Lời cảm ơn Để hoàn thành đề tài khóa luận xin chân thành cảm ơn tới TS Phạm Công Hoạt, Bộ Khoa học Công nghệ Việt Nam; TS Trần Ngọc Hùng, khoa Nông - Lâm - Ng, Trờng Đại học Vinh, đà tận tình hớng dẫn suốt trình thực tập nghiên cứu Đồng thời xin bày tỏ lòng cảm ơn sâu sắc tới anh chị phòng nghiên cứu HCSH từ vi sinh vËt, thc ViƯn Khoa Häc ViƯt Nam, c¸n bé nhân viên Cục Thú Y Hà Nội, đà tận tình giúp đỡ, bảo suốt trình thực tập Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới thầy giáo, cô giáo khoa Nông - Lâm - Ng, Trờng Đại học Vinh, đà trang bị cho tảng kiến thức vững để hoàn thành tốt đề tài Cuối xin chân thành cảm ơn gia đình, bạn bè tập thể lớp 45k NTTS, đà động viên, ủng hộ góp ý cho suốt trình học tập thực đề tài Vinh, ngày 20 tháng 11 năm 2009 Sinh viên: Phan Thị Xuân Lớp: 45k - NTTS Các chữ viết tắt, ký hiệu, đơn vị đo thuật ngữ Mg COD BOD EM DO Cm FAO TNHH WSBV MBV NghÜa tiÕng Anh Miligam Chemical Oxygen Demand Biological Oxygen Demand Effetive Microorganisms Centimet Food Agriculture Organization NghÜa tiếng Việt Miligam Độ tiêu hao oxy hoá học Nhu cầu oxy sinh hoá Chế phẩm vi sinh Hàm lợng Oxy hòa tan Cen ti mét Tổ chức Nông - Lơng Thế White spot Baculovius giới Trách nhiệm hữu hạn Bệnh đốm trắng Monodon Type baculovius Bệnh Tôm kim Danh mục hình Hình 3.1 3.2 3.3 3.4 Tên hình Sự biến động COD lô thí nghiệm Sự biến động BOD5 lô thí nghiệm Sự tăng trởng chiều dài cá lô thí nghiệm Sự tăng trởng khối lợng lô thí nghiệm Trang 41 43 46 47 Các sơ đồ Sơ đồ 2.1 2 Nội dung Quy trình sản xuất bokashy Trầu Sơ đồ bố trí thí nghiệm ảnh hởng Bokashi Trầu lên cá Rô phi Trang 25 27 Danh mục bảng Bảng 3.1 Tên bảng Kết sàng lọc nồng độ chất chiết Trầu có khả ức Trang 31 chế vi khuẩn A hydrophyla vi khuẩn V 3.2 parahaemolyticus Kết thí nghiệm tìm nồng độ chất chiết Trầu thích 32 3.3 hợp có khả ức chế vi khuẩn A hydrophyla Kết thí nghiệm tìm nồng độ chất chiết Trầu thích 33 3.4 hợp có khả ức chế vi khuẩn V.parahaemolyticus Kết sàng lọc nồng độ dịch chiết Trầu có khả ức 35 chế vi khuÈn A hydrophyla vµ vi khuÈn V parahaemolyticus 3.5 chế phẩm bokashi Trầu Kết nồng độ dịch chiết Trầu có bo kashi Trầu 37 3.6 có khả ức chế vi khuẩn A hydrophyla Kết nồng độ dịch chiết Trầu có Bokashi Trầu 38 3.7 có khả ức chế vi khuẩn V parahaemolyticus T¸c dơng øc chÕ thùc nghiƯm vi khn gây bệnh 39 3.8 chế phẩm từ dịch chiết Trầu Biến động hàm lợng COD lô thí nghiệm sử dụng 41 3.9 Bokashi Trầu Biến động hàm lợng BOD lô thí nghiệm sử dụng 42 3.10 3.11 Bokashi Trầu Sự biến động kích thớc cá rô phi lô thí nghiệm Sự biến động trọng lợng cá rô phi lô thí 45 51 nghiệm Mở ®Çu Ch¬ng Tỉng quan 1.1 Đặc điểm đối tợng nghiên cứu 1.1.1 Vi khuÈn Aeromonas hydrophyla 1.1.2 Vi khuÈn Vibrio parahaemolyticus 1.1.3 R« phi v»n (Oreochromis niloticus) 1.2 hiÖn trạng nuôI trồng thuỷ sản nớc ta .5 1.3 tình hình nghiên cứu ứng dụng chế phẩm 1.3.1 Nghiªn cøu vỊ øng dơng vi sinh nuôi trồng thuỷ sản giới 10 1.3.2 Tình hình nghiên cứu ứng dụng chế phÈm sinh häc t¹i ViƯt Nam .13 1.3.3 Chế phẩm vi sinh vật hữu hiệu (EM) 13 1.4 tình hình sử dụng hợp chất chiÕt xuÊt .16 1.4.1 Trªn giới 16 1.4.2 Tại Việt Nam 18 1.5 Bokashi TrÇu .21 Ch¬ng đối tợng, vật liệu, địa điểm, nội dung phơng pháp nghiên cứu 22 2.1 Nội dung nghiªn cøu .22 2.2 Đối tợng nghiên cứu .23 2.3 VËt liƯu nghiªn cøu 23 2.3.1 Dơng thÝ nghiƯm 23 2.3.2 Môi trờng hoá chất .23 2.4 Phơng pháp bố trí thí nghiệm 24 2.4.1 Phơng pháp tách chiết dịch Trầu 24 2.4.2 Quy trình sản xuÊt Bokashi TrÇu 25 2.5 Thí nghiệm khả kháng vi khuẩn 26 2.6 Phơng pháp kiểm tra vi sinh vËt tæng sè .27 2.7 Thí nghiệm ảnh hởng Bokashi Trầu lên 27 2.7.1 Các thông số thÝ nghiÖm 27 2.7.2 Phơng pháp xác định thông số thí nghiệm 28 2.8 Phơng pháp xử lý sè liÖu .30 2.9 Thời gian địa điểm nghiên cứu 30 Chơng Kết nghiên cứu th¶o luËn 31 3.1 KÕt qu¶ thÝ nghiệm với dịch chiết trầu 31 3.1.1 Kết thí nghiệm sàng lọc nồng độ ức chế vi khn A hydrophyla vµ vi khn V parahaemolyticus cđa dịch chiết trầu 31 3.1.2 Kết thí nghiệm xác định nồng độ ức chế vi khuẩn dịch chiết trầu 32 3.2 KÕt thí nghiệm phối hợp 34 3.2.1 Kết sàng lọc nồng độ dịch chiết Trầu 35 3.2.2 Kết thí nghiệm xác định nồng độ dịch chiết Trầu có dung dịch Bokashi Trầu khả ức chÕ 36 3.3 KÕt qu¶ thÝ nghiƯm Bokashi Trầu 40 3.3.1 Độ tiêu hao oxy ho¸ häc COD 40 3.3.2 Nhu cầu oxy sinh hoá BOD .42 3.3.3 ¶nh hởng chế phẩm tăng trởng 44 kết luận kiến nghị 49 KÕt luËn 49 KiÕn nghÞ 49 Tài liệu tham khảo 50 Mở đầu Ngnh thy sn Việt Nam trở thành ngành kinh tế mũi nhọn với tổng giá trị kim ngạch xuất năm 2007 đạt 3,4 tỷ USD [10] Bên cạnh việc mở rộng diện tích ni trồng, biện pháp thâm canh ngành thuỷ sản đặc biệt quan tâm Nhiều địa phương chuyển đổi cấu sản xuất, hình thành vùng nuôi trồng chuyên canh, áp dụng biện pháp kỹ thuật tiên tiến, giống nhập ®· góp phần nâng cao sản lượng thuỷ sản Song năm qua tình hình dịch bệnh đối tượng thuỷ sản vùng nuôi chuyên canh phức tạp Nhiều nơng dân bị trắng tay có đìa tơm, lồng cá thu hoạch bị dịch bệnh chết hàng loạt Chính lẽ việc cứu sống đìa tơm, lồng cá cứu nguy cho gia đình, doanh nghiệp khỏi bờ suy sụp kinh tế Do kháng sinh, hố chất dùng rộng rãi Việc lạm dụng gây nên tác hại nghiêm trọng, tạo dòng vi khuẩn kháng thuốc, làm suy thối mơi trường ảnh hưởng không tốt đến sức khoẻ người Dư lượng kháng sinh hoocmone tăng trưởng ảnh hưởng lớn đến chất lượng sản phẩm hình ảnh sản phẩm thuỷ sản Việt Nam trường quốc tế dần xấu Theo ông George Chamberlain- Chủ tịch Liên minh ni trồng thủy sản tồn cầu: “Chõng doanh nghiệp Việt Nam muốn bán hàng thị trờng Châu âu, Mỹ họ cần phải biết rằng, có nhân nhợng vấn đề d lợng kháng sinh, dù mức nhỏ Chúng muốn gửi thông điệp tới nhà sản xuất Việt Nam, d lợng kháng sinh, họ tiếp tục không đợc chÊp nhËn” Chính vậy, việc bảo vệ sản phẩm cá tra tơm sú có thương hiệu giới Việt Nam thị trường Mỹ, Nhật Tây Âu điều cần thiết cấp bách cho ngành Một giải pháp hữu hiệu việc tổ chức nuôi tổ chức chuỗi sản xuất có tính an tồn sinh học cao, với việc sử dụng tối đa chế phẩm sinh học phù hợp giai đoạn nuôi Nhiều nghiên cứu xây dựng quy trình sản xuất chế phẩm sinh học để xử lý nguồn nước, giảm thiểu ô nhiễm môi trường ao nuôi, phòng hạn chế dịch bệnh đưa lại kết tốt Dựa vào kinh nghiệm dân gian Trầu khơng có tính hướng khuẩn tốt Người ta dùng dịch chiết Trầu với liều lượng định thu kết tốt ni trồng thuỷ sản Đặc biệt có thử nghiệm không cần sử dụng kháng sinh, với dịch chiết Trầu hạn chế tối đa dịch bệnh tôm cá Gần nghiên cứu cho thấy chế phẩm EM kết hợp với dịch chiết Trầu ức chế thành cơng hai lọai vi khuẩn Vibrio parahaemolyticus Aeromonas hydrophyla hai loại vi khuẩn gây bệnh phổ biến động vật thuỷ sản nước nước mặn Để làm rõ khả kháng khuẩn dịch chiết Trầu, tiến hành thực đề tài: “Nghiên cứu đánh giá khả kháng vi khuẩn gây bệnh dịch chiết Trầu định hướng sử dụng” Mục tiêu nghiên cứu: Làm rõ khả kháng vi khuẩn gây bệnh dịch chiết Trầu Ch¬ng Tổng quan 1.1 Đặc điểm đối tợng nghiên cứu 1.1.1 Vi khn Aeromonas hydrophyla Ngµnh Bacteria Líp Schizomycete Hä Vbrionaceae Gièng Aeromonas Loµi Aeromonas hydrophyla - Đặc tính sinh học: Là vi khuẩn gram âm, phân lập từ năm 1950 Cấu trúc vi khuẩn hình que giống hình thái vi khuẩn Bacillus Kích thước chiều rộng từ 0,3 - 1µm, chiều dài - 3µm Chúng có khả di động nhờ tiên mao đầu tế bào vi khuẩn Vi khuẩn thích nghi mơi trường nước ngọt, nước lợ chí nước mặn Đây vi khn yểm khí tuỳ tiện, có sức kháng tốt điều kiện bất lợi Chất sát trùng Clorin không tiêu diệt vi khuẩn này, nhiệt độ 0C vi khuẩn phát triển tốt - Đặc tính gây bệnh: Đây lồi vi khuẩn có khả gây bệnh cực mạnh Khi vào thể, chúng di chuyển theo đường máu để tới quan gây bệnh Vi khuẩn có gene sản sinh độc tố lµ gen Aerolysin Cytotoxin (ACT) độc tè nµy lµ yếu tố gây tổn thương mô bệnh Một số nhà khoa học cho loài vi khuẩn hội, chúng có bệnh ghép với số yếu tố nhiễm trùng khác có stress nhiệt độ, mơi trường nhiễm… - Lồi vật cảm nhiễm: Aeromonas hydrophyla phát động vật lưỡng cư Ở ếch, vi khuẩn gây bệnh đỏ chân, gây tổn thất nội tạng gây xuất huyết Ở cá, Aeromonas hydrophyla gây bệnh lở loét, thối đuôi, thối vây, xuất huyết nhiễm trùng máu, tuột vảy, xuất hyết mang, hậu môn, mắt lồi, bụng chướng [ 5], [12], [15] - Chất kháng: Aeromonas hydrophyla bị tiêu diệt Sodium hypochloride %, Calcium hypochloride % [6], [ 15] 1.1.2 Vi khn Vibrio parahaemolyticus Ngµnh Bacteria Líp Schizomycete Họ Vbrionaceae Giống Vibrio Loài Vibrio parahaemolyticus - Đặc điểm sinh học: Là loại vi khuẩn gram âm, hỡnh que thẳng uốn cong, kÝch thước 0,3 - 0,5 x 1,4 - 2,6 àm Có phản ứng Oxydase (+), có khả oxy hoá lên men môi trờng O/ F Glucose, khả sinh H2S mẫn cảm với Vibriostat (0/129) C bn chúng sống 10 Ngn níc phơc vơ cho thÝ nghiƯm có hàm lợng COD BOD5 lần lợt 49,7 19,3 hàm lợng phù hợp với tiêu chuẩn ngành Và bổ sung chế phẩm Bokashi Trầu vào lô 2, 3, đồng thời tiến hành kiểm tra thông số nớc nuôi định kỳ ngày, 10 ngày, 15 ngày, 20 ngày 3.3.1 Độ tiêu hao oxy hoá học COD COD lợng oxy cần thiết để oxy hoá hết hợp chất hữu nớc thành CO2 H2O COD biểu thị lợng chất hữu bị oxy hoá hoá học bao gồm lợng chất hữu bị oxy hoá vi khuẩn, đại lợng đặc trng cho mức độ ô nhiễm hữu ao nuôi thuỷ sản (kể chất hữu dễ bị phân huỷ sinh học khó bị phân huỷ sinh học) [11] Bảng 3.8: Diễn biến hàm lợng COD lô thí nghiệm sử dụng Bokashi Trầu Lô thí nghiệm Hàm lợng Thời gian Bokashi sử dụng ml/m3 Không 0,5ml/ m lần ml/ m3 ml/ m3 Trung bình ngày 52,6 46,7 44,5 42,6 46,6 46 Biến động hàm lợng COD 10 ngµy 15 ngµy 20 ngµy 54,8 56,0 58,2 45,2 46,3 48,7 42,4 43,6 45,1 41,5 42,3 44,2 46,0 47,05 49,05 Đồ thị 3.1: So sánh biến động COD lô khác Nh mật độ nuôi, nguồn nớc nuôi, lô không sử dụng chế phẩm Bokashi Trầu hàm lợng COD qua thời gian kiểm tra có chiều hớng tăng, từ 52,6 ngày tăng lên 58,2 sau 20 ngày Còn lô thí nghiệm có sử dụng chế phẩm có chiều hớng giảm tuần đầu Lô số COD thấp ổn định từ 41,5 đến 44,2 qua lần kiểm tra Theo tác giả Nguyễn La Anh, Nguyễn Hữu Phớcvới số COD lô thí nghiệm cá Rô phi đảm bảo cho cá phát triển tốt, đảm bảo tiêu chuẩn Việt Nam Lô thí nghiệm thứ có số COD giảm so với lô đối chứng nhng cao lô số 4, có lẽ hàm lợng chế phẩm Bokashi Trầu đợc dùng liều thấp Kết kiểm tra hàm lợng COD sau 20 ngày lô thí nghiệm dùng chế phẩm dù lô dùng chế phẩm liều lợng cao có kết tăng so với ngày, 10 ngày 15 ngày 3.3.2 Nhu cầu oxy sinh hoá BOD BOD lợng oxy cần thiết để phân huỷ hoàn toàn chất hữu vi sinh vật điều kiện hiếu khí Trong nớc, xảy trình oxy hoá sinh học vi sinh vật sử dụng oxy hoà tan Vì việc xác định tổng lợng oxy hoà tan cần thiết cho trình phân huỷ sinh học tiêu quan trọng để đánh giá mức độ ô nhiễm nguồn nớc nuôi BOD5 lợng oxy cần thiết ngày đầu nhiệt độ ủ 200C phòng tối để tránh trình quang hợp 47 Cũng tơng tự nh hàm lợng cách kiểm tra hàm lợng COD trên, đồng thời với việc kiểm tra COD tiến hành kiểm tra BOD5 mẫu nớc Kết kiểm tra BOD5 đợc trình bày bảng 3.9 Bảng 3.9: Biến động hàm lợng BOD lô thí nghiệm sử dụng Bokashi Trầu Lô thí Hàm lợng Sử dụng nghiệm Bokashi chÕ phÈm ml/m3 Kh«ng 0,5ml/ m lần ml/ m3 ml/ m3 Trung bình ngày 21,6 19,3 18,7 18,5 19,53 Biến động hàm lợng BOD 10 ngày 15 ngày 20 ngày 25,4 27,5 28,0 18,8 17,0 21,6 16 16,1 21,4 15,9 16,0 21,4 19,03 19,15 23,1 Đồ thị 3.2: So sánh diễn biến BOD5 lô khác Hàm lợng BOD5 lô đối chứng có chiều hớng tăng theo thời gian tõ 21,6 ë lÇn kiĨm tra thø nhÊt (sau ngày sử dụng chế phẩm) đến 28,0 sau 20 ngày sử dụng Bokashi Trầu Sự ô nhiễm nguồn nớc nuôi ba yếu tố cấu thành: Thức ăn d thừa, phân dịch thải Chính thời gian nuôi nhiều hàm lợng chất hữu tích tụ ngày lớn Theo kêt ta thấy số cha vợt giới hạn tiêu chuẩn nhng lợng hợp chất hữu tăng lên trong trình nuôi nỗi lo ngành nuôi trồng thuỷ sản chất lợng môi trờng Chất lợng môi trờng bị ảnh hởng ảnh hởng đến 48 sức khoẻ động vật nuôi, gia tăng nguy dịch bệnh gây tổn thất nặng nề cho ngời dân Tuy nhiên nh diễn biến hàm lợng COD, lô thí nghiệm bổ sung Bokashi Trầu có số BOD5 có chiều hớng giảm sau 15 ngày sử dụng chế phẩm Hàm lợng BOD5 tăng sau 20 ngày nuôi Sự diễn biến BOD5 (21,6 - 15,9) nhỏ nhiều so với lô đối chứng song lô hàm lợng BOD5 cao lô lô Hàm lợng BOD5 lô thí nghiệm số thuận lợi cho sù ph¸t triĨn cđa c¸ Theo Ngun Ngäc Phíc cộng tác viên (2006), giải thích có mỈt cđa nÊm men Saccharomyces cerevisiae chÕ phÈm EM giúp cho trình chuyển hoá vật chất phân huỷ chất hữu nớc Những chất đợc tạo thành trình lại nguồn dinh dỡng cho vi sinh vật hữu hiệu khác nh vi khuẩn lactic xạ khuẩn Việc tạo thành chế phẩm Bokashi Trầu trình nuôi có tác dụng cải thiện môi trờng, tăng sản lợng nuôi Từ kết thu đợc bảng 3.8 bảng 3.9, chúng t«i cã mét sè kÕt luËn sau: + Sau tuần, hàm lợng COD, BOD5 bắt đầu tăng dần trở lại, điều cho ta thấy chế phẩm Bokashi Trầu có tác dụng cải thiện môi trờng vòng 15 ngày +) Một lần khẳng định dịch chiết Trầu có tính kháng sinh nhng không làm ảnh hởng tới vi sinh vật có lợi chÕ phÈm EM thø cÊp +) Sư dơng liỊu lỵng 1ml dung dịch chế phẩm Bokashi Trầu cho 1m3 nớc nuôi cá Rô phi có hiệu vừa đảm bảo đủ lợng phát huy tác dụng chế phẩm, vừa hạ thấp đợc chi phí chăn nuôi +) Sau 15 ngày cần thiết phải sử dụng tiếp chế phẩm Bokashi Trầu 3.3.3 ảnh hởng chế phẩm tăng trởng chiều dài khối lợng cá Rô phi thí nghiệm 49 Sự tăng trởng cá phụ thuộc chặt chẽ vào chế độ dinh dỡng, yếu tố môi trờng vệ sinh phòng bệnh Sự tăng trởng chiều dài khối lợng tiêu quan trọng để đánh giá chất lợng thức ăn, tiêu môi trờng, có phù hợp với đối tợng nuôi hay không 3.3.3.1 ảnh hởng chế phẩm tăng trởng chiều dài cá Rô phi thí nghiệm Để xác định đợc khả tăng trởng chiều dài thân cá Rô phi thí nghiệm đợc dùng chế phẩm Bokashi Trầu xử lý môi trờng nuôi, tiến hành đo kích thớc cá lần vào thời điểm: trớc dïng chÕ phÈm, sau 10 ngµy vµ 20 ngµy dùng chế phẩm Kết thu đợc trình bày bảng 3.10 Bảng 3.10: Sự tăng trởng chiều dài cá Rô phi lô thí nghiệm Lô thí nghiệm Sử dụng Số lợng cá ml 30 0,5ml 30 ml 30 ml 30 Trung bình 30 Sự tăng trởng chiều dài cá trớc sau thí nghiệm Trớc Tỷ lệ Tỷ lệ Tỷ lệ Sau 10 Sau 20 thí tăng tăng tăng nghiệm (%) (%) (%) 5,12 6,15 6,55 ± 20 28 0,13 0,18 0,21a 5,13± 6,38 ± 7,35 ± 24 43 0,13 0,2 0,15 ab 5,11± 6,55 ± 7,95 ± 28 56 0,12 0,21 0,25 b 5,12± 6,58 ± 8,00 ± 29 56 0,13 0,2 0,25 b 5.12 6,5 27 7,67 52 50 Các giá trị cột có chữ khác ý nghĩa thống kê (p < 0,05) Kết từ bảng 3.10 ta có nhận xét: + Chế phẩm Bokashi Trầu không làm ảnh hởng đến tốc độ sinh trởng cá Rô phi thí nghiệm Do chế phẩm có tác dụng hạn chế ô nhiễm môi trờng nên tạo điều kiện thuận lợi cho cá Rô phi sinh trởng Những lô cá thí nghiệm đợc dùng chế phẩm kích thớc cá Rô phi tăng từ 43 đến 56 %, lô lô có số tăng trởng cao so với lô đối chứng + Chiều dài cá trớc thí nghiệm sau 10 ngày nuôi sai khác mặt thống kê Giữa lô thí nghiệm sau 20 ngày nuôi có sai khác mặt thống kê Lô 3, lô sai khác với nhng lại có sai khác so với lô đối chứng Giữa lô lô sai khác + Lô đối chứng, thời điểm 20 ngày tốc độ tăng trởng không đáng kể, đạt 28% có lẽ môi trờng sống không đợc xử lý nên đà ảnh hởng đến phát triển cá Đồ thị 3.4: So sánh tăng trởng chiều dài cá lô 51 3.3.3.2 ảnh hởng chế phẩm tăng trởng khối lợng cá Rô phi thí nghiệm Đồng thời với việc vớt cá để đo chiều dài thân, tiến hành cân trọng lợng cá lô thí nghiệm Kết đợc trình bày bảng 3.11 Bảng 3.11: Sự tăng trởng khối lợng cá Rô phi lô thí nghiệm Lô thí nghiệm Sử dụng Số lợng cá thÓ ml 30 0,5ml 30 ml 30 ml 30 Trung bình 30 Tăng trởng khối lợng cá trớc sau thí nghiệm Tû lƯ Tû lƯ Tû lƯ Tríc thÝ Sau 10 Sau 20 tăng tăng tăng nghiệm (%) (%) (%) 12.78± 14.58± 15.64± 14 22 a 0.23 0.22 0.23 a 12.6± 15.75± 16.8± 25 33 0.25 0.26 b 0.27 b 12.66± 15.96± 16.85± 26 33 0.22 0.24 b 0.25 b 12.72± 15.85± 16.71± 25 31 b 0.23 0.23 16.71 b 12.66 15.85 25 16.79 33 Các giá trị cột có chữ khác ý nghĩa thống kê (p < 0,05) 52 Đồ thị 3.4 Sự tăng trởng khối lợng cá lô thí nghiệm Những lô cá thí nghiệm đợc sử dụng Bokashi Trầu có tốc độ tăng trởng dài thân có tốc độ tăng trởng cao khối lợng Có tăng trởng rõ nét lô thí nghiệm lô đối chứng, thời điểm 10 ngày, 20 ngày sau sử dụng chế phẩm Nếu tính theo giá trị trung bình, tốc độ tăng trởng cá lô thÝ nghiƯm kho¶ng thêi gian sau dïng chÕ phẩm đạt 33%, cao so với thời gian từ 10 - 20 ngày (chỉ đạt 22%) Theo sinh lý sinh trởng cá Rô phi, thông thờng giai đoạn thí nghiệm sau có tốc độ tăng trởng cao hơn, nhng không đạt đợc điều Kết phân tích Anova (mức ý nghĩa = 0,05) bảng so sánh LSD 0.05 ta thấy có sai khác mặt thống kê Sau 10 ngày 20 ngày nuôi lô thí nghiệm có sai khác so với lô đố chứng lô thí nghiệm sai khác mặt thống kê Chứng tỏ môi trờng sống đà ảnh hởng đến tốc độ sinh trởng cá Nh để nuôi cá Rô phi đạt hiệu hơn, cần thiết phải sử dụng lặp lại chế phẩm Bokashi Trầu cách định kỳ Trong trình theo dõi thí nghiệm quan sát biểu lâm sàng hàng ngày cha phát đợc khác biệt biểu bệnh lý bệnh vi khuẩn gây cho cá Có lẽ điều kiện thí nghiệm cho phép hạn chế đợc mầm bệnh lây nhiễm nên lô thí nghiệm lô đối chứng không phát có dịch bệnh 53 kết luận kiến nghị Kết luận 1- Dịch chiết Trầu nồng độ 250 ppm có khả ức chÕ thùc nghiƯm vi khn Aeromonas hydrophyla vµ Vibrio parahaemolyticus 2- Chế phẩm Bokashi Trầu nồng độ 25 ppm dịch chiết Trầu có khả ức chế thực nghiệm hai chủng vi khuẩn Aeromonas hydrophyla Vibrio parahaemolyticus 3- Chế phẩm Bokashi Trầu có khả cải thiện môi trờng nớc nuôi, góp phần kích thích tăng trởng cá Rô phi Kiến nghị 1- Sử dụng chế phẩm Bokashi Trầu xử lý môi trờng nớc ao nuôi cá Rô phi cần sử dụng thờng xuyên, lần cách 15 ngày với liều lợng 1ml/m3 2- Sử dụng chế phẩm Bokashi Trầu ao nuôi với nhiều lần lặp lại để làm sở nhân rộng việc sử dụng chế phẩm 3- Đánh giá chi tiết chất lợng sản phẩm nuôi trồng thuỷ sản đợc sử dụng chế phẩm Bokashi Trầu 4- Nghiên cứu chế tác dụng ức chê vi khuẩn gây bệnh chế phẩm Bokashi Trầu 54 Tài liệu tham khảo Tài liệu tiếng Việt Nguyễn La Anh, 2006, Báo cáo tổng kết khoa học kỹ thuật đề tài: Nghiên cứu ứng dụng công nghệ sinh học xử lý môi trờng tôm nuôi công nghiệp suất cao Nguyễn Xuân Bách, Kết bớc đầu xử lý EM thứ cấp để giảm ô nhiễm môi trờng Hải Dơng, Tạp chí khoa học, công nghệ môi trờng tỉnh Hải Dơng, số 5, tháng 10/2004.2 Nguyễn Đức Bình, 2006, Phân tích chất lợng đất nớc nuôi trồng thuỷ sản, Viện nghiên cứu nuôi trồng thuỷ sản I ( RIA-No-1), Trung tâm quan trắc cảnh báo môi trờng DBTS miền Bắc phòng nghiên cứu môi trờng.3 Võ Văn Chi, 2000, Cây thuốc trị bệnh thông dụng, NXB Thanh Hoá.4 Đỗ Thị Hoà, Bùi Quang Tề, Nguyễn Hữu Dũng Nguyễn Thị Muội, Bệnh học thuỷ sản, NXB Nông Nghiệp, Hà Nội Đỗ Tất Lợi, 1968, Những thuốc vị thuốc Việt Nam, NXB Khoa học kỹ thuật, Hà Nội Phan Thị Hoà Nam, Xác định thành phần tinh dầu Trầu không (Piper betle L.) Nghệ An, Luận văn thạc sỹ hoá học, 2001 55 Nguyễn Ngọc Phớc, Phạm Thị Phơng Lan, Nguyễn Quang Linh, Kishio Hatai, Nghiên cứu khả kháng nấm dịch chiết trầu (Piper betle L.), Tạp chí thuỷ sản, tháng 5/2007 Nguyễn Ngọc Phớc, Nguyễn Anh Tuấn, Nguyễn Quang Linh, Nguyễn Nam Quang, Ngô Thị Hơng Giang, Sử dụng thảo dợc chế phẩm từ thảo dợc điều trị bệnh vi khuẩn cho động vật thuỷ sản, Hội nghị khoa học Công nghệ 2005 - 2007, Trờng Đại học Nông Lâm - Đại học Huế, 2007 10 Phan Thanh Phợng, Trơng Văn Dung, Vũ Tiến Dũng, Phạm Công Hoạt, Vơng Thị Lan Phơng, 2006 - Miễn dịch học thú y ứng dụng Nhà xuất nông nghiệp 11 Nguyễn Thị Thanh, 2002, Giáo trình Quản lý chất lợng nớc ao nuôi thuỷ sản, Đại học Vinh 12 Nguyễn Xuân Thành, Nguyễn Bá Hiên, Hoàng Hải, Vũ Thị Hoan, Nguyễn Xuân Thành, 2005, Giáo trình Vi sinh vật học công nghiệp, NXB giáo dục 13 Tống Kim Thuần, Đặng Thị Mai Anh, Lê Thị Thanh Xuân, Phạm Công Hoạt, Châu Văn Minh, 2007 - Nghiên cứu tuyển chọn vi sinh vật biển có khả đối kháng vi sinh vật kiểm định, gây chết côn trùng khả ứng dụng nông nghiệp y dợc Hội nghị khoa học biện pháp phòng trừ sâu bệnh không gây ô nhiễm môi sinh Nhà xuất nông nghiệp 14 Tống Kim Thuần, Đặng Thị Mai Anh, Lê Thị Thanh Xuân, Phạm Công Hoạt, Châu Văn Minh, 2007 - Tuyển chọn vi sinh vật đối kháng với vi sinh vật kiểm định từ trầm tích phá Tam Giang, Thừa Thiên Huế Hội nghị toàn Qc vỊ NCCB khoa häc sù sèng, Quy Nh¬n - Bình Định 15 Tống Kim Thuần, Trần Thanh Thuỷ, Phạm Công Hoạt, 2006 - Nghiên cứu sinh trởng khả sinh sắc tố Asthaxanthin từ nấm men Phafiarhodozyma làm chất màu bổ sung vào thức ăn thuỷ sản Hội nghị môi trờng 56 16 Bộ thuỷ sản, 2002, Hiện trạng sử dụng kháng sinh chế phẩm sinh häc nu«i t«m Th«ng tin khoa häc c«ng nghƯ - kinh tÕ thủ s¶n, sè 9, 2002 17 Bộ thuỷ sản, Tiêu chuẩn ngành, 2006 18 Viện Nghiên cứu nuôi trồng thuỷ sản I (2005) tài liệu tập huấn chuyển giao công nghệ nuôi cá Rô Phi thơng phẩm môi trờng nớc lợ Tài liệu tiÕng Anh 19 Kazuyo Nakamura, Kei Yuasa, Somreuk Sinmuk, Kishio Hatai and Naruo Hara (1995), The ubiquinone system in Oomycetes 20 Kishio Hatai, Gen- Ichi Hoshiai (1993), Characteristics of Two Saprolegnia species isolated from Coho salmon with Saprolegniosis 21 LG Wiloughby DSC (1969) , Fungi and Fish Diseases 22 R.J.Roberts, Rwootten (1999), Fish Diseases 23 The aquatic animal heath research institute Department of FisheriesBangkok (1995), Fish parasite and Diseases Tµi liƯu Enternet 24 Dùng thảo mộc chữa bệnh cho tơm cỏ, http://nhanong.net, Sea107- 27/11/2007, NNVN (2007) 25 Trầu không, Bỏch khoa tồn thư, http://vi.wikipedia.org 26 Huỳnh Bích Thảo(2004), Trị bệnh cá thuốc nam, http://Agriviet.com 27 Thị trường thuỷ sản giới hướng mở rộng xuất Việt NamTheo tạp chí Thương Mại, http:// www.smenet.com.vn 28.Tổng c ục thống kê , http:// www.gso.gov.vn 57 Phơ lơc Giíi thiệu viện công nghệ sinh học Vị trí, địa điểm Viện Công nghệ Sinh học thuộc Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam, có trụ sở chính: Nhà A10- số 18, đờng Hoàng Quốc Việt Quận Cầu Giấy Hà Nội Các phòng thí nghiệm nằm khu nhµ: A2, A10, A15, A24, A28 vµ B2 thuộc Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam Cơ sở vật chất nhân lực Viện Công nghệ sinh học thành lập ngày 15 tháng năm 1993 Đây quan nghiên cứu khoa học đầu ngành nớc Trong phòng viện đợc trang bị thiết bị đại, sở vật chất đầy đủ để phục vụ nghiên cứu Viện có 350 cán bộ, công nhân viên chức, ®ã cã tiÕn sÜ khoa häc, 64 tiÕn sÜ, 26 thạc sĩ, 160 cán làm việc theo chế độ hợp đồng dài hạn Viện có 24 phòng thí nghiệm tiến hành nghiên cứu tất lĩnh vực công nghệ sinh học là: + C«ng nghƯ gen + C«ng nghƯ Enzim – protein + C«ng nghƯ sinh häc vi sinh vËt + C«ng nghƯ sinh học động vật + Công nghệ sinh học thực vật Nhiệm vụ chức - Nhiệm vụ: 58 Hoạt động nghiên cứu khoa học viện gắn liền với chơng trình mục tiêu kinh tế xà hội, chơng trình khoa học công nghệ trọng điểm đất nớc, với việc phục vụ sản xuất, đời sống cho nhân dân Các dự án, đề tài, công trình khoa học đợc tiến hành dựa sở thực chơng trình nghiên cứu khoa học công nghệ trọng điểm cấp nhà nớc Sản phẩm đề tài, đề án giải pháp, mô hình quy trình công nghệ phục vụ sản xuất sản phẩm dạng chế thử đa dạng chủng loại tính chất phục vụ - Chức năng: + Xây dựng viện đằu ngành lĩnh vực nghiên cứu phát triển công nghệ sinh học nhằm mục đích trì, phát triển sử dụng có hiệu nguồn gen có giá trị vi sinh vật, động thực vật nhằm phát triển công nghiệp, Nông - Lâm Ng nghiệp + Đào tạo cán chuyên môn trình độ học vấn Đại học thuộc lĩnh vực Công nghệ sinh học chuyên ngành có liên quan + Hợp tác quốc tế lĩnh vực Công nghệ sinh học Một số sản phẩm công nghệ đợc triển khai vào sản xuất ngành nuôi trồng thuỷ sản + Chế phẩm BiOF: Phòng bệnh cho tôm cá, tăng cờng khả tiêu hoá hấp thụ thức ăn + Chế phẩm BiOche: Xử lý môi trờng nớc nuôi tôm cá, phân giải chất cặn bÃ, làm nguồn nớc trì cân hệ sinh thái + Sử dụng phơng pháp PCR để phát bệnh vi khuẩn virut gây tôm + RT- PCR phát virut Taura tôm He ViƯt Nam + Sư dơng kü tht RT - PCR Với SYBR Green để xác định lợng virut YHV gây nhiễm bệnh tôm 59 + Xác định virut gây nhiễm trùng hoại tử gan huyết niệu gây bệnh tôm Sú Việt Nam + Nghiên cứu số lợng vi sinh vËt vµ lùa chän mét sè chđng vi khuẩn có ích từ ao nuôi tôm + Nghiên cứu đặc điểm sinh học chủng vi khuẩn phân giải tinh bột protein phân lập từ đầm nuôi tôm Phụ lục Kết kiểm tra tăng trởng chiều dài cá nuôi Stt 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 BÓ 12,3 12,5 12,6 14 13,01 13,05 13,29 13,24 13,52 13,4 12,79 12,65 13 12,87 13,03 12,69 12 12,2 13,3 12,8 13,21 13,12 12,56 13,27 BÓ 12,56 12,07 12,9 13,02 12,63 13 13,03 12,67 12,22 12,32 12,06 12,13 12,22 13,01 13,11 12,56 13,14 12,48 12,46 12,87 12,56 12,19 12,51 13,13 Ngày thí nghiệm Lô Lô BÓ BÓ BÓ BÓ 12,53 12,4 13,09 12,59 12,51 12,46 12,69 12,47 12 12,31 12,94 12,26 13,01 12,35 12,65 12,69 12,7 12,59 12,66 12,75 12,4 12,45 13,03 13 12,46 12,61 12,84 12,84 13,11 12,09 12,49 12,37 12,59 12,47 12,84 12,09 12,47 12,44 12,76 12,47 12,96 12,15 12,68 12,44 12,69 12,3 12,65 12,15 12,75 12,27 12,74 12,12 13 12,31 12,84 12,25 12,89 12,15 12,88 12,4 13 12,42 13,13 12,41 13,01 12,43 12,69 13,03 12,54 13 12,74 12,6 12,96 13,01 12,71 12,86 12,86 12,21 13,02 13,14 13,14 12,45 12,84 12,57 12,87 12,36 12,8 12,78 12,78 12,45 12,75 12,26 12,96 12,51 12,91 12,18 25 26 12,69 12,57 12,55 12,32 12,57 12,76 L« 12,5 13,11 60 12,83 13,02 12,35 12,11 L« BĨ BĨ 12,09 13,24 12,69 12,94 12,64 13,2 12,65 12,83 12,66 12,94 12,59 12,87 12,45 12,78 12,61 13,03 12,09 12,6 12,47 12,59 12,44 12,89 12,15 12,61 12,37 13,08 12,09 12,87 12,88 12,44 13,13 13,03 12,69 13 12,74 12,75 12,71 12,69 13,02 13,2 12,44 12,43 12,8 13,21 12,75 12,75 12,12 13,06 12,25 12,4 12,89 13 ... rõ khả kháng khuẩn dịch chiết Trầu, tiến hành thực đề tài: ? ?Nghiên cứu đánh giá khả kháng vi khuẩn gây bệnh dịch chiết Trầu định hướng sử dụng? ?? Mục tiêu nghiên cứu: Làm rõ khả kháng vi khuẩn gây. .. thấy: - Dịch chiết Trầu tác dụng tức vi khuẩn A hydrophyla sau 10 phút mà phải sau 20 phút dịch chiết Trầu bắt đầu phát huy tác dụng ức chế vi khuẩn Nồng độ dịch chiết Trầu tăng khả ức chế vi khuẩn. .. nghiên cứu sàng lọc nồng độ ức chế vi khuẩn Bokashi trầu có nhận xét sau: - Khi phối trộn dịch chiết Trầu vào dung dịch EM thứ cấp tạo dung dịch Bokashi Trầu có tác dụng ức chế vi khuẩn gây bệnh