Đang tải... (xem toàn văn)
Dứa là loại cây ăn quả có giá trị dinh dưỡng cao đồng thời là mặt hàng xuất khẩu có giá trị. Quả dứa khi chín có mùi vị thơm ngon, màu sắc hấp dẫn. Trong trái dứa tươi có nhiều đường, vitamin C
Ti liu chia s ti: wWw.SinhHoc.edu.vnMở đầuDứa là loại cây ăn quả có giá trị dinh dỡng cao đồng thời là mặt hàng xuất khẩu có giá trị. Quả dứa khi chín có mùi vị thơm ngon, màu sắc hấp dẫn. Trong trái dứa tơi có nhiều đờng, vitamin C, axit amin, axit hữu cơ, muối khoáng và các chất thơm. Dứa tơi và các sản phẩm chế biến từ dứa rất đợc a chuộng trên cả thị trờng trong nớc và thị trờng quốc tế. Vì vậy, trong các sản phẩm rau quả chế biến, xuất khẩu, dứa luôn chiếm vị trí hàng đầu (chiếm 50% tổng sản lợng). Mặt khác, dứa còn đợc sử dụng để phủ xanh đất trống trên những vùng đất dốc vốn khó sử dụng cho những cây nông nghiệp khác nhng lại rất thích hợp cho dứa.Hiện nay, nhu cầu của thị trờng về việc xuất khẩu các sản phẩm chế biến từ dứa ngày càng tăng. Trong khi đó, giống dứa ở nớc ta hiện nay chủ yếu là giống dứa Queen có năng suất thấp, quả nhỏ (0,5 - 0,7 kg), vỏ dầy, mắt sâu nên việc chế biến lát cắt từ giống dứa này gặp nhiều khó khăn, cha phù hợp với việc chế biến dứa hộp xuất khẩu. Do đó, vấn đề đặt ra hiện nay là phải làm cách nào đó để tăng năng suất và phẩm chất dứa nhằm mục đích đáp ứng kịp thời nhu cầu của thị trờng.Theo kế hoạch của Bộ Nông nghiệp và Phát triển Nông thôn thì trong những năm trớc mắt cần phải mở rộng diện tích trồng dứa, đồng thời cần thay dần giống dứa Queen truyền thống bằng giống dứa Cayen có năng suất cao, quả to, chất lợng phù hợp với việc chế biến dứa xuất khẩu. Chính vì vậy, nhu cầu về giống dứa Cayen hiện nay là rất lớn. Tuy nhiên, giống dứa Cayen lại có hệ số nhân tự nhiên rất thấp. Một số biện pháp nhân giống dứa Cayen bằng hom, nhân nách lá, thân cắt khoanh đã đợc ứng dụng nhng vẫn không đáp ứng đợc nhu cầu cây giống cho việc mở rộng sản xuất.Trớc yêu cầu của thực tiễn sản xuất, một giải pháp khả thi đã đợc thực hiện nhằm đáp ứng nhu cầu cây giống cho các khu vực trồng và sản xuất dứa, đó là: sử dụng phơng pháp nhân giống in vitro dứa Cayen. Phơng pháp này có u Ti liu chia s ti: wWw.SinhHoc.edu.vn1 Ti liu chia s ti: wWw.SinhHoc.edu.vnđiểm là trong thời gian ngắn có thể tạo đợc nguồn cây giống sạch bệnh, đồng đều về phẩm chất và giữ đợc các đặc tính quý của nguyên liệu ban đầu với hệ số nhân giống cao gấp nhiều lần so với sử dụng phơng pháp nhân giống vô tính truyền thống. Tuy nhiên, trong quá trình nhân giống và cả trong thực tế sản xuất, do ảnh hởng của nhiều yếu tố, giống dứa Cayen đã xuất hiện nhiều biến dị làm giảm năng suất và chất lợng của giống. Để khắc phục tình trạng trên cần tiến hành nghiên cứu hoàn thiện phơng pháp nhân giống in vitro dứa Cayen để bảo tồn giống, đồng thời cung cấp giống dứa Cayen giữ nguyên đặc tính di truyền u việt của giống gốc tránh hiện tợng lai tạp giống. Xuất phát từ ý nghĩa khoa học và thực tiễn đã nêu trên, chúng tôi tiến hành đề tài Nhân giống in vitro dứa Cayen nhằm mục đích tạo ra giống dứa Cayen có năng suất cao và ổn định, để phục vụ yêu cầu thâm canh cho các khu vực trồng dứa. Ti liu chia s ti: wWw.SinhHoc.edu.vn2 Ti liu chia s ti: wWw.SinhHoc.edu.vnCHƯƠNG 1. tổng quan tài liệu1.1. Nguồn gốc và vị trí phân loại cây dứaCây dứa (Pineapple, Ananas) là loại cây ăn quả rất tiêu biểu thuộc vào giới thực vật Plantae, ngành hạt kín Magnoliophyta, lớp Liliopsida, bộ Tầm Gửi Bromeliales, họ Tầm Gửi Bromeliaceae, chi Ananas, loài Ananas comosus L. [27]. Dứa có nguồn gốc từ Nam Mỹ nằm trong tứ giác bao gồm vùng phía Nam Braxin và vùng phía Bắc Achentia, Paraguay, giữa vĩ tuyến Nam 150 và 300 và kinh tuyến 400 và 600 Tây. Dứa đợc du nhập vào châu Âu và châu á từ thế kỷ 16 [3].Trên thế giới có rất nhiều loại dứa khác nhau. Tuỳ thuộc vào các đặc điểm hình thái nh hình dạng, kích thớc, đặc điểm lá, trọng lợng quả và một số chỉ số về hàm lợng đờng, hàm lợng chất khô mà ngời ta chia các loại dứa thành 4 nhóm sau [10]:Nhóm Cayen (Smooth Cayen)Nhóm này đang rất đợc a chuộng trong công nghiệp sản xuất dứa hộp trên thế giới [12].Đặc điểm của giống dứa Cayen là cây cao to, lá không có gai, quả hình trụ, mắt quả dẹt, kích cỡ đồng đều. Khi chín thịt quả vàng tơi, mùi vị thơm ngon, hàm lợng đờng và độ chua cao. Giống này cho năng suất cao, trọng lợng quả trung bình đạt 2 kg, nếu chăm sóc tốt thì trọng lợng quả có thể lên tới 5 - 7 kg [24]. Theo Sở Nông nghiệp và Phát triển Nông thôn thành phố Hồ Chí Minh, năng suất của dứa Cayen bình quân đạt 40 - 45 tấn/ha, tăng gấp ba lần so với giống dứa Queen. Điều này mở ra triển vọng lớn cho việc phát triển trồng dứa Cayen phục vụ nhu cầu chế biến dứa xuất khẩu [31]. Nhóm Hoàng Hậu (Queen Pineaple) Đây là nhóm thích hợp cho xuất khẩu quả tơi hơn là cho chế biến và sản xuất dứa hộp. Đặc điểm của nhóm này là sinh trởng kém hơn nhóm Cayen, lá ngắn, có nhiều gai. Quả nhỏ, hình tháp, trọng lợng quả trung bình đạt 0,5 - 0,7 kg, hàm lợng chất khô và độ chua thấp, thịt quả ăn rất thơm ngon và giòn. Ngoài ra, giống dứa Queen còn có khả năng chống chịu với Ti liu chia s ti: wWw.SinhHoc.edu.vn3 Ti liu chia s ti: wWw.SinhHoc.edu.vncác điều kiện môi trờng tốt nên ít bị sâu bệnh. Các giống dứa ở Việt Nam chủ yếu thuộc vào nhóm này. Nhóm Tây Ban Nha đỏ (Red Spanish)So với nhóm Cayen và nhóm Queen thì nhóm này có năng suất thấp, lá dài, quả nhỏ và hình táo nên nhóm này không đợc trồng phổ biến.Nhóm Tây Phi (Abacaxi)Đặc điểm của nhóm này là quả nhỏ, có hình tháp, lá có gai, màu sắc quả và thịt quả nhạt, không phù hợp cho cả xuất khẩu quả tơi và chế biến dứa hộp. Do vậy, giống dứa này chủ yếu là phục vụ cho nhu cầu của địa phơng.1.2. Giá trị kinh tế và sử dụng của dứaDứa là loại cây ăn quả có giá trị dinh dỡng, giá trị kinh tế và giá trị xuất khẩu cao. Vì vậy, hiện nay ngành trồng dứa đang phát triển rất mạnh mẽ.Trong quả dứa chín có hàm lợng đờng từ 10 - 12%, nếu chăm sóc tốt có thể đạt 15 - 18%. Trong đó có 60 - 70% là đờng Saccarose và 30 - 40% là đờng Glucose và Fructose. Lợng axít chiếm khoảng 0,6% (trong đó có trên 80% là axít Citric), chất tro chiếm 0,4 - 0,6% trọng lợng tơi của trái dứa.Dứa còn chứa vitamin C với hàm lợng 24 - 28 mg/100g trái. Ngoài ra, trong quả dứa còn chứa Bromelin là loại enzym có tác dụng phân giải protein.Quả dứa có thể dùng để ăn tơi, chế biến dứa hộp, nớc giải khát, làm mứt kẹo. Các phụ phẩm từ dứa còn là nguồn nguyên liệu để sản xuất phân bón, làm giấy hoặc sản xuất thức ăn gia súc [3].Theo những kết quả nghiên cứu gần đây cho thấy: dứa là loại quả ăn rất mát và đợc coi là một trong những cây ăn quả nhiệt đới hàng đầu, rất đợc a chuộng. Dứa đã trở thành món tráng miệng khá phổ biến của những ngời dân ở Hawai, Philippines, Brazil, Malaysia, Thái Lan và Việt Nam [27].1.3. Tình hình sản xuất dứa ở Việt NamTrong số các loại cây ăn quả ở Việt Nam thì dứa là loại cây ăn quả lâu đời và có nhiều lợi thế hơn so với các cây ăn quả khác nh: cam, quýt, chuối [3]. Vì vậy, việc trồng dứa ở nớc ta đã đợc quan tâm từ những năm 1936 - 1937 và cho Ti liu chia s ti: wWw.SinhHoc.edu.vn4 Ti liu chia s ti: wWw.SinhHoc.edu.vnđến nay, ngành trồng dứa vẫn giữ vị trí rất quan trọng trong ngành trồng trọt ở nớc ta. Dứa là loại cây dễ trồng, không kén đất do đó ở Việt Nam dứa đợc trồng phổ biến ở cả 3 miền Bắc - Trung - Nam [1].ở các tỉnh miền Bắc: Do nhiệt độ trung bình trong năm từ 120C - 230C, độ ẩm không khí 83% nên tơng đối thích hợp cho sinh trởng của cây dứa. Sản l-ợng dứa của khu vực này đạt khoảng 42.000 - 47.000 tấn/năm. Trong mấy năm gần đây, diện tích và sản lợng dứa ở miền Bắc tăng cao và trở thành nguồn cung cấp nguyên liệu cho các nhà máy chế biến dứa hộp. ở các tỉnh miền Trung: Mặc dù có khí hậu nhiệt đới nhng ở miền Trung do ảnh hởng của gió Lào nên nhiệt độ trung bình cao khoảng 390C, độ ẩm không khí thấp 40 - 45% nên sự sinh trởng của dứa là kém. ở các tỉnh miền Nam: Do có khí hậu nhiệt đới điển hình nên ở khu vực này đã hình thành đợc các khu trồng dứa trọng điểm nổi tiếng ở nớc ta nh: Hậu Giang, Kiên Giang, Long An, Minh Hải, thành phố Hồ Chí Minh. Sản l-ợng dứa của vùng này cung cấp hầu hết cho các nhà máy chế biến dứa ở miền Nam [10]. Có thể nói đây là vùng có diện tích và sản lợng dứa lớn nhất so với cả nớc.Theo tài liệu của FAO (2001) sản lợng dứa của nớc ta hiện nay đạt khoảng 415.000 tấn/năm. Còn ở một số nớc khác thuộc khu vực Đông Nam á nh Thái Lan đạt 1.979 triệu tấn, Philippines đạt 1.618 triệu tấn, Brazil đạt 143 triệu tấn. Tổng sản lợng dứa của cả thế giới trong năm 2001 là 14.220 triệu tấn [27].1.4. Các phơng pháp nhân giống dứa1.4.1. các phơng pháp nhân giống vô tính truyền thốngNhân giống bằng các loại chồiChồi là cơ quan quan trọng đợc dùng trong nhân giống dứa theo phơng pháp nhân giống vô tính truyền thống. Trong sản xuất hiện nay, giống dứa phục vụ cho sản xuất chủ yếu là các loại chồi. Tuỳ theo vị trí của chồi trên cây ngời ta phân biệt thành 5 loại chồi sau: chồi thân, chồi cuống, chồi nách, chồi ngầm và chồi ngọn [17].Ti liu chia s ti: wWw.SinhHoc.edu.vn5 Ti liu chia s ti: wWw.SinhHoc.edu.vnNhân giống bằng thânDứa Cayen có rất ít chồi do đó để phát triển nhanh giống dứa này ngời ta kết hợp việc sử dụng các loại chồi và nhân giống bằng thân dứa đã thu quả [24]. Dùng thân dứa có nhiều mầm ngủ, bóc sạch lá và cắt thành từng khoanh dày 2,5 - 3 cm. Sau đó xử lý các khoanh bằng thuốc diệt nấm và giâm vào đất có độ ẩm 15 - 16%. Sau một thời gian mỗi một khoanh có thể thu đợc 1 - 3 chồi nên từ một thân dứa có thể thu đợc 9 - 10 chồi [9].Nhân bằng cách chẻ nhỏ các chồiCó thể tăng hệ số nhân giống bằng cách dùng chồi chẻ đôi hoặc chẻ t để giâm. Các phần chẻ sẽ cho 1 - 2 chồi. Sau khi các chồi có từ 7 - 8 lá lại tiếp tục chẻ để tăng hệ số nhân giống [19].1.4.2. Nhân giống bằng nuôi cấy in vitroHiện nay, ngành trồng dứa ở Việt Nam đang có kế hoạch tăng nhanh về quy mô sản xuất và mở rộng diện tích. Do đó, việc sử dụng các phơng pháp nhân giống vô tính truyền thống cha đáp ứng đợc nhu cầu về giống dứa cho sản xuất.Giải pháp cho vấn đề trên là ứng dụng kỹ thuật nuôi cấy mô để nhân giống. Biện pháp nhân giống vô tính giống dứa bằng kỹ thuật nuôi cấy mô đợc đề xuất vào năm 1977 đã mở ra một triển vọng mới cho ngành sản xuất dứa [27]. Quy trình nhân giống in vitro cây dứa bao gồm 5 giai đoạn nh sau: 1. Tạo chồi2. Tạo cây, nhân và duy trì chồi nuôi in vitro3. Nuôi cây4. Vờn ơm5. Đồng ruộngở Việt Nam, trớc yêu cầu của thực tiễn sản xuất về số lợng và chất lợng cây giống thì vấn đề nhân giống bằng kỹ thuật nuôi cấy in vitro đang đợc hết sức quan tâm và chú ý. Đã có nhiều công trình nghiên cứu thành công phơng pháp nhân giống dứa Cayen nh: Nguyễn Hữu Hổ, Nguyễn Văn Uyển đề nghị quy trình Ti liu chia s ti: wWw.SinhHoc.edu.vn6 Ti liu chia s ti: wWw.SinhHoc.edu.vnnhân nhanh giống dứa Cayen dới dạng thể chồi [17]. Đặng Xuyến Nh, Hoàng Thị Kim Hoa và các cs đa ra quy trình nhân nhanh giống dứa Cayen Phú Hộ và Đồng Giao [8]. Trơng Thị Hảo đa ra quy trình nhân nhanh giống dứa Cayen bằng kỹ thuật nuôi cấy phát sinh phôi giả (PLB protocorm like body) trong điều kiện tự nhiên [28]. Đào Kim Thoa đã nghiên cứu thành công một số biện pháp kỹ thuật làm tăng hệ số nhân giống vô tính cây dứa Cayen [29], Lê Văn Thợng cũng đã nghiên cứu một số biện pháp tăng nhanh năng suất trồng dứa trên đất đồi và đất phèn [11].Tuy nhiên, vấn đề sản xuất cây giống in vitro hiện nay còn gặp nhiều khó khăn nhất là việc hoàn thiện, rút ngắn và đơn giản hoá quy trình chăm sóc dứa in vitro ở giai đoạn vờn ơm [7]. 1.5. Các điều kiện ảnh hởng đến sinh trởng của cây dứa 1.5.1. ảnh hởng của điều kiện ngoại cảnh lên sinh trởng và tỷ lệ sống sót của câyNói chung, trong đời sống của thực vật ảnh hởng của điều kiện ngoại cảnh nh: ánh sáng, độ ẩm có ý nghĩa quyết định đến sinh trởng và phát triển của cây. Nó tác động trực tiếp hoặc gián tiếp đến quá trình thực hiện các chức năng sinh lý của cây nh: hô hấp, quang hợp, dinh dỡng khoáng hoặc trao đổi n-ớc, tổng hợp sắc tố [14], [16].Đối với cây dứa nuôi cấy mô do có đặc điểm là sinh trởng trong môi tr-ờng giàu dinh dỡng, ánh sáng, nhiệt độ ổn định, độ ẩm không khí cao nên khi đ-a cây ra vờn ơm thì các điều kiện ngoại cảnh có ảnh hởng rất lớn đến sinh trởng và tỷ lệ sống sót của cây [5]. Khi nghiên cứu giải phẫu lá cây Brasisica phát triển từ hạt và cây nuôi cấy mô, Wetzstein đã đi đến kết luận là: có sự khác biệt giữa chúng về sinh lý học, về các hợp chất hoá học và về khả năng quang hợp [25]. Ngoài ra, cấu tạo của lá cây nuôi trong ống nghiệm còn có đặc điểm là: mô giậu giảm, thịt lá tăng, lớp sáp trên lá mỏng nên khi đa cây ra ngoài môi tr-ờng có độ ẩm thấp cây dễ bị mất nớc và héo [23]. Ti liu chia s ti: wWw.SinhHoc.edu.vn7 Ti liu chia s ti: wWw.SinhHoc.edu.vnCác tác giả trên cũng lu ý khi đa cây ra ngoài ống nghiệm cần trồng trong nhà kính (có cờng độ ánh sáng thấp). Trớc lúc đa cây ra đồng ruộng nên tạo độ ẩm 80 - 100% để cây thích nghi dần với điều kiện tự nhiên, tạo thêm nhiều rễ mới.Qua nghiên cứu cũng cho thấy: ở cây dơng xỉ nhân bằng kỹ thuật nuôi cấy in vitro do nuôi cấy trong điều kiện độ ẩm cao nên lợng sáp trên lá giảm thấp (2,8 àg/mg trọng lợng tơi). Khi đặt cây trong điều kiện độ ẩm thấp 60 - 70% hàm lợng sáp trên bề mặt lá tăng nhanh và đã làm tăng tỷ lệ sống sót của cây từ 72 - 96% [21]. Từ những kết quả thu đợc cho thấy: đối với cây nuôi cấy mô trớc khi đa ra trồng ở điều kiện tự nhiên cần có quá trình thích nghi dần với điều kiện tự nhiên nh chế độ ánh sáng, độ ẩm 1.5.2. ảnh hởng của chất điều hoà sinh trởngTrong quá trình sinh trởng và phát triển của thực vật ngoài các chất hữu cơ (protein, gluxit, lipid, axit nucleic) để cấu trúc lên tế bào, mô, cơ quan và cung cấp cho hoạt động sống của cây thì cây còn cần rất nhiều chất có hoạt tính sinh học nh: vitamin, enzym và các hoocmon, trong đó các hoocmon có vai trò rất quan trọng trong việc điều chỉnh các quá trình sinh trởng phát triển và các hoạt động sinh lý của thực vật [22].Các chất điều hoà sinh trởng phát triển của thực vật gồm các Phytohoocmon và các chất điều hoà sinh trởng đợc tổng hợp nhân tạo. Đây là những chất có bản chất hoá học rất khác nhau nhng chúng đều có tác dụng điều tiết các quá trình sinh trởng phát triển của cây từ lúc tế bào trứng đợc thụ tinh phát triển thành phôi cho đến khi cây ra hoa kết quả, hình thành cơ quan sinh sản, dự trữ và kết thúc chu kỳ sống của mình [14]. Hiện nay, trong nền nông nghiệp thâm canh cao thì các chất điều hoà sinh trởng ngày càng có vai trò tích cực hơn trong việc điều chỉnh quá trình sinh trởng và phát triển của cây một cách hợp lý nhất làm tăng năng suất và phẩm Ti liu chia s ti: wWw.SinhHoc.edu.vn8 Ti liu chia s ti: wWw.SinhHoc.edu.vnchất thu hoạch [12]. Trong nuôi cấy mô tế bào, các chất điều hoà sinh tr-ởng nh: Auxin, Cytokinin là thành phần không thể thiếu đợc để chủ động điều khiển sự phát sinh hình thái thực vật in vitro.AuxinWent (1928) và Thimann (1937) đã phát hiện ra Auxin. Đại diện của Auxin là: Indole acetic acid (IAA) [14]. Auxin có tác dụng sinh lý rất nhiều mặt lên các quá trình sinh trởng của tế bào, hoạt động của tầng phát sinh, sự hình thành rễ, hiện tợng u thế ngọn, tính hớng của thực vật, sự sinh trởng của quả và tạo quả không hạt Trong đó, tác dụng sinh lý đặc trng nhất của Auxin là kích thích sự ra rễ [20].Vai trò của Auxin cho sự phân hoá rễ thể hiện rất rõ trong nuôi cấy mô. Trong môi trờng chỉ có Auxin thì mô nuôi cấy chỉ xuất hiện rễ mà thôi [25]. Vì vậy, trong kỹ thuật nhân giống vô tính thì việc sử dụng Auxin để kích thích sự ra rễ là cực kỳ quan trọng và bắt buộc. C ytokinin Cytokinin đợc phát hiện vào năm 1953 (sau Auxin) bởi Miller, Skoog và các cs. Hiệu quả sinh lý đặc trng nhất của Cytokinin đối với thực vật là kích thích sự phân chia tế bào mạnh mẽ. Vì vậy, ngời ta xem chúng nh là các chất hoạt hoá sự phân chia tế bào, tác động lên sự phân hoá cơ quan đặc biệt là sự phân hoá chồi [15]. Ngời ta đã chứng minh đợc sự cân bằng tỷ lệ giữa Auxin và Cytokinin có ý nghĩa quyết định trong quá trình phát sinh hình thái của mô cấy in vitro cũng nh trên cây nguyên vẹn. Nếu tỉ lệ Auxin lớn hơn tỉ lệ Cytokinin thì kích thích sự ra rễ, còn nếu tỉ lệ Cytokinin lớn hơn tỉ lệ Auxin thì kích thích sự xuất hiện và phát triển của chồi [18]. Để tăng hệ số nhân giống, ngời ta tăng nồng độ Cytokinin trong môi trờng nuôi cấy ở giai đoạn tạo chồi in vitro [26].Ti liu chia s ti: wWw.SinhHoc.edu.vn9 Ti liu chia s ti: wWw.SinhHoc.edu.vnGibberellinBên cạnh Auxin và Cytokinin thì Gibberellin là một nhóm chất điều hoà sinh trởng đợc sử dụng rộng rãi trong nông nghiệp do nó có tác dụng tích cực lên sự sinh trởng phát triển của cây [7]. Gibberellin đợc phát hiện bởi nhà nghiên cứu ngời Nhật Kurosawa (1920) khi nghiên cứu bệnh ở mạ lúa. Gibberellin đợc sử dụng rộng rãi nhất là Gibberelic acid (GA3) [6].Tác dụng sinh lý rõ rệt nhất của Gibberellin là làm tăng sinh trởng ở cây nguyên vẹn [18]. Gibberellin kích thích mạnh mẽ sự sinh trởng của tế bào thực vật theo chiều dọc làm kéo dài thân, lóng cũng nh chiều cao cây. Do đó, trong các chất kích thích sinh trởng thực vật thì Gibberellin là chất quan trọng đợc sử dụng để kích thích sinh trởng kéo dài thân, lóng của cây.Ngoài các chất điều hoà sinh trởng kể trên, bột ra rễ ABT - một loại chất kích thích sinh trởng mới đang đợc sử dụng rộng rãi với nhiều mục đích khác nhau. Hiện nay có khoảng 10 loại ABT, trong đó mỗi loại có u thế sử dụng với các loại cây trồng riêng biệt. Các tổng kết mới đây cho thấy các ABT6 - 10 khi xử lý đã tăng thu hoạch từ 6 - 20%, cao hơn 4 - 8% so với xử lý ABT4. Có thể nói: ABT6 đợc sử dụng rộng rãi cho nhiều loại cây trồng và đem lại hiệu quả cao nhất. Hiện nay, ở Việt Nam chất kích thích ABT đã và đang đợc sử dụng để kích thích sự ra rễ của nhiều loại cây trồng, thúc đẩy quá trình nảy mầm của hạt giống, kích thích sinh trởng và tăng năng suất cây trồng [13].1.6. Phơng pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật1.6.1. Lịch sử phát triển của phơng pháp nuôi cấy mô tế bào thực vậtNăm 1902, Harberland là ngời đầu tiên đã quan niệm rằng bất kỳ một tế bào nào của cơ thể sinh vật đa bào đều có khả năng tiềm tàng để phát triển thành một cá thể hoàn chỉnh. Ông đã cho rằng: Bằng cách nuôi cấy tế bào đã phân lập, ngời ta có thể tạo ra các phôi nhân tạo từ các tế bào sinh dỡng. Ông cũng đã tiến hành nuôi cấy mẫu lá của một số cây một lá mầm nh: Erythronium, Tradescantia, tuy nhiên đã không thành công. Hơn mời năm sau, Ti liu chia s ti: wWw.SinhHoc.edu.vn10 [...]... thiếu của công nghệ sinh học hiện đại, nhất là trong lĩnh vực ứng dụng công nghệ DNA tái tổ hợp thực vật, công nghệ tạo giống và nhân nhanh giống hiện đại 1.6.3 Phơng pháp nhân giống in vitro Phơng pháp nhân giống in vitro có khả năng khắc phục đợc những trở ngại của các phơng pháp nhân giống vô tính truyền thống đồng thời còn đem lại những lợi ích thiết thực nh sau: Tạo cây con đồng nhất về mặt di truyền,... quy trình nhân giống các cây ăn quả có múi ở cây lơng thực đã nhân đợc giống khoai tây, lúa, ngô Đối với cây công nghiệp, chúng ta đã ứng dụng thành công phơng pháp nuôi cấy in vitro ở một số cây nh: Bạch đàn, Keo Kỹ thuật nuôi cấy in vitro cũng đợc sử dụng rộng rãi để nhân nhanh một số cây dợc liệu nh: Trinh nữ hoàng cung, Thanh Ti liu chia s ti: wWw.SinhHoc.edu.vn 13 Ti liu chia s ti: wWw.SinhHoc.edu.vn... đơn bội) Lu giữ tập đoàn gen Phục tráng giống thông qua kỹ thuật cấy đỉnh sinh trởng và cải tạo giống thông qua kỹ thuật gen Có thể sản xuất giống cây quanh năm Nhân nhanh nhiều cây không kết hạt trong những điều kiện sinh thái nhất định hoặc nẩy mầm kém Hệ số nhân cực kỳ cao Nói tóm lại, nhân giống in vitro một mặt tạo ra cây con sạch bệnh với hệ số nhân cao, mặt khác đảm bảo đợc tính ổn định... thuật cao nên Ti liu chia s ti: wWw.SinhHoc.edu.vn 14 Ti liu chia s ti: wWw.SinhHoc.edu.vn chỉ có hiệu quả đối với những cây có giá trị cao hoặc khó nhân bằng các phơng pháp khác Hiện nay, nhân giống in vitro đã đợc áp dụng cho nhiều loại cây Murashige (1974) đã chia quy trình nhân giống in vitro thành 4 giai đoạn nh sau [7]: Giai đoạn 1: Nuôi cấy khởi đầu (tái sinh chồi, cụm chồi) Đa mẫu vật từ bên... chiết từ tinh dịch cá bẹ (Lerringperm) vào môi trờng nuôi cấy mô thân cây thuốc lá Ông nhận thấy chế phẩm này có tác dụng kích thích sinh trởng mô nuôi cấy rõ rệt Một năm sau, Skoog và cs đã xác nhận chất gây ra hiện tợng trên là 6-furfuryl amino purine và đặt tên là Kinetin Sau đó ngời ta đã tìm ra và tổng hợp một số chất có tác dụng kích thích phân bào tơng tự nh Kinetin và cùng với Kinetin gọi chung... wWw.SinhHoc.edu.vn 15 Cụm chồi Ti liu chia s ti: wWw.SinhHoc.edu.vn Sơ đồ quy trình nhân giống thực vật in vitro Hoa Đỉnh sinh trưởng Lá Thân Rễ Bao phấn, túi noãn Khử trùng Vật liệu vô trùng Tạo mô sẹo Phôi Mô sẹo Mầm chồi Tế bào phôi Tái sinh chồi Chồi Nhân nhanh chồi Cụm chồi Tạo rễ Cây hoàn chỉnh Đưa cây ra đất Ti liu chia s ti: wWw.SinhHoc.edu.vn Vườn ươm 16 Vờn ơm Ti liu chia s ti: wWw.SinhHoc.edu.vn... việc nhân chồi của dứa Cayen [4], [8] a b Hình 3.5 Kết quả nhân chồi ở môi trờng MT6 a) Chồi dứa Cayen mới tạo thành b) Chồi dứa Cayen sau 10 tuần 3.3 ảnh hởng của sự kết hợp giữa NAA và BAP đến khả năng tạo protocorm Những chồi dứa Cayen mới tạo thành sẽ đợc cấy chuyển sang môi trờng tạo protocorm Môi trờng tạo protocorm là môi trờng dịch thể (môi trờng nền MS bổ sung 2,5% đờng và các chất điều hòa sinh... để nhân chồi ở môi trờng dịch thể cũng là 8 tuần giống nh môi trờng rắn Trong đó, môi trờng ML6 (môi trờng nền MS + 2,5% đờng + 1,0 (mg/l) NAA + 2,0 (mg/l) BAP) là môi trờng thích hợp nhất để tiến hành các thí nghiệm nhân chồi a b Hình 3.11 Kết quả nhân chồi dứa Cayen từ protocorm ở môi trờng ML6 a) Chồi dứa Cayen sau 5 tuần b) Chồi dứa Cayen sau 8 tuần 3.6 ảnh hởng của mật độ nuôi cấy đến sự phát sinh... s ti: wWw.SinhHoc.edu.vn 11 Ti liu chia s ti: wWw.SinhHoc.edu.vn là nhóm Cytokinin Cytokinin đợc tách chiết từ thực vật bậc cao đầu tiên là Zeatin có trong mầm ngô Các hợp chất này có khả năng kích thích sự phân chia tế bào của các mô đã biệt hoá cao nh tế bào thịt lá hoặc nội nhũ của hạt đã phơi khô Năm 1957, Skoog và Miller công bố kết quả nghiên cứu về ảnh hởng của tỷ lệ (Kinetin/auxin) trong môi... hành các thí nghiệm nhân chồi từ protocorm là môi trờng MT6 (môi trờng nền MS + 0,8% thạch + 2,5% đờng + 1,0 mg/l NAA + 2,0 mg/l BAP) Thời gian thích hợp để nhân nhanh chồi từ protocorm là khoảng 8 tuần Ti liu chia s ti: wWw.SinhHoc.edu.vn 33 Ti liu chia s ti: wWw.SinhHoc.edu.vn a b Hình 3.9 Kết quả nhân chồi từ protocorm ở môi trờng MT6 a) Chồi dứa Cayen sau 5 tuần b) Chồi dứa Cayen sau 8 tuần 3.5 . về giống dứa Cayen hiện nay là rất lớn. Tuy nhiên, giống dứa Cayen lại có hệ số nhân tự nhiên rất thấp. Một số biện pháp nhân giống dứa Cayen bằng hom, nhân. Nhân giống in vitro dứa Cayen nhằm mục đích tạo ra giống dứa Cayen có năng suất cao và ổn định, để phục vụ yêu cầu thâm canh cho các khu vực trồng dứa.