Bài thực hành 3 Tách và định lượng nhóm sắc tố vàng (Carotenoit) 1. Nguyên tắc của phương pháp Khi rút sắc tố ra khỏi lá chúng ta thu được một hỗn hợp sắc tố, trong đó có nhóm sắc tố vàng - nhóm carotenoit. Nhóm clorophin và nhóm carotenoit có thể hoà tan tốt trong một số dung môi hữu cơ khác nhau. Dựa vào đặc điểm hoá học này, người ta đã tách nhóm sắc tố carotenoit ra khỏi nhóm clorophin bằng phương pháp hoá học. 2. Đối tượng, hoá chất và dụng cụ thí nghiệm - Lá cây - Cối chày sứ - Bình nút nhám - Phễu thuỷ tinh - Giấy lọc - Phễu chiết - Bình tam giác - Máy so màu quang điện - Cồn hay axeton - Ete etilic - KOH 30 % trong cồn 3. Các bước tiến hành Lấy 1 gam lá, cắt nhỏ, cho vào cối nghiền và tách chiêt sắc tố như trong bài thực hành 1. Toàn bộ dịch chiết cho vào bình định mức, thêm axeton đến vạch 50 ml. Lấy 10 ml dịch chiết cho vào phễu chiết, thêm 10 ml ete etilic. Đổ từ từ nước cất vào phễu chiết cho đến khi sắc tố chuyển hết lên lớp ete phía trên. Để dung dịch đứng yên, gạn bỏ lớp axeton và nước ở phía dưới. Sau khi đã loại hết nước và axeton, cho dịch sắc tố vào bình nút nhám, thêm vào dịch sắc tố 3 ml KOH 30%, lắc mạnh trong 30 phút, thêm 20 ml nước cất, rồi lại cho vào phễu chiết. Để yên một lúc, ta thấy trong phễu chiết sắc tố đã tách thành 2 lớp: lớp sắc tố carotenoit có màu vàng ở phía trên, lớp nước phía dưới chứa muối của clorophin a và b (clorophinat). Tách lớp muối này bằng cách cho thêm nước và rửa nhiều lần. Rót dịch carotenoit vào bình định mức, đem so màu trên máy so màu quang điện. Chất đối chứng là dung môi ete etilic và kính lọc màu xanh tím. Tính hàm lượng sắc tố vàng theo công thức : X ( mg/ g ) =(n. V. L . V2)/(1000. P. V1) V1 : thể tích sắc tố dùng để xác định hàm lượng V2 : thể tích toàn bộ dịch sắc tố P : khối lượng lá ( g ) V : thể tích toàn bộ dịch sắc tố vàng L : thể tích dịch lấy đo ở máy n : Chỉ số OD của máy khi đo dịch sắc tố. 4. Kết luận : Tính toán kết quả và nhận xét. . Bài thực hành 3 Tách và định lượng nhóm sắc tố vàng (Carotenoit) 1. Nguyên tắc của phương pháp Khi rút sắc tố ra khỏi lá chúng ta. ta thu được một hỗn hợp sắc tố, trong đó có nhóm sắc tố vàng - nhóm carotenoit. Nhóm clorophin và nhóm carotenoit có thể hoà tan tốt trong một số dung môi