Đang tải... (xem toàn văn)
Tìm hiểu nấm mốc Peniccilium roqueforti
ĐỀ TÀIPENICCILIUM ROQUEFOTI GVHD: K.S. PHẠM MINH NHỰTNHÓM 7TRẦN THUỴ KIM BÌNHTRƯƠNG THỊ TRÚC HÀ PHẠM NGÔ ÁNH THƯHUỲNH THỊ DIỆU HIỀN MỤC LỤCLời nói đầuPhần I Tổng Quan Về Penicillium RoquefortiI. Lịch sử phát hiện .4II. Phân loại khoa học 4III. Đặc điểm nhận dạng 6IV. Đặc điểm sinh hoá .9Phần II Các Phương Pháp Xác ĐịnhI. Phương pháp truyền thống .8II. Các phương pháp hiện đại 1. Phương pháp PCR .222. Phương pháp RAPD .25Phần III: Kết Luận 2 LỜI NÓI ĐẦUTrong những năm gần đây với sự tiến bộ của khoa học kỹ thuật, quá trình định danh cho nhiều loài vi sinh vật cũng như dễ dàng hơn với thiết bị hiện đại hơn. Nhiểu loại vi sinh có lợi, hại đều được biết đến rõ ràng hơn. Trong những năm vi sinh học phát triển một loài sinh độc tố nhưng có ít trong đó có loại nấm mốc Peniccilium roqueforti được xác định từ trong sản phẩm phomat xanh vốn quen thuộc với dân châu Âu. Penicilium roqueforti được các nhà khoa học tìm hướng đi mới ngoài việc sử dụng để sản xuất phomat xanh.3 PHẦN I : TỔNG QUAN TÀI LIỆUI. LỊCH SỬ PHÁT HIỆNĐầu tiên được mô tả bởi Thom vào năm 1906, Penicillium roqueforti thoạt đầu là một loài hỗn tạp của nấm xanh sinh bào tử. Chúng được chia thành các nhóm loài khác nhau dựa trên sự khác biệt về kiểu hình, và sau đó chúng được kết hợp thành một loài bởi Raper và Thom. Nhóm Pencillium được phân loại lại vào năm 1996 dựa vào sự khác nhau của dãy DNA ribosom và đặc tính chuyển hoá thứ cấp. Trước đây được chia thành hai loại khác nhau – một là được dùng cho phomat ( Penicillium roqueforti var. roqueforti) và một là tạo patulin.II. PHÂN LOẠI KHOA HỌCGiới: Nấm Ngành: AscomycotaLớp: EurotiomycetesBộ: EurotialesHọ: TrichocomaceaeGiống: Penicillium Loài: Penicillium roqueforti4Charles Thom (1872-1956)Hình ảnh được phóng đại vài trăm triệu lần dưới kính hiển vi điện tử (Penicillium roqueforti var. carneum), Penicillium roqueforti được phân loại thành ba loài là Pencillium roqueforti, Penicillium carneum và Penicillium paneum.III. ĐẶC ĐIỂM1. Đặc điểm hình thái5Hình ảnh Penicilium roqueforti Penicilium roqueforti là loại mốc có màu xanh, có cuốn đính bào từ, sinh bào tử, sinh sản hữu tính, hình sợi, thuộc ngành nấm nang.6Qúa trình hợp giao tử (A – F) ; Toàn giao (Hologamy)(G – J); Tiếp xúc giữa 2 giao tử (K– L); Tự giao (autogamy)(M – N: sinh sản ở nấm mốc. 2. Đặcđiểm bào tửBào tử của nấm mốc Penicilium roqueforti : hình cầu gần như hình tròn, bề mặt tròn nhẵn(kích thước 3,5- 5,5 µm), không có màng tế bào. Cuống dài 100-200 x 4-5,5,….Khuẩn lạc Penicilium roqueforti3. Môi trường sốngĐặc điểm trên môi tổng hợp:7Bào tử Penicilium roquefortiHình ảnh P.roqueforti Penicillium roqueforti chỉ là một loài của Penicillium mà nó có thể phát triển trên môi trường chứa 0-5% acid acetic, ở nồng độ rượu cao, và ở nồng độ oxy thấp (nói rõ trong phần sau). Khuẩn lạc trên môi trường Czapek thạch và MEA 25oC phát triển rất nhanh chóng, đường kính đạt 4-5 cm, trong vòng 14 ngày, các bào tử có các cuống mọc dày đặc, mượt, Màu xanh xanh, sau đó trở nên tối hơn. Dịch tươi do loài này tiết ra trong như giọt pha lê. Mùi không rõ nét. Sau đó môi trường thay đổi màu sắc từ màu xanh sang xanh đậm. Cuống bào tử đính kích thích 100-200 x 4,0-6,5 μm. Hạt bào tử đính trong cột lỏng lẻo,hình cầu, màu xanh lục, nhẵn-tường, chủ yếu là từ 4-6 mm, có khi đến 8mm.Phân bố trong tự nhiên:Roqueforti Penicillium là một loại nấm hoại sinh phổ biến , nó thì tồn tại khắp nơi trong tự nhiên và có thể được phân lập từ đất, các chất hữu cơ phân hủy và các bộ phận của cây Ngoài ra, chúng được tìm thấy trong ẩm ướt, hầm tối, đến vườn đất và tán lá, mà còn trong phòng tắm, nước, đường ống, con dấu cao su, ngưỡng cửa sổ, thảm, nệm và đồ nội thất…4. Tốc độ phát triểnTốc độ phát triển nhanh trên các môi trường và đạt kích thước sau: CYA: 34-55mm, MEA: 35-56 mm, YES: 47-74 mm. Khuẩn lạc của Penicilium roqueforti phát triển rất tốt trên môi trường acid acetic : 0,5%, và cũng phát triển tốt trên CREA thích hợp trên môi trường acid.IV. ĐẶC TÍNH SINH HOÁ1. Sinh hợp chất thứ cấp1.1. Penicilium roqueforti là loài sinh ra hợp chất thứ cấp marcfortines và fumigaclvine A.8 Những tư liệu về những hợp chất này tạm thời chưa được rộng nên khó khăn trong việc lấy nó làm tư liệu.1.2. Độc tố PR và eremofortin C Là chất chuyển hóa thông thường của Penicilium roqueforti. Các cấu trúc hóa học của hai hợp chất liên quan chặt chẽ với nhau và khác nhau chỉ bởi một aldehyde và một nhóm acohol tại vị trí C-12 . Định tính, định lượng độc tính enzyme:Các hoạt động tối đa các enzym trong các môi trường đã được tìm thấy vừa xảy ra vào ngày 13 tính từ khi bắt đầu thí nghiệm, trong đó tương ứng cực đại của PR trong vật chứa độc tố. Enzyme này được phân lập và tinh chế từ các môi trường và vừa khuẩn ty thể của nấm tương ứng thông qua một thao tác liên quan đến amoni sulfat và fractionation DEAE-cellulose sắc ký.Sản lượng đã được 33,3 và 21,6% cho các enzym có hoạt tính trung. Độ pH tối ưu cho enzym khi pH 5,6. Khi nó xúc tác sự chuyển đổi ở 30 ° C và phân rã với thời gian phản ứng khi ở nhiệt độ cao. Ở 100 ° C, hoạt động của enzyme đã hoàn toàn bị mất. Các K. và Vmax của các enzym như được xác định ở 30 ° C là 0,02 mM và 4.0, umol / phút mỗi mg, tương ứng. Trọng lượng phân tử của enzyme đã 9Marcfortines từ Penicilium roqueforti được ước tính bằng cách lọc ,áp suất sắc ký lỏng thu được là I-250 protein đến 40.000. Độc tố PR và eremofortin C (EC) là chất chuyển hóa thứ cấp của nấm Penicillium roqueforti, những độc tố này gây nguy hiểm cho những người sử dụng sản phẩm phomat bị nhiễm penicilium roqueforti. Hình: phân tích chất độc bằng phương pháp HPLC . sự hoạt động của độc tính trong Penicilium roqueforti.Kể từ khi phát hiện và cô lập PR độc tố , nó làm sáng tỏ độc tố nấm mốc con đường tổng hợp sinh học của các độc tố khác có liên quan và chuyển hóa qua lại lẫn nhau.Cấu trúc của PR :10 [...]... Độc tính: Penicilium roqueforti sinh độc tố roquefortine Độ độc thấp của roquefortine C đã được tìm thấy trong pho mát xanh nhưng nồng độ chính xác đã không báo cáo Scott và Kennedy (1976) tìm thấy nồng độ roquefortine lên đến 6,8 mg / kg trong các mẫu phó mát xanh trên thị trường mà họ kiểm tra Trong thực tế,độc tính roquefortine tạo ra bởi hầu hết các chủng của P roqueforti được phân... 220g Tiến hành định danh cho loài nấm mốc Penicilium roqueforti bằng môi trường CYA,YES II XÁC ĐỊNH P .ROQUEFORTI BẰNG PHƯƠNG PHÁP HIỆN ĐẠI 1 Xác định bào tử Penicilium roqueforti bằng phương pháp PCR Phương pháp lấy mẫu không khí tích hợp và phân tích DNA để phát hiện các bào tử nấm Penicilium roqueforti Tóm tắt: Bào tử P .roqueforti được thu thập trực tiếp vào ống Eppendorf sau... chất độc do Penicilium roqueforti sinh tổng hợp 2 Oxy hoá các acib béo Khả năng của nấm để ôxi hóa của các axit béo chuỗi trung bình được thu Ketones methyl lần đầu tiên được ghi nhận, người đã cho thấy Penicillium roqueforti và hai loài của chi Aspergillus sản xuất Ketones methyl khi nuôi vi nấm 11 trong vài tuần trong môi trường acid béo Năng lực của các bào tử của P roqueforti để tạo Ketones... roqueforti được phân lập từ phô mai xanh Một tỷ lệ nhỏ các chủng tìm thấy từ thịt cũng tạo ra roquefortine Khả năng gây bệnh của Penicillium roqueforti là rất thấp, thậm chí là ít cơ hội gây bệnh Giá trị LD50 của roquefortine khoảng 10 mg / kg được thử nghiệm trên chuột Cho bò ăn ngô bị nhiễm P roqueforti làm bò biếng ăn, và viêm đường ruột Con người tiếp xúc độc tính đó qua da và đường... Penicilium roqueforti cần môi trường CYA(môi trường thạch Czapek Yeast Autolysate), YES Khuẩn lạc phát triển trên môi trường CYA: làm môi trường chuyển từ màu vàng kem sang màu nâu nhạt Khuẩn lạc có màu xanh nhạt.Trên môi trường YES: khuẩn lạc làm môi trường từ vàng nhạt sang màu nâu Khuẩn lạc có màu xanh lục Penicilium roqueforti trên CYA 2 Penicilium roqueforti trên... nhân làm việc tại một nhà máy, nơi pho mai xanh được sản xuất bằng cách sử dụng Penicillium roqueforti Triệu chứng là ho, khó thở, khó chịu, thể tích phổi giảm Penicillium Roqueforti có thể gây ra phản ứng dị ứng như sổ mũi, ho, hắt hơi, nổi mề đay, hoặc bệnh suyễn Không có bằng chứng để kết luận độc tính roquefortine có khả năng gây ung thư V ỨNG DỤNG Sản xuất poliscchacarides, sản xuất... bào tử bất hoạt vào không được nhỏ hơn 1000 Sau đó bằng cách phá vỡ các bào tử, có hoặc không có tinh chế DNA, Penicilium roqueforti đã có thể phát hiện DNA từ một bào tử duy nhất P roqueforti bào tử được thêm vào từ không khí các mẫu nồng độ cao của các bào tử nấm không rõ nguồn gốc: phấn hoa, bụi đã làm giảm độ nhạy phát điện Tuy nhiên, bằng cách sử dụng DNA tinh khiết, nó đã có thể... lồng nhau được nhạy cảm hơn so với bước đơn PCR hoặc PCR theo sau phương pháp Southern blotting 21 Vật liệu và phương pháp: Kết quả và định lượng P roqueforti spores roqueforti bào tử: phản ứng xác định số lượng bào tử trên chủng P roqueforti C2709 cô lập từ hạt lúa mì tại Rothamsted(Anh), Nó được cấy trên bông thấm bấc ngâm trong dextrose agar khoai tây (Oxoid Ltd, Basingstoke, Vương... roqueforti Điều này liên quan đến việc trộn các mẫu với một vùng đệm ức chế (có chứa Tris, EDTA, 22 sodium dodecyl sulfate, và β-mercaptoethanol), ủ chúng ở 65 ° C cho 1 h, và sau đó thực hiện khai thác phenol-chloroform và lượng isopropanol Chúng tôi đổi cách thực hiện bằng cách thêm 20 ng của glycogen ở bước thêm isopropanol trong quá trình ly tâm DNA cũng được chiết xuất từ sợi nấm của P roqueforti. .. from log 10 dilutions of P roqueforti spores and 5 to 50 ng from mycelium or spores of other fungi) Mỗi 25μL hỗn hợp của phản ứng có 25 pmol cả hai đoạn mồi, 0,5 U của Platinum Taq, đệm (20 mM Tris HCl [pH 8,4], 50 mM KCl, 1,5 mM MgCl 2 ), 0,2 mM triphosphates deoxyribonucleoside, và DNA dung dịch pha loãng của bào tử P roqueforti và 5-50 ng mycelium hoặc bào tử của nấm khác Điều kiện chu kì . Penicilium roqueforti3 . Môi trường sốngĐặc điểm trên môi tổng hợp:7Bào tử Penicilium roquefortiHình ảnh P .roqueforti Penicillium roqueforti chỉ. g./500 ml).3. Độc tính:Penicilium roqueforti sinh độc tố roquefortine. Độ độc thấp của roquefortine C đã được tìm thấy trong pho mát xanh nhưng nồng