Ðây phiên html tập tin http://iasvn.org/uploads/files/dautay_1008085239.pdf G o o g l e tự động tạo phiên html tài liệu crawl web Để liên kết tới đánh dấu trang này, sử dụng URL sau: http://www.google.com/search?q=cache:j2g %E1%BA%A5y+in+vitro%22&hl=vi&ct=clnk&cd=4&gl=vn Google mối liên hệ đến tác giả Những cụm từ tìm kiếm này tơ sáng: môi trường nuôi cấy in vitro Page Trung tâm Nghiên cứu Khoai tây, Rau & Hoa – ẢNH H ƯỞNG C ỦA BI ỆN PHÁP X Ử LÝ KH Ử TRÙNG M ẪU VÀ CÁC Y ẾU T Ố MÔI TR ƯỜNG TRONG NHÂN NHANH GI ỐNG DÂU TÂY IN VITRO Phạm Xuân Tùng & Phạm Thị Lan Trung tâm Nghiên cứu Khoai tây, Rau & Hoa Viện Khoa học Kỹ thuật Nông nghiệp miền Nam Tóm tắt Các thí nghiệm đượ tiến hành đểđánh giá hiệu khử trùng mẫu CH c ảnh hưởng số yếu tố môi trường đến việc nhân nhanh giống dâu tây in vitro Kết cho thấy với chế phẩm CH 36%, dung dịch 8% có hiệu khử trùng tốt với mẫu chồi đỉnh xử lý 15 phút (85,6% sống không bị nhiễm nấm, khuẩn) Môi trường MS có bổ sung 0,4-0,6 mg/l BAP cho hệ số nhân chồi cao (51,6 lần) với chất lượng chồi tốt Chồi tách từ cụm nuôi cấy MS+BAP vươn thân tốt cấy chuyển hai lần cách 15 ngày mơi trường MS khơng có chất điều hịa sinh trưởng MS có bổ sung 0,2 mg/l NAA 0,2 g/l than họat tính thích hợp cho việc tái sinh rễ in vitro Phối hợp với phun bổ sung phân NPK tím Atonik, 10 ngày lần, giá thể đất mùn đen thích hợp cho việc cấy chuyển dâu tây vườn ươm Từ khóa: dâu tây, Fragaria x ananasa, mơi trường Murashige-Skoog, calcium hypochlorite, 6-benzylamino purine, naphthalene-acetic acid, indole-butyric acid Summary Experiments were conducted to investigate the effect of CH on sterilization of apical doom and influence of other factors in the culture medium on in vitro rapid propagation of strawberry Results indicated that 8% solution of the currently available preparation 36% CH was highly effective in sterilization of apical dooms from runners for 15 minutes (85.6 % live explants free from comtamination) MS medium containing 0.4-0.6 mg/l BAP gave the highest shoot multiplication rate (51.6x) with good shoot appearance Shoot buds excised from callus masses, cultured in MS medium suplemented with high concentration of BAP, grew best in height when subcultured twice after every 15 days on MS medium free of plant growth regulators MS medium suplemented with 0.2 mg/l NAA and 0.2 g/l active charcoal showed the best results in in vitro regeneration of root system Incombination with NPK and Atonik sprays at 10-day intervals, the black peatmoss gave the best results in transplanting the in vitro plantlets into the nethouse nursery Key words: strawberry, Fragaria x ananasa, Murashige – Skoog medium, calcium hypochlorite, 6-benzylamino purine, naphthalene acetic acid, indole-butyric acid Page Trung tâm Nghiên cứu Khoai tây, Rau & Hoa – ĐẶT V ẤN ĐỀ Như với nhiều lọai trồng nhân giống vơ tính khác, ni cấy mơ biên pháp kỹ thuật đượ sử dụng rộng rãi đểnhân nguồn giống bệnh dâu tây (Fragaria x c ananasa) Có thể tái sinh in vitro từ mảnh (Nehra & Stushnoff, 1989; Liu & Stanford, 1988), từ nõan chưa thụ tinh tràng hoa (Prediery cs, 1989), từ hạt phấn (Rosati cs, 1975) phôi chưa trưởng thành (Wang cs, 1984) Tuy nhiên, phương pháp có ý nghĩa thực tiễn phổ biến tạo mẫu bệnh từ mô phân sinh, nuôi cấy callus, tạo nhân nhanh cụm chồi, tạo có rễ in vitro, sản xuất xuất giống từ thân bò (runner) Chất lượng giống in vitro yếu tố có ảnh hưởng quan trọng đến hiệu qủa sản xuất giống tiêu chuẩn khả sinh trưởng suất vườn dâu (Rancillac & Nourrisseau, 1989; Stapteton & cs, 2001) Nuôi cấy mô kỹ thuật ứng dụng nhân nhanh giống dâu tây Đà Lạt năm gần Tuy nhiên, giống số sở nhân giống đưa sản xuất khác chất lượng sức sống Hệ số nhân vấn đề quan trọng đượ quan tâm, kích thước quy mơ rễ vấn đềcó c ý nghĩa định đến sức sống, khả phục hồi phát triển nhanh cấy chuyển giá thể ex vitro Báo cáo trình bày số kết nghiên cứu nhằm xác định yếu tố ảnh hưởng môi trường nuôi cấy in vitro giá thể ex vitro nhằm xây dựng hịan chỉnh quy trình sản xuất giống chất lượng cao phục vụ sản xuất Đà lạt V ẬT LI ỆU VÀ PH ƯƠNG PHÁP NGHIÊN C ỨU 2.1 Vật liệu nghiên cứu Vật liệu giống Angelique ( Mỹ Đá) nhập nội từ Israel, giống thích ứng tốt với điều kiện khí hậu Đà Lạt có nhiều đặc điểm ưu việt đẹp, cứng suất cao 2.2 Phương pháp nghiên cứu Mơi trường Murashige- Skoog (MS) (1962) có bổ sung 8g/l agar, 30 g/l đường pH 5.8 đượ dùng làm môi trường nuôi cấy cho thí nghiệm (TN) ni c cấy in vitro Phương pháp bố trí cho thí nghiệm mơ tả Thí nghiệm 1: Khảo sát nồng độcalcium hypochlorite (CH)[36 % Ca(OCl) ] thời gian xử lý khử trùng mẫu ban đầu Các nghiệm thức gồm: C 1.1 = CH %, 10 phút C 2.1 = CH 6%, 10 phút C 1.2 = CH %, 15 phút C 2.2 = CH 6%, 15 phút C 3.1 = CH 8%, 10 phút C 3.2 = CH 8%, 15 phút Chồi đỉnh tay non (runner) khoẻ mạnh đượ chọn làm vật liệu cho c trình nhập mẫu Chồi đượ rửa bụi đất xà phòng trước c xử lý dung dịch khử trùng CH với nồng độ thời gian khử trùng Page Trung tâm Nghiên cứu Khoai tây, Rau & Hoa – theo nghiệm thức nêu Trước tách đỉnh sinh trưởng, mẫu xử lý rửa nước cất vô trùng – lần điều kiện vô trùng Mỗi mẫu đỉnh sinh trưởng đượ cấy ống nghiệm có chứa ml mơi c trường tiệt trùng TN đượ bố trí hòan tòan ngẫu nhiên với ba lần nhắc lại, c 30 mẫu / lần nhắc Chỉ tiêu theo giõi tỉ lệ (%) mẫu sống nấm, khuẩn 20 ngày sau cấy Thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hưởng nồng độ6-benzylamino purine (BAP) môi trường MS đến tốc độnhân chồi Các nghiệm thức gồm: C = MS + 0,0 mg/l BAP C = MS + 0,6 mg/l BAP C = MS + 0,2 mg/l BAP C = MS + 0,8 mg/l BAP C = MS + 0,4 mg/l BAP C = MS + 1,0 mg/l BAP Những mẫu sống, có sức sinh trưởng tốt thu đượ từ TN đượ c c chọn làm mẫu cấy đểtạo chồi TN đượ bố trí hịan tịan ngẫu nhiên với ba lần c nhắc lại, 10 bình/ lần nhắc, chồi / bình tam giác 250 ml chứa 40 ml mơi trường tiệt trùng (theo nghiệm thức) Các số liệu thu thập sau 50 ngày cấy gồm: hệ số nhân (số chồi/cụm chồi); trọng lượng trung bình cụm chồi Thí nghiệm 3: Xác định mơi trường vươn thân cho dâu tây nuôi cấy in vitro Các nghiệm thức gồm: V 1.1 = MS + 0,0 mg/l BAP , cấy chuyền lần * V 1.2 = MS + 0,0 mg/l BAP, cấy chuyền hai lần ** V 2.1 = MS + 0,05 mg/l BAP, cấy chuyền lần V 2.2 = MS + 0,05 mg/l BAP, cấy chuyền hai lần V 3.1 = MS + 0,1 mg/l BAP, cấy chuyền lần V 3.2 = MS + 0,1 mg/l BAP, cấy chuyền hai lần * Cấy chuyền lần: nuôi 30 ngày chuyển sang môi trường mới; ** Cấy chuyền hai lần: nuôi 30 ngày, 15 ngày chuyển lần sang môi trường có hàm lượng BAP; Mẫu cấy chồi có kích thước tách từ cụm chồi chọn từ nghiệm thức tốt TN2 TN gồm ba lần nhắc với 10 bình tam giác 250 ml / lần nhắc, 15 chồi / bình Chỉ tiêu theo giõi: chiều cao trung bình chồi (cm) sau 30 ngày Thí nghiệm 4: Khảo sát ảnh hưởng naphthalene-acetic acid (NAA) indolebutyric acid (IBA) nồng độkhác đến khả rễ dâu tây in vitro Các nghiệm thức gồm: R = MS R = MS + 0,1 mg/l NAA R = MS + 0,1 mg/l IBA R = MS + 0,2 mg/l NAA R = MS + 0,2 mg/l IBA R = MS + 0,3 mg/l NAA R = MS + 0,3 mg/l IBA Page Trung tâm Nghiên cứu Khoai tây, Rau & Hoa – Cây đơn lẻ đồng đượ chọn từ nghiệm thức tốt TN làm vật c liệu Các nghiệm thức đượ bố trí hịan tịan ngẫu nhiên với ba lần lặp lại, lần c 10 bình tam giác 250 ml với 20 cây/bình Mơi trường cho TN rễ in vitro cịn bổ sung thêm 0,2 g/l than hoạt tính Số liệu thu thập sau 15 ngày cấy: số rễ trung bình / cây, chiều dài rễ trung bình / (cm) Thí nghiệm 5: Khảo sát ảnh hưởng số loại giá thể phân bón đến tỷ lệ sống sức sinh trưởng in vitro vườn ươm TN đượ bố trí đểkhảo sát số loại giá thể phân bón khác nhằm c xác định đượ lọai giá thể phân bón phù hợp cho dâu tây in vitro cấy c chuyển ex vitro Tất loại giá thể xử lý vô trùng dung dịch formalin theo phương pháp thơng thường Các lọai phân bón hóa học đượ bổ sung tùy nghiệm thức bón c dạng phun sương Hàm lượng số lần bón cho nghiệm thức: g/l, 3lần/tháng Thành phần lọai phân bón sử dụng sau: + Atonik 1.8 DD, gồm đồng phân: Sodium -5- nitroguaire olate 0,3% Sodium - o- nitrophen olate 0,6% Sodium - p- nitrophen olate 0,9% + NPK tím: 15% N, 5% P O , 20% K O; 0,5% Bo, 0,02% Fe, 0,02% Zn + Urea: 46 % N Cây in vitro có rễ 10 ngày tuổi chuyển vườn ươm (đểnguyên bình) đểthích ứng (acclimatization) tuần Sau đó, lấy khỏi bình, rửa mơi trường bám rễ cấy vào khay xốp 96 bầu (đường kính bầu cm) Các nghiệm thức đượ bố trí ngẫu nhiên nhà lưới với lần nhắc lại, c 100 / lần nhắc Trong năm ngày đầu, đượ che 60 % nắng trực tiếp c lưới đen thoáng từ h -16 h Các kỹ thuật chăm sóc khác áp dụng theo quy trình chung nhà mạ cấp Trung tâm nghiên cứu Khoai tây, Rau & Hoa Các nghiệm thức gồm: G = đất mùn đen + NPK tím G = đất fine đỏ+ NPK tím G = đất mùn đen + urea G = đất fine đỏ+ urea G = đất mùn đen G = đất fine đỏ G = đất mùn đen + NPK tím + Atonik Chỉ tiêu theo giõi: tỉ lệ sống (%); chiều cao trung bình/ sau 30 ngày K ẾT QU Ả VÀ TH ẢO LU ẬN Thí nghiệm 1: Hiệu tiệt trùng nồng độvà thời gian xử lý CH Kết khảo sát ảnh hưởng CH nồng độvà thời gian khác đến tỷ lệ sống nấm khuẩn giai đoạn tái sinh in vitro, cho thấy nồng độ 8% CH thời gian 15 phút thích hợp (Bảng 1) Nghiệm thức cho tỷ lệ Page Trung tâm Nghiên cứu Khoai tây, Rau & Hoa – sống, bệnh (nấm, khuẩn) cao (85,6%) khác biệt có ý nghĩa so với nghiệm thức khác Kết tương thích với kết SánchezCuevas & Salaverría (2004) sử dụng sodium hypochlorite phù hợp với quan sát trước tác giả Bảng Tỷ lệ (%) mẫu sống, nồng độCH thời gian xử lý khác Nghiệm thức 10 phút 15 phút Trung bình theo C C = 4% CH 12,2 f 25,6 e 18,9 c C = 6% CH 48,9 d 66,7 c 57,8 b C = 8% CH 75,6 b 85,6 a 80,7 a Trung bình theo T 45,6 b 59,3 a CV% = 4,27 Chú thích: - C = nồng độ; T = Thời gian - Các nghiệm thức đơn lẻ (in nghiêng) có chữ khơng khác biệt có ý nghĩa với P = 1%; - Các trung bình theo C T có chữ khơng khác biệt có ý nghĩa với P = 1%; Thí nghiệm 2: Ảnh hưởng nồng độ 6-benzylaminopurine (BAP) môi trường MS đến tốc độnhân chồi (hệ số nhân) Theo Bhatt & Dhar (2000), với mơi trường MS, BAP có hiệu tốt kích thích phát sinh chồi in vitro dâu tây, so với kinetin 2-ip BAP (1-4 mg/l) cho tốc độsố lượng chồi cao đáng kể so với lọai cytokinin sử dụng thí nghiệm họ Nghiên cứu Stapteton cộng (2001) cho thấy, hàm lượng cytokinin cao mơi trường ni in vitro (MS) có ảnh hưởng xấu khả chống chịu đồng ruộng dâu tây Trong môi trường in vitro, hàm lượng cytokinin cao làm giảm số lượng chồi / cụm chất lượng chồi, nhiều trường hợp dẫn đến tượng thủy tinh hóa (vitrification) cụm chồi (Wang cs, 1984) Trong thí nghiệm này, mơi trường MS có bổ sung 0,2 mg/l BAP cho hệ số nhân thấp, với 0,8 mg/l BAP xuất hiện tượng thủy tinh hóa làm cho hệ số nhân giảm (Bảng 2) Kết phù hợp với kết luận tác giả vừa nêu Nghiệm thức 0,6 mg/l BAP cho hệ số nhân cao (51,6 lần), chồi nhỏ thành thục đều, có khối lượng / cụm (3,1g) nhỏ so với nồng độ0,4 mg/l BAP Kết cho thấy nghiệm thức 0,4 0,6 mg/l BAP có hiệu gia tăng hệ số nhân chồi với chất lượng chồi tốt Bảng Hệ số nhân trọng lượng trung bình cụm chồi sau 30 ngày cấy Page Trung tâm Nghiên cứu Khoai tây, Rau & Hoa – Nghiệm thức Hệ số nhân (số chồi/cụm) Trọng lượng cụm chồi (g) C MS + 0,0 mg/l BAP 1,4 e 0,32 e C MS + 0,2 mg/l BAP 35,7 cd 1,83 d C MS + 0,4 mg/l BAP 44,2 b 3,60 a C MS + 0,6 mg/l BAP 51,6 a 3,10 b C MS + 0,8 mg/l BAP 36,9 c 2,40 c C MS + 1,0 mg/l BAP 31,0 d 2,30 cd CV% 5,4 3,06 Prob ** ** Chú thích: - Trong cột, giá trị trung bình có chữ khác biệt khơng có ý nghĩa; ** P=0,01 Thí nghiệm M ơitrường vươn thân thích hợp cho giống dâu tây nuôicấy in vitro Mohamed cs (1991) phát ảnh hưởng chất điều hịa sinh trưởng mơi trường ni cấy kéo dài đến bốn tháng sau trồng đồng ruộng Trong điều kiện môi trường nuôi cấy có nhiều BAP (Thí nghiệm 2), chắn ảnh hưởng ức chế vươn thân xu hướng tiếp tục phát sinh chồi kéo dài sau tách chuyển sang môi trường tái sinh Nghiệm thức MS + 0,0 mg/l BAP + cấy chuyền lần cho đồng đều, thân mập, cứng cát, sức sinh trưởng mạnh, chiều cao cao (3,4cm), cao có ý nghĩa so với nghiệm thức lại (Bảng 3) Kết thu cho thấy cấy chuyền hai lần mơi trường khơng bổ sung BAP có tác dụng rõ làm giảm dần dư lượng BAP mô cụm chồi, tích lũy qúa trình nhân chồi giai đọan trước Vì vậy, chồi khơng tiếp tục phát sinh, mà phát triển chiều cao Kết cho phép xác định đượ môi trường in vitro phù hợp cho dâu tây sinh c trưởng Bảng Chiều cao trung bình 30 ngày sau cấy Nghiệm thức Chiều cao trung bình /cây (cm) V1 MS + 0,0 mg/l BAP + cấy chuyền lần 2,7 b V2 MS + 0,0 mg/l BAP + cấy chuyền lần 3,4 a V3 MS + 0,05 mg/l BAP + cấy chuyền lần 2,0 cd V4 MS + 0,05 mg/l BAP + cấy chuyền lần 2,5 bc V5 MS + 0,1 mg/l BAP + cấy chuyền lần 1,9 d V6 MS + 0,1mg/l BAP + cấy chuyền lần 2,0 cd CV (%) Prob 3,21 ** Chú thích: - Như bảng Page Trung tâm Nghiên cứu Khoai tây, Rau & Hoa – Thí nghiệm 4: Ảnh hưởng NAA IBA nồng độ khác đến rễ dâu tây in vitro Sự phát triển sung mãn hệ rễ nuôi cấy in vitro điều kiện thiết yếu cho phát triển tốt điều kiện nhà lưới đồng ruộng Trong ni cấy in vitro, có mặt cytokinin môi trường thường hạn chế khả rễ Cây hình thành rễ mơi trường có bổ sung auxin khơng cần bổ sung thêm auxin phụ thuộc vào kiểu gen trồng (Wang cs, 1984) Khi nghiên cứu ảnh hưởng auxin (IBA, NAA) lên hình rễ Fragaria x ananasa, Bhatt & Dhar (2000) kết luận: rễ tốt sử dụng NAA với liều lượng thấp (0,1 mg/l) Rễ số lồi đượ hình thành dễ dàng bổ sung thêm c than hoạt tính vào mơi trường ni cấy Than hoạt tính tạo thuận lợi cho phát triển rễ nhờ khả hấp thụ chất thải có tính ức chế thân mơ ni cấy, đồng thời giảm cường độánh sánh vùng rễ phát triển (Druart & Wulf, 1993) Nồng độthan họat tính thích hợp cho dâu tây Tùng cs (2004) xác định 0,2 g/l sử dụng thí nghiệm Kết thí nghiệm cho thấy mơi trường MS có bổ sung 0,2 mg/l NAA, 0,2 g/l than họat tính cho rễ dâu tây in vitro đẹp với số rễ / cao (14,3) chiều dài rễ vừa phải (1,2 cm) (Bảng 4) Nghiệm thức có 0,3 mg/l IBA cho kết tuơng đươ với số rễ 12,9 rễ/cây chiều dài 1,42 cm/rễ Cerovic ng Ruzic (1989) thông báo môi trường rễ in vitro tốt 1/2MS bổ sung g/l than họat tính mg/l IBA Tuy nhiên, kết thu giống dâu tây khác Bảng Số rễ chiều dài trung bình rễ (cm)/ sau 15 ngày ni cấy Nghiệm thức Số rễ trung bình / Chiều dài trung bình rễ (cm) R1 MS + 0,0 auxin 7,7 d 0,43 e R2 MS + 0,1 mg/l NAA 9,3 cd 0,93 c R3 MS + 0,2 mg/l NAA 14,3 a 1,20 b R4 MS + 0,3 mg/l NAA 10,3 c 0,90 cd R5 MS + 0,1 mg/l IBA 10,3 c 0,78 d R6 MS + 0,2 mg/l IBA 12,5 b 1,25 b R7 MS + 0,3 mg/l IBA 12,9 ab 1,42 a CV% 6,16 5,24 Prob ** ** Chú thích: Bảng Thí nghiệm 5: Hiệu số loại giá thể phân bón đến tỷ lệ sống sức sinh trưởng in vitro vườn ươm Trong nghiệm thức thí nghiệm, giá thể đất mùn đen có bổ sung thêm phân tím Atonik cho tỷ lệ sống sức sinh trưởng cao (Bảng & Hình 1) Kết áp dụng thử nghiệm nhà mạ Trung tâm Page Trung tâm Nghiên cứu Khoai tây, Rau & Hoa – Nghiên cứu Khoai tây, Rau Hoa với số lượng 30 ngàn giống tỏ có triển vọng quy trình nhân giống dâu tây bệnh Các quan sát cho thấy, rễ in vitro môi trường MS có bổ sung 0,2 mg/l NAA 0,3 mg/l IBA chuyển giá thể vườn ươm cho kết tương đươ Mặc dù vậy, đểcó hiệu kinh tế nên dùng NAA áp dụng ng vào sản xuất IBA đắt tiền so với NAA Bảng Tỷ lệ % sống chiều cao trung bình số giá thể phân bón ngồi vườn ươm sau 30 ngày cấy Nghiệm thức Tỷ lệ sống (%) Chiều cao trung bình / (cm) G Đất mùn đen + NPK tím 97,7 ab 7,9 b G Đất mùn đen + urea 79,0 b 7,0 c G Đất mùn đen 97,7 ab 4,7e G Đất mùn đen + NPK tím + Atonik 98,3 a 9,6 a G Đất fine đỏ + NPK tím 97,3 ab 7,0 c G Đất fine đỏ + urea 71.3 c 5,4 de G Đất fine đỏ 97,7 ab 5,8 d CV% 4,65 3,81 Prob ** ** Chú thích: Bảng K ẾT LU ẬN 1) Với chế phẩm calcium hypochlorite 36% có thị trường, dung dịch 8% thời gian xử lý 15 phút có hiệu tốt xử lý khử trùng mẫu dâu tây từ đỉnh sinh trưởng (runner) trước nhập mẫu 2) Mơi trường MS có bổ sung 0,6 mg/l BA cho hệ số nhân cao nhất, thích hợp cho việc nhân nhanh in vitro phương pháp nhân cụm chồi nhằm gia tăng hệ số nhân trình nhân giống 3) Nghiệm thức MS + 0,0 (mg/l) BA, cấy chuyền hai lần 30 ngày cho có chiều cao tốt nhất, đồng đều, thân mập, cứng cát thích hợp đểtạo in vitro có sức sinh trưởng tốt 4) Mơi trường MS có bổ sung 0,2 mg/l NAA mơi trường thích hợp đểtái sinh rễ in vitro tối ưu 5) Giá thể đất mùn đen có bổ sung thêm phân tím Atonik qua cho tỷ lệ sống cao sức sinh trưởng tốt nhất, thích hợp cho việc đưa dâu tây in vitro giá thể ex vitro 5 ĐỀ NGH Ị Tiếp tục hoàn thiện quy trình đểáp dụng vào sản xuất thực nghiệm quy mô lớn phục vụ sản xuất dâu tây Page Trung tâm Nghiên cứu Khoai tây, Rau & Hoa – TÀI LI ỆU THAM KH ẢO Bhojwani, S S & M K Razdan, 1996 Plant tissue culture: Theory and Practice A revised edition Elsevier Science B.V The Netherlands cultures of soybean root cells Epx Cell Res 50:151-168 Cerovic, R D Ruzic 1989 Micropropagation of strawberry cvs Cacanska Rana and Senga Sengana, pomological-biochemical characteristics of micropropagated plants Acta Hort 265 (Proc Intern’l Strawberry Symp.), 1989, Cesena, Italy Chandler K Stapteton, D E Legard, J E Price, and J C Sumler 2001 Transplant source affects fruiting performance and pests of “sweet charlie” strawberry in Florida Hortechnology 11 61-65 Druart, P & O D Wulf 1993 Activated charcoal catalyses sucrose hydrolysis during autoclaving Plant Cell Tiss Org Cult 32: 97-99 Bhatt, I D & U Dhar 2000 Micropropagation of indian wild strawberry pp: 8388 Liu, Z R and J C Stanford 1988 Plant regeneration by organogenesis from strawberry leaf and runner tissue HortScience 23 (6): 1057 – 1059 Mohamed, F., H.J Swartz and J G Buta 1991 The role of abscisic acid and plant growth regulators in tissue culture-induced rejuvenation of strawberry ex vitro Plant Cell, Tiss & Organ Cult 25 (1): 75-84 Murashige, T and F Skoog 1962 A revised medium for rapid growth bioassy with tobacco tissue cultures Physiol Plant 15:473-479 Predieri, F., F F Malavasi and M Ancherani 1989 Regeneration of plants from strawberry (Fragaria x ananassa duch.) unpollinated ovaries and petals Acta Hort 295 (Proc Intern Strawberry Symp).1989 Cesena, Italy Rosati, P., M Devreux and U Laneri, 1975 Anther culture of strawberry HortScience 10 (2): 119-120 Nehra, N S and C Stushnoff 1989 Direct shoot generation from strawberry feaf disks J Am Soc Hort Sci 114 (6): 1014 – 1018 Sanchez-Cuevas, M C and J L Salaverria Control of oxidation and contamination of strawberry (Fragaria x ananassa Duch.) cultivated in vitro Revista Científica UDO Agrícola Vol 4, No 1, 2004, pp 21-26 Tùng, P.X., N.T.T Xuân, P X Thủy P T Lan, 2003 Báo cáo KH đềtài “Nghiên cứu chọn tạo giống dâu tây có suất cao, phẩm chất tốt, phù hợp với điều kiện Đà lạt” TT NC Khoai tây, Rau & Hoa, 2003 Wang, D.Y., W P Wergin and R H Zimmerman 1984 Somatic embryogenesis and plant regeneration fron immature embryos of strawberry HortScience 19: 71-72 Page 10 Trung tâm Nghiên cứu Khoai tây, Rau & Hoa – 10 Một số hình ảnh ni cấy nhân nhanh dâu tây in vitro Hình Cụm chồi MS + 0,4mg/l BAP Hình Cụm chồi MS + 0,6mg/l BAP Hình Cụm chồi MS + 0,6mg/l BAP Hình 2.Cụm chồi MS +0,2; 0,4mg/l BAP Hình Mẫu bệnh 20 ngày tuổi Page 11 Trung tâm Nghiên cứu Khoai tây, Rau & Hoa – 11 Hình Cây rễ MS + 0,2mg/l NAA Hình Cây dâu tây in vitro sau trồng ngày vườm ươm Hình 10 Cây dâu tây giá thể đất mùn đen + phân tím + Atonik sau 30 ngày trồng vườn ươm Hình Cây MS, khơng có BAP Hình Cây rễ MS + 0,3mg/l IBA ... rễ dâu tây in vitro Sự phát triển sung mãn hệ rễ nuôi cấy in vitro điều kiện thiết yếu cho phát triển tốt điều kiện nhà lưới đồng ruộng Trong nuôi cấy in vitro, có mặt cytokinin mơi trường thường... cytokinin sử dụng thí nghiệm họ Nghiên cứu Stapteton cộng (2001) cho thấy, hàm lượng cytokinin cao mơi trường ni in vitro (MS) có ảnh hưởng xấu khả chống chịu đồng ruộng dâu tây Trong môi trường in. .. mg/l BAP, cấy chuyền hai lần * Cấy chuyền lần: nuôi 30 ngày chuyển sang môi trường mới; ** Cấy chuyền hai lần: nuôi 30 ngày, 15 ngày chuyển lần sang môi trường có hàm lượng BAP; Mẫu cấy chồi có