MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Từ 2000 năm qua, loại nấm thuộc chi Linh chi giới y học hàng đầu phương Đông quan tâm, sản phẩm có nguồn gốc từ linh chi có khối lượng bán hàng cao thị trường thực phẩm y tế Đài Loan, Trung Quốc Gần đây, thể bào tử nấm nhận quan tâm giới y học, mà nguồn hứa hẹn ngành dược phẩm [1] Nhiều hợp chất với hoạt động tim mạch, điều hòa miễn dịch, gây độc tế bào, giảm đau, trị đái tháo đường, chất chống oxy hóa, chất diệt côn trùng cô lập hai thập kỷ qua Chỉ có hai lồi Ganoderma lucidum (Linh chi đỏ; Xích chi) Ganoderma applanatum (Cổ linh chi) thu 130 loại chất chuyển hóa với nhân tế bào loại lanosterol ergosterol (provitamin D2), phân lập chúng với việc xác định hoạt tính sinh học giới thiệu số tài liệu công bố [2] Sự xuất chất chuyển hóa thứ cấp chủ yếu loại nấm tổng hợp phân tử lớn từ cacbon đioxit lượng từ ánh sáng mặt trời mà khơng có chất diệp lục Do đó, ngồi điều kiện khí hậu mơi trường phát triển vi sinh vật xác định chủ yếu loại chất dinh dưỡng chất nơi chúng phát triển, làm cho nấm xuất vùng khác phát triển chất khác nhau, thay đổi thay đổi trình trao đổi chất chúng tạo nhiều loại hóa chất với cấu trúc khác trở thành chất [3],[4] Việt Nam có khí hậu nhiệt đới gió mùa loại thực vật đa dạng sinh học hứa hẹn lượng lớn loài nấm đặc trưng điều kiện cần thiết cho loại nấm sinh tổng hợp hợp chất nghiên cứu loài xuất nơi khác giới Ở Việt Nam có nghiên cứu đến thành phần hóa học nấm vậy, nghiên cứu chủ yếu nhấn mạnh vào nội dung ergosterol (provitamin D 2), mà ergosterol sử dụng số trồng ăn quy mô lớn nguồn cung cấp thay loại vitamin, khoáng chất, amino axit, chất xơ chất béo [5,6] Costa Rica Vì chúng tơi chọn đề tài: “Phân lập xác định cấu trúc hợp chất từ nấm (Ganoderma sinense Zhao, Xu et Zhang) Việt Nam” Nhiệm vụ nghiên cứu Trong luận văn này, chúng tơi có nhiệm vụ: - Chiết chọn lọc với dung mơi thích hợp để thu hỗn hợp hợp chất từ nấm linh chi đen (Ganoderma sinense Zhao, Xu et Zhang) - Phân lập xác định cấu trúc hợp chất từ nấm linh chi đen (Ganoderma sinense Zhao, Xu et Zhang) Đối tượng nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu dịch chiết từ nấm linh chi đen (Ganoderma sinense Zhao, Xu et Zhang) Việt Nam Chương TỔNG QUAN 1.1 Giới nấm Nấm nhóm lớn sinh vật (khoảng 500.000 lồi mơ tả, người ta ước tính có từ đến 1,5 triệu lồi) phân bố rộng rãi tự nhiên, góp phần vào phân hủy chất hữu tham gia vào chu kỳ sinh học, số gây bệnh cho động vật thực vật Ban đầu, loại nấm phân loại giới thực vật cấu trúc chất tạo nên sinh vật coi có cấu trúc chất mà sinh vật phát triển Tuy nhiên, áp dụng sinh học phân tử nghiên cứu phân loại học chúng có cấu trúc gần giống với giới thực vật Nấm sinh vật có nhân điển hình thường tế bào khác với tế bào thực vật thành phần thành tế bào lục lạp thiếu chất diệp lục, nhân có thành tế bào diện ergosterol màng tế bào chất [8] Nấm vi sinh vật dị dưỡng hóa nên có chất dinh dưỡng cách hấp thụ chuyển hóa hợp chất hữu sinh vật khác tổng hợp từ lượng ánh sáng mặt trời cacbon đioxit Các chất dinh dưỡng hịa tan enzyme tiết ra, sau hấp thu qua thành tế bào mỏng phân phối khuyếch tán đơn giản nguyên sinh chất Cùng với vi khuẩn, nguyên nhân thối rữa phân hủy chất hữu [9] Điều ảnh hưởng đến sinh trưởng phát triển chúng tự nhiên kết hợp với chất hữu phân hủy, tham gia vào chu trình tự nhiên cacbon chu trình tự nhiên khác Thơng thường sinh sản vơ tính sinh sản hữu tính, thơng qua bào tử, sinh sản hàng triệu tế bào nấm, có khả phát triển thành loài nấm Các bào tử sinh sau có hợp hai hạt nhân hai sợi nấm tương thích phân bào giảm nhiễm Các hình thái sinh sản bào tử nấm đa dạng cần quan tâm lớn để xác định cấu trúc phân loại chúng [8] 1.1.1 Đặc điểm hình thái chung Nấm loài xác định dựa tập hợp đặc điểm chung, khơng thiết phải tất nhóm đặc điểm xuất nhau, là: a Tổ chức đơn bào, đa bào hay lưỡng hình, khơng thật hình thành mô tế bào b Phần lớn loại nấm bao gồm sợi nấm mà sợi mỏng có vách ngăn với khơng có vách ngăn, đó, có điều kiện cần thiết độ ẩm có nhiều cách khác để hình thành thể bào tử thể c Thực vật chủ yếu lưu trữ vật chất dạng tinh bột, nấm chủ yếu lưu trữ dạng glycogen tương tự giới động vật d Thành tế bào chủ yếu gồm polysaccarit protein khác Các polysaccarit quan trọng chitin (polyme N-axetyl glucosamine hay 2(axetylamin)-2-deoxy-D-glucozơ), mannan (polyme mannozơ) glucan (polyme glucozơ) e Chủ yếu ưa khí, có vi khuẩn yếm khí chọn lọc f Dị dưỡng dinh dưỡng, loại enzyme tiêu hóa phân tán bề mặt chất loại nấm bị thối hóa sử dụng nguồn cung cấp chất dinh dưỡng 1.1.2 Sự phân bố môi trường sống Nấm phổ biến thường có sẵn khắp nơi tất chất Chúng phát triển chất khác nhau: Thân mục, đất vườn, phân hữu nguồn gốc động vật khác chí thấy nấm phát triển thuỷ tinh Về mặt phân bố địa lý hầu hết loài phân bố rộng khắp giới, nhiên số lồi có vùng phân bố hạn chế [11] Giống hầu hết nấm hoại sinh, phát triển chất hữu mục nát Một số loài hình thành mối quan hệ cộng sinh với rễ thực vật có hoa, cộng sinh mang lại lợi ích cho hai lồi nấm thực vật có hoa Trong cộng sinh nấm Ectomycorrhizal đóng vai trị đa chức q trình cộng sinh với thực vật bậc cao thuộc hầu hết Basidiomycetes, số có loại nấm xâm nhập vào mô rễ thực vật không sản xuất hạt carpophorus mà ta nhận biết mắt thường [12] 1.1.3 Dinh dưỡng lối sống Nấm sinh vật mà khả tìm nguồn chất hữu cần thiết cho sinh trưởng phát triển chúng cao Điều có nghĩa nguồn dinh dưỡng nấm từ động vật thực vật, tính chất nấm hình thành phụ thuộc vào nguồn dinh dưỡng từ xác động thực vật nấm có vai trị sinh vật hoại sinh (sinh vật sống xác động thực vật), phụ thuộc vào sinh vật sống cộng sinh (sinh vật sống chung với có lợi) sinh vật sống hội sinh (sinh vật sống chung khơng có lợi khơng có hại) ký sinh trùng (sinh vật sống nhờ vào sinh vật chủ gây hại cho vật chủ) [9] 1.1.4 Phân loại vị trí Việc phân loại nấm thay đổi nhiều thập kỷ gần Tuy nhiên, theo “Dictionary of the Fungi” (từ điển Nấm) tái lần thứ bảy, nấm phân loại theo hai ngành: Ngành nấm nhày (Myxomycetes) thể nấm khối chất ngun sinh chất khơng có vách ngăn bao bọc, kích thước tới vài chục centimet, đơn bào, có nhiều nhân (thể hợp bào), di chuyển nuốt thức ăn động vật (amib) Ngành nấm thật (Mycota) đại diện giới Nấm, có cấu tạo thể dinh dưỡng đơn bào (một nhân hay nhiều nhân) đa bào, tế bào nấm có vách ngăn bao bọc tế bào thực vật, đa số có cấu tạo chittin, nhiều tế bào nấm cịn tích trữ đường dạng glycogen giống động vật Tuy nhiên, theo tái lần thứ chín “Dictionary of the Fungi” đối chiếu phân tử (như ARN ribosome 12S) vẽ phát sinh nấm cho thấy thực tế nấm khơng nhóm monophyletic (chung nguồn gốc) mà polyphyletic (nhiều nguồn gốc khác nhau) tiến hóa hội tụ nên có điểm tương đồng Do có điểm tương đồng nguồn gốc polyphyletic, nấm thuộc ba giới khác nhau, giới thực vật, giới động vật nguyên sinh giới nấm Được coi nấm (theo phân chia nấm cũ) mà ngành nấm, chia thành bốn nhánh (phyla) với đặc điểm cụ thể, thể bảng 1.1 Bảng 1.1 Phân loại loài nấm Giới nấm (nấm) Các tính Khơng có vách ngăn nấm sợi nấm Chúng khơng có vách ngăn (đơn hợp Phylum zigomycota (nấm hợp tử) tử) Sinh sản bào tử: Tiếp hợp hai giao tử thành bào tử Ví dụ: Endomycorrhizae Vách ngăn Nhóm loại nấm nhiều phức Phylum ascomycota (nấm sắc - nấm túi tạp hay nang) Sinh sản bào tử nang Ví dụ: Nấm men Vách ngăn Sinh sản bào tử đảm bên Phylum basidiomycota (nấm đảm) Ví dụ: Ectomycorrhizae, Rovellons, Boletus, Linh chi đỏ Không vách ngăn bào tử động Phylum chytridiomycota (nấm roi nấm trứng) 1.1.5 Lớp nấm Basidiomycetes Có giai đoạn sinh dưỡng bao gồm sợi nấm vĩ mô Basidiomycetes trải qua ba giai đoạn phát triển tương ứng với ba hình thức sợi nấm: sợi nấm dạng nhỏ, sợi nấm dạng vừa sợi nấm lớn Đầu tiên sợi nấm đơn bào có vách ngăn phát triển sau nảy mầm từ bào tử sinh sản hình thành từ sợi nấm trưởng thành đơn bội Các sợi nấm có nguồn gốc từ sợi nấm dạng nhỏ Các sợi nấm lớn xảy hình thức sinh sản hữu tính, sợi nấm cấu trúc hình thành cấu trúc hình kẹp (xương mác) vách ngăn, thơng qua trì tình trạng di chuyển hạt nhân dicariontica vách ngăn khác [6] 1.1.6 Họ Polyporaceae Có khoảng 25000 lồi Basidiomycetes 500 lồi thuộc Polyporaceae phân biệt với lồi khác có “lỗ chân lơng”, bên ngồi cứng mà chúng mọc gỗ mục nát tiêu biểu, hầu hết loại nấm thuộc Polyporaceae tìm thấy thời tiết khơ vào mùa đơng, số lồi tìm thấy quanh năm loài Basidiocarps tạo thời gian ngắn [13] 1.2 Linh chi đỏ (Ganoderma lucidum) Nấm Linh chi đỏ gọi nấm Reishi, thuộc chi đặc trưng có hệ thống từ chức sợi nấm cung cấp cho độ bền kết cấu, số bào tử màu nâu bất thường có hai vách phân hủy gỗ gây màu trắng (do suy giảm lignin) Cây mọc hoang rừng gần tất vĩ độ ấm hành tinh, châu Á Mỹ Amazon, vùng khí hậu cận nhiệt đới nhiều ôn đới Tăng trưởng tự nhiên diễn hàng năm thân chết bị hư hỏng, đặc biệt gỗ sồi, phong, du, liễu, hoa mộc lan, mận [13,14] Hình 1.1 Linh chi đỏ 1.2.1 Hình thái học - Mũ nấm (carpophorus): Dài 2-20 cm, lúc đầu thắt nút không đều, đến trưởng thành nhiều mang cấu trúc xác định (hình tai hình thận), thường với bề mặt thơ mịn, bóng sáng, trưởng thành có màu nâu màu vàng - đỏ với vùng sáng trắng phía bên lề, đơi có màu xanh Độ dày đạt tới cm giai đoạn cuối tăng trưởng - Lớp mô mặt mũ nấm (hymenium): Chiều sâu ống cm, bề mặt lỗ có màu trắng, trở thành màu nâu sẫm trưởng thành, đường kính lỗ 47 mm (nhìn thấy mắt thường) - Cuống nấm (stipe): Thời gian đầu chưa có, sau phát triển thường phổ biến với chiều dài khoảng 3-14 cm bề dày đạt tới cm, màu với mũ nấm, thường phát triển lệch bên - Bào tử nấm: Kích thước 7-13 x 5-9 μ; nhiều có hình elip, đơi với típ cắt ngắn; trưởng thành thơ kệch [14,15] 1.2.2 Sự đa dạng chất chuyển hóa nguồn gốc nấm Các chất chuyển hóa thứ cấp đối tượng nhiều đề tài nghiên cứu nấm, liên quan nhiều đến thành phần hợp chất hóa học sản phẩm từ tự nhiên, dẫn đến cô lập loạt hợp chất quan trọng có nguồn gốc từ nấm mà phân loại theo bảng [6] (xem bảng 1.2) a Chất chuyển hóa thứ cấp mà khơng có can thiệp từ axetat (A) b Chất chuyển hóa thứ cấp có nguồn gốc từ axit béo (B) c Polyketit chất chuyển hóa thứ cấp từ vi khuẩn, nấm, thực vật động vật (C) d Tecpen sterol (D) e Chất chuyển hóa thứ cấp có nguồn gốc từ sản phẩm trung gian chu kỳ axit tricacboxylic (E) f Chất chuyển hóa có nguồn gốc từ axit amin (F) Bảng 1.2 Đa dạng chất chuyển hóa có nguồn gốc từ nấm Phân loại A B Chất chuyển hóa Nguồn gốc Estroptomicin Muscarin Methyl salicicat Gravillin B Axit 4-(6-amino-9H-Purin-9-il) D Streptomyces sp Amanita muscarine Phổ biến nhiều loài Chi Penicillium Lentinus edolo Aspergillus oryzae Phổ biến nhiều loài Pseudokoningii propionic Asperopterin Axit 2-D-hidroxidecanoic Tricodermen A1 C Stt* trichoderma Streptomyces sp Phổ biến nhiều loài Grisseofulvun penicillium Pyrenophora avenae Chi Penicillium Chi Penicillium Chi Penicillium Chi Penicillium Monosporium bonorde Steotomyces aureofacines Cronartium fusiliforme Cronartium fusiliforme Giới Helminthosporium Fusarium poae Stereum hirsutum Palmivorus sp Clitocybe illudens Sydowi Aspergillus Fusarum moniliforme Cyathus striatus Cochliobolus miyabeus Paspali claviceps Phổ biến nhiều loài Phổ biến nhiều loài Cereviceae saccharomyces Applanatum sp Cyathus helenae Phellinus torulosus Phellinus pomaceus Nlakesleanus phycomyces Brefaldina A Griseofulvin Axit orcelinic Pirenoforin Axit puberlonic Purpurogenon Tetrahidrocatenarin Axit fulvic Monordemo Metilantron α-pinen Limonen Longifolen Axit phức tạp Axit esterpuric Isopentasol Torreyol Axit sidon Axit gibberellic Estriantin A Ofiobolin A Paspalacin Ergosterol Cerevisterol Parkeol Friedelin Glachidon Axit natalic Pomaceron β-caroten 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 E F Axit roccellaric Heveadrida Dicetopiperacin L-glycine) Dicetopiperacin Roccellaria mollis Heveae helminthosporium cyclo-(L-prolyl- Fasarium oxysporum cyclo-(L- Phytophthora cinnamomi isoleusil-L-valine) Dicetopiperacin cyclo-(L-tyrosyl- Pestalotia palmarum L-proline) Macrofominol Axit 6-amino penicillinic Macrophomia phaseolina Penicillium chrysogenum Acremoniun Dicacetoxi-cephalosporin C cephalosporium 39 40 41 42 43 44 45 46 *Các cấu trúc liệt kê Phụ lục 1.3 Thành phần hóa học số loài nấm Nghiên cứu tiến hành loài khác cho thấy chất chuyển hóa thứ cấp nấm linh chi nhận quan tâm nhiều nhất, họ vấn tiếp tục xác định cấu trúc mới, phù hợp với hợp chất có nguồn gốc từ nhân tế bào dẫn xuất ergostan (47) lanostan (48) (chủ yếu sterol axit lanostanic) [11] 47 48 1.3.1 Các sterol Các sterol có nhiều loại nấm ergosta-5,7,22-trien-3-β-ol (ergosterol-49) chiếm khoảng 0,3-0,4% G Lucidum, ergosta-7,22-dien-3- 10 Hình 3.23: Phổ 1H-NMR hợp chất 96 Hình 3.24: Phổ 13C-NMR hợp chất 96 50 Hình 3.25: Phổ 13C-NMR hợp chất 96 Hình 3.26: Phổ DEPT hợp chất 96 51 Hình 3.27: Phổ DEPT hợp chất 96 52 Hình 3.28: Phổ HMBC hợp chất 96 53 Hình 3.29: Phổ HMBC hợp chất 96 54 Hình 3.30: Phổ HMBC hợp chất 96 55 Hình 3.31: Phổ HSQC hợp chất 96 56 Hình 3.32: Phổ HSQC hợp chất 96 57 KẾT LUẬN Nghiên cứu thành phần hoá học dịch chiết nấm Linh chi đen (Ganoderma sinense Zhao, Xu et Zhang) thuộc họ Ganodermaceae Việt Nam thu số kết sau: - Nấm Linh chi đen chiết với dung môi metanol ngày, cất thu hồi dung môi thu cao metanol thô (121g) - Bằng phương pháp phân bố cao metanol nước chiết với dung môi chọn lọc chưng cất chân không thu 28 g cao etylaxetat 33g cao butanol - Phân lập hợp chất từ cao etylaxetat phương pháp sắc ký thu hợp chất 95 (123mg) hợp chất 96 (31mg) - Sử dụng phương pháp phổ đại: phổ UV, phổ hồng ngoại IR, phổ khối lượng (EI-MS), phổ cộng hưởng từ hạt nhân 1H-NMR, 13 C-NMR, DEPT, HMBC HSQC để xác định cấu trúc hợp chất tách Các kết phổ xác định: hợp chất 95 ergosterol; hợp chất 96 esgosterol peroxit 58 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Vũ Văn Chuyên, Lê Trần Chấn, Trần Hợp (1987), Địa lý họ Việt Nam, Nhà xuất Khoa học kỹ thuật, Hà Nội Nguyễn Thượng Dong người khác (2006), Nghiên cứu thuốc từ thảo dược, Nhà xuất Khoa học kỹ thuật, Hà Nội Nguyễn Văn Đàn, Nguyễn Viết Tựu (1985), Phương pháp nghiên cứu hoá học thuốc, Nhà xuất Y học, Hà Nội Phạm Hoàng Hộ (1992), Cây cỏ Việt Nam, Montreal Trần Văn Sung (2002), Phổ cộng hưởng từ hạt nhân hoá hữu cơ, Nhà xuất Đại học Quốc gia Hà Nội Đào Hữu Vinh, Nguyễn Xuân Dũng, Trần Thị Mỹ Linh, Phạm Hùng Việt (1985), Các phương pháp sắc ký, Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội Tiếng Anh Jong, S C and Birmingham, J M 1992 Medicinal benefits of the mushroom Ganoderma Adv Appl Microbiol 37: 101-34 Jordan K Zjawiony; “Biologically Active Compounds from Aphyllophorales (Polypore) Fungi”; J Nat Prod 2004, 67, 300-310 Wainwright, M,(1995).”Introducción a la biotecnología de los hongos” Editorial Acribia, 2ª Pag 57-73 10 Konda Hiroshi; Wakako Tokumoto, Akamoto Kiyoe, Fujii Michico, Hiray Yuko, Yamazaki Kazuo, Komoda Yasuo, Nakamura Hideo, Ishihara Shigemasa and Uchida Masuro; “The Biologically Constituents of Ganoderma lucidum (FR) KARST Histamine release_Inhibitory Triterpenes”; Chem Pharm buit 33(4) 1367-1374, 1985 11 Nieto Ivonne J.;Valencia Meiser A.;“Esteroles, ácidos grasos e 59 hidrocarburos de los cuerpos fructíferos de Ganoderma Australe”; bol soc chil qm v.47 n.4 concepción dic 2002 12 Trigos Landa Ángel Rafael; Qmica de los hongos En “producción de la vitamina D2 a partir de Hongos Macromicetos: Aspectos Científicos, Técnicos y Económicos”; Editorial Guadalupe Pág 34-36 13 Antonio G González, León Francisco, Rivera Augusto, Padrón J., javier González Javier, Zuluaga J., Quintana J., Estévez F., and Bermejo Jaime; “New Lanostanoids from the Fungus Ganoderma concinna”; J Nat Prod 2002, 65, 417-421 14 Gausen H., Chadefaud M.;”El Reino de los Hongos” Editorial Reverté s.a, 1989 pag 327-351 15 Hawksworth, D L., P M Kirk, B C Sutton, and D N Pegler “Ainsworth and Bisby''s Dictionary of the Fungi” 7th Ed CAB International, Wallingford, United Kingdom (1983), 509p 16 Herrera, T y M Ulloa.1990 El Reino de los Hongos Micología básica y aplicada Universidad Autónoma de México Fondo de cultura Económica México pag 552 17 Webster, J 1980 Introduction to fungi Cambridge University Press Cambridge UK Pag 669.` 18 Ulloa, M 1991 Diccionario ilustrado de micología Universidad Autónoma de México pag 310 19 VOLK TOM; “An introduction to the characters used to identify poroid wood decay fungi”;Dept of Biology University of Wisconsin-La Crosse; McIlvainea 14 (2): 74-82, 2000 20 http://www.bluewillowpages.com/mushroomexpert/ganoderma_lucidum html 21 G.-S SEO AND KIRK; “Ganodermataceae: nomenclature and clasification; pag 17-18 College of Agriculture; Chungnam National University; Taejon, Korea; CABI Bioscience,Egham,UK Pag 22 Nishitoba, T., Sato, H., Shirasu, S and Sakamura, S.1986 Evidence on the strain-specific terpenoid pattern of Ganoderma lucidum Agric Biol Chem 50: 2151-2154 23 Rivera Augusto, Nieto J Ivonne, Valencia Meiser A.; “Composición y Cuantificación por Cromatografía de Gases Acoplada a Espectrometría 60 de Masas de la Fracción Esterólica de Once Hongos Colombianos”; Universidad nacional de Colombia, facultad de Ciencias; Revista Colombiana de Química, Volumen 31, No de 2002 24 Norman, A W Ed., 1980 Vitamin D molecular Biology and clinical Nutrition;Marcel Dekker, nueva York 25 Weete, J D 1989 Fungal sterols Adv Lipid Res 23: 115–167 26 Wasser, sp.; Weis, A L Critical Rev Immunology 1965,1999 27 Jiang-Jing Gao, Norio Nakamura, Byung-Sun Min, Akiko Hirakawa, Feng Zuo, and Masao Hattori; “Quantitative Determination of Bitter Principles in Specimens of Ganoderma lucidum Using High-Performance Liquid Chromatography and Its Application to the Evaluation of Ganoderma Products” Chem Pharm Bull 52(6) 688—695 (2004) 28 Min, B Y., Gao, J J., Nakamura, N and Hattori, M 2000 Triterpenes from the spores of Ganoderma lucidum and their cytotoxicity against Meth-A and LLC tumor cells Chem Pharm Bull 48: 1026-1033 29 Lin, L J and Shiao, M S 1987 Separation of oxytriterpenoids from Ganoderma lucidum by high-performance liquid chromatography J Chromatogr 410:195-200 30 Tie Z.; Huang, X Dictionary of Traditional Chinese Medicine; The Commercial Press Ltd.: Hong Kong, 1988; p 201 31 Wu, T.-S.; Shi, L.-S.; Kuo, S.-C J Nat Prod 2001, 64, 1121-1122 32 Gao, J.-J.; Min, B.-S.; Ahn, E.-M.; Nakamura, N.; Lee, H.-K.; Hattori, M Chem Pharm Bull 2002, 50, 837-840 33 Toshihiro Akihisa,Masaaki Tagata, Motohiko Ukiya, Harukuni Tokuda, Takashi Suzuki, and Yumiko Kimura; Oxygenated Lanostane-Type Triterpenoids from the Fungus Ganoderma lucidum; J Nat Prod 2005, 68, 559-563 34 Tian-Shung Wu, Li-Shian Shi, and Sheng-Chu Kuo; Cytotoxicity of Ganoderma lucidum Triterpenes; J Nat Prod 2001, 64, 1121-1122 35 Jiang-Jing Gao, Byung-Sun Min; New Triterpene Aldehides, Lucialdehides A-C, from Ganoderma lucidum and Their Against Murine and Human Tumor Cells Chem, Pharm.Bull, 50(6)837-840(2002) 36 Byung-Sun Min, Jiang-Jing Gao; Triterpenes frm the Spors of Ganoderma lucidum and Their Cytotoxicity against Meth-A and LLC 61 Tumor Cell; Chem, Pharm.Bull, 48(7) 1026-1033 (2002) 37 Peter Kleinwächter, Ngo Anh, Trinh Tam Kiet, Brigitte Schlegel, HansMartin Dahse, Albert Härtl, and Udo Gräfe; Colossolactones, New Triterpenoid Metabolites from a Vietnamese Mushroom Ganoderma colossum§ J Nat Prod 2001, 64, 236-239 38 Chun-Nan Lin, Yih-Fen Fann and Mei-ing Chung; Steroids of formasan Ganoderma tsugae;Phytochimestry, Vol.46,pp.1143-1146,1997 39 King-Hong Gan, Yih-Fen Fann, Shu-Huy Hsu, Kuo-Wha Kuo and ChunNan Lin; Mediatión of the Cytotoxicity of Lanostanoidsd and Steroids of Ganoderma tsugae through Apoptosis and cell Ctcle J Nat Prod 1998,61,485-487 40 Deng-Hai Chen and Willian Kuan-Dee Chen; “Determination of Ganoderic Acids in Triterpenoid Constituents of Ganoderma tsugae”; Journal of food and Drug Analysis, vol 11, N0.3, 2003, Pages 195-201 41 Lin Z B., “Modern Research of Ganoderma lucidum,” 2nd ed., Beijing Medical University Press, Beijing, 2001, pp 302—304 42 El-Mekkawy S., Meselhy M R., Nakamura N., Tezuka Y., Hattori M.,Kakiuchi N., Shimotohno K., Kawahata T., Otake T., Phytochemistry,49, 1651—1657 (1998) 43 Sonoda Y., Sekigawa Y., Sato Y., Chem Pharm Bull., 36, 966— 973(1988) 44 Kohoda H., Tokumoto W., Sakamoto K., Fuji M., Hirai Y., Yamasaki K., Komoda Y., Nakamura H., Ishihara S., Uchida M., Chem Pharm Bull., 33, 1367—1374 (1985) 45 Min B S., Gao J J., Hattori M., Lee H K., Kim Y H., Planta Med., 67, 811—814 (2001) 46 Min B S., Nakamura N., Miyashiro H., Bae K H., Hattori M., Chem Pharm Bull., 46, 1607—1612 (1998) 47 Min B S., Gao J J., Nakamura N., Hattori M., Chem Pharm Bull., 48, 1026—1033 (2000) 48 Gao J J., Min B S., Ahn E M., Nakamura N., Lee H K., Hattori M., Chem Pharm Bull., 50, 837—840 (2002) 49 Takashi Mizuno; “Studies on Bioactive Substances and Medicinal Effects of REISHI, (Ganoderma lucidum)”; Shizuoka University, Japan 62 Pag 1-6, 1999 50 Ear Oedema and Tumor Promotion Mice Phytother Res 81, 10-13 51 Mizuno, T Food Rev Int 1995, 11, 129-133 52 Suay, I.; Arenal, F.; Asenio, F J.; Basilio, A.; Cabello, M A.; Diez, M T.; Garcia, J B.; Gonzalez del Val, A.; Gorrochategui, J.; Hernandez,P.; Pelaez, F.; Vicente, M F Antonie van Leeuwenhoek 2000,78, 129-139 53 Mothana, R A A.; Jansen, R.; Juelich, W.-D.; Lindequist, U J Nat Prod 2000, 63, 416-418 54 Smania, A., Jr.; Delle Monache, F.; Smania, E F A.; Cuneo, S R Int J Med Mushrooms 1999, 1, 325-330 55 Tuzz-Ying Song and Gow-Chin yen Antioxidant Properties of Antrodia camphorata in Submerged Culture; J Agric Food Chem 2002, 50, 33223327 56 Kino, K.; Yamashita, A.; Yamaoka, K.; et al Isolation and characterization of a new immunodulatory protein, Ling Zhi-8(LZ-8), from Ganoderma lucidium J Biol Chem 1989, 264, 472-478 57 Hashimoto, T.; Asakawa, Y Heterocycles 1998, 47, 1067-1110 58 Lee, I.-K.; Yun, B.-S.; Cho, S.-M.; Kim, W.-G.; Kim, J.-P.; Ryoo, I.J.;Koshino, H.; Yoo, I.-D J Nat Prod 1996, 59, 1090-1092 59 Nuevas Fuentes de Antioxidantes Naturales Editor Alfredo Rosas Romero, Agosto 2004 Programa de Cooperación Iberoamericano de Ciencia y Tecnología para el Desarrollo (CYTED) Ministerio de Ciencia y tecnología de Venezuela 60 J.J Hicks, “Bioquímica”, Ed Mcgraw Hill interamericana, México D.F, 2001 PP 129-329 61 Geissman, T A., Crout, D H., “Organic Chemistry of Secondary Plant Metabolism” University of California, Los Angeles, April of 1969 pp 61-65 62 http://huitoto.udea.edu.co/∼framacogfit/Esteroides/Esteroles 63 Manual de Técnicas de Investigación CYTED: Iberoamericano de Ciencia Y Tecnología para el Programa Desarrollo Subprograma X Química Fina Farmacéutica; pág: 63-70 64 Brand-Williams, W.; Cuvelier, M.E.; Berset, C 1995 Use of a free radical method to evaluate antioxidant activity Lebensm.-Wiss u – Technol 1995, 28:25-30 63 65 Cavin, A.; Hostettmann, K.; Dyatmyko, W.; Potterat, O 1998 Antioxidant and lipophilic constituents of Tinospora crispa Planta Med 64:393-396 66 Pannala, A.S.; Chan, T.S.; O’Biren, J.; Rice-Evans, C 2001 Flanonoid B-ring chemistry and antioxidant activity: Fast reaction kinetics Biochem Biophys Res Comm 282:1161-1168 67 Re, R., Pellegrini, N Proteggente, A., Pannala, A., Yang, M., and Rice-evans, C “Antioxidant activity applying and improved ABTS Radical Cation Decolaration Assay” Free Radical Biology and Medcine 1999, 26, 1237 68 Arnao, M; Cano, A.; Acosta, M 1999 Methods to measure the antioxidant activity in plant material A comparative discussion Free Rad Res 31:S8996 69 www.aist.go.jp/RIODB/SDBS/menu-e.html 70 Barrera, E “Estudio químico de metabolitos secundarios del hongo macromiceto Laetiporus sulphureos”, Tesis de Química, Departamento de Química, Universidad Nacional de Colombia, Santa fe de Bogota, 2004 64 ... luận văn này, chúng tơi có nhiệm vụ: - Chi? ??t chọn lọc với dung mơi thích hợp để thu hỗn hợp hợp chất từ nấm linh chi đen (Ganoderma sinense Zhao, Xu et Zhang) - Phân lập xác định cấu trúc hợp chất. .. hợp chất từ nấm linh chi đen (Ganoderma sinense Zhao, Xu et Zhang) Đối tượng nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu dịch chi? ??t từ nấm linh chi đen (Ganoderma sinense Zhao, Xu et Zhang) Việt Nam Chương... khoáng chất, amino axit, chất xơ chất béo [5,6] Costa Rica Vì chọn đề tài: ? ?Phân lập xác định cấu trúc hợp chất từ nấm (Ganoderma sinense Zhao, Xu et Zhang) Việt Nam? ?? Nhiệm vụ nghiên cứu Trong luận