Đang tải... (xem toàn văn)
Báo cáo phương pháp kiểm định vi sinh trong thực phẩm
TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN TP.HCM KHOA SINH HỌC BỘ MÔN PHƯƠNG PHÁP KIỂM NGHIỆM VI SINH THỰC PHẨM VŨ THÙY LINH 0715174 1 NH VI SINH TRONG THC PHM I. Giới thiệu Ng c thc phm n hi mc bit tình trng ng c tp th Có rt nhiu nguyên nhân dn tình trng ng c thc phm, chim 55,8% trong s n t các loài vi sinh vStaphylococcus aureus, Coliform, E. Coli… Ch tính riêng Vin tht do ng c thc phn 30 t ng. Nm bc tình hình thc t, trong tun tháng 5 va qua ( t n 21/05/2011) khoa Sinh hn hành cho sinh viên thc nghim v kinh vi sinh trong thc phm nhm giúp sinh viên thnh và gia n thc trong quá trình tip cn vi các c t. II. Mẫu thực phẩm 1. Tên mẫu: 2. Ngày thu: 16/05/2011 3. Nơi thu- III. Tiêu chuẩn kiểm nghiệm: TCVN 7046 : 2002 Th- nh k thut IV. Kết quả kiểm định 1. Tổng số vi sinh vật hiếu khí, số khuẩn lạc trong 1(g) mẫu (TPC) 1.1. Quy trình định lượng TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN TP.HCM KHOA SINH HỌC BỘ MÔN PHƯƠNG PHÁP KIỂM NGHIỆM VI SINH THỰC PHẨM VŨ THÙY LINH 0715174 2 1.2. Kết quả đếm khuẩn lạc pha loãng F S khun lc N ( CFU) 10-4 >300 10-5 >300 10-6 323 và 358 1.3. Kết luận - Kt qu: Tng s vi sinh vt hiu khí trong 1 (g) mu l6 CFU/g TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN TP.HCM KHOA SINH HỌC BỘ MÔN PHƯƠNG PHÁP KIỂM NGHIỆM VI SINH THỰC PHẨM VŨ THÙY LINH 0715174 3 - Kt lun: Tng s vi sinh vt hiu khí trong 1 (g) mt tiêu chun cho phép ca tiêu chun Vit Nam (106 CFU/g) 1.4. Mở rộng - m khun lc là m bi c s dng r ng vi sinh vt, c th ng vi sinh vt hiu khí có trong mu thc phm. Trong bài thc tp mc tin hành pha loãng lên n 10-4 , 10-5 , 10 -6 c xem là n tin hành nuôi cy ng PCA. Kt qu m khun lu l y mu thm rt nhiu vi sinh vt hiu khí. Nhiu chng loi khác nhau. - V n th t thc phm khá d b nhim vi sinh v phm cht giúp vi sinh vt tn ti và phát tri0 c, thành phm dinh ng m có th do ch bin, gia nhii hn, nhim t các dng c ch bin, vt cha hoc t t. - Gii pháp: Cn gi sch s trong quá trình ch bin thcác thit b b ng tht, vùng ch bin phi thoáng, tránh xa cng rãnh hoc vùng rác thi. X lý sch nhng ph phn. Quá trình bo qun và vn chuyn phi gi nhi tránh n chng th Hình 1: Tng s vi sinh vt hing PCA n 10-6 2. Coliform tổng số trong 1 (g) mẫu (C) 2.1. Quy trình định lượng TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN TP.HCM KHOA SINH HỌC BỘ MÔN PHƯƠNG PHÁP KIỂM NGHIỆM VI SINH THỰC PHẨM VŨ THÙY LINH 0715174 4 2.2. Kết quả đếm khuẩn lạc và ống sinh hơi pha loãng F S khun lc N ( CFU) 10-4 50 và 15 - S i n: n= 2 TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN TP.HCM KHOA SINH HỌC BỘ MÔN PHƯƠNG PHÁP KIỂM NGHIỆM VI SINH THỰC PHẨM VŨ THÙY LINH 0715174 5 - Th tích c - T l xác nhn: R= s khun lng BGBL/tng s khun lcy=1 ( c N x R N x V x F C = 32,5 x 104 ( CFU/g) 2.3. Kết luận - Coliform tng s / g trong mu th4 CFU/g - Kt lun: Coliform tng s trong 1(g) mt tiêu chun cho phép theo TCVN 102 CFU 2.4. Mở rộng - ng VRB không hng khác, mà c cân t và gi nhit 450C. - ng BGLB Coliform0Coliform - c tính ca nhóm Coliform là có kh ng nuôi cy lng Coliform tng s ta s d quan sát kh a Coliform t khnh có xut hin Coliform trong mu. Trong bài thc tp này kt qu cho ta thy 5 ng BGBL có cy khun lc Coliform - Coliform có th c xem là vi sinh vt ch th bi vì s ng ca chúng hin din trong mu ch th kh n din ca các vi sinh vt gây bnh khác trong thc phm. S hin din Coliform trong mu th cho thy s hin din ca các vi sinh vt gây bnh khác trong mu thln. - Khun l ho m do màu c ng và thêm ta qung mui mng. TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN TP.HCM KHOA SINH HỌC BỘ MÔN PHƯƠNG PHÁP KIỂM NGHIỆM VI SINH THỰC PHẨM VŨ THÙY LINH 0715174 6 Hình 2: Khun lng VRB 3. Quy trình định tính Escherichia Coli giả định 3.1. Quy trình định tính TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN TP.HCM KHOA SINH HỌC BỘ MÔN PHƯƠNG PHÁP KIỂM NGHIỆM VI SINH THỰC PHẨM VŨ THÙY LINH 0715174 7 3.2. Kết luận - Kt qu: Phn ng th t hin vòng màu hng trên mt dung dch. - Kt lun: Phát hin E. Coli gi nh trong 1(g) mu. TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN TP.HCM KHOA SINH HỌC BỘ MÔN PHƯƠNG PHÁP KIỂM NGHIỆM VI SINH THỰC PHẨM VŨ THÙY LINH 0715174 8 3.3. Mở rộng - Thuc th s dng trong phn t chính tham gia phát hi ng nuôi cy là p-dimethyaminobanzaldehyde. Cht này phn ng vi indol to thành phc h do nhân pyrol ca indol phn ng vi nhóm ahdehyde ca DMAB t. - t ch th ng ô nhim phân hay cht th nh s hin din c kim tra xem mu thc phm có b nhim bn t ng hay thông qua nguc hay không. 4. Quy trình định lượng Staphylococcus aureus 4.1. Quy trình định lượng TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN TP.HCM KHOA SINH HỌC BỘ MÔN PHƯƠNG PHÁP KIỂM NGHIỆM VI SINH THỰC PHẨM VŨ THÙY LINH 0715174 9 4.2. Kết quả pha loãng F S khun lc N (CFU) 10-3 21 và 14 - S ng huy 4 - T l xác nhn: R= S khun l huyng s khun lc cy = 4/5 N x R N x V x F C = 14 x 103 (CFU/g) 4.3. Kết luận - Staphylococcus aureus có trong 1 (g) mu là 14 x 103 CFU/g - Kt lun: Staphylococcus aureus trong 1 (g) mt quá tiêu chun cho phép ca TCVN: 102 CFU/g 4.4. Mở rộng - Staphylococcus StaphylococcusStaphylococcus có hai - S.aureus0 S.aureus Staphylococcus aureus. - TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN TP.HCM KHOA SINH HỌC BỘ MÔN PHƯƠNG PHÁP KIỂM NGHIỆM VI SINH THỰC PHẨM VŨ THÙY LINH 0715174 10 Hình 3: Khun lc Staphylococcus aureus [...]...TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN TP.HCM KHOA SINH HỌC BỘ MÔN PHƯƠNG PHÁP KIỂM NGHIỆM VI SINH THỰC PHẨM 5 Định tính Samonella trong 25 (g) mẫu 5.1 Quy trình định tính VŨ THÙY LINH 0715174 11 TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN TP.HCM KHOA SINH HỌC BỘ MÔN PHƯƠNG PHÁP KIỂM NGHIỆM VI SINH THỰC PHẨM 5.2 Kết quả Thử nghiệm KIA: Đối chứng: Trên đỏ dƣới vàng,... rộng 5 3 Quy trình định tính Escherichia Coli giả định 6 3.1 Quy trình định tính 6 3.2 Kết luận 7 VŨ THÙY LINH 0715174 14 TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN TP.HCM KHOA SINH HỌC BỘ MÔN PHƯƠNG PHÁP KIỂM NGHIỆM VI SINH THỰC PHẨM 3.3 Mở rộng 8 4 Quy trình định lƣợng Staphylococcus aureus 8 4.1 Quy trình định lƣợng 8 4.2 Kết... chuẩn kiểm nghiệm: 1 IV Kết quả kiểm định 1 1 Tổng số vi sinh vật hiếu khí, số khuẩn lạc trong 1(g) mẫu (TPC) 1 1.1 Quy trình định lƣợng 1 1.2 Kết quả đếm khuẩn lạc 2 1.3 Kết luận 2 1.4 Mở rộng 3 2 Coliform tổng số trong 1 (g) mẫu (C) 3 2.1 Quy trình định lƣợng 3 2.2 Kết quả đếm khuẩn lạc và ống sinh. .. ra và chuyển thành NH3 DMAB trong môi trƣờng nuôi cấy phản ứng với indol tạo màu đò Samonella không có khả năng tách nhóm amin từ tryptophan vì vậy không sinh indol Phản ứng thử indol âm tính (-) không phát sinh vòng màu đỏ Hình 3: Hình dạng khuẩn lạc Samonella VŨ THÙY LINH 0715174 13 TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN TP.HCM KHOA SINH HỌC BỘ MÔN PHƯƠNG PHÁP KIỂM NGHIỆM VI SINH THỰC PHẨM Mục lục: Giới... 9 4.3 Kết luận 9 4.4 Mở rộng 9 5 Định tính Samonella trong 25 (g) mẫu 11 5.1 Quy trình định tính 11 5.2 Kết quả 12 5.3 Mở rộng 12 VŨ THÙY LINH 0715174 15 TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN TP.HCM KHOA SINH HỌC BỘ MÔN PHƯƠNG PHÁP KIỂM NGHIỆM VI SINH THỰC PHẨM VŨ THÙY LINH 0715174 16 ... Samonella trong 25 (g) mẫu Mở rộng Salmonella là trực trùng gram âm, hiếu khí và kị khí tùy ý, có khả năng di động không tạo bào tử, lên men glucose và mannitol sinh acid nhƣng không lên men saccharose và lactose, không sinh Indole, không phân giải ure, không có khả năng tách nhóm amine từ tryptophane, hầu hết các chủng đều sinh H2S Salmonella có thể phân tích định tính bằng mộ quy trình gồm 4 bƣớc: tăng sinh, ... tăng sinh chọn lọc, phân lập và khẳng định Salmonella thƣờng có mặt trong mẫu với số lƣợng nhỏ, bị tổn thƣơng và cùng hiện diện chung với một số lƣợng lớn với các loài vi khuẩn khác thuộc họ Enterobacteriaceae có tính cạnh tranh mạnh và ức chế sự tăng trƣởng của Salmonella Vì trong môi trƣờng KIA lƣợng đƣờng chỉ chiếm 1% lactose và 0,1% glucose và thuốc thử phenol red Do đó sau khi lên men glucose... glucose hết Samonella bắt đầu sử dụng đến pepton trong môi trƣờng, quá trình trao đồi này làm giải phóng NH3, làm kiềm hóa môi trƣờng do đó phần nghiêng có màu đỏ Ở phần sâu của môi trƣờng có pH acid bởi sự lên 5.3 VŨ THÙY LINH 0715174 12 TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN TP.HCM KHOA SINH HỌC BỘ MÔN PHƯƠNG PHÁP KIỂM NGHIỆM VI SINH THỰC PHẨM men kỵ khí glucose, các sản phẩm thu đƣợc là acid hữu cơ, do... lisine decarboxylase tác động lên amino acid L- lisin và khử nhóm carboxyl, chúng tạo thành một amin và CO2 làm kiềm hóa môi trƣờng Tiến hành thử phản ứng LDC để xác định khả năng tổng hợp enzyme khử nhóm carboxyl hay tách hydrogen từ các acid amin Nếu sau khi nuôi cấy môi trƣờng chuyển màu vàng là âm tính, giữ nguyên màu ban đầu là dƣơng tính Từ kết quả trên ta có thể thấy Samonella là vi sinh vật có... enzyme khử nhóm carboxyl hoặc tách hydrogen từ acid amin khi môi trƣờng giữ nguyên màu tím (+) Vi khuẩn Samonella có khả năng lên men đƣờng manitol sinh acid khi có thuốc thử phenol red sẽ làm môi trƣờng chuyển từ đỏ sang vàng Samonella có khả năng lên men đƣờng manitol do đó môi trƣờng ở ống đối chứng chuyển từ đỏ sang vàng Emzyme urease là một enzyme quan trọng trong tế bào vi sinh vật Khi có cơ . BỘ MÔN PHƯƠNG PHÁP KIỂM NGHIỆM VI SINH THỰC PHẨM VŨ THÙY LINH 0715174 1 NH VI SINH TRONG THC PHM I. . BỘ MÔN PHƯƠNG PHÁP KIỂM NGHIỆM VI SINH THỰC PHẨM VŨ THÙY LINH 0715174 3 - Kt lun: Tng s vi sinh vt hiu khí trong 1 (g) mt