... biệt 21 - Real – Time PCR đánh giá tích lũy sản phẩm định lượng qPCR (quantitative PCR – PCR định lượng) Ngoài số kỹthuậtPCR khác nữa… VIII RT – PCR Như biết, PCRkỹthuật nhân bội ADN mạch ... bản, phiên mã dịch mã Trong số tiến kỹthuật góp phần tạo bùng nổ lĩnh vực sinh học phân tử phải kể tới kỹthuậtPCR (Polymerase Chain Reaction) KỹthuậtPCR Kary Mullis đề suất vào năm 1985, ... RT – PCR (reverse transcriptase PCR) gọi RNA – PCR hay RT – PCR RT – PCR nhạy phương pháp khác dùng cho phân tích ARN - RT – PCR cạnh tranh (Competitive RT – PCR) kỹ that thường dùng định lượng...
... thí nghi m thành công, ph m vi báo cáo này, ch ñ c p t i k thu t Polymerase chainreaction (PCR) S ñ i c a k thu t PCR ñã ñưa l i m t cu c cách m ng vi c nghiên c u, phân tích gen h gen Trư c ... PH N III - K T QU VÀ TH O LU N 44 3.1 Thi t l p chu n hóa phương pháp PCR 44 3.1.1 L a ch n gi a PCR ñơn PCR ph c 44 3.1.2 L a ch n môi trư ng nuôi c y thích h p ñ tách chi t DNA ... “Xây d ng quy trình xác ñ nh vi khu n Verotoxigenic Escherichia coli th t b ng k thu t PCR (Polymerase chain reaction) ” Nghiên c u cho phép xác ñ nh nhanh xác tiêu chu n vi sinh ñ i v i vi khu n...
... 2.2.2 Kỹthuật xét nghiệm Máu toàn phần trích ly RNA với thuốc thử chuẩn hoá Chomczynski [2] Khuếch đại týp gene tổ hợp BCR-ABL b2a2 b3a2 kỹthuật RT -PCR (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction) ... samples from 60 Chronic Myeloid Leukemia patients were tested by RT -PCR (Reverse Trancription-Polymerase Chain Reaction) and Real-Time PCR to detect Philadelphia chromosome containing BCR-ABL fusion ... tác nhân gây bệnh gen tổ hợp BCR-ABL (Joanna Gora-Tybor 2008) [3], điều giải thích sử dụng kỹthuật RT -PCR phát diện gen tổ hợp BCR-ABL 59/60 bệnh nhân CML (98,33%) Carol D Jone CS (2003) [1] Susan...
... khỏc nh PCR t (Nested -PCR) , ADN nhỏnh (Branch-DNA), PCR a thnh phn (multiplex -PCR) , PCR ngc (Reverse -PCR) , RAPD -PCR vv nhng tt c u da trờn nguyờn tc ca phn ng PCRPCR t: t c mc nhy cm cao PCR, ... K THUT PCR (Polymerase Chain Reaction) I M U: K thut PCR (vit tt t ch Polymerase Chain Reaction) , hay cũn gi l phn ng tng hp dõy chuyn nh polymerase ... (hỡnh 2) PCR t cú nhy cao hn PCR tiờu chun l lp li s khuch i sn phm t mt PCR th vi mt PCR th Tuy nhiờn ngoi nhim cng l hn ch ca nú ADN nhỏnh: Nguyờn tc: ADN ớch c khuch i bng PCR, sau ú...
... bệnh cầu trùng [18] 2.10 KỹthuậtPCR 2.10.1 Khái niệm Kĩ thuậtPCR khởi đầu vào thập niên 1980 (Saiki cộng (1985); Mullis Faloona, (1987)), không hợp lí nói tác động PCR lên sinh học phân tử, ... cầu trùng từ mẫu phân gà thu - Tách ADN từ Oocysts cầu trùng phân lập - Sử dụng kỹthuậtPCR (polymerase chain reaction) để phát số loài cầu trùng có phân gà 3.2 Nguyên liệu phương pháp nghiên ... đơn giản PCR chép lặp lại nhiều lần đoạn chuỗi ADN kép với tham gia hai mồi xuôi ngược giúp nhận diện có mặt ADN xúc tác Taq polymerase/MgCl2, loại dNTP [31] 2.10.2 Nguyên tắc kỹthuậtPCR Tất...
... chuyên biệt - Real – Time PCR đánh giá tích lũy sản phẩm định lượng qPCR (quantitative PCR – PCR định lượng) Ngoài số kỹthuậtPCR khác nữa… B RT – PCR Như biết, PCRkỹthuật nhân bội ADN mạch ... bản, phiên mã dịch mã Trong số tiến kỹthuật góp phần tạo bùng nổ lĩnh vực sinh học phân tử phải kể tới kỹthuậtPCR (Polymerase Chain Reaction) KỹthuậtPCR Kary Mullis đề suất vào năm 1985, ... – PCR (reverse transcriptase PCR) gọi RNA – PCR hay RT – PCR RT – PCR nhạy phương pháp khác dùng cho phân tích ARN - RT – PCR cạnh tranh (Competitive RT – PCR) kỹthuật thường dùng định lượng...
... Nguyễn Bá Lộc - Real – Time PCR đánh giá tích lũy sản phẩm định lượng qPCR (quantitative PCR – PCR định lượng) Ngoài số kỹthuậtPCR khác nữa… RT – PCR Như biết, PCRkỹthuật nhân bội ADN mạch kép ... bản, phiên mã dịch mã Trong số tiến kỹthuật góp phần tạo bùng nổ lĩnh vực sinh học phân tử phải kể tới kỹthuậtPCR (Polymerase Chain Reaction) KỹthuậtPCR Kary Mullis đề suất vào năm 1985, ... RT – PCR (reverse transcriptase PCR) gọi RNA – PCR hay RT – PCR RT – PCR nhạy phương pháp khác dùng cho phân tích ARN - RT – PCR cạnh tranh (Competitive RT – PCR) kỹ that thường dùng định lượng...
... kỳ Phản ứng PCR tiến hành khoảng 25-40 chu kỳ Trong kỹthuậtPCR thông thường người ta thực bước biến tính ADN trước bước vào chu kỳ Bước thư ờng thực 94-95oC, 2-3 phút Phản ứng PCR - bước bắt ... 60C 3 Phản ứng PCR - bước kéo dài chuỗi 3 72C 5 5 Phản ứng PCR - sản phẩm hình thành sau bước Biến tính Bắt cặp & kéo dài chuỗi 5 5 5 5 Sản phẩm cuối phản ứng PCR IV LI CH CA PHN NG PCR Thi gian ... cao; V CC NG DNG CA K THUT PCR Nhõn phõn t RNA bng k thut PCR Cn cú cỏc on mi kt hp c vi khuụn RNA, sau ú tng hp cỏc phõn t DNA nh enzyme reverse trancriptase theo k thut PCR Enzyme Tth DNA-polymerase...
... PCR TRONG PHÁT HIỆN VI SINH VẬT GÂY BỆNH TRONG THỰC PHẨM 1.6.1.Nguyên tắc kĩ thuậtPCR [3], [4] PCR (Polymerase Chain Reaction) phương pháp in vitro để tổng hợp DNA dựa khuôn trình tự đích ĐNA ... cho phản ứng PCR - Thực phản ứng PCR: Phản ứng PCR thực với thể tích 25µl eppendorf 0,5ml 0,2ml gồm thành phần Bảng 49 Bảng Thành phần sử dụng phản ứng PCR phát C Perfringens Phản ứng PCR thực theo ... DNA cho phản ứng PCR 39 T T 2.2.10.Điều kiện phản ứng PCR 39 T T 2.2.11.Phân tích sản phẩm PCR điện di gelagarose 39 T T 2.2.12.Khảo sát điều kiện tối ưu phản ứng PCR 39 T...
... nucleotid + Một số kỹthuậtPCR khác: Một số kỹthuật phát triển sở kỹthuậtPCR có ý nghĩa quan trọng cho định danh định typ vi sinh vật nested PCR (PCR lồng), revert transtriptase PCR (sao chép ... Dùng kỹthuậtPCR cho ribotyping: KỹthuậtPCR ribotyping ứng dụng cặp mồi đặc hiệu để nhân vùng gene ARN (thuộc ribosom hay ARN vận chuyển) Tuy nhiên, thực tế kỹthuật yêu cầu kinh nghiệm, kỹthuật ... có tác dụng phát ARN thời điểm định mẫu KỹthuậtPCR chiều ứng dụng phương pháp giải trình tự ADN trực tiếp từ sản phẩm PCR. phẩm PCR + Sử dụng kỹthuậtPCR cho xác định typ vi sinh vật: Như trình...
... nucleotid + Một số kỹthuậtPCR khác: Một số kỹthuật phát triển sở kỹthuậtPCR có ý nghĩa quan trọng cho định danh định typ vi sinh vật nested PCR (PCR lồng), revert transtriptase PCR (sao chép ... Dùng kỹthuậtPCR cho ribotyping: KỹthuậtPCR ribotyping ứng dụng cặp mồi đặc hiệu để nhân vùng gene ARN (thuộc ribosom hay ARN vận chuyển) Tuy nhiên, thực tế kỹthuật yêu cầu kinh nghiệm, kỹthuật ... có tác dụng phát ARN thời điểm định mẫu KỹthuậtPCR chiều ứng dụng phương pháp giải trình tự ADN trực tiếp từ sản phẩm PCR. phẩm PCR + Sử dụng kỹthuậtPCR cho xác định typ vi sinh vật: Như trình...
... thích hợp việc phân tích đa hình DNA kỹthuật RFLP ngƣời ta đƣa kỹthuậtPCR – RFLP PCR – RFLP kỹthuật dựa sở khuyếch đại có chọn lọc đoạn DNA kỹthuậtPCR trƣớc Sau tiến hành phân cắt đoạn ... 2.3.2.6 Các vấn đề thƣờng gặp PCR phƣơng pháp khắc phục .16 2.3.2.7 Ứng dụng PCR 18 2.4 Giới thiệu kỹthuật RFLP kỹthuậtPCR – RFLP .18 2.4.1 Kỹthuật RFLP ( restricton fragment ... tính đa hình gen PRLR, Vincent cộng dùng kỹthuậtPCR – RFLP (polymerase chainreaction – restriction fragment length polymorphism) Trƣớc ông dùng kỹthuậtPCR để phân lập đoạn DNA gen PRLR, sau...
... phản ứng PCR Tuy nhiên, thành phần nên hiệu chỉnh 1) sản phẩm PCR lớn 5kb; 2) có khả hoạt tính enzyme bị giảm sút thiếu sót khâu bảo quản; 3) tiến hành hiệu chỉnh nhiều cách sản phẩm PCR thấp ... thành phần PCR Tuy nhiên, phải kiểm tra độ tương thích enzyme DNA polymerase _ Tăng lượng DMSO PCR cần giảm nhiệt bắt mồi xuống Một số buffer có chứa sẵn loading buffer để điện di sau PCR Tuy nhiên, ... DNA) tốc độ đạt tới 15s/kb; 2) DNA genome lớn, phức tạp tốc độ thường 30s-1min/kb V Ứng dụng kỹthuậtPCR - Giúp tách nhanh xác gen đoạn AND riêng biệt - Chuẩn đoán nhanh, nhạy tất bệnh di truyền...
... biệt 21 - Real – Time PCR đánh giá tích lũy sản phẩm định lượng qPCR (quantitative PCR – PCR định lượng) Ngoài số kỹthuậtPCR khác nữa… VIII RT – PCR Như biết, PCRkỹthuật nhân bội ADN mạch ... bản, phiên mã dịch mã Trong số tiến kỹthuật góp phần tạo bùng nổ lĩnh vực sinh học phân tử phải kể tới kỹthuậtPCR (Polymerase Chain Reaction) KỹthuậtPCR Kary Mullis đề suất vào năm 1985, ... RT – PCR (reverse transcriptase PCR) gọi RNA – PCR hay RT – PCR RT – PCR nhạy phương pháp khác dùng cho phân tích ARN - RT – PCR cạnh tranh (Competitive RT – PCR) kỹ that thường dùng định lượng...
... DNA Sau giữ lạnh -20oC để sử dụng cho phản ứng PCR Phương pháp khuyếch đại DNA (Kỹ thuật PCR) Sản phẩm DNA sau ly trích trộn chung với hỗn hợp gồm có PCR buffer, MgCl2, dNTP/s, Taq DNA polymerase ... gồm: PCR buffer, MgCl2, dNTP/s, Taq DNA polymerase, nước cất, primer xuôi primer ngược Thành phần hỗn hợp cho phản ứng PCR trình bày qua bảng Bảng Thành phần hóa chất cho phản ứng PCR H2O cất PCR ... thành phần hóa chất phản ứng PCR Để chẩn đoán sản phẩm chuyển gen thành công công việc tìm thành phần hóa chất tối ưu cho phản ứng PCR cần thiết, ảnh hưởng rõ đến sản phẩm PCR nói riêng đến thành...
... DNA Sau giữ lạnh -20oC để sử dụng cho phản ứng PCR Phương pháp khuyếch đại DNA (Kỹ thuật PCR) Sản phẩm DNA sau ly trích trộn chung với hỗn hợp gồm có PCR buffer, MgCl2, dNTP/s, Taq DNA polymerase ... primer Gic Bt Với cặp primer Gic, sản phẩm PCR sau chụp hình cho thấy có hai mẫu có band kích thước 226bp (có chuyển gen Invertase) Với cặp primer Bt, sản phẩm PCR sau chụp hình cho thấy có mẫu có ... YANG – CHIH SHIH, 2000 Detection of Genetically Modified Soybeans and Maize by The Polymerase ChainReaction Method Journal of Food and Drugs analysis No.3 - Vol.8, p 200-207 KAREN E KOCH, JIAN...