Đang tải... (xem toàn văn)
luận văn
B GIÁO D C VÀ ðÀO T O TRƯ NG ð I H C NÔNG NGHI P HÀ N I ð NG TH THÚY YÊN GIÁM SÁT S LƯU HÀNH C A VIRUS CÚM TYPE A/H5N1 TRÊN ðÀN THU C M T I M T S Xà THU C HUY N GIA LÂM, ðÔNG ANH - HÀ N I LU N VĂN TH C SĨ NÔNG NGHI P Chuyên ngành : Thú y Mã s : 60.62.50 Ngư i hư ng d n khoa h c: TS TR N TH LAN HƯƠNG HÀ N I – 2011 L I CAM OAN Tôi xin cam đoan rằng: - Các kết nghiên cứu luận văn trung thực, khách quan cha đợc sử dụng để bảo vệ học vị - Mọi giúp đỡ cho việc thực luận văn đà đợc cảm ơn thông tin trích dẫn luận văn đà đợc rõ nguồn gốc Hà Nội, tháng 10 năm 2011 giả luậ vă Tác giả luận văn ng Th Thuý Yờn Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i - Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p i L I C M ƠN Trong su t năm h c t p hoàn thành lu n văn, v i n l c c a b n thân tơi nh n đư c s giúp ñ , hư ng d n t n tình c a nhi u cá nhân t p th , cho phép tơi đư c t lịng bi t ơn c m ơn chân thành t i: Ban Giám hi u Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i; Vi n ðào t o Sau ð i h c; B môn Vi sinh v t - Truy n nhi m, Khoa Thú y th y giáo giúp đ , t o ñi u ki n ñ h c t p, ti p thu ki n th c c a chương trình h c Ti n sĩ Tr n Th Lan Hương, ngư i tr c ti p hư ng d n th c hi n lu n văn t t nghi p Nhân d p hoàn thành lu n văn, cho phép tơi đư c g i l i c m ơn sâu s c t i gia đình, ngư i thân b n bè ñã ñ ng viên giúp đ tơi vư t qua m i khó khăn su t trình h c t p, nghiên c u, th c hi n ñ tài Xin chân thành c m ơn! Hà N i, tháng 10 năm 2011 Tác gi ð ng Th Thuý Yên Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i - Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p ii M CL C Trang M C L C .i DANH M C B NG vi PH N M ð U 1.1 ð t v n ñ 1.2 M c tiêu ñ tài 1.3 Ý nghĩa khoa h c th c ti n c a ñ tài PH N T NG QUAN TÀI LI U 2.1 L ch s b nh cúm gia c m 2.2 Căn b nh cúm gia c m 2.3 D ch t h c b nh cúm gia c m 12 2.4 Tri u ch ng b nh tích b nh cúm gia c m 16 2.5 Ch n đốn b nh cúm gia c m 18 2.6 ðáp ng mi n d ch ch ng virus cúm gia c m 18 2.7 Phòng ch ng b nh cúm gia c m 21 2.8 S d ng vaccine phòng ch ng b nh cúm gia c m 22 PH N ð I TƯ NG N I DUNG, NGUYÊN LI U, PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN C U 26 3.1 ð i tư ng nghiên c u 26 3.2 N i dung nghiên c u 26 3.3 Nguyên li u, d ng c 26 3.4 ð a ñi m th i gian nghiên c u 27 3.5 Phương pháp nghiên c u 27 3.5.1 Phương pháp ñi u tra 27 3.5.2 Phương pháp l y m u x lý m u 27 3.5.3 Phương pháp phân l p virus phôi tr ng 28 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i - Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p iii 3.5.4 Phương pháp làm ph n ng ngưng k t h ng c u (HA) 28 3.5.5 Phương pháp làm ph n ng ngăn tr ngưng k t h ng c u ph n ng HI 30 3.5.6 Phương pháp Real-time RT – PCR 32 3.5.7 X lý s li u 36 PH N K T QU NGHIÊN C U VÀ TH O LU N 37 4.1 Tình hình chăn ni thu c m t i xã: Xuân N n, C Bi, Kim Sơn, ða T n thu c huy n Gia Lâm, ðông Anh – Hà N i năm 2010 37 4.2 ði u tra v tình hình s d ng vaccine cúm gia c m t i m t s xã hai huy n ðông Anh Gia Lâm, Hà N i năm 2009 năm 2010 41 4.2.1 K ho ch tiêm phòng vaccine cúm gia c m cho ñàn thu c m 41 4.2.2 K t qu tiêm phòng vaccine cúm gia c m ñàn thu c m t i b n xã thu c hai huy n ðông Anh Gia Lâm, Hà N i năm 2009 2010 42 4.3 K t qu giám sát s lưu hành c a virus cúm gia c m ñàn thu c m t i m t s xã hai huy n Gia Lâm ðông Anh, Hà N i năm 2010 45 4.3.1 K t qu giám sát s lưu hành c a virus cúm gia c m ñàn th y c m nuôi l n gia c m c n thu c m không nuôi l n gia c m c n t i m t s xã huy n Gia Lâm ðông Anh, Hà N i 45 4.3.2 Giám sát s lưu hành c a virus cúm ñàn thu c m ñư c tiêm vaccine không ñư c tiêm vaccine t i b n xã Xuân N n, C Bi, Kim Sơn, ða T n thu c huy n Gia Lâm ðông Anh, Hà N i 50 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i - Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p iv 4.4 K t qu giám sát huy t h c ñ i v i ñàn thu t i m t s xã huy n Gia Lâm ðông Anh, Hà năm 2010 56 4.4.1 K t qu giám sát huy t h c đ i v i đàn thu c m ni t i m t s xã huy n Gia Lâm ðông Anh, Hà N i trư c sau tiêm phịng đ t I năm 2010 56 4.4.2 K t qu giám sát huy t h c ñ i v i ñàn thu c m nuôi t i m t s xã huy n Gia Lâm ðông Anh, Hà N i trư c sau tiêm phịng đ t II năm 2010 62 K T LU N VÀ ð NGH 68 5.1 K t lu n 68 5.2 ð ngh 69 TÀI LI U THAM KH O 70 PH L C 73 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i - Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p v DANH M C B NG Trang B ng 4.1: Tình hình chăn ni thu c m t i m t s xã năm 2010 huy n ðông Anh, Gia Lâm, Hà N i 39 B ng 4.2: Tình hình s d ng vaccine cúm gia c m cho ñàn thu c m t i m t s xã huy n Gia Lâm, ðông Anh, Hà N i năm 2009 năm 2010 44 B ng 4.3: K t qu giám sát virus cúm gia c m ñàn thu c m có ni l n gia c m c n thu c m không nuôi l n gia c m c n b ng phương pháp phân l p phôi tr ng 47 B ng 4.4: K t qu giám sát lưu gi virus cúm đàn thu c m ni l n gia c m c n ñàn thu c m không nuôi l n gia c m c n b ng phương pháp phân l p phôi tr ng phương pháp RRT – PCR 49 B ng 4.5: K t qu giám sát virus cúm gia c m ñàn thu c m ñư c tiêm vaccine không tiêm vaccine t i xã: Xuân N n, Kim Sơn, C Bi, ða T n b ng phương pháp phân l p phôi tr ng 53 B ng 4.6: K t qu giám sát lưu gi virus cúm ñàn thu c m ñư c tiêm vaccine đàn thu c m khơng đư c tiêm vaccine b ng phương pháp phân l p phôi phương pháp RRT – PCR 55 B ng 4.7: K t qu giám sát kháng th cúm gia c m huy t ñàn thu c m nuôi t i xã (trư c dùng vaccine cúm H5N1 ñ t năm 2010) 58 B ng 4.8: K t qu giám sát kháng th cúm gia c m huy t ñàn thu c m nuôi t i xã (sau dùng vaccine cúm H5N1 ñ t I năm 2010) 61 B ng 4.9: K t qu giám sát kháng th cúm gia c m huy t ñàn thu c m nuôi t i xã (trư c dùng vaccine cúm H5N1 ñ t II năm 2010) 64 B ng 4.10: K t qu giám sát kháng th cúm gia c m huy t ñàn thu c m nuôi t i xã (sau dùng vaccine cúm H5N1 ñ t năm 2010) 66 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i - Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p vi PH N M ð U 1.1 ð t v n ñ V i ch trương phát tri n chăn nuôi c a ð ng Nhà nư c, nh ng năm g n ñây ngành chăn ni gia c m nói chung th y c m nói riêng đư c tr ng ñ u tư phát tri n Nh nh ng ti n b khoa h c k thu t v gi ng, th c ăn, thú y, h p tác qu c t , liên doanh, liên k t v i qu c gia có n n chăn nuôi tiên ti n, chăn nuôi gia c m nói chung thu c m nói riêng tăng trư ng nhanh v i hàng ngàn trang tr i hàng trăm tri u gia c m, thu c m lo i ðây ngành có th m nh nư c ta, ñem l i hi u qu kinh t cao b n v ng, góp ph n giúp ngư i dân khơng nh ng xố đói, gi m nghèo mà xu t hi n nhi u h gia đình vươn lên làm giàu t chăn nuôi gia c m, thu c m Song v i s phát tri n c a chăn ni d ch b nh ngày x y nhi u di n bi n ph c t p ð c bi t ph i quan tâm ñ n b nh cúm gia c m B nh cúm gia c m ñư c bi t t lâu sau nh ng v d ch gây cho ñàn gia c m, thu c m nhi u nư c th gi i ðây m t b nh truy n nhi m r t nguy hi m có t c ñ lây lan nhanh v i t l ch t cao ñàn gia c m nhi m b nh Trong m y năm g n ñây, d ch cúm gia c m ñ c l c cao (HPAI – Highly Pathogenic Avian Influenza) xu t hi n ñã gi t ch t hàng ch c tri u gia c m, thu c m th gi i, ñ ng th i hàng t gia c m, thu c m ph i tiêu h y b t bu c ñ tránh lây lan, gây thi t h i l n cho ngành chăn nuôi kinh t nư c có d ch B nh đư c T ch c D ch t th gi i (OIE) x p vào b ng A – danh m c b nh truy n nhi m c c kỳ nguy hi m Theo T ch c Y t th gi i (WHO) t năm 2003 đ n tháng năm 2011 có 519 ca nhi m H5N1, có 306 ngư i t vong t i 15 nư c th gi i Còn t i Vi t Nam, theo B Y t t tháng 12/2003 đ n tháng 12/2010 có 119 ngư i m c cúm A/H5N1, có 60 ngư i t vong ði u ngư i ta Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i - Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p ñáng lo ng i virus cúm gia c m có kh bi n ch ng m nh, v y mà th gi i ñang ph i ñ i m t v i nguy có th x y m t ñ i d ch cúm ngư i mà nguyên nhân ch ng cúm gia c m bi n đ i thành nh ng lo i thích nghi gây b nh ngư i Các chuyên gia nghiên c u v virus b nh cúm gia c m đánh giá “v t ni có th m i ñe b nh cúm gia c m m i” Các t ch c qu c t FAO, OIE, WHO ñã ñ ng lo t c nh báo v vai trị c a v t ni đ i v i vi c tàng tr truy n lây virus cúm gia c m Hi n t i, v t nuôi không nh ng v t “th m l ng” ñ i v i virus cúm H5N1 mà cịn có th gây b nh th đ c l c cao r t có kh gây bi n ch ng thành virus gây b nh cho ngư i Th c t ñ t d ch b nh x y ph i có bi n pháp khoanh vùng d p d ch, nh m n ñ nh phát tri n s n xu t, ñ c bi t ngăn ch n vi c lây nhi m sang ngư i Mu n v y ph i gi m b t ñư c nguy lây lan d ch b nh, cơng tác giám sát s lưu hành c a virus cúm nh m tìm hi u đưa nh ng thơng tin đánh giá v s t n lưu c a virus ngồi th c đ a ñi u c n thi t Xu t phát t tình hình th c ti n trên, chúng tơi ti n hành th c hi n ñ tài: “Giám sát s lưu hành c a virus cúm type A/H5N1 ñàn thu c m t i m t s xã thu c huy n Gia Lâm, ðông Anh - Hà N i” 1.2 M c tiêu ñ tài - Giám sát s lưu hành c a virus cúm type A/ H5N1 ñàn thu c m t i m t s xã thu c huy n Gia Lâm, ðông Anh - Hà N i Trên s đưa bi n pháp phòng, ch ng d ch cúm gia c m phù h p 1.3 Ý nghĩa khoa h c th c ti n c a ñ tài Khi ñ t v n ñ v nghiên c u v nghiên c u s lưu hành c a virus cúm gia c m ñàn thu c m, chúng tơi ý th c đư c tính ph c t p, khó khăn q trình h p tác v i h chăn ni q trình th c hi n Hy v ng v i k t qu nghiên c u c a ñ tài s đưa nh ng thơng tin v tình Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i - Lu n văn th c sĩ khoa h c nơng nghi p hình lưu d virus cúm ñàn thu c m, hi u qu s d ng vaccine cúm thu c m s cho quan qu n lý v thú y ñ a bàn cho nhà chăn ni có nh ng bi n pháp phịng, ch ng h u hi u ñ i v i d ch cúm gia c m, nh m h n ch t i ña s lây lan bùng phát cúm gia c m, nâng cao su t chăn ni, đ m b o v sinh mơi trư ng, an toàn cho s c kho ngư i tiêu dùng Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i - Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p * Sau tiêm phịng vaccine H5N1 đ t II năm 2010 ð xác ñ nh hàm lư ng kháng th có huy t c a đàn thu c m sau tiêm vaccine cúm H5N1 năm 2010 cho k t qu th nào, ti n hành giám sát kháng th cúm H5N1 huy t đàn thu c m ni t i xã Xuân N n, C Bi, Kim Sơn, ða T n thu c huy n Gia Lâm ðơng Anh sau tiêm phịng vaccine cúm H5N1 đ t II năm 2010 Th i gian l y m u sau tiêm phòng 21 ngày K t qu kháng th cúm gia c m ñàn thu c m sau tiêm phịng đ t II năm 2010 đư c trình bày b ng 4.10 Qua b ng chúng tơi có m t s nh n xét sau: + T i xã Xuân N n: 21 ngày sau tiêm phịng vaccine, chúng tơi l y 30 m u huy t v t 20 m u huy t ngan ñ ki m tra kháng th cúm H5N1 b ng ph n ng HI K t qu 100% m u đ u có hi u giá kháng th ; 20 m u huy t ngan có 29 m u huy t v t có hi u giá kháng th t log2 tr lên, t l b o h 96,67% Hi u giá kháng th trung bình v t 6,1 log2; ngan log2 + T i xã C Bi: 21 ngày sau tiêm phịng đ t II, chúng tơi l y 20 m u huy t v t 20 m u huy t ngan ñ ki m tra kháng th cúm H5N1 b ng ph n ng HI K t qu 100% m u ñ u ñ t hi u giá kháng th t 4log2 tr lên; t l b o h 100% Hi u giá kháng th trung bình v t 6,75 log2; ngan 6,5 log2 + T i xã Kim Sơn: Chúng ti n hành l y 30 m u huy t v t sau tiêm phòng 21 ngày ñ ki m tra kháng th cúm b ng ph n ng HI K t qu 100% m u có hi u giá kháng th t 4log2 tr lên Hi u giá kháng th trung bình 6,63 log2 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i - Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p 65 Tên xã 20 Vt Vt ða T n T ng Vt Kim Sơn 145 25 30 20 20 Ngan Ngan 30 Vt 0 0 0 2 0 0 2 22 3 2 34 5 3 Hi u giá HI (log2) 37 39 11 8 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i - Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p Gia Lâm C Bi ðông Xuân N n Anh Tên huy n S m u ki m tra Loài thu c m T l có kháng th 6,50 ± 0,29 6,60 ± 0,28 6,63 ± 0,27 6,50 ± 0,25 6,75 ± 0,3 6,00 ± 0,32 100 100 100 100 100 100 100 (log2) 6,10 ± 0,23 (%) Hi u giá kháng th trung bình vaccine cúm H5N1 ñ t năm 2010) 143 24 30 20 20 20 29 S m u 98,62 96,67 100 100 100 100 96,67 (%) HI ≥ 4log2 66 B ng 4.10: K t qu giám sát kháng th cúm gia c m huy t ñàn thu c m nuôi t i xã (sau dùng + T i xã ða T n: 21 ngày sau tiêm phịng đ t II, chúng tơi l y 25 m u huy t ñ ki m tra kháng th b ng ph n ng HI K t qu 100% m u đ u có hi u giá kháng th , có 24 m u có hi u giá kháng th t log2 tr lên, t l b o h 96,67% Hi u giá kháng th trung bình 6,6 log2 Như v y sau ki m tra 145 m u huy t sau tiêm phịng đ t II cho ñàn thu c m t i xã Xuân N n, C Bi, Kim Sơn, ða T n huy n Gia Lâm, ðơng Anh, Hà N i 100% m u có hi u giá kháng th , có 143 m u đ t hi u giá kháng th t 4log2 tr lên, t l b o h 98,62% Như v y sau đ t tiêm phịng chúng tơi có nh n xét sau: + T l m u huy t có kháng th đ t b o h hi u giá kháng th trung bình c a đàn thu c m t i xã Xuân N n, C Bi, Kim Sơn, ða T n thu c huy n ðông Anh, Gia Lâm t i th i ñi m trư c tiêm phòng vaccine cúm gia c m H5N1 năm 2010 r t th p Ngun nhân có th th i m l y vaccine tháng tháng 10 nên lư ng kháng th H5N1 có huy t c a thu c m ñã b gi m Do t l m u huy t có kháng th đ t m c b o h r t th p K t qu cho th y vi c ti n hành tiêm ti p vaccine phịng b nh cúm gia c m cho đàn thu c m xã Xuân N n, C Bi, ða T n, Kim Sơn r t c n thi t + Sau c đ t tiêm phịng ta th y hàm lư ng kháng th cúm H5N1 huy t c a v t, ngan nuôi t i xã Xuân N n, C Bi, Kim Sơn, ða T n thu c hai huy n ðông Anh, Gia Lâm, Hà N i sau tiêm phòng vaccine cúm gia c m H5N1 ñư c 21 ngày r t cao Các m u huy t có hi u giá kháng th t p trung nhi u t log2 ñ n log2 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i - Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p 67 K T LU N VÀ ð NGH 5.1 K t lu n T k t qu nghiên c u c a đ tài, chúng tơi có m t s k t lu n sau: Tình hình chăn ni thu c m t i xã: Xuân N n, C Bi, Kim Sơn, ða T n thu c huy n ðông Anh Gia Lâm, Hà N i cịn mang tính ch t nh l , phân tán, chưa t p trung T l tiêm phòng vaccine cúm gia c m ñàn thu c m t i xã Xuân N n, C Bi, Kim Sơn, ða T n thu c huy n ðông Anh Gia Lâm, Hà N i năm 2009 ñ t 87,01%; năm 2010 ñ t 91,02% S thu c m ñư c tiêm vaccine cúm gia c m H5N1 năm 2009 41995 con, năm 2010 50670 Trên đàn thu c m ni l n gia c m c n thu c m không nuôi l n gia c m c n xã Xuân N n, C Bi, Kim Sơn, ða T n thu c huy n ðông Anh Gia Lâm, Hà N i khơng có s lưu hành c a virus cúm gia c m Trên ñàn thu c m ñư c tiêm vaccine thu c m khơng đư c tiêm vaccine xã Xuân N n, C Bi, Kim Sơn, ða T n thu c huy n ðông Anh Gia Lâm, Hà N i khơng có s lưu hành c a virus cúm gia c m B ng phương pháp phân l p phôi tr ng phương pháp RRT-PCR đ u khơng phát hi n s lưu gi virus cúm gia c m m u ki m tra Trên ñàn thu c m nuôi t i xã: Xuân N n, C Bi, Kim Sơn, ða T n thu c huy n Gia Lâm, ðông Anh, Hà N i t i th i m trư c tiêm phịng vaccine cúm H5N1 c a năm 2010, hàm lư ng kháng th l i r t th p - Trư c tiêm phịng vaccine cúm đ t I ñ t II, s m u có hi u giá kháng th HI ≥ 4log2 dao ñ ng t 16,67% - 23,33% Sau tiêm phịng cúm H5N1 đư c 21 ngày c a năm 2010, ñàn thu c m nuôi t i xã: Xuân N n, C Bi, Kim Sơn, ða T n thu c huy n Gia Lâm, ðông Anh, Hà N i, hàm lư ng kháng th r t cao S m u có hi u giá kháng th HI ≥ 4log2 sau tiêm phịng đ t I 100%, sau tiêm phịng đ t Trư ng ð i h c Nơng nghi p Hà N i - Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p 68 II dao ñ ng t 96,67% - 100% 5.2 ð ngh ð chăn nuôi thu c m c a xã phát tri n n a c n s h tr , quan tâm c a c p, ban ngành có liên quan ð ng th i ph i có s qui ho ch khu v c chăn nuôi thu c m Tăng cư ng công tác qu n lý, ki m tra, giám sát ch t ch tình hình chăn nuôi thu c m c a h chăn nuôi, ñ ng th i tăng cư ng bi n pháp phòng ch ng d ch nghiêm ng t tri t đ Cơng tác tiêm phịng c n ñư c tri n khai m t cách ch t ch ñ ñ m b o t l tiêm phịng cho đàn thu c m, h n ch d ch b nh phát sinh Vi c giám sát s lưu hành c a virus cúm gia c m c n ñư c ki m tra thư ng xuyên, t làm s khoa h c đ đ bi n pháp phòng ch ng cúm gia c m đ t hi u qu Tích c c cơng tác tun truy n, v n đ ng nhân dân tham gia tích c c ch trương, chi n lư c c a C c thú y v tiêm phòng vaccine cúm gia c m, phòng ch ng d ch b nh Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i - Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p 69 TÀI LI U THAM KH O TÀI LI U THAM KH O TI NG VI T 1.B Nông nghi p Phát tri n Nơng thơn (2005) K ho ch d phịng ch ng d ch cúm gia c m ch ng ñ c l c cao t i Vi t Nam Bùi Quang Anh, Văn ðăng Kỳ (2004), “B nh cúm gia c m: lưu hành b nh, ch n đốn ki m sốt d ch b nh”, T p chí Khoa h c k thu t Thú y, t p XI, s 3, trang 69-75 Bùi Quang Anh, Tr n H u C n (2004), B nh cúm gia c m bi n pháp phòng ch ng, NXB Nông nghi p, Hà N i Các văn b n hư ng d n s d ng vaccine cúm gia c m giám sát sau tiêm phòng; Báo cáo tình hình d ch cúm gia c m ti n đ tiêm phịng c a C c Thú y t i trang web www.cucthuy.gov.vn C c thú y (2004), B nh cúm gia c m bi n pháp phịng tr , NXB Nơng nghi p, Hà N i D.L Suares Mary J.Pantin-Jackwood (2008), “Tiêm vaccine ñ kh ng ch d ch cúm gia c m th ñ c l c cao”, H i th o qu c t nghiên c u ph c v ho ch đ nh sách phịng ch ng cúm gia c m, 16-18/6/2008, Hà n i Nguy n Ti n Dũng (2004), “Ngu n g c virus cúm gia c m H5N1 t i Vi t Nam năm 2003-2004”, T p chí khoa h c k thu t Thú y, T p XI, S 3, trang Nguy n Ti n Dũng , ðào Thanh Vân, Bùi Ng c Anh, Kenjiro, Bùi Nghĩa Vư ng, Nguy n Th Vinh, Nguy n Bá Thành, Ph m Th Kim Dung (2005), “Giám sát tình tr ng nhi m virus cúm gia c m t i ð ng b ng Sông C u Long cu i năm 2004”, T p chí khoa h c k thu t Thú y, XII(2), trang 13 -18 Nguy n Ti n Dũng (2008), “Vài nét v virus cúm gia c m H5N1”, T p chí khoa h c k thu t Thú y, T p XV, S 4, trang 80 – 86 10 Nguy n Ti n Dũng, Nguy n Th Vinh, Dhanasekara Vijay Krishna, Robertc Webster, Yi guan, J.S.Malik peiris Gavin J.D.Smith (2008), “S đa d ng c a dịng virus cúm A (H5N1) t i Vi t Nam t năm 20052007”, T p chí khoa h c k thu t Thú y, t p XV, s 4, trang 9-15 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i - Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p 70 11 Lê Thanh Hoà, Nguy n Như Thanh (1997), Mi n d ch h c Thú y, NXB Nông nghi p, Hà N i 12 Ken Inui (2008), “Ki m ch ng hi u qu vaccine cúm gia c m ñ i v i virus m i phân l p g n ñây (2007-2008)”, H i th o qu c t nghiên c u ph c v ho ch đ nh sách phịng ch ng cúm gia c m, 16-18/6/2008, Hà n i 13 Ken Inui (2008), “S thay ñ i c a virus cúm gia c m th ñ c l c cao H5N1 Vi t Nam”, H i th o qu c t nghiên c u ph c v ho ch đ nh sách phịng ch ng cúm gia c m, 16-18/6/2008, Hà n i 14 Ph m S Lăng, Nguy n Hồi Nam, Tơ Long Thành, Cù H u Phú (2004), B nh m i gia c m k thu t phòng tr , NXB Nông Nghi p, Hà N i 15 Mary J Pantin-Jackwood, Jenny Pfeiffer, Tô Long Thành, Nguy n Tùng David Suarez (2008), “ð c tính virus cúm gia c m th ñ c l c cao H5N1 c a Vi t Nam gà v t”, H i th o qu c t nghiên c u ph c v ho ch đ nh sách phịng ch ng cúm gia c m, 16-18/6/2008, Hà N i 16 Lê Văn Năm (2004), “ B nh cúm gà”, T p chí khoa h c k thu t Thú y, t p I, s 3, trang 82-84 17 Lê Văn Năm (2007), “ð i d ch cúm gia c m ngun t c phịng ch ng”, T p chí khoa h c k thu t Thú y, T p XIV, S 2, trang 91-94 18 Dư ðình Quân (2006), Kh o sát ñáp ng mi n d ch c a ngan, v t v i vaccine Cúm gia c m th c ñ a, Lu n án th c s Nông nghi p, Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i 19 Nguy n Hoài T o, Nguy n Tu n Anh (2004), “M t s thông tin v d ch cúm gia c m”, Chăn nuôi, S 3, trang 23 20 Tô Long Thành (2005), “ B nh cúm gia c m, khuy n cáo c a t ch cqu c t tình hình m i, tình hình cúm gia c m Vi t Nam bi n pháp phòng tr áp d ng”, T p chí khoa h c k thu t Thú y, T p I, s 4-2005, trang 67-68 21 Tô Long Thành (2007), “Các lo i vaccine cúm gia c m ñánh giá hi u qu tiêm phịng”, T p chí khoa h c k thu t Thú y, T p XVI, S 2, trang 84-93 22 Tô Long Thành ( 2005), “M t s thông tin m i v b nh cúm gia c m”, T p Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i - Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p 71 chí Khoa h c k thu t Thú y, T p XII, S 1, trang 84-91 23 Tô Long Thành (2004), “Thông tin c p nh t tái xu t hi n b nh cúm gia c m t i nư c Châu Á”, T p chí Khoa h c k thu t Thú y, T p XI, s 42004, trang 87-93 TÀI LI U THAM KH O TI NG ANH 24 Bruschke C (2007), “ International Strandards Guidelines on poultring Hpai vaccination”, A1 vaccine conference: vacanation: a tool for the control of avian influenza, 20-22 march 2007, verona, Italy 25 Cappua I & Cattoli G (2007), “ Diagnosing avian influenza infections in vaccinated populations using “DIVA” systems”, AI vaccine conference: Vaccination: a tool for the control of avian influenza, 20-22 March 2007, Verona, Italy 26 Food and Agriculture Organization of the United Nations (FAO) (2004), FAO, OIE & WHO Technical consultation on the Control of Avian Influenza, Animal health special report 27 Garcia-Garcia J., Rodriguez V.H & Hernandez M.A (1998), “Experiment studies in field trials with recombinant fowlpox vaccine in broilers in Mexico”, Proceedings of the Fourth International Symposium on Avian Influenza, Athens, Georgia, USA, pp.245-252 28 Guus Kock (2007), “Efficacy of vaccination in different poultry species”, AI vaccine conference: Vaccination: A tool for the control of avian influenza, 20-22 March 2007, Verona, Italy 29 Mingxiao M et al (2006), Construction and immunogenicity of recombinant fowlpox vaccines coexpressing HA of AVI H5N1 and chicken IL18, Elsevier Inc Vaccine 24 (2006), pp 4304-4311 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i - Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p 72 PH L C Ph l c 1: Thành ph n cách pha nguyên li u dùng ch n đốn cúm * Mơi trư ng 199 ch a 0,5% BSA (Albumin huy t bò) B sung kháng sinh Penicillin G Stretomycin Polymyxin B Gentamycin Nystatin 2.000.000 U/lít 200 mg/lít 2.000.000 U/lít 250 mg/lít 500.000 U/lít Ofloxacin HCl 60 mg/lít Sulfmethoxasole 200 mg/lít * Mơi trư ng Glycerol - Pha ch PBS NaCl 8g KCl 0,2 g Na2HPO4 1,15g KH2PO4 0,2 g Nư c c t v a đ 1000 ml - H p vơ trùng (1210 C/15 phút), b sung kháng sinh (như trên) tr n v i glycerol theo t l 1:1 Ngoài có th s d ng mơi trư ng b o qu n khác như: Mu i ñ m Hank, môi trư ng M.E.M, PBS, Tryptose Phosphate broth, Veal Infusion Broth, Sucrose – phosphatebuffer Các dung d ch có th ñư c b sung BSA (bovine serum albumin), Gelatin 0,5 – 1%, ch t kháng sinh, kháng n m * Dung d ch PBS 0,01 M pH7,2 Na2HPO4 1,096 g NaH2PO4.H2O 0,316 g Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i - Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p 73 NaCl 8,5 g Nư c c t 1lít Ch nh pH = 7,2 b ng NaOH 1N ho c HCl 1N, h p vô trùng, b o qu n 40C không tu n * Dung d ch nư c mu i sinh lý 0,85% 8,5 g NaCl lít nư c c t H p vô trùng, b o qu n 40C * Huy n d ch h ng c u gà 1% - Gà tr ng kho m nh ñã trư ng thành, khơng có kháng th cúm newcastle - Dùng bơm tiêm 5-10 ml hút s n 1ml (10% th tích) dung d ch ch ng đơng (Natri Citrat 4%, Alserver …) r i l y máu gà tĩnh m ch cánh cho máu vào ng nghi m - Ly tâm 1000-1500 vịng/phút, 15 phút, đ b huy t tương, cho thêm nư c sinh lý (NaCl 0,85%) vào h ng câu, l c ñ u Ly tâm 3-4 l n ñ r a h ng c u Sau l n ly tâm cu i hút b nư c - Pha h ng c u thành huy n d ch 1% b ng cách pha 1ml h ng c u v i 99 ml nư c mu i sinh lý - B o qu n huy n d ch h ng c u nhi t ñ 4-80C H ng c u sau pha có th dùng 4-5 ngày (n u h ng c u b dung huy t lo i b không dùng) Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i - Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p 74 Ph l c 2: B ng trình t chu i c a m u dò Primer cho RRT-PCR phát hi n cúm gia c m Gen M Trình t m i (primer) m u dị (probe) M u dò: TGC AGT CCT CGC TCA CTG GGC ACG M i xuôi: CAT GGA RTG GCT AA GAC AAG ACC M i ngư c: AGG GCA TTT TGG ACA AAK CGT CTA H5 M u dò: TCA ACA GTG GCG AGT TCC CTA GCA M i xuôi: ACG TAT GAC TAC CCG CAG TAT TCA M i ngư c: AGA CCA GCT ACC ATG ATT GC N1 M u dò: TGG TCT TGG CCA GAC GGT GC M i xuôi: TGG ACT AGT GGG AGC AGC AT M i ngư c: TGT CAA GGT TAA GGG CAA CTC Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i - Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p 75 Ph l c 3: Lư ng ch t ph n ng Real time RT-PCR dùng cho c p m i phát hi n gen MA (Cúm A), H5 H7 Ch t ph n ng ph n ng Li u lư ng cho Hàm lư ng cu i H2O 6,95 µl 5X buffer 25mM MgCl2 dNTP’s (10mM m i lo i) 1X 1,25 3,75 mM* 0,8 320 mM m i lo i dNTP M i ch y xi (20 pmol/µl) 0,5 10 pmol/25µl M i ch y ngư c (20 pmol/µl) 0,5 10 pmol/25µl RNase Inhibitor (13,3 units/µl) 0,5 0,266 units/µl M u dị (6 pmol/µl) 0,5 0,12 µM T ng lư ng cho ph n ng 17 µl M u ARN µl Enzyme Mix1,0 Lư ng toàn b ng m u25 µl Ph l c 4: B ng chu kỳ nhi t c a bư c phiên mã ngư c (RT) dùng cho Quiagen® one step RT-PCR kit chu kỳ 30 phút 500C 15 phút Bư c phiên mã ngư c 950C Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i - Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p 76 Ph l c 5: B ng chu kỳ nhi t cho t ng h p gen c p m i C pm i H5 40 chu kỳ Bi n tính giây 940C 20 giây 600 C Bi n tính giây 940 C 20 giây 580 C Bi n tính giây 940 C Bám c a c p m i 40 chu kỳ Nhi t ñ Bám c a c p m i H7 45 chu kỳ Th i gian Bám c a c p m i AIV Matrix Bư c 20 giây 570 C Kéo dài chu i t ng h p giây 720 C Ph l c 6: Các thông s hư ng d n cài ñ t chương trình phân tích d li u c a máy chu kỳ nhi t Cepheid® Smart Cycler Ph n m m Smart Cycler cung c p nhi u phương pháp xác ñ nh ngư ng chu kỳ (Ct) T t c cách phân tích d li u đư c l y t Analysis Settings View Results Nh ng thay ñ i cài ñ t m c ñ nh tiêu chu n ñã ñư c thi t l p ñ i v i phân tích phát hi n virus Cúm A v i c p m i Matrix, H5 H7 Biên t p ph n phân tích m c đ nh c a Smart Cycler ñư c mô t dư i ñây, d li u thơ s đư c phân tích tuỳ theo m c đ phân tích đư c mơ t Phân tích đư ng cong (Curve analysis): Ch p nh n cài ñ t ñư ng cong sơ c p “Primary curve” – Ct đư c phát hi n thơng báo chu kỳ có đư ng cong sơ c p c t chéo ngư ng Cách s d ng (Usage): Ch p nh n cài ñ t m c ñ nh “Assay” ñ i v i kênh FAM Tr giá tr n n (Background Subtraction): Ch p nh n giá tr m c ñ nh “ON” Giá tr t i thi u n n (Background Minimum): Ch p nh n giá tr m c ñ nh “5” (phút) Chu kỳ ñ u tiên ñã tính giá tr n n ph n tr giá tr n n ñư c B t Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i - Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p 77 Chu kỳ c c ñ i giá tr n n (Background Maximum cycle): Nh p s “28” chu kỳ c c đ i đ tính tốn giá tr n n tr giá tr nên ñư c B t M c ñ nh 40 ð t ngư ng (Threshold Settings): ch p nh n m c ñ nh c a “Manual” ðơn v huỳnh quang ngư ng xác ñ nh (Manual Threshold Fluorescence units): Nh p s “25” ñơn v huỳnh quang Ct n m phía huỳnh quang n n N u cài đ t huỳnh quang n n g n giá tr c n ngư ng gi i h n phát hi n nh y Tuy nhiên n u giá tr ngư ng g n v i giá tr huỳnh quang n n đ n c a n n có th c t chéo ngư ng cho k t qu khơng xác m u dương tính (ph n ng dương tính gi ) N u ñơn v huỳnh quang ngư ng th p t 30 ñ n 25 (giá tr m c ñ nh), đ nh y phân tích s tăng lên Kh cho k t qu âm tính gi gi m kh cho k t qu dương tính tăng Boxcar Average: ch p nh n m c ñ nh “0” * Ki m tra k t qu xét nghi m Ch nh ng thay ñ i ph n m c ñ nh c a máy chu kỳ nhi t Cepheid®Smart Cycler đư c cài đ t giá tr n n c c ñ i giá tr ngư ng V i ph n cài ñ t phân tích, m u đư c xem dương tính (c t chéo Ct) đơn v huỳnh quang vư t 25 ñơn v Nh ng cài ñ t ñư c thi t k nh m t i ưu hoá kh phân bi t m u dương tính âm tính quy trình hư ng d n c th này, nhiên k t c a m i l n ch y ph n ng c n ph i ñư c xác nh n b i cán b xét nghi m ðư ng cong ph i n m pha n tính log c t chéo ngư ng Khi giá tr n n c c ñ i th p, nh hư ng c a v t hình ch V gi m xu ng Các m u v n v t hình ch V, có th đ t giá tr n n c c ñ i xu ng 15 cho đ n chu kỳ cịn xu t hi n v t n m ngang th ng hàng v i giá tr huỳnh quang “s không” Ph i ln nh r ng đ t giá tr c c ñ i th p n u mu n ch y nhi u chu kỳ t t tính tốn giá tr n n ðây m t s ñi u ch nh c a ph n m m cung c p d li u gi m s lư ng chu kỳ tính tốn giá tr n n ch nh ñư ng cong N u có câu h i v v t, Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i - Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p 78 xem v t v i giá tr tr n n đư c t t Nó s cho th y d li u huỳnh quang thô đơi c n có nh ng phân tích h tr Huỳnh quang n n ph i ñư c theo dõi thư ng xuyên S suy gi m c a m u dò s x y tăng huỳnh quang n n V t huỳnh quang m u c n ñư c xem xét trư c ch p nh n k t qu dương tính/âm tính c a máy chu kỳ nhi t Smart Cycle Các m u b nh ph m có v t huỳnh quang làm gia tăng ñơn v huỳnh quang giá tr ti p c n, không c t ngang Ct, nên ñư c g i ñ n NVSL ñ xét nghi m thêm Nh ng m u ñư c xem tăng ch m “late riser – LR” thư ng cho k t qu g n v i ngư ng phát hi n Hi n m u LR chưa ñư c tìm hi u rõ nên c n xét nghi m thêm b ng phương pháp phân l p virus Các ch t ph n ng H5 s phát hi n ñư c c ch ng thu c phân nhóm (subtype) Eurasian H5 North American H5 Ph n ng khơng phân bi t đư c ph h c a virus Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i - Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p 79 ... d ng vaccine t i m t s xã huy n Gia Lâm, ðông Anh (Hà N i) - Giám sát s lưu hành c a virus cúm gia c m ñàn thu c m t i m t s xã huy n Gia Lâm, ðông Anh (Hà N i) - Giám sát huy t h c ñ i v i ñàn... qu giám sát s lưu hành c a virus cúm gia c m ñàn th y c m nuôi l n gia c m c n thu c m không nuôi l n gia c m c n t i m t s xã huy n Gia Lâm ðông Anh, Hà N i 45 4.3.2 Giám sát s lưu hành. .. xã thu c huy n Gia Lâm, ðông Anh - Hà N i” 1.2 M c tiêu ñ tài - Giám sát s lưu hành c a virus cúm type A/ H5N1 ñàn thu c m t i m t s xã thu c huy n Gia Lâm, ðông Anh - Hà N i Trên s đưa bi n
