... khuẩn E. coli là một trong
nhưng kỹ thuật trọng yếu và cơ bản của công nghệ DNA tái tổ hợp hay kỹ
thuật di truyền học phân tử. Các loại vi khuẩn E. coli có năng lực tăng cao
trong thu nhận DNA ...
72
Chương 3
KỸ THUẬT PHÂN TÍCH XÁC NHẬN PHÂN TỬ
I. Kỹ thuật lai Southern (Southern hybridization)
Kỹ thuật chuyển/lai Southern (hay phương pháp Southern
transfer/hybr...
... biết.
Có thể nói đây không chỉ là một kỹ thuật mà là một chiến lược tổng
quát bao gồm việc vận dụng nhiều kỹ thuật cơ bản trong sinh học phân tử
nhằm phân lập ra được đoạn DNA nằm kề đoạn DNA ... biết.
1
2
3
4
5
6
7
XIII. Phương pháp tạo thể đột biến nhân tạo
Để phân tích và xác định các miền cơ năng trong phân tử DNA như
promoter, enhancer cũng như các...
... X. Phân tích điều tiết phiên mã nhờ thử nghiệm CAT (CAT
assay) 81
1. Thí nghiệm chính: di nạp gen vào tế bào eukaryota 81
2. CAT assay 82
Chương 3. Kỹ thuật phân tích xác nhận phân tử 84
I. Kỹ ... và RNA) 24
1. Phương pháp quang học 24
2. Phương pháp định lượng bằng điện di 24
3. Phương pháp nhỏ giọt định lượng acid nucleic 25
Chương 2. Kỹ thuật cơ bản trong tái tổ...
... nồng độ theo yêu cầu.
Thành phần (ml) Nồng độ của gel
5% 8% 10% 12% 15%
Tris-HCl 1,5M (pH 8,8) 5, 0 5, 0 5, 0 5, 0 5, 0
Dung dịch acrylamide 30% 3,3 5, 3 6,7 8,0 10,0
SDS 10% 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2
Ammonium ... protein càng nhỏ.
Gel 5% acrylamide phân tách được protein có phân tử lượng 60 - 200 kDa,
10% thì 16 đến 70 kDa, 15% thì 12 đến 45 kDa. Ngoài ra, gel có nồng độ
cao hơn...
... ứng trong
4 phút ở 90 ºC.
2) Thêm 150 µl acetic acid, 5 µl tRNA (1 mg/ml) và 750 µl ethanol 70%
đã làm lạnh, trộn kỹ, để ở −70 ºC trong 15 phút.
3) Quay li tâm 10 phút, lấy tủa, hòa tan tủa trong ... (ống Falcon
2 059 ).
5) Thêm 50 µg carrier RNA, rồi thêm 5 µl dung dịch TCA 5% đã được làm
lạnh ở trong nước đá.
Dung dịch TCA 5% là dung dịch Na
4
P
2
O
4
30mM.
6) Để yên...
... theo bảng dưới đây để có dung dịch acrylamide phù
hợp với nồng độ gel cần chọn.
Nồng độ gel (%) 5 6 8 12 20
Urea (g) 50 50 50 50 50
TBE 20× (ml) 5 5 5 5 5
Dịch polyacrylamide 40% (ml)* 12 ,5 15 ... nạp JM 1 05, để trên
nước đá 40 phút.
3) Xử lý nhiệt 2 phút ở 42 ºC hoặc ở 50 ºC trong 50 giây (gây sốc nhiệt).
4) Để lại trong nước đá (khoảng 5 phút).
5) Rót agarose...
... đều các dung dịch sau: 1) NaOH 0,5M và NaCl 1,5M
trong khoảng 30 - 60 giây, 2) Tris-HCl (pH 7 ,5) 0,5M và NaCl 1,5M trong
3 - 5 phút, và 3) SSC 2× trong 3 - 5 phút. Do sau khi xử lý dung dịch ... v/ph trong 15 giờ ở 15 °C thì RNA 18S sa lắng
gần tận đáy ống. Li tâm trong 5 ~ 30% đường với vận tốc 22.000 v/ph
trong 16 giờ ở 15 °C thì RNA 28S sa lắng ở tận giữa ống.
7) Ch...
... PCR 10× 5 10 1×
dNTP (-dTTP) 50 × 1 μl 10 μl 200 μM mỗi loại
Hỗn hợp DIG-dUTP + dTTP 5 10 μl 20 μl 200 μM (toàn bộ)
Primer xuôi 0,3-2 ,5 μl 0 ,5- 5,0 μl 0,1-1,0 μM
Primer ngược 0,3-2 ,5 μl 0 ,5- 5,0 μl ... cùng 1 ,5 ml chứa 95 g CsCl trong 75
ml SM, lớp tiếp theo 2 ml chứa 67 g CsCl trong 82 ml SM và lớp thứ ba
(trên cùng) 2 ml chứa 60 g CsCl trong 85 g SM. Tỷ trọng tương ứn...
... li tâm
55 .000 v/ph ở 15 °C trong 15 giờ (dùng rotor RPV 65 T Hitachi, chẳng
hạn).
5) Tắt máy li tâm. Nhẹ nhàng lấy rotor khỏi máy. Tháo các ống nhựa li
tâm khỏi rotor, thông thường trong dịch ... 10 ,5 ml potassium acetate, trộn đều, để 10 phút trong băng hay
nước đá.
4) Quay li tâm 15. 000 v/ph trong 20 phút ở 4 ºC, rồi chuyển dịch trong
sang ống nghiệm 50 ml (Falcon,...
... HỒNG SƠN
Giáo trình
KỸ THUẬT CƠ BẢN
TRONG
SINH HỌC PHÂN TỬ
Nhà xuất bản Đại học Huế
2006
II. Điện di
Phương pháp điện di trong gel (keo) thường được sử dụng để phân
li (phân đoạn) DNA, RNA, ... 0,5M (pH 8,0): pha 93, 05 g Na
2
EDTA.2H
2
O vào trong khoảng
5
TS. PHẠM HỒNG SƠN
Giáo trình
KỸ THUẬT CƠ BẢN
TRONG SINH HỌC PHÂN TỬ
Nhà xuất bản Đại học Huế
Năm 2006
400 ml...