Chủ đề: NUÔI CẤY MÔ – TẾ BÀO THỰC VẬT BẰNG TẾ BÀO TRẦN VÀ KĨ THUẬT CHUYỂN GEN KHÁI NIỆM Nuôi cấy mô- tế bào thực vật kĩ thuật cho phép nuôi cấy dễ dàng tế bào thực vật hay mô phân sinh bệnh môi trường nhân tạo thích hợp để tạo khối tế bào hay hoàn chỉnh ống nghiệm CƠ SỞ SINH LÍ CỦA CƠNG NGHỆ NI CẤY MƠ- TẾ BÀO  TÍNH TỒN NĂNG: Là khả tế bào hình thành hịa chỉnh điều kiện ni cấy thích hợp, tế bào có chứa AND(NST) hồn chỉnh, chứa tồn thơng tin di truyền cho chu kì sống hồn chỉnh AND mARN Protêin tính trạng  Tùy tế bào, loại mơ, thời kì sinh trưởng, phát triển mà gen phù hợp hoạt động; gen không hoạt động giai đoạn phát triển thể (do chế điều hòa hoạt động gen)    SỰ PHÂN CHIA, PHÂN HÓA, PHẢN PHÂN HÓA CỦA TẾ BÀO: Phân hóa: tế bào 1khối tế bào(phân hóa) mơ quan hệ quan Phản phân hóa: tế bào phân hóa thành mơ chức riêng biệt quay trạng thái chức phôi sinh ban đầu ki gặp điều kiện thuận lợi • Các đặc tính xác định dựa sở đặc điểm di truyền thay đổi mơi trường có ảnh hưởng trực tiếp đến đặc tính CÁC NHÂN TỐ ĐẢM BỎ THÀNH CÔNG TRONG CÔNG NGHỆ NUÔI CẤY MÔ- TẾ BÀO THỰC VẬT: Đảm bảo điều kiện vô trùng, phịng thí nghiệm phải chun hóa cao  Chọn môi trường chuẩn bị môi trường cách  Chọn mơ cấy, xử lí mơ cấy thích hợp trước sau cấy  CÁC BƯỚC TRONG KĨ THẬY NUÔI CẤY MÔ- TẾ BÀO THỰC VẬT  Tạo vật liệu khởi đầu: thường chọn chồi phận nuôi cấy thích hợp khử trùng cấy mơi trường khởi động để tái sinh  Giai đoạn nhân nhanh: vật liệu khởi đầu chuyển sang môi trường nhân nhanh có bổ sung Xitokinin để tái sinh thành nhiều chồi  Giai đoạn tạo hoàn chỉnh: tách riêng chồi cho vào môi trường tạo rể (bố sung Auxin) chồi rể thành hoàn chỉnh  Giai đoạn cây: ống nghiệm đủ tiêu chuẩn (chiều cao, số lá, số rể) chuyển sang mơi trường tự nhiên CÁC HÌNH THỨC NI CẤY MƠ • Ni cấy mơ thực vật • Nuôi cấy mô tế bào trần SỰ CHUYỂN GEN TRỰC TIẾP(BIẾN NẠP) • Các phương pháp chuyển gen trực tiếp: hoá thẩm, điện thẩm, súng bắn ADN: Hoá thẩm: dùng PEG dùng tế bào trần.(tần số chuyển gen thấp) Điện thẩm: dùng xung điện cao áp tế bào trần Cơ sở củ điện thẩm tế bào chịu tác động xung điện cao áp, lổ nhỏ tạm thời tạo thành màng trở nên thấm, ADN vào tế bào theo khuynh hướng nồng độ Tuy nhiên số lổ tạo thành tăng theo điện giá trị tới hạn( điểm màng bị tổn thương khơng hồn nghịch) Sự thành lập lỗ nhỏ do: Điện trường làm thay đổi cân điện tích lớp P lipit màng Tính lỏng tạo nên chổ yếu tạm thời dễ bị đứt ảnh hưởng điện trường KĨ THUẬT BẮN ADN • Các Plasmid có mang gen lạ cố đinh hạt kim loại( vàng hay tungsten) có đường kính 0.000006m nhờ lực hút tĩnh điện Các hạt kim loạiPlasmid bắn với vận tốc lớn để xuyên qua vách, màng xen vào gen nhân tế bào đích Màng tế bào có tính dẻo hồn hảo nên dễ dàng sửa chữa sau bị tổn thương Các phân tử ADN tách khỏi hạt kim loại sau vào nhân tế bào gia nhập vào ADN NST tế bào Ưu điểm: Nhanh, dễ thực hiện, cơng đoạn, hiệu kinh tế cao khơng chun biệt cho lồi Khơng địi hỏi lập nuôi cấy tế bào trần Dễ phát tế bào có mang gen chuyển Nhược điểm: Thiết bị đắt tiền Tần số chuyển gen thấp • Cả phương pháp gián tiếp trực tiếp: sau tế bào thực vật mang gen đặc tính, chúng nguyên phân nhiều lần tạo ra1 khối tế bào phân hố tạo mơ quan trưởng thành • Thành tựu – ứng dụng kó thuật nuôi cấy mô tế bào trần kó thuật chuyển gen Bằng phương pháp dung hợp tế bào trần áp dụng kó thuật chuyển gen nhà khoa học vượt qua rào cản sinh học tự nhiên để tạo tế bào lai giống thực vật mang gen mong muốn Góp phần quan trọng việc cải tiến giống trồng, tăng suất Tăng tính chống chịu với điều kiện khí hậu, thổ nhưỡng bất lợi  Tăng khả kháng thuốc diệt cỏ  Tăng khả chống chịu với côn trùng bọ cánh cứng (bằng cách chuyển gen mã hoá tổng hợp thuốc trừ sâu thực vật)     Tăng khả phòng trừ bệnh Tăng suất trồng Tạo thức ăn chứa kháng thể đặc hiệu cho gia súc Tuy nhiên có số hạn chế  Ảnh hưởng sức khoẻ cộng đồng  Ảnh hưởng môi trường sinh thái  nh hưởng kinh tế trị xã hoäi ... tạo dịng tế bào có nguồn gốc đơn bào • Tế bào trần thiết yếu cho lai thể hệ( dung hợp tế bào trần) áp dụng kĩ thuật chuyển gen( bơm AND, hóa thẩm, điện thẩm…) MỞ RỘNG NUÔI CẤY MÔ BẰNG KĨ THUẬT DUNG...KHÁI NIỆM Nuôi cấy mô- tế bào thực vật kĩ thuật cho phép nuôi cấy dễ dàng tế bào thực vật hay mô phân sinh bệnh mơi trường nhân tạo thích hợp để tạo khối tế bào hay hoàn chỉnh ống... phân tạo mô sẹo ni dưỡng đơn bội(n) xử lí cơnxixin trưởng thành(đơn bội kép) NUÔI CẤY MÔ BẰNG TẾ BÀO TRẦN Khái niệm tế bào trần: Là tế bào thực vật bị loại bỏ vách xử lí enzim Đó tế bào tự do,