Đang tải... (xem toàn văn)
Nghiên cứu đa hình protein huyết thanh và trình tự vùng điều khiển D-loop ty thể của ba giống gà: Ri, Mông và Đa cựa
ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM ––––––––––––––––––––––––– HỨA THỊ NGA NGHIÊN CỨU ĐA HÌNH PROTEIN HUYẾT THANH VÀ TRÌNH TỰ VÙNG ĐIỀU KHIỂN D-LOOP TY THỂ CỦA BA GIỐNG GÀ: RI, MÔNG VÀ ĐA CỰA LUẬN VĂN THẠC SỸ SINH HỌC THÁI NGUYÊN - 2009 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên tnu.edu.vn ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM ––––––––––––––––––––––––– HỨA THỊ NGA NGHIÊN CỨU ĐA HÌNH PROTEIN HUYẾT THANH VÀ TRÌNH TỰ VÙNG ĐIỀU KHIỂN D-LOOP TY THỂ CỦA BA GIỐNG GÀ: RI, MÔNG VÀ ĐA CỰA Chuyên ngành: Di truyền học Mã số: 60.42.70 LUẬN VĂN THẠC SỸ SINH HỌC Ngƣời hƣớng dẫn khoa học:PGS.TS NGUYỄN TRỌNG LẠNG THÁI NGUYÊN - 2009 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên tnu.edu.vn LỜI CẢM ƠN Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới PGS.TS Nguyễn Trọng Lạng Bộ môn Di truyền học, khoa Sinh học, Trƣờng Đại học Sƣ phạm, Đại học Thái Ngun hƣớng dẫn tơi tận tình, chu đáo q trình tơi học tập nghiên cứu Tơi xin chân thành cảm ơn tập thể cán Phòng Công nghệ DNA ứng dụng Viện Công nghệ Sinh học đặc biệt PGS.TS Nơng Văn Hải tận tình giúp đỡ, hƣớng dẫn tạo điều kiện tốt để tơi hồn thành khóa luận Trong suốt q trình học tập nghiên cứu tơi đƣợc anh chị NCS Nguyễn Đăng Tôn, CN Địch Thị Kim Hƣơng, CN Vũ Hải Chi - cán nghiên cứu phịng quan tâm, hƣớng dẫn cho tơi lời khuyên quý báu Tôi trân trọng biết ơn giúp đỡ Tơi xin chân thành cảm ơn thầy cô cán sở Đào Tạo thuộc Khoa Sinh - KTNN, Trƣờng Đại học Sƣ phạm, Đại học Thái Nguyên Cuối cùng, tơi xin cảm ơn gia đình bạn bè động viên, giúp đỡ suốt trình học tập nghiên cứu Tác giả luận văn Hứa Thị Nga Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên tnu.edu.vn LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chƣa đƣợc công bố cơng trình khác Tác giả luận văn Hứa Thị Nga Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên tnu.edu.vn CÁC CHỮ VIẾT TẮT A Adenin bp Base pair (cặp bazơ) cs Cộng C Cytozin ddNTP Dideoxynucleside triphosphate dNTP Deoxynucleside triphosphate DNA Deoxyribonucleic acid D-Loop Displacement loop - đoạn điều khiển ty thể EDTA Ethylene Diamine Tetraacetic Acid EtBr Ethidium brommide EtOH Ethanol Epp Eppendorf G Guamin Kb kilo base kDa kilo Dalton mtDNA DNA ty thể (mitochondrial DNA) NXB Nhà xuất NADH Nicotinamide adenine dinucleotide PBS Phosphate - buffer saline PCR Polymerase Chain Reaction RNA Ribonucleic Acid RNase Ribonuclease SDS Sodium Doecyl Sulphate T Timin TAE Tris - Acetate - EDTA Tm Melting Temperature (Nhiệt độ nóng chảy) Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên tnu.edu.vn DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1 Thành phần phản ứng khuếch đại gen 28 Bảng 2.2 Chu trình nhiệt 29 Bảng 2.3 Chu trình nhiệt cho PCR máy luân nhiệt GenAmp PCR System 9700 30 Bảng 3.1 Thống kê điểm đa hình hai mẫu nghiên cứu so với trình tự chuẩn 41 Bảng 3.2 So sánh mức độ sai khác trình tự nucleotide 42 Bảng 3.3 Thống kê xuất băng điện di protein huyết gà thí nghiệm 45 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Sơ đồ tổ chức DNA ty thể Gà 16 Hình 3.1 Ảnh điện di DNA tổng số 33 Hình 3.2 Ảnh chụp kết điện di sản phẩm PCR 36 Hình 3.3 So sánh trình tự D-Loop hai mẫu gà nghiên cứu Ri (RI) Đa cựa (Da) với trình tự tham khảo mã số AB114078 40 Hình 3.4 Quan hệ di truyền số giống gà 42 Hình 3.5: Phổ điện di SDS – PAGE protein huyết 43 MỤC LỤC MỞ ĐẦU 1 Lý chọn đề tài Mục tiêu nghiên cứu đề tài Nội dung nghiên cứu Chƣơng TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 SƠ LƢỢC VỀ HỆ THỐNG PHÂN LOẠI GÀ VÀ MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM CỦA CÁC GIỐNG GÀ NGHIÊN CỨU 1.1.1 Sơ lƣợc nguồn gốc vị trí phân loại gà nhà 1.1.2 Một số đặc điểm ba giống gà nghiên cứu 1.2 ĐẠI CƢƠNG VỀ SINH HỌC PHÂN TỬ 1.3 CƠ SỞ KHOA HỌC CỦA ĐỀ TÀI 1.3.1 Cơ sở khoa học việc nghiên cứu tiêu sinh lý, hóa sinh máu gia cầm 1.3.2 Cơ sở khoa học việc nghiên cứu tính đa hình protein huyết máu 10 1.3.3 Thành phần protein huyết gia súc số động vật 11 1.4 GIỚI THIỆU CHUNG VỀ TY THỂ GÀ 12 1.4.1 Cấu trúc chức ty thể 12 1.4.2 Sự tổng hợp protein ty thể 13 1.4.3 Chủng loại phát sinh ty thể 14 1.4.4 MtDNA động vật có xƣơng sống mtDNA gà 14 1.4.5 Tình hình nghiên cứu DNA ty thể gà giới 17 1.4.6 Tình hình nghiên cứu DNA ty thể gà Việt Nam 20 Chƣơng VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22 2.1 VẬT LIỆU 22 2.2 HÓA CHẤT VÀ THIẾT BỊ 22 2.2.1 Hóa chất 22 2.2.2 Thiết bị 23 2.3 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 23 2.3.1 Tách chiết tinh DNA tổng số từ máu động vật 23 2.3.2 Kĩ thuật điện di DNA gel agarose 24 2.3.3 Phƣơng pháp điện di SDS-PAGE 25 2.3.4 Nhân vùng điều khiển D-Loop kĩ thuật PCR 27 2.3.5 Tinh sản phẩm DNA 29 2.3.6 Phƣơng pháp xác định trình tự 30 Chƣơng KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 31 3.1 ĐÁNH GIÁ ĐA DẠNG DI TRUYỀN CỦA BA MẪU GIỐNG GÀ 31 3.1.1 Tách chiết tinh DNA tổng số từ máu gà 31 3.1.2 Nhân vùng điều khiển D-Loop DNA ty thể 33 3.1.3 Xác định trình tự vùng điều khiển DNA ty thể 37 3.2 THÀNH PHẦN ĐIỆN DI PROTEIN HUYẾT THANH GÀ THÍ NGHIỆM 43 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 46 TÀI LIỆU THAM KHẢO 47 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên tnu.edu.vn ... tài: "Nghiên cứu đa hình protein huyết trình tự vùng điều khiển D-loop ty thể ba giống gà: Ri, Mông Đa cựa" Mục tiêu nghiên cứu đề tài - So sánh trình tự đoạn điều khiển DNA ty thể giống gà - Xác... PHẠM ––––––––––––––––––––––––– HỨA THỊ NGA NGHIÊN CỨU ĐA HÌNH PROTEIN HUYẾT THANH VÀ TRÌNH TỰ VÙNG ĐIỀU KHIỂN D-LOOP TY THỂ CỦA BA GIỐNG GÀ: RI, MÔNG VÀ ĐA CỰA Chuyên ngành: Di truyền học Mã số:... truyền ba đại diện ba giống gà - Phân tích đa hình protein huyết ba đại diện ba giống gà 3 Nội dung nghiên cứu - Tách chiết tinh DNA tổng số từ mô máu gà Ri, gà Mông, gà Đa cựa - Phân lập vùng D-Loop
