Đang tải... (xem toàn văn)
luận văn, thạc sĩ, tiến sĩ, cao học, khóa luận, đề tài
Bộ giáo dục đào tạo nông nghiệp Ptnt ViƯn Khoa häc N«ng nghiƯp ViƯt Nam - HOÀNG THU HÀ NGHIÊN C U K THU T NHÂN SINH KH I VÀ S D NG CH PH M N M CĨ ÍCH Metarhizium anisopliae TRONG PHỊNG TR R Y NÂU H I LÚA VÙNG ð NG B NG B C B Chuyên ng nh : Bảo vệ thực vật Mà số : 60.62.10 Luận văn thạc sĩ nông nghiÖp Ngư i hư ng d n khoa h c: TS Lê Văn Tr nh H Néi, 2010 L I CAM OAN Tôi xin cam đoan số liệu kết nghiên cứu nên luận văn trung thực cha đợc sử dụng để bảo vệ học vị Tôi xin cam đoan giúp đỡ việc thực luận văn đà đợc cảm ơn thông tin trích dẫn đà đợc rõ nguồn gốc Tác giả luận văn Hong Thu Hà Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i - Lu n văn Th c s khoa h c nông nghi p……… i L I C M N Để hoàn thành đề tài nỗ lực thân, đà nhận đợc nhiều giúp đỡ cá nhân tập thể Do muốn bày tỏ lòng cám ơn tới tất cá nhân, đơn vị đà giúp đỡ trình thực đề tài Trớc tiên, xin đợc bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới thầy giáo hớng dẫn TS Lê Văn Trịnh, ngời thầy tận tình chu đáo Thầy đà truyền đạt cho kiến thức kinh nghiệm quý báu nh lòng say mê nghiên cứu khoa học Tôi xin chân thành cảm ơn thầy cô giáo Viện Khoa học nông nghiệp Việt Nam, đặc biệt thầy cô giáo Ban đào tạo Sau đại học sẵn lòng giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi hoàn thành luận văn nghiên cứu khoa học Cám ơn nhóm nghiên cứu thuộc Viện Bảo vệ thực vật, Cục Bảo vệ thực vật đà hỗ trợ suốt trình tiến hành thí nghiệm Lòng biết ơn sâu sắc xin đợc dành cho gia đình, ngời thân đà tạo điều kiện cho yên tâm công tác học tập Một lần xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày tháng năm 2010 Tác giả luận văn Hong Thu H Tr ng i h c Nông nghi p Hà N i - Lu n văn Th c s khoa h c nông nghi p……… ii M CL C L I CAM ðOAN i L I C M ƠN ii M C L C iii DANH M C CH VI T T T v DANH M C B NG .vi DANH M C HÌNH VÀ SƠ ð vii M ð U .1 Tính c p thi t c a ñ tài nghiên c u M c đích u c u c a ñ tài nghiên c u 2.1 M c đích 2.2 Yêu c u c n ñ t 3 Ý nghĩa khoa h c th c ti n c a ñ tài .4 ð i tư ng, ph m vi th i gian nghiên c u 4.1 ð i tư ng nghiên c u c a ñ tài 4.2 Ph m vi nghiên c u c a ñ tài .5 4.3 ð a ñi m th i gian th c hi n 4.3.1 ð a ñi m nghiên c u 4.3.2 Th i gian th c hi n .5 CHƯƠNG - T NG QUAN TÀI LI U VÀ CƠ S KHOA H C 1.1 Cơ s khoa h c c a ñ tài 1.2 M t s k t qu nghiên c u nư c 1.2.1 Tình hình nghiên c u nư c ngồi .8 1.2.2 Tình hình nghiên c u nư c 16 CHƯƠNG - V T LI U, N I DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN C U 22 2.1 V t li u nghiên c u 22 2.2 N i dung nghiên c u 22 2.2.1 ði u tra thu th p phân l p n ch n ngu n n m M anisopliae (M.a) gây ch t r y nâu t nhiên 22 2.2.2 Nghiên c u hoàn thi n m t s y u t k thu t nhân sinh kh i ch ph m ch ng n m M.a có ho t l c cao đư c phân l p r y nâu 22 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i - Lu n văn Th c s khoa h c nông nghi p……… iii 2.2.3 ðánh giá hi u qu gây ch t r y nâu c a ch ph m n m M.a nhà lư i ñ ng ru ng 22 2.2.4 Nghiên c u xác ñ nh k thu t s d ng ch ph m n m M.a phịng tr r y nâu đ ng ru ng 23 2.3 Phương pháp nghiên c u 23 2.3.1 Các thí nghi m phương pháp th c hi n 23 2.3.2 Tính tốn x lý s li u 29 CHƯƠNG - K T QU NGHIÊN C U 30 3.1 K t qu thu th p, phân l p n ch n ch ng n m M.a ký sinh r y nâu t nhiên 30 3.2 Hoàn thi n m t s y u t k thu t nhân sinh kh i ch ph m ch ng n m M.a có ho t l c cao đư c phân l p r y nâu 38 3.3 Hi u qu gây ch t r y nâu c a ch ph m n m M.a nhà lư i ngồi đ ng ru ng 45 3.3.1 Hi u qu gây ch t r y nâu c a ch ph m n m M.a nhà lư i 45 3.3.2 Hi u qu phòng tr r y nâu c a ch ph m M.a ngồi đ ng ru ng 47 3.4 Xác ñ nh k thu t s d ng ch ph m n m M.a phòng tr r y nâu ngồi đ ng ru ng 49 3.4.1 Li u lư ng s d ng 50 3.4.2 S l n s d ng ch ph m đ phịng tr r y nâu có hi u qu 51 3.4.3 ð xu t k thu t s d ng k t qu ng d ng ch ph m M.a đ phịng tr r y nâu ñ ng ru ng 53 K T LU N VÀ ð NGH 56 K t lu n 56 ð ngh 54 TÀI LI U THAM KH O 58 PH L C 66 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i - Lu n văn Th c s khoa h c nông nghi p……… iv DANH M C CH VI T T T M.a: Metarhizium anisopliae M.f: Metarhizium flavoviride B.b: Beauveria bassiana H.c: Hirsutella citriformis CFU: Clony forming unit CFU/g: S bào t s ng/ gram ñ t Bt/g: Bào t / gram CT: Công th c MT: Môi trư ng MaR: Ch ng n m Metarhizium anisopliae (ký hi u t MaR1 ñ n MaR12) MfR: Ch ng n m Metarhizium flavoviride (ký hi u t MfR1 ñ n MfR3) BbR: Ch ng n m Beauveria bassiana (ký hi u t BbR1 ñ n BbR3) Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i - Lu n văn Th c s khoa h c nông nghi p……… v DANH M C B NG B ng 3.1 T l n m ký sinh r y nâu N lugens Stal h i lúa t i H i Phòng Vĩnh Phúc năm 2008 30 B ng 3.2 K t qu phân l p ch ng n m ký sinh r y nâu 31 B ng 3.3 Hi u l c gây ch t r y nâu c a ch ng n m M a 33 B ng 3.4 Kh ký sinh tr l i sau 14 ngày m u r y ch t sau phun ch ng n m ñã phân l p 34 B ng 3.5 K t qu ñ nh tên ch ng n m phân l p r y nâu b ng phương pháp phân lo i h c phân t PCR 36 B ng 3.6 S lư ng bào t n m M.a sau 10 ngày nuôi c y 38 B ng 3.7 S lư ng bào t n m M.a sau 10 ngày ni c y m c nhi t đ khơng khí c a mơi trư ng khác 41 B ng 3.8 S lư ng bào t n m M.a sau 10 ngày nhân sinh kh i b ng công ngh Cu Ba môi trư ng thóc g o 42 B ng 3.9 S lư ng bào t n m M.a sau 10 ngày nhân sinh kh i b ng công ngh Cu Ba m t s môi trư ng khác 43 B ng 3.10 Hàm lư ng bào t có ch ph m M.a sau tháng lưu gi b o qu n (Vi n BVTV, 2009) 44 B ng 3.11 Hi u qu h n ch r y nâu c a ch ph m n m M.a v i li u lư ng s d ng khác 46 B ng 3.12 Hi u l c phòng tr r y h i lúa mùa c a ch ph m n m M.a t i Phú Xuân 48 B ng 3.13 Hi u l c phòng tr r y nâu h i lúa n p v mùa c a ch ph m M.a t i H i An 50 B ng 3.14 Hi u l c h n ch r y nâu c a ch ph m n m M.a lúa v xuân t i Hương Canh 52 B ng 3.15 Kh i lư ng ch ph m M.a ñã s n xu t s d ng t i vùng tr ng lúa năm 2009 2010 53 B ng 3.16 M t ñ r y nâu t i ñ nh cao phát sinh t i ñi m xây d ng mơ hình th nghi m 54 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i - Lu n văn Th c s khoa h c nơng nghi p……… vi DANH M C HÌNH VÀ SƠ ð Hình 1.1 Các ki u phát sinh bào t tr n c a nhóm Hyphomycetes c a L p n m b t toàn Deuteromycetes .9 Hình 3.1 N m M.a ký sinh r y nâu 30 Hình 3.2 Khu n l c c a n m M.a phát tri n môi trư ng PDA sau 10 ngày nuôi c y phịng thí nghi m 35 Hình 3.3 Xác đ nh mơi trư ng thích h p ñ nhân sinh kh i n m M.a 39 Hình 3.4 Thí nghi m v i cơng th c môi trư ng (MT) khác 40 Hình 3.5 ðánh giá hi u l c gây ch t r y nâu ñi u ki n nhà lư i 46 Hình 3.6 Xác đ nh li u lư ng ch ph m thích h p phịng tr r y nâu t i Bình Xuyên, Vĩnh Phúc 49 Sơ ñ 3.1 V trí phân lo i c a ch ng M1, M2, M3 lồi có quan h h hàng g n 37 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i - Lu n văn Th c s khoa h c nông nghi p……… vii M ð U Tính c p thi t c a ñ tài nghiên c u Lúa lương th c quan tr ng b c nh t c a Vi t Nam, v i l ch s hàng nghìn năm phát tri n qui mơ gieo tr ng l n ð n nay, Vi t Nam ñã tr thành m t cư ng qu c s n xu t xu t kh u lúa g o hàng ñ u th gi i Trong trình phát tri n, s n xu t lúa g o nư c ta có nhi u thay ñ i to l n, ñ c bi t s thay ñ i v c u gi ng, trình đ k thu t canh tác qu n lý d ch h i Tuy nhiên, nh ng năm g n ñây, r y nâu m t s ñ i tư ng sâu b nh h i khác ñã phát sinh gây h i n ng nhi u vùng tr ng lúa ð c bi t, r y nâu ñã tr thành d ch gây thi t h i l n vùng ñ ng b ng sông C u Long nhi u vùng tr ng lúa c nư c ði u đó, khơng ch nh hư ng ñ n xu t kh u lúa g o, mà có nguy nh hư ng ñ n an ninh lương th c c a Vi t Nam R y nâu (Nilaparvata lugens Stal) thu c gi ng Nilaparvata, h Delphacidae, b Homoptera ñ i tư ng gây h i quan tr ng nh t s ñ i tư ng d ch h i ñ i v i ngh tr ng lúa Vi t Nam m t s nư c khác, như: Thái Lan, Philippin, v.v R y nâu gây h i tr c ti p cho lúa b ng cách chích hút d ch, làm nh hư ng đ n sinh trư ng phát tri n c a cây, làm suy gi m v su t, th m chí gây “cháy r y” di n r ng Hơn n a, r y nâu cịn mơi gi i lan truy n m t s b nh vi rut, đ c bi t nghiêm tr ng b nh vàng lùn lúa lùn xo n Trư c nh ng năm 1960, r y nâu ch ñ i tư ng d ch h i th y u Trong th p niên 60 70 c a th k 20 cu c “cách m ng xanh” di n r y nâu tr thành ñ i tư ng gây h i quan tr ng b c nh t t i nư c s n xu t lúa Trong giai ño n 1966 – 1975, thi t h i r y nâu gây (thi t h i r y nâu b nh vàng lùn lùn xo n r y nâu môi gi i) cho nư c Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i - Lu n văn Th c s khoa h c nông nghi p……… châu Á c tính kho ng 300 tri u USD (Dyck and Thomas, 1979) T i Vi t Nam Thái Lan, thi t h i r y nâu gây hai năm 1990 – 1991 30 tri u USD (Gallagher et all., 1994) T i Trung Qu c thi t h i r y nâu tr c ti p gây chi phí cho vi c phòng tr chúng lên t i 400 tri u USD (Zhoi, Wang and Cheng, 1995) (D n theo N T L c CS., 2002) [13] Vi t Nam, theo báo cáo t ng k t công tác phòng ch ng d ch r y nâu năm 1977 – 1978, d ch r y nâu phá h i di n tích kho ng tri u t nh phía Nam, làm gi m su t 30 – 50%, nhi u nơi b m t tr ng, thi t h i lên t i kho ng tri u t n thóc (B.V Ích T.Q Hùng, 1985) Ti p theo, s phá h i c a r y nâu k t h p v i b nh lúa lùn xo n r y nâu lan truy n ñã xu t hi n nhi u vùng c nư c Di n tích b h i riêng đ ng b ng sơng C u Long lên t i 40.000 (H.M Trung, 1980) ð c bi t năm 2006 – 2007 d ch r y nâu b nh vàng lùn, lùn xo n ñã gây h i di n r ng h u h t t nh mi n Tây ðông Nam b Theo báo cáo c a C c B o v th c v t t i H i ngh toàn qu c t ng k t công tác b o v th c v t năm 2006, di n tích b nhi m r y c nư c năm 2006 605.593ha (tăng 3,2 l n so v i năm 2005) di n tích b nhi m n ng 48.867 (tăng 4,6 l n so v i năm 2005), có 51,8 b cháy r y phân b r i rác m t s t nh Riêng b nh vàng lùn lùn xoăn di n tích b nhi m b nh kho ng 175.283 ha, di n tích nhi m n ng t i 10.374 M t nh ng ngun nhân d n đ n hi n tư ng r y nâu liên t c b c phát di n r ng gây h i kéo dài vi c s d ng thu c tr sâu hoá h c thư ng xuyên v i s lư ng l n H u qu c a vi c l m d ng thu c hóa h c m t cách ph bi n phòng tr r y nâu sâu h i khác lúa, khơng ch gây đ c h i ñ i v i s c kh e c a ngư i mơi trư ng, mà cịn làm t n h i ñáng k ñ n qu n th lồi thiên đ ch, phá v cân b ng sinh thái t o nên s không b n v ng c a s n xu t lúa g o nư c ta [9],[13] Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i - Lu n văn Th c s khoa h c nông nghi p……… Nguy n Dương Khuê (1998), Bư c ñ u th nghi m dùng n m Metarhizium cho phòng tr m i nhà, Báo cáo khoa h c - Vi n KH Lâm Nghi p, Trang 198 Ph m Văn L m (1995), Bi n pháp sinh h c phòng ch ng d ch h i nông nghi p, NXB Nông nghi p, Hà N i, 236 trang 10 Ph m Văn L m (2002), Tài nguyên thiên ñ ch c a sâu h i- Nghiên c u ng d ng, Quy n 1, NXB Nông nghi p, Hà N i, 142 trang 11 Nguy n Th L c, Nguy n Th Thanh Nhàn, Phan Phư c Hi n Nguy n Văn Lu t (1999), “Hi u qu s d ng n m Beauveria bassiana, Metarhizium anisopliae Rotenone tr r y nâu h i lúa”, T p chí Khoa h c – Cơng ngh Qu n lý kinh t , S 5-1999, Trang 196-198 12 Nguy n Th L c, Võ Th Bích Chi, Ph m Quang Hưng, Nguy n Th Nhàn Nguy n ð c Thành (2002), “ nh hư ng c a n m tr ng n m xanh ñ i v i m t s thiên ñ ch c a sâu h i lúa” T p chí Nông nghi p Phát tri n Nông thôn, S 6-2002, Trang 490-493 13 Nguy n Th L c, Võ Th Bích Chi, Nguy n Th Nhàn, Ph m Quang Hưng, Huỳnh Văn Nghi p, Vũ Ti n Khang Nguy n ð c Thành (2002), Nghiên c u, s n xu t ng d ng hai ch ph m sinh h c đ qu n lý lồi sâu h i lúa, Vi n lúa ðBSCL, Trang 274 – 295 14 Nguy n Th L c (2009), Kh ký sinh, ch xâm nhi m c a n m xanh Metarhizium anisopliae đ i v i trùng gây h i ñ nh hư ng s n xu t ch ph m sinh h c M.a tr sâu h i tr ng, H i th o ñ nh hư ng phát tri n ng d ng bi n pháp sinh h c phòng ch ng d ch h i tr ng, Tr 90- 98 15 Võ Th Thu Oanh, Lê ðình ðơn, Bùi Cách Tuy n (2007), “ð c ñi m sinh h c kh gây b nh c a n m Metarhizium anisopliae (Metsch.) Sorokin ñ i v i sâu khoang (Spodoptera litura F.) h i rau c i xanh Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i - Lu n văn Th c s khoa h c nông nghi p……… 59 (Brassica juncea L.)”, T p chí KHKT Nơng Lâm nghi p, S 1&2, Trang 58-63 16 Ph m Th Thuỳ, ð ng Th Thanh, Nguy n Th Hoài B c, Tr n Thanh Tháp nnk (1996), Nghiên c u công ngh s n xu t ng d ng ch ph m n m Beauveria Metarhizium đ phịng tr m t s sâu h i tr ng (1991- 1995), Tuy n t p cơng trình nghiên c u b o v th c v t, 1990- 1995 NXB Nông nghi p, Hà N i, Trang 189 -201 17 Ph m Th Thùy ctv (1995), Nghiên c u công ngh s n xu t n m trùngMetarhizium flavoviride Gams đ phòng tr sâu h i tr ng, Báo cáo khoa h c t i H i th o qu c gia khu v c v vi sinh v t CNSH ngày 6-7/10/1995, Trang 340 -345 18 Ph m Th Thùy (1998), “K t qu flavoviride tr châu ch u h i lu ng kh o nghi m n m Metarhizium Lương Sơn - Hịa Bình năm 1997”, T p chí B o v th c v t, S 5/98, Trang 23 – 26 19 Ph m Th Thùy CS (2001), K t qu nghiên c u c i ti n công ngh s n xu t ng d ng n m Metarhizium anisopliae (Ma) ñ phòng tr b h i d a B n Tre năm 2000, Báo cáo t i H i th o Qu c t sinh h c, Hà N i 2-5/7/2001, Trang 449 -458 20 Ph m Th Thùy, Tr n Văn Huy, Nguy n Duy M n (2005), Nghiên c u hồn thi n cơng ngh s n xu t thu c tr sâu vi n m Beauveria Metarhizium ñ phòng tr sâu h i ñ u tương ñ u xanh Hà Tĩnh năm 2003-2004, H i ngh cơng ngh sinh h c tồn qu c, Hà N i 11-12/4/2005, Trang 494 - 497 21 Ph m Th Thùy (2004), Công ngh sinh h c b o v th c v t, Nhà xu t b n ð i h c Qu c gia Hà N i, Trang 109 – 146 22 Lê Văn Tr nh, ðào Th Huê, Tr n Văn Huy, Nguy n Th Chúc Quỳnh (2008), K t qu nghiên c u s n xu t ch ph m n m có ích phịng tr Trư ng ð i h c Nơng nghi p Hà N i - Lu n văn Th c s khoa h c nông nghi p……… 60 r y nâu h i lúa b n v ng, H i ngh khoa h c hàng năm, Vi n B o v th c v t, Trang 23 Nguy n Ng c Tú, Nguy n C u Th Hương Giang (1997), B o v tr ng t ch ph m t vi n m, NXB Nông nghi p TP H Chí Minh 24 Vi n B o v th c v t (2005), Nghiên c u ch ph m sinh h c ña ch c b ng công ngh sinh h c, Báo cáo t ng k t ñ tài khoa h c c p nhà nư c KC.04-12 giai ño n 2001- 2005, 245 trang 25 Vi n B o v th c v t (2001), Nghiên c u áp d ng công ngh vi sinh (vi khu n, vi n m, virut) ñ s n xu t ch ph m sinh h c BVTV phòng tr sâu h i tr ng, Báo cáo t ng k t ñ tài khoa h c c p nhà nư c KHCN.02.07B giai ño n 1996-2000, 178 trang 26 Vi n B o v th c v t (1997), Phương pháp nghiên c u b o v th c v tPhương pháp ñi u tra b n d ch h i nông nghi p thiên ñ ch c a chúng, T p 1, NXB Nông nghi p, Hà N i, 99 trang 27 Vi n B o v th c v t (1999), Phương pháp ñi u tra, ñánh giá sâu, bênh, c d i h i lúa, Phương pháp nghiên c u b o v th c v t, T p 2, NXB Nông nghi p, Hà N i, 80 trang TÀI LI U TI NG ANH 28 Aniritha de Goos J.N and J Bidochka (1999), “Effect of low temprature on grownth in the entomophathogenic fungus Metarhizium anisopliae”, Canadian Jounal of microbiology- Volume 45- Number 12 December 29 Aristotle J Domnas and Steven A Warner (1991), Biochemical Activities of Entomophagous Fungi, Critical Reviews in Microbiology, Vol 18, No 1, Pages 1-13 30 Bailey L.A and Rath.A.C (1994), Production of Metarhizium anisoplieae spores using nutrient impregnated membranes and its economic analisis, Biocontrol Sci Technol.4, Pages 297 - 307 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i - Lu n văn Th c s khoa h c nông nghi p……… 61 31 Barron G.L (1968) The General of Hyphomycetes from soil, Mycologia Vol 56, No (Jul - Aug., 1964) Pages 514-518 32 Bastos Cruz B P., O C Abreu, P Valarini and D A Oliveira (1985) Effect of temperature, medium components on spore germination of Metarhizium anisopliae (Metsch.) Sorokin spores Arquivo Instituto Biologico (Sao Paulo), Vol 52, Pages 45- 47 33 Boucias D.G and Pendland J.C (1998), Principle of Insect Pathology Institute of Food and Agricultural Sciences, University of Floria, Kluwer Academic Publishers, Pages 259 -362 34 Bo W.G, Zhang R.J (2004), Pathogenicity of Metarhizium anisopliae var acridu to the developmental stages of brown planthopper Nilaparvata lugens stal and Sogatella furcifera (Horvath) State Key Laboratory for Biological Control, Sun Yat-sen University, China Pages 89-97 35 Butt T.M and Copping L (2000), Fungal biology control agent Pesticide Outlook.11 Pages 186-191 36 Callaghan A A (1969), Light and spore discharge in Entomophthorales, Trans Brit Mycol Soc., 53 (1), Pages 87-97 37 Dangar T E., Geetha L and Pillai G.B (1991), “ Mass production of the entomopathogenic fungi Metarhizium anisopliae in coconut water” Journal of Plantation Crop, 19, Pages 54-69 38 Desgranges C., Vergoignan C., Lereec, A., Riba G and Durand A (1993), Use of solid state fermentation to produce Beauveria bassiana for the biological control of European corn borer, Biotechnol Adv 11, Pages 577–587 39 Dorta B., Bosch A and Ertola R (1990), Hight level of sporulation Metarhizium anisopliae in a medium containing by- products Applied Microbiology and Biotechnology, Vol 33, Pages 712-715 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i - Lu n văn Th c s khoa h c nông nghi p……… 62 40 Fargues J., Goettel M S., Smits N., Ouedraogo A., Vidal C., Lacy L.A, Lomer C J., and M Rougier (1996), Variability in susceptibility to simulated sunlight of conidia among isolates of entomopathogenic Hyphomycetes, Mycopathologia.135: Pages 171-181 41 Fernandez J P and R.E Welty (1991), Histopathology of orchard grass infected by Rhyncho-sporium orthosporum, Mycologia 83: Pages 774778 42 Fuxa J R (1987), Ecological considerations for the use of entomopathogens in IPM, Annual Review of Entomology 32 Pages 225251 43 Gillespie A.T (1986), Synergistic effect of entomogenous fungi on some insecticides against Bihar hairy caterpillar Spilarctia obliqua (Lepidoptera: Arctiidae), Volume 161, Issue 1, January 2006, Pages 3842 44 Hall F.R and Menn J.J (1999), Biopesticides- Use and delivery, Humana Press Inc, 626 pages 45 Hegedus D D., Bidochka M J., Khachatourians G G (1990), Beauveria bassiana submerged conidia production in a defined medium containing chitin, two hexosamines or glucose, Appl Microbiol Biotechnol 33, Pages 641–647 46 Http://www.agbio.ca/ResearchDatabase/res_biol_ctrl_wireworms.asp 47 Humber RA (1997), Fungi: identification In: Manual of techniques in insect pathology San Diego, California (USA): Academic Press Inc Pages 153-185 48 Hywel Jones N.L (2002), The importance of invertebrate-pathogenic fungi from the tropics, Trop Mycol Vol 2, Pages 133-144 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i - Lu n văn Th c s khoa h c nông nghi p……… 63 49 Hywel Jones N.L and Gillespie A.T (1990), Effect of temperature on spore germination in Metarhizium anisopliae and Beauveria bassiana, My col Res 94, Pages 389 - 392 50 Jin S.F, Feng M G, Chen J.Q (2008), Selection of global Metarhizium isolates for the control of the rice pest Nilaparvata lugens (Homoptera: Delphacidae) Pest Managment Sciences, Institute of Microbiology, College of Life Science, China, Pages 1008-1014 51 Kaakeh P., Pari S (1996), “Virulence of Metarhizium anisopliae (Deuteromycotina: Hyphomycetes) Strain ESC-1 to the German Cockroach (Dictyoptera: Blattellidae) and Its Compatibility with Insecticides”, Journal of Economic Entomology, Volume 92, Number 2, April 1999, Pages 340- 346 (7) 52 Kleespies R.G and Zimmermann G (1998), Effect of Activitives on the Production, Viability and Virulence of Metarhizium anisopliae, Biocontrol Science and Technology 8: Pages 207 -214 53 Lobo- Lima, M L., J M Brito and J E Henry (1992), Biological control of grasshoppers in the Cape Verde Islands, Biological Locusts and Grasshopper May 1991 C.A.B International, Wallingford, UK 394 pp 54 Mendoca A.F (1992), Mass production, application and fomulation of Metarhizium anisopliae for control of sugarcane froghopper, Biological control of locust and grasshopper, Pages 239-244 55 Moorhouse E.R., M.A Easterbrook, A.T Gillespie, and A.K.harnley (1993), Control of Otiorhynchus sulcatus (Fabricius) (Coleoptera: Curculionidae) larvae on a range of hardy ornamental nursery stock speciessing the entomogenous fungus Metarhizium anisopliae, Biocontrol Sci.echnol 1: Pages 63–72 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i - Lu n văn Th c s khoa h c nông nghi p……… 64 56 Quintela E D and C W Mc.Coy (1998), Synergistic effect of imidacloprid and two entomopathogenic fungi on the behavior and survival of larvae of Diaprepes abbreviatus (Coleoptera: Curculionidae) in soil, J Econ Entomol Vol 91, Pages 110-122 57 Rombach M C.; Aguda, R M.; Shepard B M.; Roberts, D W (1986), Infection of Rice Brown Planthopper, Nilaparvata lagens (Homoptera: Delphacidae) by Field Application of Entomopathogenic Hyphomycetes (Deuteromycotina) Environmental Entomology, Vol 5, No 5, Pages 1070-1073 58 Samson, R.A., H.C Evans, and J.P Latger (1988), Atlas of Entomopathogenic Fungi, Springer-Verlag, Berlin Heidelberg, New York, 187 pp 59 Silva J C and C L Messias (1986), “Virulence of mutants and revertants of Metarhizium anisopliae var anisopliae toward Rhodnius prolixus”, Journal of Invertebrate Pathology, Volume 48, Issue 3, November 1986, Pages 368-374 60 Song Zhang and Jing Yun (1997), “Preliminary Study on Using Metarhizium anisopliae to Control Dendrolimus punctatus”, Journal of Fujian college of forestry Pages 115- 120 61 Tulloch M (1976), The genus Metarhizium, Transactions of the British Mycological Society, Vol 66, Pages 407- 411 62 Zoberi M H (1995), Metarhizium anisopliae, a fungal pathogen of Reticulitermes flavipes (Isoptera: Rhinotermitidae), Mycologia Vol 87, Pages 354–359 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i - Lu n văn Th c s khoa h c nông nghi p……… 65 PH L C K T QU GI I TRÌNH T ðO N GEN 26S ARN RIBOXOM C A CH NG N M PHÂN L P TRÊN R Y NÂU: M1, M2, M3, M4 1/ Trình t gen rARN 26S đo n D1/D2 c a ch ng M1 AGGAAAAGAAACCAACAGGGATTGCCCCAGTAACGGCGAGT GAAGCGGCAACAGCTCAAATTTGAAATCTGGCCCCCCCAGGGCCC GAGTTGTAATTTGCAGAGGATGCTTTTGGCGAGGTGCCTTCCGAGT TCCCTGGAACGGGACGCCATAGAGGGTGAGAGCCCCGTCTGGTTG GACGCCGAGCCTCTGTAAAGCTCCTTCGACGAGTCGAGTAGTTTGG GAATGCTGCTCTAAATGGGAGGTATATGTCTTCTAAAGCTAAATAT TGGCCAGAGACCGATAGCGCACAAGTAGAGTGATCGAAAGATGA AAAGCACTTTGAAAAGAGAGTTAAATAGTACGTGAAATTGTTGAA AGGGAAGCGCTCATGACCAGACGTGGGCCCGGTGAATCATCCAGC GTTCTCGCTGGTGCACTTTGCCGGCGCCCAGGCCAGCATCGGTTTG CCCCGGGGGATAAAGGCCCTGGGAATGTGGCTCCCTAGGGAGTGT TATAGCCCACTGCACAATACCCTGTGGCGGACCGAGGTTCGCGCA TCTTGCAAGGATGCTGGCGTAATGGTCATCAGCGACCCGTCTTGAA ACACGGACCAAGGAGTCGTCTTCGTATGCGAGTGTTCGGGT Trình t gen rARN 26S ño n D1/D2 c a ch ng M1 tương ñ ng 100% (600/600 bp) v i ño n 26S c a Metarhizium flavoviride var minus 2/ Trình t gen rARN 26S ño n D1/D2 c a ch ng M2 AGGAAAAGAAACCAACAGGGATTGCCCCAGTAACGGCGAGT GAAGCGGCAACAGCTCAAATTTGAAATCTGGTCCCCAGGGCCCGA GTTGTAATTTGCAGAGGATGCTTTTGGTGAGGTGCCTTCCGAGTTC CCTGGAACGGGACGCCATAGAGGGTGAGAGCCCCGTCTGGTTGGA TACCGAGCCTCTGTAAAGCTCCTTCGACGAGTCGAGTAGTTTGGGA Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i - Lu n văn Th c s khoa h c nông nghi p……… 66 ATGCTGCTCTAAATGGGAGGTATATGTCTTCTAAAGCTAAATATTG GCCAGAGACCGATAGCGCACAAGTAGAGTGATCGAAAGATGAAA AGCACTTTGAAAAGAGGGTTAAATAGTACGTGAAATTGTTGAAAG GGAAGCACTTATGACCAGACTTGGCCCCGGTGAATCATCCAGCGG TTCCCGCTGGTGCACTTTGCCGGGGTTCAGGCCAGCATCAGTTCGC TCCGGGGGAtaAAGGCTTTGGGAATGTGGCTCCCTCGGGAGTGTTA TAGCCCATTGCGCAATACCCTGTGGCGGGCTGAGGTTCGCGCTTTA TGCAAGGATGCTGGCATAATGGTCATCAGTGACCCGTCTTGAAAC ACGGACCAAGGAGTCGTCTTCGTATGCGAG Trình t gen rARN 26S đo n D1/D2 c a ch ng M2 tương ñ ng 100% (600/600 bp) v i ño n 26S c a Metarhizium anisopliae 3/ Trình t gen rARN 26S đo n D1/D2 c a ch ng M3 AAAGCGGAGGAAAAGAAACCAACAGGGATTGCCCCAGTAAC GGCGAGTGAAGCGGCAACAGCTCAAATTTGAAATCTGGTCCCCAG GGCCCGAGTTGTAATTTGCAGAGGATGCTTTTGGTGAGGTGCCTTC CGAGTTCCCTGGAACGGGACGCCATAGAGGGTGAGAGCCCCGTCT GGTTGGATACCGAGCCTCTGTAAAGCTCCTTCGACGAGTCGAGTA GTTTGGGAATGCTGCTCTAAATGGGAGGTATATGTCTTCTAAAGCT AAATATTGGCCAGAGACCGATAGCGCACAAGTAGAGTGATCGAAA GATGAAAAGCACTTTGAAAAGAGGGTTAAATAGTACGTGAAATTG TTGAAAGGGAAGCACTTATGACCAGACTTGGCCCCGGTGAATCAT CCAGCGGTTCCCGCTGGTGCACTTTGCCGGGGTTCAGGCCAGCATC AGTTCGCTCCGGGGGATAAAGGCTTTGGGAATGTGGCTCCCTCGG GAGTGTTATAGCCCATTGCGCAATACCCTGTGGCGGGCTGAGGTTC GCGCTTTATGCAAGGATGCTGGCATAATGGTCATCAGTGACCCGTC TTGAAACACGGACCAAGGAGTCGTCTTCGTATGCGAG Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i - Lu n văn Th c s khoa h c nơng nghi p……… 67 Trình t gen rARN 26S đo n D1/D2 c a ch ng M3 tương ñ ng 100 % (600/600 bp) v i ño n 26S c a Metarhizium anisopliae 0.01 51 53 59 55 55 56 53 Metacordyceps liangshanensis_ EF468815 Epichloe amarillans_U57680 97 Epichloe festucae_U68116 56 Epichloe glyceriae_L07136 66 Epichloe clarkii_U68413 87 Epichloe typhina_L07132 Paecilomyces carneus_EF468843 57 Tolypocladium_parasiticum_ EF468848 Metarhizium album_DQ518775 Metarhizium frigidum_AF339529 75 Metarhizium flavoviride var minus_ AF280636 100 M1 Nomuraea rileyi_DQ067301 Cordyceps chlamydosporia_ DQ518758 Torrubiella petchii_EU369038 100 Torrubiella tenuis_EU369046 91 Metarhizium anisopliae var majus_AF33953 Cordyceps taii_AF543787 100 Metarhizium anisopliae_AF280634 92 M2 94 M3 Lecanicillium tenuipes_ AF339525 V trí phân lo i ch ng M1, M2, M3 lồi có quan h h hàng g n 4/ Trình t gen rARN 26S đo n D1/D2 c a ch ng M4 CGGAGGAAAAGAAACCAACAGGGATTGCCCCAGTAACGGCG AGTGAAGCGGCAACAGCTCAAATTTGAAATCTGGCTCTCAGGGCC CGAGTTGTAATTTGTAGAGGATGCTTTTGGCGAGGTGCCTTCCGAG TTCCCTGGAACGGGACGCCACAGAGGGTGAGAGCCCCGTATGGTC GGACACCGAGCCTCTGTAAAGCTCCTTCGACGAGTCGAGTAGTTTG GGAATGCTGCTCAAAATGGGAGGTATATGTCTTCTAAAGCTAAAT ATTGGCCAGAGACCGATAGCGCACAAGTAGAGTGATCGAAAGATG Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i - Lu n văn Th c s khoa h c nông nghi p……… 68 AAAAGCACTTTGAAAAGAGGGTTAAAAAGTACGTGAAATTGTTGA AAGGGAAGCGCCTATGACCAGACTTGCGCCCGGTGAATCACCCAG CGTTCTCGCTGGTGCACTTTGCCGGGCACAGGCCAGCATCAGTTCA GCGCGGGGGAGAAAGGCTTCGGGAATGTGGCTCCCTCGGGAGTGT TATAGCCCGCTGCGTAATGCCCTGCGCCGGACTGAGGTACGCGCA TTGCAAGGATGCTGGCGTAATGGTCATCAGCGACCCGTCTTGAAA CACGGACCAAGGAGTCGTCTTCGTATGCGAGTGTTCGGGTGTC Trình t gen rARN 26S ño n D1/D2 c a ch ng M4 tương ñ ng 100 % (600/600 bp) v i ño n 26S c a Beauveria bassiana (Cordyceps bassiana) 0.005 55 Beauveria brongniartii_ AB027381 100 Cordyceps bassiana_EF026006 M4 Beauveria bassiana_DQ075680 Isaria fumosorosea_EF429304 Lecanicillium attenuatum_ AB378513 59 Verticillium saksenae_AB378520 53 99 Lecanicillium psalliotae_ AB378518 86 58 Lecanicillium psalliotae_ AY261180 Paecilomyces farinosu_DQ067297 59 Lecanicillium lecanii_U17421 54 Hyperdermium bertonii_AF242354 Cordyceps pruinosa_AB044635 55 Cordyceps militaris_AY184966 76 Cordyceps kyusyuensis_EF468813 Phytocordyceps ninchukispora_ EF468847 51 100 V trí phân lo i c a ch ng M4 loài có quan h h hàng g n Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i - Lu n văn Th c s khoa h c nông nghi p……… 69 X LÝ S LI U BALANCED ANOVA FOR VARIATE SAU3NG FILE TNNHALUO 28/11/** 21:27 -PAGE HIEU LUC THUOC TRONG NHA LUOI VARIATE V003 SAU3NG LN PROB SOURCE OF VARIATION ER DF SUMS OF MEAN SQUARES F RATIO SQUARES LN ===================================================================== ======== CT 131.357 43.7856 0.28 0.843 * RESIDUAL 36 5681.68 157.824 -* TOTAL (CORRECTED) 39 5813.04 149.052 -BALANCED ANOVA FOR VARIATE SAU5NG FILE TNNHALUO 28/12/** 21:27 -PAGE HIEU LUC THUOC TRONG NHA LUOI VARIATE V004 SAU5NG LN PROB SOURCE OF VARIATION ER DF SUMS OF MEAN SQUARES F RATIO SQUARES LN ===================================================================== ======== CT 1608.88 536.293 2.63 0.064 * RESIDUAL 36 7327.15 203.532 -* TOTAL (CORRECTED) 39 8936.02 229.129 -BALANCED ANOVA FOR VARIATE SAU8NG FILE TNNHALUO 28/12/** 21:27 -PAGE HIEU LUC THUOC TRONG NHA LUOI VARIATE V005 SAU8NG LN PROB SOURCE OF VARIATION ER DF SUMS OF MEAN F RATIO Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i - Lu n văn Th c s khoa h c nông nghi p……… 70 SQUARES SQUARES LN ===================================================================== === CT 3190.14 1063.38 5.81 0.002 * RESIDUAL 36 6587.61 182.989 -* TOTAL (CORRECTED) 39 9777.75 250.712 -TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TNNHALUO 28/12/** 21:27 -PAGE HIEU LUC THUOC TRONG NHA LUOI MEANS FOR EFFECT CT CT NOS SAU3NG SAU5NG SAU8NG 10 18.8600 36.7600 60.3200 10 20.8400 48.8100 79.0000 10 23.9400 54.2900 83.2100 10 21.3900 46.8600 79.6100 SE(N= 10) 3.97271 4.51145 4.27772 5%LSD 36DF 11.3937 12.9388 12.2685 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TNNHALUO 28/12/** 21:27 -PAGE HIEU LUC THUOC TRONG NHA LUOI F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE SAU3NG SAU5NG SAU8NG GRAND MEAN (N= 40) NO OBS 40 21.257 40 46.680 40 75.535 STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 12.209 12.563 19.1 0.8428 15.137 14.266 20.6 0.0637 15.834 13.527 14.9 0.0025 | | | | Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i - Lu n văn Th c s khoa h c nông nghi p……… 71 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SAU5N FILE VINHPHUC 28/11/** 21:37 -PAGE THI NGHIEM TAI VINH PHUC VARIATE V003 SAU5N LN PROB SOURCE OF VARIATION ER DF SUMS OF MEAN SQUARES F RATIO SQUARES LN ===================================================================== ======== CT 4987.11 1662.37 16.83 0.001 * RESIDUAL 790.147 98.7683 -* TOTAL (CORRECTED) 11 5777.26 525.205 -BALANCED ANOVA FOR VARIATE SAU8N FILE VINHPHUC 28/12/** 21:37 -PAGE THI NGHIEM TAI VINH PHUC VARIATE V004 SAU8N LN PROB SOURCE OF VARIATION ER DF SUMS OF MEAN SQUARES F RATIO SQUARES LN ===================================================================== ======== CT 747.660 249.220 3.72 0.061 * RESIDUAL 535.447 66.9308 -* TOTAL (CORRECTED) 11 1283.11 116.646 -BALANCED ANOVA FOR VARIATE SAU12N FILE VINHPHUC 28/12/** 21:37 -PAGE THI NGHIEM TAI VINH PHUC VARIATE V005 SAU12N LN PROB SOURCE OF VARIATION ER DF SUMS OF MEAN SQUARES F RATIO SQUARES LN Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i - Lu n văn Th c s khoa h c nông nghi p……… 72 ===================================================================== ======== CT 1017.85 339.282 0.65 0.606 * RESIDUAL 4164.62 520.577 -* TOTAL (CORRECTED) 11 5182.47 471.133 -TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE VINHPHUC 28/12/** 21:37 -PAGE THI NGHIEM TAI VINH PHUC MEANS FOR EFFECT CT -CT NOS 3 3 SAU5N 31.6333 29.1333 63.3667 76.6667 SAU8N 63.7667 52.4333 65.2667 74.6667 SAU12N 42.5333 55.6333 53.8667 68.5000 SE(N= 3) 5.73784 4.72338 13.1729 5%LSD 8DF 18.7105 15.4025 42.9556 -ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE VINHPHUC 28/12/** 21:37 -PAGE THI NGHIEM TAI VINH PHUC F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE SAU5N SAU8N SAU12N GRAND MEAN (N= 12) NO OBS 12 50.200 12 64.033 12 55.133 STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 22.917 9.9382 19.8 0.0010 10.800 8.1811 12.8 0.0608 21.706 22.816 41.4 0.6062 | | | | Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i - Lu n văn Th c s khoa h c nông nghi p……… 73 ... n m có ích tr r y nâu v i quy mô khác ñã ñ t ñư c nh ng thành cơng nh t đ nh Các nghiên c u s d ng vi sinh v t ký sinh ñ phòng tr r y nâu Vi t Nam ch y u t p trung vào tác nhân n m có ích Metarhizium. .. y nâu, chúng tơi th c hi n ñ tài: Nghiên c u k thu t nhân sinh kh i s d ng ch ph m n m có ích Metarhizium anisopliae phịng tr r y nâu h i lúa vùng ñ ng b ng B c b M c ? ?ích u c u c a ñ tài nghiên. .. đư c ch ng n m có ích, nh t n m Metarhizium anisopliae có ho t l c gây ch t cao ñ i v i r y nâu h i lúa ðóng góp tư li u th c li u v ch ng n m có ích có ti m cao vi c ký sinh r y nâu, làm s cho
