Bài giảng vi sinh CÁC PHƯƠNG PHÁP PHÁT HIỆN ĐỀ KHÁNG KHÁNG SINH Phạm Hùng Vân XÁC ĐỊNH MIC MIC Minimum Inhibitory Concentration (µg/ml) Nồng độ tối thiểu của kháng sinh ức chế được vi khuẩn Tửứ MIC, xaực ủũnh vi khuaồn khaựng hay nhaùy vụựi khaựng sinh Thuốc cho vào Đỉnh đạt được Thời gian Nồng độ /hiệu quả AUC vùng dưới đường cong MIC90 Đỉnh/MIC Th.gian/MIC Phaân Phaân loa loa ï ï i i kha kha ù ù ng ng sinh sinh theo theo d d ö ö ô ô ï ï c c ñ ñ o o ä ä ng ng T/MIC Penicillins, cephalosporins, aztreonam, monobactams, carbapenems, "macrolides", clindamycin AUC/MIC fluoroquinolones, azithromycin, tetracyclines, vancomycin, ketolides, Streptogramins Peak/MIC Aminoglycosides, fluoroquinolones (Th.gian treân MIC) Xa Xa ù ù c c đ đ ònh ònh đ đ ie ie å å m m gãy gãy PK PK - - PD PD mo mo ä ä t t v v í í du du ï ï trên trên ca ca ù ù c c KS KS co co ù ù d d ư ư ơ ơ ï ï c c đ đ o o ä ä ng ng T/MIC T/MIC T. gian Nồng độ KS (µg/ml) 2 Drug A 4 6 8 0 Penicillins Cephalosporins Carbapenems Monobactam Macrolides Aztreonam điểm gãy PK-PD Điểm gãy PK-PD của thuốc A là 2 µg/m vì ở điểm này, thời gian giữa liều đạt 50% (chỉ cần đạt 40-60%)l Xa Xa ù ù c c đ đ ònh ònh đ đ ie ie å å m m gãy gãy PK PK - - PD PD mo mo ä ä t t v v í í du du ï ï trên trên ca ca ù ù c c KS KS co co ù ù d d ư ư ơ ơ ï ï c c đ đ o o ä ä ng ng Cmax Cmax /MIC /MIC T. gian Nồng độ KS (µg/ml) 2 Drug A 4 6 8 0 Aminoglycosides Fluoroquinolones điểm gãy PK-PD 10 Điểm gãy PK-PD của thuốc A là 1µg/ml vì ở điểm này, nồng độ củathuốc đạt 1/10 Cmax (10µg/ml) Xa Xa ù ù c c đ đ ònh ònh đ đ ie ie å å m m gãy gãy PK PK - - PD PD mo mo ä ä t t v v í í du du ï ï trên trên ca ca ù ù c c KS KS co co ù ù d d ư ư ơ ơ ï ï c c đ đ o o ä ä ng ng 24hAUC/MIC 24hAUC/MIC T. gian Nồng độ KS (µg/ml) 0 fluoroquinolones azithromycin, tetracyclines, vancomycin, ketolides, Streptogramins điểm gãy PK-PD Điểm gãy PK-PD của thuốc là 1µg/ml vì ở điểm này, nồng độ củathuốc đạt 1/125 24hAUC (0.125mg/h/L) Lựachọn kháng sinh theo PK/PD? • Thông số PK/PD tuỳ thuộc vào dose • Từ dose, tính được PK/PD break point • So MIC của vi khuẩnvới PK/PD break point, nếuMIC ≤ PK/PD breakpoint thì dùng thuốcsẽ có hiệuquả • Chú trọng khoảng cách liều, đặcbiệt đốivới beta-lactam Từđâu có MIC? Vi khuẩn được gọi là nhạy với kháng sinh khi MIC của vi khuẩn đối với kháng sinh là thấp hơn điểm gãy PK-PD [...]... khuẩn nhỏ Các vấn đề thường gặp Chọn lựa các kháng sinh làm KSĐ √ √ √ quá nhiều KS, trùng lặp phổ tác dụng ít các kháng sinh hữu dụng lâm sàng sai kháng sinh để làm KSĐ Kết quả KSĐ thiếu hữu dụng lâm sàng √ √ √ √ làm rối trí lâm sàng khi chọn kháng sinh kết quả KSĐ tự mâu thuẫn phải chọn kháng sinh theo kinh nghiệm chọn kháng sinh điều trò sai (không dùng đóa oxacillin để phát hiện S pneumoniae kháng PNC)... MIC phương pháp pha loãng kháng sinh trong tube 128µg/ml 64µg/ml 32µg/ml 16µg/ml 8µg/ml 4µg/ml Nồng độ kháng sinh MIC 2µg/ml 1µg/ml 0.5µg/ml 0.25µg/ml 0.12µg/ml Xác đònh MIC phương pháp pha loãng kháng sinh trong thạch 128µg/ml 64µg/ml 32µg/ml 16µg/ml 8µg/ml 2µg/ml 1µg/ml 0.5µg/ml 0.25µg/ml 0.12µg/ml 4µg/ml Xác đònh MIC phương pháp epsilon (E-test) Xác đònh MIC phương pháp pha loãng trong microwell PHƯƠNG... ATCC 49226 Cm, Ct, Cz, Cx, Cu, Ci, Of, Pn, Te Các vấn đề thường gặp Thiếu hay phương tiện và phương pháp KSĐ không chuẩn thức √ √ √ môi trường (thông thường, và đặc biệt), đóa kháng sinh mật độ vi khuẩn, mặt thạch KSĐ Kết quả KSĐ thiếu chính xác √ sai KQ các kháng sinh Sul/Trim, Aminoglycosides khi dùng NA, hay MHA kém chất lượng √ sai KQ với các đóa kháng sinh kém chất lượng √ mặt thạch KSĐ ướt → 2... đònh MIC phương pháp epsilon (E-test) Xác đònh MIC phương pháp pha loãng trong microwell PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH MBC Minimal Bactericidal Concentration PHƯƠNG PHÁP KHUẾCH TÁN KHÁNG SINH TRONG THẠCH Đóa kháng sinh Để tiện sử dụng, cho đóa kháng sinh vào các lọ chứa nắp chặt, có chất hút ẩm Bảo quản đóa kháng sinh Luôn bảo quản ở tủ mát 4 – 8o C Phải để ở nhiệt độ PTN 30’ trước khi mở nắp Lựa chọn môi trường... trải đều vạch cấy vk lên mặt thạch KSĐ Làm khô mặt thạch đã trải vi khuẩn trong tủ vô trùng trong vòng không quá 15 phút trước khi đặt đóa kháng sinh lên mặt thạch Đặt đóa kháng sinh lên mặt thạch ≥ 12mm Dùng kẹp mũi nhọn gắp đóa kháng sinh đặt lên mặt thạch ≥ 24mm Đặt đóa kháng sinh lên mặt thạch ≥ 12mm Dùng đầu kim tiêm lấy đóa kháng sinh đặt lên mặt thạch ≥ 24mm Nhiệt độ, khí trường, thời gian ủ Các. .. CO2 (bình nến) Nhiệt độ, khí trường, thời gian ủ vk khó mọc: S pneumoniae và các Streptococci khác (KSĐ trên MHC) 35o C 16 - 18h 5% CO2 (bình nến) Đo đường kính vòng vô khuẩn Đo đường kínhvòng vô khuẩn bằng mm tròn 2 trường hợp có 2 vòng: (1) đóa kháng sinh Trim/Sulf, (2) vi khuẩn Proteus mọc lan Đo đường kính vòng ngoài Các trường hợp khác có 2 vòng vô khuẩn: (1) đặt ĐKS lúc mặt thạch còn ướt (2)... Tb, Bt P aeruginosa ATCC 27853 Ak, Cm, Cf, Ct, Cz, Cx, Ci, Ge, Im, Nl, Nr, Of, Tb E coli 35218 Ac Đảm bảo chất lượng KSĐ Kiểm tra chất lượng trên các vi khuẩn ATCC; thực hiện đònh kỳ hay mỗi khi có: (1) lot môi trường mới, (2) lot ĐKS mới, (3) người mới thực hiện KSĐ ĐKS kiểm tra H influenzae ATCC 49247 Vi khuẩn ATCC Vi khuẩn ATCC Ac, Am, Az, Cm, Ct, Cz, Cx, Cl, Ci, Im, Of, Rf, Te, Bt H influenzae ATCC... (Mueller Hinton Agar) S pneumoniae Các Streptococci khác MHC H influenzae HTM N gonorrhoeae CAXV (Mueller Hinton Agar máu cứu) (Haemophilus Test Media) (GC agar thêm 1% Isovitex) Trải vi khuẩn lên mặt thạch KSĐ Chọn 5 khúm vk riêng lẽ, giống hệt nhau, làm thành huyền dòch đục đều trong NS vô trùng Dùng tăm bông vô trùng, lấy huyền dòch vk, ép kiệt nước thừa, rồi trải đều vk lên mặt thạch KSĐ McF 0.5... Staphylococci Enterococci Haemophilus spp N gonorrhoeae S pneumoniae Streptococci khác V cholerae Đảm bảo chất lượng KSĐ Kiểm tra chất lượng trên các vi khuẩn ATCC; thực hiện đònh kỳ hay mỗi khi có: (1) lot môi trường mới, (2) lot ĐKS mới, (3) người mới thực hiện KSĐ ĐKS klểm tra S aureus ATCC 25923 Vi khuẩn ATCC Vi khuẩn ATCC Ak, Ac, Am, Az, Cr, Cd, Cm, Cf, Ct, Cz, Cx, Cu, Cl, Ci, Dx, Er, Ge, Kn, Nl,... vk không thuần Phải làm lại KSĐ Biện luận kết quả KSĐ dựa theo đường kính vòng vô khuẩn VD: vk thử KSĐ E coli ĐKS Dmm vòng vô khuẩn đo được Bảng biện luận kết quả Kháng T gian Nhạy Kết quả Am Ci Cm Te ≤ 13 ≤ 15 ≤ 12 ≤ 14 Nhạy Nhạy T gian Kháng 18 21 14 12 14-16 16-20 13-17 15-18 ≥17 ≥21 ≥18 ≥19 Phải dùng đúng bản biện luận kết quả Dmm vòng vô khuẩn, theo NCCLS 2000, có 9 bảng biện luận, tùy vk thử . vi sinh CÁC PHƯƠNG PHÁP PHÁT HIỆN ĐỀ KHÁNG KHÁNG SINH Phạm Hùng Vân XÁC ĐỊNH MIC MIC Minimum Inhibitory Concentration (µg/ml) Nồng độ tối thiểu của kháng. TAÙN KHAÙNG SINH TRONG THAÏCH Đóa kháng sinh Để tiện sử dụng, cho đóa kháng sinh vào các lọ chứa nắp chặt, có chất hút ẩm Bảo quản đóa kháng sinh Luôn