Đang tải... (xem toàn văn)
Khảo sát điều khiện nuôi cấy và sinh bào tử vi khuẩn Bacillus subtilis
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC NGUYỄN DUY KHÁNH KHẢO SÁT ĐIỀU KIỆN NUÔI CẤY VÀ SINH BÀO TỬ VI KHUẨN Bacillus subtilis LUẬN VĂN KỸ SƢ CHUYÊN NGÀNH CÔNG NGHỆ SINH HỌC Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 9/2006 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC KHẢO SÁT ĐIỀU KIỆN NUÔI CẤY VÀ SINH BÀO TỬ VI KHUẨN Bacillus subtilis LUẬN VĂN KỸ SƢ CHUYÊN NGÀNH CÔNG NGHỆ SINH HỌC Giáo viên hƣớng dẫn Sinh viên thực TS NGUYỄN NGỌC HẢI NGUYỄN DUY KHÁNH KHÓA: 2002 – 2006 Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 9/2006 MINISTRY OF EDUCATION AND TRAINING NONG LAM UNIVERSITY, HCMC FACULTY OF BIOTECHNOLOGY EXAMINE CULTURE CONDITION AND SPORULATION OF Bacillus subtilis GRADUATION THESIS MAJOR: BIOTECHNOLOGY Professor Student Dr.NGUYEN NGOC HAI NGUYEN DUY KHANH TERM: 2002 - 2006 HCMC, 09/2006 LỜI CẢM ƠN Với tất lịng kính trọng, em xin chân thành cảm ơn Ban Giám hiệu trường Đại học Nơng Lâm thành phố Hồ Chí Minh, Ban chủ nhiệm Bộ Môn Công nghệ sinh học, tất quý Thầy Cô truyền đạt kiến thức cho em suốt trình học trường Em xin chân thành cảm ơn TS Nguyễn Ngọc Hải hết lòng hướng dẫn dạy dỗ, động viên, quan tâm, ủng hộ em hồn thành khố luận Em xin chân thành cám ơn TS Lê Anh Phụng, BSTY Nguyễn Thị Kim Loan giúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợi cho em suốt q trình hồn thành khố luận Em xin chân thành cảm ơn Phịng vi sinh, Khoa Chăn ni – Thú Y cho phép tạo điều kiện thuận lợi cho em học tập nghiên cứu phịng Tơi xin cảm ơn bạn lớp CNSH 28 chia xẻ vui buồn thời gian học hết lòng hỗ trợ, giúp đỡ thời gian thực tập Sinh viên thực Nguyễn Duy Khánh i TÓM TẮT NGUYỄN DUY KHÁNH, ĐH Nơng Lâm Tp Hồ Chí Minh Tháng 8/2006 “KHẢO SÁT ĐIỀU KIỆN NUÔI CẤY VÀ SINH BÀO TỬ VI KHUẨN Bacillus subtilis” Hội đồng hướng dẫn: TS NGUYỄN NGỌC HẢI Việt nam nước nơng nghiệp có nghành chăn ni phát triển có đóng góp lớn vào phát triển kinh tế đất nước Vì vậy, vấn đề nâng cao suất, chất lượng sản phẩm cải thiện môi trường chăn nuôi quan tâm nước ta Xuất phát từ vấn đề này, tiến hành nghiên cứu khảo sát đặc điểm vi khuẩn Bacillus subtils, tìm hiểu điều kiện ni cấy thích hợp xử lí bào tử để sản xuất chế phẩm sinh học nhằm cung cấp thông tin để chọn lựa điều kiện ni cấy vi khuẩn Bacillus subtilis thích hợp, từ sản xuất chế phẩm sinh học cung cấp cho nghành chăn ni Qua q trình thực đề tài chúng tơi có ghi nhận sau: Khảo sát ảnh hưởng chế độ nuôi cấy tĩnh nuôi cấy lắc (15 phút lắc, 45 phút nghỉ) chế độ nuôi cấy lắc cho số lượng vi khuẩn cao Khảo sát ảnh hưởng loại môi trường khác (TSB, TSB + 1% glucose, TSB + 1% cao nấm men, TSB + 1% glucose + 1% cao nấm men) mơi trường TSB cho số lượng vi khuẩn thấp nhất, mơi trường cịn lại mơi trường phù hợp cho Bacillus subtilis phát triển Khảo sát ảnh hưởng pH môi trường (pH 7,5), thời gian (24,36 48 giờ) nhiệt độ nuôi cấy (nhiệt độ phịng, 37oC) pH 7, thời gian 48 nhiệt độ nuôi cấy 37oC cho số lượng vi khuẩn lớn Khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ (50, 70), pH (6, 9) thời gian xử lí (3, giờ) đến hình thành bào tử xử lí nhiệt độ pH có ảnh hưởng đến trình hình thành bào tử vi khuẩn Bacillus subtilis ii MỤC LỤC Trang tựa Lời cảm tạ i Tóm tắt ii Mục lục iii Danh sách chữ viết tắt iv Danh sách hình v Danh sách bảng vi Phần MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích – Yêu cầu Phần TỔNG QUAN 2.1 Đại cương vi khuẩn Bacilus subtilis 2.1.1 Lịch sử phát triển 2.1.2 Đặc điểm phân loại 2.1.3 Đặc điểm phân bố 2.1.4 Đặc điểm hình thái 2.1.5 Đặc điểm nuôi cấy 2.1.6 Đặc điểm sinh hoá 2.1.7 Cấu trúc kháng nguyên 2.1.8 Tính chất đối kháng B subtilis với số vi sinh vật gây bệnh 2.2 Bào tử vi khuẩn Bacillus subtilis 2.2.1 Khả sinh bào tử 2.2.2 Cấu tạo bào tử 2.2.3 Thành phần hoá học bào tử 2.2.4 Sự nảy mầm bào tử 2.2.5 Sức đề kháng bào tử 2.3 Hệ vi sinh vật đường ruột loạn khuẩn 10 2.3.1 Hệ vi sinh vật đường ruột 10 2.3.2 Vai trò hệ vi sinh vật đường ruột 11 iii 2.3.3 Sự loạn khuẩn 12 2.4 Giới thiệu chung probiotic 13 2.4.1 Định nghĩa 13 2.4.2 Chức sinh học probiotic 13 2.5 Tình hình nghiên cứu ứng dụng chế phẩm chứa vi khuẩn Bacillus subtilis 14 PHẦN NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 3.1 Thời gian địa điểm thực đề tài 16 3.2 Vật liệu thí nghiệm 16 3.2.1 Giống vi khuẩn 16 3.2.2 Môi trường nuôi cấy 16 3.2.3 Hoá chất 16 3.2.4 Thiết bị dụng cụ 16 3.3 Nội dung nghiên cứu 17 3.4 Phương pháp thực đề tài 17 3.4.1 Khảo sát đặc điểm sinh học Bacillus subtilis 17 3.4.2 Các thí nghiệm Bacillus subtilis 17 3.4.2.1 Ảnh hưởng chế độ nuôi cấy (nuôi cấy tĩnh, nuôi cấy lắc) thời gian nuôi cấy đến số lượng vi khuẩn 17 3.4.2.2 Khảo sát môi trường thời gian ni cấy thích hợp cho vi khuẩn Bacillus subtilis phát triển tạo sinh khối 18 3.4.2.3 Khảo sát pH mơi trường thích hợp cho nuôi cấy vi khuẩn Bacilus subtilis 19 3.4.3 Các thí nghiệm bào tử Bacillus subtilis 20 3.4.3.1 Khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ đến tạo bào tử vi khuẩn Bacillus subtilis 20 3.4.3.2 Khảo sát ảnh hưởng pH đến tạo bào tử vi khuẩn Bacillus subtilis 21 PHẦN KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 22 4.1 Khảo sát đặc điểm sinh học Bacillus subtilis 22 4.1.1 Đặc điểm hình thái Bacillus sutilis 22 iv 4.1.2 Quan sát đặc điểm khuẩn lạc Bacillus subtilis 22 4.1.3 Quan sát dăc điểm nuôi cấy Bacillus subtilis môi trường canh23 4.1.4 Tính chất sinh hố 23 4.2 Các thí nghiệm Bacillus subtíils 25 4.2.1 Khảo sát chế độ (nuôi cấy tĩnh, nuôi cấy lắc) thời gian nuôi cấy thích hợp 25 4.2.2 Khảo sát môi trường thời gian ni cấy thích hợp 27 4.2.3 Khảo sát pH mơi trường ni cấy vi khuẩn thích hợp 29 4.2.4 Các thí nghiệm bào tử Bacillus subtilis 30 4.2.4.1 Khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ đến hình thành bào tử Bacillus subtilis 30 4.2.4.2 Khảo sát ảnh hưởng pH đến hình thành bào tử vi khuẩn Bacillus subtilis 32 Phần KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 34 5.1 Kết luận 34 5.2 Đề nghị 34 Phần TÀI LIỆU THAM KHẢO 36 Phần PHỤ LỤC 38 v DANH SÁCH CÁC HÌNH Hình 2.1 Hình thái vi khuẩn Bacillus subtilis Hình 2.2 Quá trình tạo bào tử Hình 2.3 Cấu tạo bào tử Bacillus sutilis Hình 4.1 Tế bào vi khuẩn Bacillus subtilis kính hiển vi độ phóng đại 1000 lần 22 Hình 4.2 Đặc điểm khuẩn lạc Bacillus subtilis môi trường TSA 23 Hình 4.3 Khuẩn lạc Bacillus subtilis mơi trường thạch tinh bột 23 Hình 4.4 Phản ứng lên men số loại đường vi khuẩn Bacillus subtilis 25 vi DANH SÁCH CÁC BẢNG Bảng 2.1 Các phản ứng sinh hoá Bacillus subtilis Bảng 2.2 Sự khác bào tử tế bào sinh dưỡng Bacillus subtilis Bảng 3.1 Bố trí thí nghiệm 18 Bảng 3.2 Bố trí thí nghiệm 19 Bảng 3.3 Bố trí thí nghiệm 20 Bảng 3.4 Bố trí thí nghiệm 21 Bảng 3.5 Bố trí thí nghiệm 21 Bảng 4.1 Ảnh hưởng thời gian chế độ nuôi cấy đến số lượng vi khuẩn Bacillus subtilis 25 Bảng 4.2 Ảnh hưởng môi trường thời gian nuôi cấy đến số lượng vi khuẩn Bacillus subtilis 27 Bảng 43 Ảnh hưởng pH, nhiệt độ thời gian nuôi cấy đến số lượng vi khuẩn Bacillus subtilis 29 Bảng 4.4 Ảnh hưởng nhiệt độ đến hình thành bào tử vi khuẩn Bacillus subtilis 30 Bảng 4.6 Ảnh hưởng pH đến hình thành bào tử vi khuẩn Bacillus subtilis 32 vii ... nghiệm bào tử Bacillus subtilis 30 4.2.4.1 Khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ đến hình thành bào tử Bacillus subtilis 30 4.2.4.2 Khảo sát ảnh hưởng pH đến hình thành bào tử vi khuẩn Bacillus. .. 4.2.1 Khảo sát chế độ (nuôi cấy tĩnh, nuôi cấy lắc) thời gian ni cấy thích hợp 25 4.2.2 Khảo sát mơi trường thời gian ni cấy thích hợp 27 4.2.3 Khảo sát pH môi trường nuôi cấy vi khuẩn. .. cứu khảo sát đặc điểm vi khuẩn Bacillus subtils, tìm hiểu điều kiện ni cấy thích hợp xử lí bào tử để sản xuất chế phẩm sinh học nhằm cung cấp thông tin để chọn lựa điều kiện ni cấy vi khuẩn Bacillus