Các th nghi m sinh hóaử ệ Các th nghi m sinh hóaử ệ GV: Nguy n Văn H nhễ ạ Ch ng 4ươ  Phân l p khu n l c thu n khi t là c n ậ ẩ ạ ầ ế ầ thi t cho đ nh danh VSVế ị  Vi c đ nh danh d a ch y u vào đ c ệ ị ự ủ ế ặ đi m ki u hình đ c bi t là các ph n ng ể ể ặ ệ ả ứ sinh hóa.  Có 3 cách s d ng các th nghi m sinh ử ụ ử ệ hóa đ đ nh danh VSV:ể ị ◦ Cách truy n th ngề ố ◦ S d ng các b KITử ụ ộ ◦ S d ng các thi t b t đ ngử ụ ế ị ự ộ Th nghi m kh năng lên menử ệ ả Th nghi m kh năng lên menử ệ ả  Mục đích: thử nghiệm khả năng sữ dụng các nguồn CH của các VSV  Nguyên tắc: VSV sử dụng CH  tao acid  giảm pH môi trường  Các loại carbonhydrate ◦ Monocarbonhydrate: glucose, xylose, rhamnose … ◦ Dicarbonhydrate: sucrose, lactose … ◦ Polycarbonhydrate: tinh bột, cellulose ◦ Các loại đường khử: đường mono chứa chức –CHO ◦ Các loại đường rượu: chứa chức -OH Phenol Red Carbohydrate Broth Phenol Red Carbohydrate Broth H p 115ấ ở o C trong 15 phút Trang 104 Th nghi m kh năng lên menử ệ ả Th nghi m kh năng lên menử ệ ả  Môi trường: Phenolred broth base bổ sung 0,5-1% đường cần thử nghiệm  VSV sử dụng được nguồn đường trong môi trường sẽ làm giảm pH  thay đổi màu chất chỉ thị phenolred  Phản ứng (+): môi trường chuyển vàng  Phản ứng (-): môi trường có màu đỏ Th nghi m Citrateử ệ Th nghi m Citrateử ệ  Mục đích: Xác định khả năng vi sinh vật sử dụng nguồn citrat như là nguồn cacbon duy nhất.  Cở sở sinh hóa: ◦ VSV sử dụng citrate, sinh ra CO 2 làm kiềm hóa MT ◦ VSV sử dụng muối ammonium là nguồn đạm duy nhất tạo ra NH 3 làm kiềm hóa MT Th nghi m Citrateử ệ Th nghi m Citrateử ệ Môi trường Simmon citrate agar (tr. 105) Ammonium dihydrogen phosphate1.0g Dipotassium hydrogen phosphate 1.0g NaCl 5g Sodium citrate 2g MgSO 4 0,2g Bromothymol blue 0,08g Agar 13g Th nghi m Citrateử ệ Th nghi m Citrateử ệ  Chú ý - Cấy lượng sinh khối vừa đủ - Có đối chứng trắng đi kèm Đ i ch ng tr ngố ứ ắ P âm tínhứ P d ng tínhứ ươ Th nghi m Ureaseử ệ Th nghi m Ureaseử ệ  Mục đích: phát hiện VSV có mang enzym urease  Cơ sở sinh hoá: (NH 2 ) 2 CO + H 2 O  2 NH 3 + CO 2  tăng pH môi trường  đỏ phenol (vàng – đỏ)  Môi trường sử dụng: ◦ Urea Broth (Rustigian – Stuart) ◦ Christensen Urea (môi trường thạch nghiêng) [...]... vào 5ml môi trường ◦ ủ 37oC/24 giờ ◦ Quan sát Thử nghiệm khả năng sinh H2S Mục đích: phát hiện khả năng sinh H2S  Cơ sở sinh hóa:  Acid amin chứa S Thiosulfate desulfohydrase thiosulfate reductase H2S H2S  H2S sinh ra được nhận biết bởi ion sắt, chì tạo kết tủa màu đen (FeS, PbS) Thử nghiệm khả năng sinh H2S Để phân biệt các loài thu c họ Enterobacteriaceae và giống Proteus  Môi trường sử dụng:... năng sinh H2S  (+) (-) Đọc kết quả: Xuất hiện màu đen trong môi trường Không xuất hiện màu đen trong môi trường ĐC (+) Thử nghiệm khả năng sinh H2S Pancreatic digest of casein (casitone) 20.0 g Peptic digest of animal tissue (beef extract) 6.1 g Ferrous ammonium sulfate 0.2 g Sodium thiosulfate 0.2 g Agar 3.5 g (-) (+) (+) Thử nghiệm khả năng sinh Indol  Mục đích Phát hiện các VSV có khả năng sinh. .. nghiệm KIA/TSI  Mục đích: phát hiện khả năng ◦ sử dụng các nguồn cacbonhydrate ◦ sinh H2S ◦ tạo hơi (gas) Ủ 37oC/24 giờ Quan sát: Phần nghiêng / phần sâu / hơi / H2S Thử nghiệm KIA/TSI ĐC 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 Thử nghiệm MR (Methyl red)   Mục đích: xác định vi sinh vật sản xuất và duy trì các acid bền trong quá trình lên men glucose Cơ sở sinh hóa: ◦ Chất chỉ thị pH: methyl red dưới 4,4 5,0 – 5,8 trên... Cở sở sinh hóa: Acetoin được tạo ra trong điều kiện yếm khí hoàn toàn 2 pyruvate acetoin + 2 CO2 Thử nghiệm VP (Voges – Proskauer) Môi trường sử dụng: MR-VP  Phương pháp tiến hành:  ◦ ◦ ◦ ◦ Cấy vi sinh vật trong môi trường MR-VP Ủ 24 – 48 giờ, nhiệt độ 37oC Bổ sung thu c thử vào môi trường, lắc nhẹ Đọc kết quả sau 20 phút và chậm nhất là 4 giờ Thử nghiệm VP (Voges – Proskauer)  Kiểm tra thu c thử... 0.2 g Agar 3.5 g (-) (+) (+) Thử nghiệm khả năng sinh Indol  Mục đích Phát hiện các VSV có khả năng sinh indol  các VSV có hệ emzym tryptophanase 37oC / 24h Thu c thử Kovac’s Chủng VSV MT canh trypton Pứ dương tính Pứ âm tính Thử nghiệm khả năng sinh Indol  Là phản ứng giúp phân biệt ◦ E coli (+) với Klebsiella (-) ◦ Proteus mirabilis (-) với Proteus khác (+) ◦ Bacillus alvei (+) với Bacillus khác... carbon duy nhất  Cơ sở sinh hoá Malonate là chất cạnh tranh với succinate Khi VSV phân hủy được malonate thì cũng phân huỷ được các nguồn đạm vô cơ khác  tạo thành sp kiềm  làm tăng pH môi trường  Thử nghiệm Malonate  Môi trường sử dụng: Malonate broth (bromothymol blue) pH 7,6 Dương tính: MT chuyển màu xanh da trời  Âm tính: MT không đổi màu và không sinh khối  Đ C (+) (-)... blue) pH 7,6 Dương tính: MT chuyển màu xanh da trời  Âm tính: MT không đổi màu và không sinh khối  Đ C (+) (-) Thử nghiệm catalase  Mục đích: phát hiện các vi sinh vật có hệ enzym catalase  Cơ sở sinh hoá: ◦ Catalase hiện diện ở các VSV hiếu khí và kỵ khí tùy ý catalase H2O2 ◦ (hydrogen peroxide) H2O + O2 (bọt khí) ... môi trường (-): mặt môi trường không đổi màu (-) (+) Thử nghiệm Bile Esculin  Mục đích: xác định khả năng thủy giải glucoside esculin thành esculetin và glucose khi có sự hiện diện của muối mật  Cơ sở sinh hoá: ◦ Esculin là hợp chất nhân tạo ◦ Esculetine được phóng thích phản ứng với Fe2+ tạo thành phức hợp màu đen Môi trường Bile Esculine Agar Beef extract Pepton Esculin Mật bò (Oxgall) Ferric citrate . đích: Xác định khả năng vi sinh vật sử dụng nguồn citrat như là nguồn cacbon duy nhất.  Cở sở sinh hóa: ◦ VSV sử dụng citrate, sinh ra CO 2 làm kiềm hóa. Ureaseử ệ Thử nghiệm khả năng sinh H Thử nghiệm khả năng sinh H 2 2 S S  Mục đích: phát hiện khả năng sinh H 2 S  Cơ sở sinh hóa: Acid amin chứa S H 2