Nghiên cứu thành phần hóa học và thăm dò hoạt tính sinh học của lá cây bần ổi sonneratia ovata bark, họ bần (sonneraticeae)

13 592 0
Nghiên cứu thành phần hóa học và thăm dò hoạt tính sinh học của lá cây bần ổi sonneratia ovata bark, họ bần (sonneraticeae)

Đang tải... (xem toàn văn)

Tài liệu hạn chế xem trước, để xem đầy đủ mời bạn chọn Tải xuống

Thông tin tài liệu

1 B Cơng trình đư c hồn thành t i: GIÁO D C VÀ ĐÀO T O Đ I H C ĐÀ N NG Đ I H C ĐÀ N NG Ngư i hư ng d n khoa h c: GS.TS NGUY N KIM PHI PH NG NGUY N TH NG C HI N NGHIÊN C U THÀNH PH N HĨA H C VÀ THĂM DỊ HO T TÍNH SINH H C C A LÁ CÂY B N SONNERATIA OVATA BARK, H Ph n bi n 1: GS.TS ĐÀO HÙNG CƯ NG I B N (SONNERATICEAE) Ph n bi n 2: GS.TS NGUY N BIN Chuyên ngành: Hóa h u Mã s : 60.44.27 Lu n văn ñư c b o v t i H i ñ ng ch m Lu n văn t t nghi p th c sĩ Khoa H c h p t i Đ i h c Đà N ng vào ngày 25 tháng năm 2011 TÓM T T LU N VĂN TH C SĨ KHOA H C ĐÀ N NG - 2011 * Có th tìm hi u lu n văn t i: - Trung tâm Thông tin - H c li u, Đ i h c Đà N ng - Thư vi n trư ng Đ i h c Sư ph m, Đ i h c Đà N ng 3 M Đ U LÝ DO CH N Đ TÀI N n y h c c truy n Vi t Nam v i b dày l ch s lâu ñ i phong phú, đa s thu c ñư c bào ch t lo i c thiên nhiên Ngày v i s phát tri n c a n n dư c h c hi n đ i n n dư c h c c truy n không ng ng phát tri n ñ i m i Các lo i thu c ngày hi n ñư c t ng h p hay bán t ng h p, n n s n xu t thu c th gi i Vi t Nam ch y u bán t ng h p t h p ch t ñư c phân l p t thiên nhiên Vì lý đó, ngành hóa h u chuyên v h p ch t thiên nhiên ñang phát tri n m t cách m nh m góp ph n vào vi c cung c p nhi u lo i thu c có ích cho ngư i R ng ng p m n C n Gi v i ñ c thù h d tr sinh quy n ñư c th gi i công nh n, vùng r ng ng p m n v i qu n th th c v t ña d ng ph i xanh c a thành ph H Chí Minh Đ ng Nai R ng ng p m n C n Gi có u ki n mơi trư ng r t ñ c bi t, h sinh thái trung gian gi a h sinh thái th y v c v i h sinh thái c n, h sinh thái nư c ng t h sinh thái nư c m n H sinh thái th c v t v i nhi u lo i cây, ch y u b n tr ng, m m tr ng, qu n h p đư c đơi - b n tr ng xu i, ñư c…; lo i nư c l b n chua, b n i, ô rô, d a lá, ráng V i l i th nơi b o t n ñư c nhi u lo i ñ ng th c v t quý hi m, r ng ng p m n C n Gi ñang ñư c nhà khoa h c c a ngành ñ u tư nghiên c u R ng ng p m n C n Gi v i sinh kh i loài th c v t l n v n chưa ñư c khai thác hi u qu , ph c v l i ích cho ngư i m t s h p ch t h u phân l p t ñ c h u c a r ng ng p m n như: h p ch t phorbol ester ñư c cô l p t thân Excoecaria agallocha L [15] có ho t tính kháng virus HIV; h p ch t benzoxazolin v i d n xu t đư ng ribose có ho t tính kháng ung thư đư c l p t rơ - Acanthus illicifolius L [16]; h p ch t cineol, eucalyptol đư c tìm th y tinh d u tràm dài- Malaleuca leucadendran có tác d ng sát trùng m nh ñ i v i nhi u lo i vi khu n gây b nh [2,3] Các nghiên c u sinh h c g n ñây ch r ng vùng r ng ng p m n ch a nhi u h p ch t có giá tr bào ch thu c triterpen, steroid, glycosid, alkaloid h p ch t quinon V i hy v ng có th l p ñư c nhi u h p ch t có giá tr t m t nh ng lồi c a r ng ng p m n khơng đ lãng phí ngu n sinh kh i l n này, chúng tơi đ nh hư ng nghiên c u thu c chi B n có t i r ng ng p m n C n Gi mà n hình b n i- Sonneratia ovata Bak M C ĐÍCH NGHIÊN C U Lu n văn đ t m c tiêu tìm hi u thành ph n hóa h c thăm dị ho t tính sinh h c c a B n i - Sonneratia ovata Bak (thu c h B n, Sonneratiaceae) Đ I TƯ NG VÀ PH M VI NGHIÊN C U Trong lu n văn tơi sâu vào tách, tinh ch xác đ nh c u trúc c a m t s h p ch t hóa h c cao eter d u h a B n i Sonneratia ovata Bak (thu c h B n, Sonneratiaceae), thu hái C n Gi - TPHCM PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN C U 4.1 Nghiên c u v lý thuy t - T ng quan v m t s loài h B n (Sonneratiaceae) - Tìm hi u B n i – Sonneratia ovata Bak v hình thái th c v t, phân b , thành ph n hóa h c thăm dị ho t tính sinh h c 4.2 Phương pháp th c nghi m - Phân l p ch t s ch b ng phương pháp SKC, SKBM - Xác đ nh c u trúc hóa h c h p ch t cô l p ñư c b ng phương pháp ph hi n ñ i như: Ph 1H - NMR, 13C - NMR, DEPT - 135 90: Ghi máy c ng hư ng t h t nhân Bruker t n s 500 MHz cho ph 1H NMR 125 MHz cho ph 13C- NMR T t c ph ñư c ghi t i: Phịng phân tích trung tâm, trư ng Đ i H c Khoa H c T Nhiên, s 227, ñư ng Nguy n Văn C , qu n 5, TPHCM Ý NGHĨA KHOA H C VÀ TH C TI N C A Đ TÀI T k t qu nghiên c u, lu n văn ñã thu ñư c m t s k t qu v i nh ng đóng góp thi t th c sau: - Cây B n i – Sonneratia ovata Bak ñư c nghiên c u v thành ph n hóa h c ho t tính sinh h c - Cao eter d u h a, cao etyl acetat, cao metanol ñã ñư c th ho t tính gây ñ c t bào ưng thư ngư i Hela, NCI-H46, MCF-7 K t qu cho th y, t t c cao đ u khơng có kh gây đ c t bào ung thư c t cung Hela, t bào ung thư ph i NCI-H46 t bào ung thư vú MCF-7 n ng đ 100µg/ml sau 48 gi c m ng - T cao eter d u h a, b ng s c ký c t silica gel nhi u l n, k t h p v i s c ký b n m ng l p ñư c ch t s ch HE 2.2.4, HE7.1 HE8.1 Các k t qu nghiên c u s góp ph n vào vi c ch ng minh b o v s ña d ng sinh h c c a th m th c v t Vi t Nam C U TRÚC C A LU N VĂN Ngồi ph n m đ u, k t lu n tài li u tham kh o lu n văn g m có chương sau : Chương 1: T ng quan Chương : Các phương pháp nghiên c u, th c nghi m CHƯƠNG Chương 3: K t qu th o lu n T NG QUAN V M T S LOÀI TRONG H B N (SONNERATIACEAE) Chi Sonneratia th gi i có kho ng 20 lồi Theo Ph m Hồng H [1] , Vi t Nam hi n có loài thu c chi là: - B n tr ng – Sonneratia alba J.E Smith - B n vô cánh – Sonneratia apetala Buch – Ham in Sim - B n chua – Sonneratia caseolaris (L.) Engl - B n ñ ng - Sonneratia griffithii Kurz - B n i - Sonneratia ovata Bak V i gi i h n m t ñ tài lu n văn t t nghi p, l a ch n kh o sát thành ph n hóa h c c a B n i- m t lồi đ c h u c a r ng ng p m n C n Gi CHƯƠNG CÁC PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN C U VÀ TH C NGHI M 2.1 Hóa ch t thi t b 2.2 Phương pháp nghiên c u 2.2.1 Phương pháp chi t ngâm d m 2.2.2 Phương pháp tách tinh ch ch t 2.2.3 Phương pháp xác đ nh c u trúc hóa h c c a m t h p ch t 2.3 Th c nghi m 2.3.1 X lý nguyên li u B n i 2.3.2 Đi u ch lo i cao 2.3.3 Cô l p h p ch t có cao eter d u h a (E) CHƯƠNG trưng c a n i đơi >C=CH- khung sư n ursan t i δC 139,2 (>C=) 126,3 (-CH=) Đi u phù h p v i ph K T QU VÀ TH O LU N H-NMR (δppm), vùng t trư ng th p xu t hi n tín hi u c a m t proton olefin t i δH 3.1 Cô l p h p ch t cao eter d u h a T B n i (40kg) ñi u ch cao metanol (1,5 kg), s d ng 5,23 (dd; 3,5Hz; 3,5Hz) k thu t trích pha r n silica gel ñã phân cao metanol thành nh ng cao 30 có tính phân c c khác cao eter d u h a (246,7 g), cao etyl 29 20 acetat (389,3 g), cao metanol (800 g) 19 Ch n cao eter d u h a ñ s c ký c t, cô l p h p ch t, ñã thu ñư c 12 22 18 11 h p ch t, ký hi u l n lư t HE2.2.4, HE7.1 HE8.1 25 26 13 17 COOH 14 Các h p ch t có tính ch t v t lý trình bày sau: O H p ch t HE2.2.4 (972,1 mg) ñư c l p t phân đo n HE2.2 H3C 1' 28 27 O 2' 23 24 - Tr ng thái: ch t r n d ng b t, màu tr ng ngà Acid 3β-O-acetylursolic (HE2.2.4) - Nhi t đ nóng ch y: 287-289oC (k t tinh l i CHCl3) - S c kí l p m ng gi i ly h dung ly E : EA (8:2), hi n hình b n m ng b ng dung d ch H2SO4 25% nung nóng b n, cho m t v t δC = 78,8 cho bi t nguyên t 13 Tín hi u ph C-NMR carbon C-3 mang nhóm -OH b acyl hóa b d ch chuy n v vùng t trư ng th p bình thư ng (>CH-O-CO-) trịn, màu h ng, v i giá tr Rf = 0,69 (hình 2.4) H-NMR (500MHz, CD3OD + CDCl3, δppm)( Hình 3.3): Đư c Ph 1 H-NMR, vùng trư ng cao, th y xu t hi n tín hi u proton (5 tín hi u d ng mũi đơn tín hi u d ng mũi đơi, khơng k trình bày b ng 3.1 - Ph có ñ c ñi m sau: - Ph 10 16 15 3.1.1 Kh o sát c u trúc hóa h c c a HE2.2.4 21 13 C-NMR (Hình 3.4) k t h p v i DEPT-NMR (125MHz, tín hi u c a proton metyl nhóm acetoxy -OCOCH3 c ng hư ng CD3OD + CDCl3, δppm) (Hình 3.5, hình 3.6): Đư c trình bày t i b ng 3.1 -CH3 ñ c trưng c a triterpen có khung sư n ursan Bi n lu n c u trúc hóa h c Ph 13C-NMR k t h p v i DEPT-NMR (δppm) cho th y vùng t trư ng th p, ngồi tín hi u c ng hư ng c a nguyên t carbon c a acid carboxylic t i δC 181,3 (-COOH) cịn có tín hi u c a nguyên t carbon carboxylat t i 172,7 (-COO-) Bên c nh c p tín hi u ñ c δH 2,03) ng v i proton nhóm Nh ng nh n đ nh cho th y h p ch t HE2.2.4 m t d n xu t d ng acetyl c a m t acid triterpen có khung sư n ursan-12-en So sánh v i tài li u tham kh o[17], h p ch t HE2.2.4 ñư c xác ñ nh acid 3β-O-acetylursolic 10 B ng 3.1 S li u ph NMR c a h p ch t HE2.2.4 so sánh 15 28,8 16 25,0 [17] v i acid 3β-O-acetylursolic Acid 3β-O- HE 2.2.4 acetylursolic 13 C-NMR 38,4 δH ppm (J, Hz) 1,65 (m); 1,07 1,87 (m); 1,07 24,3 -CH2- - 40,4 >C< 18 53,6 2,18 (d; 11,0) 53,9 >CH- 19 39,6 1,33 (m) 39,2 >CH- 20 39,6 1,33 (m) 39,9 >CH- 21 31,2 1,50 (m) 31,5 -CH2- 22 C- NMR 37,6 1,70 (m) 37,7 -CH2- 23 28,3 0,86 (s) 28,9 -CH3 24 17,1 0,85 (s) 17,1 -CH3 O- 25 15,7 0,95 (s) 15,9 -CH3 DEPT 38,4 -CH2- 28,6 -CH2- (m) 24,1 4,0) -CH2- 48,2 13 V trí C 1,99 (dd; 13,5; 25,0 17 (CD3OD + CDCl3) (pyridin-d5) 1,25 (m) (m) -CH- 80,9 4,49 (dd; 7,5; 6,5) 78,8 38,0 - 37,7 >C< 26 17,5 0,85 (s) 17,1 -CH3 55,7 0,82 (m) 56,3 >CH- 27 24,1 1,63 (s) 24,1 -CH3 18,6 1,52 (m); 1,36 19,0 -CH2- 28 180,1 - 181,3 -COOH 29 17,7 0,76 (d; 11,0) 17,5 -CH3 30 21,6 0,94 (d; 6,5) 21,3 -CH3 1’ 170,7 - 172,5 -COO- 2’ 21,3 2,04 (s) 24,3 -CH3 (m) 33,5 40,0 10 11 0,92 (dd; 11,5; 33,8 -CH2- - 39,9 >C< 47,9 1,54 (m) 42,9 >CH- 37,2 - 37,7 >C< 23,7 1,91 (m); 1,07 21,5 -CH2- 8,5) (m) 12 125,6 5,23 (dd; 3,5; 3,5) 126,3 -CH= 13 139,4 - 139,2 >C= 14 42,6 - 40,0 >C< 11 12 * Nhi t đ nóng ch y 192-1930C (k t tinh h n h p dung môi clorofom : metanol (1:1) * S c kí l p m ng cho m t v t nh t có Rf = 0,62 v i h dung mơi clorofom: etyl acetat (8:2), hi n hình b ng dung d ch H2SO4 50% cho m t v t tím, sau chuy n thành xanh đ m (Hình 2.3) H-NMR (DMSO-d6) (Hình 3.1), δppm: đư c trình bày * Ph b ng 3.2 * Ph 13 C-NMR (DMSO-d6) (Hình 3.2) k t h p v i DEPT-NMR 90 135 (Hình 3.3): đư c trình bày b ng 3.2 Bi n lu n c u trúc Ph Hình 3.3: Ph c ng hư ng t h t nhân H-NMR c a HE2.2.4 13 H-NMR k t h p v i ph C-NMR DEPT-NMR cho th y tín hi u c ng hư ng ñ c trưng c a H-1’, H-6, C1’, C-5, C-6 c a h p ch t β-Sitosterol-3-O-β-D-glucopyranoside nên ch n s li u ph c a β-Sitosterol D-glucose ñ so sánh ñ i chi u K t qu đư c trình bày b ng 3.2 cho th y có s trùng kh p V y h p ch t HE7.1 β-Sitosterol-3-O-β-D-glucopyranosid có c u trúc hóa h c sau: 21 H3C 20 18 12 CH3 OH 4' 6' 2' O 3' Hình 3.4: Ph c ng hư ng t h t nhân 13C-NMR c a HE2.2.4 3.1.2 Kh o sát c u trúc hóa h c c a HE7.1 H p ch t HE7.1 (26.911,5mg) thu ñư c t phân ño n HE7 c a cao eter d u h a có ñ c ñi m sau: * D ng b t màu tr ng 10 O 5' HO HO 16 14 15 23 13 CH3 28,29 C2H5 26 17 11 19 H 22 OH 1' β -Sitosterol-3-O-β-D-glucopyranosid (HE7.1) CH3 24 25 27 CH3 13 B ng 3.2 So sánh ph NMR c a h p ch t HE7.1 v i β-Sitosterol-3- V trí CDEPT 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 -CH2-CH2>CH-CH2=C< =CH-CH2>CH>CH>C< -CH2-CH2>C< >CH-CH2-CH2>CH-CH3 -CH3 >CH-CH3 -CH2-CH2>CH>CH-CH3 -CH3 -CH2-CH3 1’ >CH- O-D-glucopyranosid[12, 16] 13 H-NMR, ppm C-NMR, ppm HE7.1 HE7.1 β-Sitosterol [12, 16] (DMSO-d6) (DMSO-d6) 36,80 37,1 29,23 31,5 3,62 (1H, m) 70,07 71,5 39,33 42,1 140,10 140,1 5,31 (1H, brd) 121,19 121,1 31,34 31,8 31,34 31,8 49,58 50,1 36,17 36,3 20,56 21,0 38,29 39,6 41,82 42,1 56,15 56,5 23,82 24,2 27,74 28,1 55,41 55,8 0,63 (3H, s) 11,62 11,2 0,89 (3H, s) 19,04 19,3 35,44 36,0 18,57 18,7 33,33 33,8 25,45 26,0 45,13 45,6 28,69 29,0 18,90 19,0 19,65 19,7 22,59 23,0 11,74 11,9 D-glucose 4,83 (2H, d, J=5,0) 100,79 104,0 14 2’ 3’ 4’ 5’ 6’ >CH>CH>CH>CH-CH2- 4,80 (1H, dd, J=2,5; 5,0) 73,43 76,74 76,69 76,93 61,06 74,1 76,8 70,6 76,8 61,8 Hình 3.1: Ph c ng hư ng t h t nhân 1H-NMR (DMSO-d6) c a HE7.1 Hình 3.2: Ph c ng hư ng t h t nhân 13C-NMR (DMSO-d6) c a HE7.1 15 3.1.3 Kh o sát c u trúc hóa h c c a HE8.1 H p ch t HE8.1 (120 mg) ñư c l p t phân đo n HE8 Phân đo n thu ñư c sau s c ký c t cao eter d u h a, có ñ c 16 - Ph HSQC (CD3OD) (hình 3.15), ph HMBC (CD3OD) (hình 3.16) Bi n lu n c u trúc c a HE8.1 ñi m sau: * Xác ñ nh HE8.1 m t cerebrosid - H p ch t d ng b t vơ đ nh hình, màu tr ng - Ph - SKLM cho m t v t nh t màu tím đen có Rf 0,38 v i h gi i ly carbon t c p >C=O amid (δC 177,2; C-1’), b n carbon olefin –CH= cloroform : metanol (8: 2), hi n hình b ng thu c th H2SO4 30%, (δC 130,6; 131,1; 131,9; 134,3), carbon lo i >CH-O- (δC 77,96 - nung nóng b n 71,6), hai carbon lo i –O-CH2 (δC 62,7; 69,8), m t carbon lo i -CH- - Ph HR-ESI-LC-MS h p ch t HE8.1 (hình 3.7) cho mũi ion gi NH (δC 54,7), nhóm metylen –CH2- (δC 23,0-33,0) hai carbon phân t v i m/z 736,5346 [M+Na]+ (∆ = 1,2 mili mass), ng v i –CH3 n m 13 C k t h p v i DEPT-NMR cho th y h p ch t có m t cu i m ch dài (δC 14,5) H-NMR xu t hi n tín hi u c a b n proton olefin t i δH 5,4-5,8; công th c phân t C40H75NO9Na V y MHE8.1 C40H75NO9 - Ph - Ph HR-ESI-LC-MS c a m nh HE8.1-B (hình 3.8) cho mũi ion gi proton c a nhóm metylen –CH2– t i δC 1,33-1,29 proton phân t v i m/z 298,2744 [M+H]+ (∆ = 0,4 mili mass), ng v i cơng c a hai nhóm metyl –CH3 (n m cu i hai m ch dài) δC 0,91 [6H (t, δH 4,27 th c phân t C18H36NO2 V y MHE8.1-B C18H35NO2 8,6 Hz)] Ph - Ph GC-MS c a m nh HE8.1-A (hình 3.9) cho bi t ester béo [1H (d, 8,4 Hz, H-1’’)] tương ng v i m t carbon anomer có δC metyl 2-hydroxyhexadecanoat C17H34O3 v i th i gian lưu tR 21,262 103,0 nên phân t h p ch t HE8.1 có ch a m t phân t ñư ng V y MHE8.1-A C17H34O3 H-NMR cho th y có m t proton anomer V y có th k t lu n r ng h p ch t HE8.1 m t cerebrosid - Ph GC-MS c a m nh HE8.1-C (hình 3.10) cho bi t acid béo ph n ceramid g m hai dây dài n i v i ngang qua n i amid, acid (9E)-tetradecenoic C14H26O2 v i th i gian lưu tR 19,784 V y c u trúc HE8.1 cịn ch a m t phân t đư ng hai n i đơi MHE8.1-C C14H26O2 Tuy nhiên d li u ph NMR chưa cho thông tin c th đ xác - Ph UV-Vis (hình 3.7) h p ch t HE8.1: ph ESI-MS v i ñ u ñ nh ñư c chi u dài, c u trúc c a hai m ch carbon v trí c a n i dò UV cho bi t h p ch t HE8.1 không h p thu UV, v y h p ch t đơi mà ph i d a vào d li u MS GC-MS c a s n ph m thu HE8.1 s khơng có n i đơi liên h p đư c sau th c hi n ph n ng th y gi i HE8.1 ph n ng oxy - Ph H-NMR (CD3OD) (hình 3.11), trình bày b ng 3.3; ph 13 C-NMR (CD3OD) (hình 3.12), ph DEPT (hình 3.13), trình bày b ng 3.3 - Ph COSY (hình 3.14) hóa HE8.1-B * Xác đ nh c u trúc c a m nh HE8.1-A HE8.1-A s n ph m thu đư c sau trích dung d ch sau ph n ng th y gi i HE8.1 v i dung môi n-hexan K t qu GC-MS c a s n ph m HE8.1-A este methyl 2-hydroxyhexadecanoat C17H34O3 (M 17 = 286) (Hình 3.7), v i đ tương h p 18 RMF = 888 V y có th xác ñ nh ñư c chi u dài c a m ch carbon đ u tiên có 16 carbon có m t nhóm ceton -C=O v trí 1’ m t nhóm –OH v trí 2’, u s n ph m HE8.1-C acid tetradeca-9-en-oic (C14H26O2, M = 226) (hình 3.10), v i đ tương h p RMF = 781 [ Theo tài li u tham kh o [51] phân tích acid béo thu đư c sau ph n ng oxy hóa s s phù h p v i tương quan HMBC c a H-3’ [1,75 (m)] v i C-2’ d ng c t DB-1, nhiên v i u ki n phịng thí nghi m GC-MS (73,13) c a b mơn Hóa h u s d ng c t HP-5 (là c t chuyên d ng ñ * Xác ñ nh c u trúc c a m nh HE8.1-B phân tích tinh d u) nên ñ tương h p gi a ph c a thư vi n ph HE8.1-B s n ph m thu đư c sau trích dung d ch sau ph n ng th y gi i HE8.1 v i dung môi cloroform K t qu LC-MS c a c a h p ch t th p 800, v y k t qu GC-MS c a s n ph m HE8.1-C có th ch p nh n ñư c] s n ph m HE8.1-B cho mũi ion gi phân t m/z 298,2744 [M+H]+ V y m nh HE8.1-B m t aminoalcol có 18C v i hai nhóm – (∆ = 0,4 mili mass), phù h p v i công th c phân t C18H35NO2 (M = OH t i v trí s 3, m t nhóm –NH2 t i v trí s 2, hai n i đơi 297) (hình 3.8) V y có th xác ñ nh ñư c chi u dài c a m ch carbon trí C-4 C-13 (do H-13 H-14 ch ng ch p lên cho tín hi u th hai có 18C; d a tương quan HMBC c a H-2 [4,00 (dd, 3,7; d ng mũi ña t i δH 5,43 có h ng s ghép J nh nên n i đơi t i C-13 có 7,4)] v i C-3 (72,9), H-2 v i C-1 (69,8), H-1 [3,72 (dd; 3,4; 10,2)] c u hình Z) v i C-2 (54,7) tương quan COSY c a H-2 v i H-1, H-2 v i H-3 * Xác ñ nh lo i đư ng v trí đư ng g n vào ceramid [4,14 (m)] cho th y HE8.1-B mang hai nhóm –OH - Ph m t nhóm –NH2 v trí và v H-NMR, cho th y H-1” [4,27 (d; 8,4)], H-2” [3,20 (t; 9,7; 5,6)], H-3” [3,34 (t; 8,11; 9,7)], v y ñư ng phân t h p ch t v trí s H p ch t HE8.1 có hai n i đơi C=C c u trúc c a HE8.1 đư ng glucose có c u hình β (b ng 3.1) Ph HMBC cho m nh HE8.1-A khơng có s hi n di n c a n i đơi v y hai n i đơi th y có tương quan gi a proton anomer H1’’ (δH 4,27 ) v i carbon s n m C-1 (δC 69,8), v y phân t đư ng s g n vào v trí C-1 c a ceramid m ch carbon c a m nh HE8.1-B; d a vào tương quan HMBC c a H-2 v i C-4 (131,2), H-3 v i C-4, H-6 [2,07 (m)] v i C-5 * K t lu n c u trúc hóa h c c a h p ch t HE8.1 (134,4), H-5 [5,48 (d; 16,3)] v i C-3, H-4 [5,72 (dd; 7,6;16,3)] v i C- HE8.1 m t cerebrosid v i ph n ceramid g m hai dây dài 16C 3, v y n i đơi ñ u tiên ñư c xác ñ nh t i v trí C-4, H-4 H-5 18C n i v i qua m t n i amid, có h ng s ghép J = 16,3 nên n i đơi C-4 có c u hình E Cịn m t g n v trí s 2, n i đơi n a khơng th xác đ nh đư c c th v trí khơng cho tương đơi C-4, C-13 v i c u hình l n lư t E, Z M t phân t ñư ng quan HMBC, nên mu n xác đ nh n i đơi ph i ti n hành ph n ng glucose có c u hình β g n vào ceramid t i v trí C-1 b ng n i O- oxy hóa n i đơi m nh HE8.1-B b ng dung d ch KMnO4/H+ glucosid * HE8.1-C s n ph m thu đư c sau trích dung d ch sau ph n ng oxy hóa HE8.1-B v i dung môi cloroform K t qu GC-MS c a dây 16C có m t nhóm –OH dây 18C có m t nhóm –OH v trí s hai n i 19 - Ph 20 MS c a HE8.1 cho mũi ion gi phân t NH2 m/z 736,5346 [M+Na]+ (∆ = 1,2 mili mass), phù h p v i công th c phân t C40H75NO9 (M = 713) (hình 4.7) đư c thiên nhiên thư ng có mang b n nhóm –OH t i v trí C-2, 15 17 Các tài li u tham kh o [46,47,48,49,50] cho th y cerebrosid cô l p C-3, C-4, C-2’ n cho phân t 12 HO 16 14 13 18 OH có b n carbon th tính t i C-2, CHE8.1-B (C18H35NO2) 3, C-4 C-2’ v i c u hình 2S, 3S, 4R 2’R Tuy nhiên, h p ch t HE8.1 t i C-4 có m t n i đơi s kh m t phân t nư c nên lúc tâm th tính ch cịn l i C-2, C-3, C-2’ v i c u hình 2S, 3R 2’R (do có xu t hi n n i đơi t i v trí s nên làm cho th t 1''' 3''' HOOC ưu tiên s b thay ñ i làm cho C-3 s khơng cịn mang c u hình S n a 5''' 7''' 4''' 2''' 6''' 13''' 11''' 9''' 10''' 8''' 12''' 14''' mà s mang c u hình R [46,48,49,50]) So sánh d li u ph NMR c a h p ch t HE8.1 v i h p ch t Soya-cerebroside I [47] tương ñ ng; ngo i tr h p ch t HE8.1 có hai n i đơi cịn Soya-cerebroside I có hai n i đơi Đ ngh HE8.1-C (C14H26O2) cho th y có m C-4 C-13, C-4 C-8 (b ng 3.3) c u trúc c a h p ch t HE8.1 là: 1-O-β-D- O HO glucopyranosyl-(2S,3R,2’R,4E,13Z)-2-N-[2'hydroxyhexadecanoylamino]-octadeca-4,13-dien-1,3-diol O OH 1'' (CH)12CH3 2' 16' 2' 4' OH HE8.1-A (C17H34O3) 10 10 OH 3' O 1' 2'' 3'' O HN O 5'' HO HO Scifinder t i ñ i h c Saskatchewan, Canada (tháng 7/2011) 1' 3' 4'' H p ch t HE8.1 h p ch t m i, ñã ñư c ki m tra b ng ph n m m H3C OH 6'' C u trúc h p ch t Soya cerebroside I [47] (CH2)7CH3 21 22 O HO HO HO 3" 2,07 (m) 33,7 18 7-11 1,29-1,33 (m) 30,2-30,8 - 12 1,29-1,33 (m) 33,1 - 5,43 (t; 5,3) 129,9 12 5,43 (t; 5,3) 131,9 13, 15 15 1,29-1,33 (m) 33,3 - 1,29-1,33 (m) 23,7 - 0,91 (t; 8,6) 14,5 17 - 177,2 - 2’ 3,98 (dd) 73,1 1’, 3’ 3’a 1,75 (m) 35,9 1’, 2’, 4’ 3’b 1,58 (m) - - 4’a 1,30 (m) 26,2 - 4’b 1,41 (m) - - 5’-15’ 1,29-1,33 (m) 23,0-33,0 - 16’ 1’ O 0,91 (t; 8,6) 14,5 15’ HMBC H 13C 1’’ 4,27 (d; 8,4) 104,7 1, 2’’ 10' 8' 13' 12' 14' 10 15' 4' 16' 18 5" O 2" 3, 11' 9' 7' 6' 2' 134,4 17 HN 5' 3' 5,48 (d; 16,3) 14 6" 4" OH 13 1' 17 11 12 15 13 1" 14 HO OH Tương quan HMBC HE8.1 Công th c c u t o h p ch t HE8.1 B ng 3.3: S li u ph c a h p ch t HE8.1 HE8.1 No 16 δH (CD3OD) δC (CD3OD) 2’’ 3,20 (t; 9,67; 5,6) 75,0 1’’, 3’’ 1a 4,12 (m) 69,8 1’’, 3’’ 3,34 (t; 8,11; 9,7) 78,0 2’’, 4’’ 1b 3,72 (dd; 3,4; 10,2) - - 4’’ 3,27 (m) 71,6 3’’, 5’’ 4,0 (dd, 3,7; 7,4) 54,7 1’, 1, 3, 5’’ 3,30 (m) 78,0 4’’, 6’’ 4,14 (m) 72,9 1, 2, 6’’a 3,87 (d; 11,8) 62,7 5’’ 5,72 (dd; 7,6;16,3) 131,2 2, 6’’b 3,70 (m) - - 23 24 3.2 Th ho t tính kháng vài dịng t bào ung thư c a cao u ch t b n i Cao metanol cao eter d u h a, cao etyl acetat, cao metanol sơ ñ 2.1 ñã ñư c g i th ho t tính kháng vài dịng t bào ung thư Hela (ung thư c t cung), NCI-H460 (ung thư ph i), MCF-7 (ung thư vú) K t q a (b ng giá tr I%) đư c trình bày b ng 3.5 Nh n xét Các cao ñ u khơng cho th y có ho t tính dòng t bào ung thư Hela (ung thư c t cung), NCI-H460 (ung thư ph i), MCF-7 (ung thư vú) Trong đó, t cao eter d u h a, lu n văn l p đư c h p Hình 3.11: Ph c ng hư ng t h t nhân 1H-NMR c a HE8.1 ch t acid 3β-O-acetylursolic (HE2.2.4) h p ch t ñã ñư c ch ng minh có ho t tính kháng vài dịng t bào ung thư bi u bì ngư i ung thư vòm mũi HONE-1, ung thư vòm mi ng KB ung thư ñ i tràng HT29[22], kí sinh trùng s t rét Plasmodium falciparum dịng t bào MRC-5[64] Đi u có th lý gi i h p ch t HE2.2.4 hi n di n hàm lư ng h p ch t khơng có ho t tính v i nh ng dịng t bào ung thư th nghi m Hình 3.12: Ph c ng hư ng t h t nhân 13C-NMR c a HE8.1 25 26 K T LU N VÀ KI N NGH bi n ñây l n ñ u tiên h p ch t ñư c tìm th y có s hi n T 10,9 kg b t khô, thu hái khu sinh quy n r ng ng p m n C n Gi - TP HCM, ñã ñi u ch ñư c cao methanol thô (1,5 kg) T cao phân thành nh ng cao có đ phân c c khác cao eter d u h a (246,7g), cao etyl acetat (389,3g), cao metanol (800g), ph n l i mu i vơ Các cao đư c th nghi m ho t tính c ch vài dòng t bào ung thư Hela (ung thư c t cung), NCI-H460 (ung thư ph i), MCF-7 (ung thư vú) K t qu cho th y cao ñ u khơng có ho t tính c ch s phát tri n c a dòng t bào ung thư th nghi m T 246,7 gam cao eter d u h a, b ng s c ký c t silica gel l p l i nhi u l n, k t h p v i s c ký b n m ng l p đư c ch t s ch acid 3β-O-acetylursolic (HE2.2.4); β-Sitosterol-3-O-β-D- glucopyranoside (HE7.1) 1-O-β-D-glucopyranosyl-(2S,3S,4E)-2N-[(2’R)-2'-hydroxyhexadecanoylamino-4-octadecadien-1,3-diol (HE8.1) C u trúc c a ch t ñã ñư c xác ñ nh b ng vi c k t h p phương pháp ph hi n ñ i ph c ng hư ng t h t nhân H-NMR, 13C-NMR, DEPT, HSQC HMBC H p ch t acid 3β-O-acetylursolic (HE2.2.4) ñã ñư c cô l p t i, qu c a Ilex paraguariensis (Maté)[17], trái tươi B n Ternstroemia japonica[46], Ilex affinis Ilex buxifolia[18], r Ficusmicrocarpa[22], r [70] Smith Craibiodendron henryi W W Eucalyptus globulus[28], Rabdosia japonica (Burm F.), Hara var Glaucocalyx (Maxim.) Hara[71] Dù ph di n B n i M t khác lu n văn ñã l p đư c h p ch t HE8.1 h p ch t m i, ñã ñư c ki m tra b ng ph n m m Scifinder t i ñ i h c Saskatchewan, Canada (tháng 7/2011) Các nghiên c u hóa h c cao cịn l i v n cịn đư c ti p t c th c hi n đ góp ph n minh ch ng cho tính đa d ng sinh h c c a khu h th c v t r ng ng p m n C n Gi TP HCM ... bi t, h sinh thái trung gian gi a h sinh thái th y v c v i h sinh thái c n, h sinh thái nư c ng t h sinh thái nư c m n H sinh thái th c v t v i nhi u lo i cây, ch y u b n tr ng, m m tr ng, qu... ñ t m c tiêu tìm hi u thành ph n hóa h c thăm dị ho t tính sinh h c c a B n i - Sonneratia ovata Bak (thu c h B n, Sonneratiaceae) Đ I TƯ NG VÀ PH M VI NGHIÊN C U Trong lu n văn tơi sâu vào tách,... eter d u h a B n i Sonneratia ovata Bak (thu c h B n, Sonneratiaceae), thu hái C n Gi - TPHCM PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN C U 4.1 Nghiên c u v lý thuy t - T ng quan v m t s loài h B n (Sonneratiaceae) -

Ngày đăng: 23/12/2013, 16:46

Từ khóa liên quan

Tài liệu cùng người dùng

  • Đang cập nhật ...

Tài liệu liên quan