Ứng dụng chỉ thị phân tử PCR và dòng BAC để xác định gen mùi thơn trên cây lúa (Oryza sative L )

... dụng chỉ thị phân tử PCR và dòng BAC để xác định gen mùi thơm trên cây l a cũng l một trong những ứng dụng từ thư viện BAC. Xuất phát từ những cấp thiết trên, đề tài: Ứng dụng chỉ thị phân ... phân tử PCR và dòng BAC để xác định gen mùi thơm trên cây l a (Oryza sativa L. ) được thực hiện. 2 2.Mục tiêu nghiên cứu - Ứng dụng chỉ thị phân tử DNA liên kết chặt với gen qui định mùi ... PHÁT ỨNG DỤNG CHỈ THỊ PHÂN TỬ PCR VÀ DÒNG BAC ĐỂ XÁC ĐỊNH GEN MÙI THƠM TRÊN CÂY L A (Oryza sativa L. ) Chuyên ngành: Di Truyền và Chọn Giống Mã số: 62.62.05.01 LUẬN ÁN TIẾN SĨ...

... Tách dòng các gen liên quan đến sinh tổng hợp lignin (CCR và CAD 2) a. Phân nhóm cây dựa trên hàm l ợng lignin Để tách dòng gen EuCCR và EuCAD2 và phát triển các chỉ thị SN P của hai gen này ... fingerprinting) 111.4.3. Chọn l c dựa trên sự trợ giúp của chỉ thị phân tử (MAS) 111.4.3.1. Chọn l c gián tiếp dựa trên liên kết chỉ thị phân tử với locus tính trạng số l ợng (QTL) 121.4.3.2. ... cho các chỉ thị microsatellite 333.1.2. Xác định các chỉ thị microsatellite có mức độ đa hình cao 343.1.3. Xác định sự liên kết giữa các chỉ thị microsatellite 36ii 3.1.4. Xác định cấu...

... TE3.2.2. Phương pháp nghiên cứu *   Xác định khả năng chứa gen bất dục đực mẫn cảm với nhiệt độ tms2 bằng phương pháp PCR : +) Chiết tách ADN tổng số của dòng mẹ TGMS,các tổ hợp phân ly F2  theo quy trình cải tiến của Bộ môn Công nghệ sinh học. Bước 1:Thu ngắt mẫu l  khỏe,dài khoảng 2cm bỏ vào ống eppendorf có dung tích 1,5ml,đánh dấu tên giống rồi bỏ vào đá  l nh.  Bước 2:Cối,chày sứ dùng để nghiền mẫu đã được hấp khử trùng và đặt trong đá l nh.Các mẫu l  được cắt nhỏ khoảng 0,5cm rồi bỏ vào cối.  Bước 3:Nhỏ 400  l dung dịch đệm chiết suất ADN vào cối rồi nghiền nhỏ mẫu l   cho đến khi dung dịch chuyển sang màu xanh đen.   Bước 4:Bổ sung thêm 400  l dung dịch chiết suất AND vào pha trộn l n sau đó hút 400  l vào ống eppendorf đã được đánh dấu.  Bước 5: Cho 700  l hỗn hợp Phenol : Chlorofom : Isoamylalcohol ( 25:24:1 ) Bước 6:Cho 600  l hỗn hợp Chlorofom : Isoamylalcohol(24: 1) ,l c đều va ly tâm 7 phút với tốc độ 13000 vòng/phút rồi hút phần dung dịch ở trên vào ống eppendorf mới đã đánh dấu tương ứng.  Bước 7: Cho 800  l Ethanol(96 %)( hoặc 600  l Isopropanol),trộn đều và ly tâm 7 phút với tốc độ 13000 vòng/phút.Sau đó đổ phần dung dịch phía trên giữ l i phần kết tủa dưới đáy ống nghiệm.  Bước 8: Rửa kết tủa bằng Ethanol 70% ,l m khô tự nhiên ở nhiệt độ phòng bằng cách úp ngược ống nghiệm l n giấy thấm.  Bước 9:Hòa tan kết tủa bằng 50  l dung dịch TE rồi bảo quản ở nhiệt độ ­20oC+Kiểm tra độ tinh sạch ADN bằng cáchđiện di trên gel agarose 1%.+Tiến hành phản ứng PCR với cặp mồi RM11 cho gen tms2.STT ... PCR  Để chọn tạo l a lai hai dòng thành công thì dòng TGMS phải nhiều và phong phú,từ đó mới tạo ra được tổ hợp cho ưu thế lai cao.Hiện nay các dòng TGMS đang được sử  dụng như:103S,T1S­96,64S,287S,36S2,Kim 76S,Pair 64S  và 25S.Các nhà khoa học đã tìm được 6 gen TGMS(tms1, tms2, tms3, tms4, tms5, tms 6). Mỗi gen này có ngưỡng chuyển hóa hữu dục và bất dục khác nhau,trong đó ,gen tms2 có ngưỡng chuyển hóa hữu dục ổn định. Nhà chọn tạo giống đã sử dụng các gen TGMS này lai chuyển vào các  dòng, giống l a triển vọng để tạo dòng TGMS tốt,có khả năng phối hợp cao,tạo ra nhiều tổ hợp lai mới cho ưu thế lai cao như TH3­3,Việt Lai 20,TH3­4,… Bằng  việc sử dụng ADN marker (chỉ thị phân t )  thời gian chọn tạo ra các dòng mới được rút ngắn.Các chỉ thị liên kết chặt  với các tính trạng kiểu hình.Do đó,chúng ta có thể xác định được các tính trạng dựa trên sự có mặt của các gen mong muốn.Kỹ thuật này không chỉ có độ chính  xác cao mà còn xác định được trên một l ợng l n vật liệu nghiên cứu. Để đáp ứng được mục tiêu chọn giống chúng tôi tiến hành đề tài: “Nghiên cứu ứng dụng chỉ thị phân tử DNA chọn l c gen tms2 để tạo ra các  dòng TGMS mới”.1.2.Mục đích và yêu cầu:1.2.1.Mục đích: Xác định gen tms2 trong tập đoàn các dòng TGMS bằng  chỉ thị phân tử. ­Nghiên cứu di truyền gen tms2. 1.2.2 Yêu cầu : ­Khảo sát một số đặc điểm nông sinh học của các tổ hợp lai F1­Chiết tách AND để tiến hành phản ứng PCR ­Đánh giá được khả năng hữu – bất dục bằng phương pháp truyền thống của các tổ hợp lai F2.­Phát hiện gen tms2 ở các dòng TGMS và thế hệ F2 . ... thước.3.1.3. Địa điểm nghiên cứu:tại phòng công nghệ sinh học  ứng dụng và khu thí nghiệm đồng ruộng khoa nông học – Trường Đại Học Nông Nghiệp Hà Nội . 3.1.4. Thời gian nghiên cứu :   Đề tài được thực hiện từ tháng 1/2010 đến tháng 5/2010.PHầN I :Mở ĐầU1.1.Đặt vấn đề: Cây l a (Oryza sativa L. ) l  một trong ba cây l ơng thực chủ yếu trên thế giới (l a mì ,l a gạo,ng ), có tầm quan trọng sống còn với hơn nửa dân số thế giới.Hiện nay với sự gia tăng dân số nhanh và sự giảm dần diện tích đất nông nghiệp đặc biệt l  đất canh tác l a mỗi năm thì vấn đề đảm bảo an ninh l ơng thực l  yêu cầu cấp thiết cần quan tâm trước mắt cũng như l u dài.Do đó ,để tăng năng suất l a gạo,một trong những hướng  đặt ra có hiệu quả cao đó l  sử dụng ưu thế lai.PHầN...