Đang tải... (xem toàn văn)
Trình tự nhận biết và các kiểu cắt DNA của enzyme gới hạn.
Họ Tên : Nguyễn Thị ĐôngLớp : K33c_sinhTrường: ĐHSPHN2BÀI TIỂU LUẬN MÔN CÔNG NGHỆ GENECâu hỏi: Trình tự nhận biết và các kiểu cắt DNA của enzyme gới hạn.Bài làm- Enzyme giới hạn là enzyme có khả năng nhận biết những đoạn trình tự DNA nhất định và cắt DNA ở ngay điểm này hay điểm kế cận.- Enzyme giới hạn mang tính đặc hiệu cao, mỗi enzyme chỉ có thể nhận biết một đoạn trình tự đặc thù các cặp bazo trên DNA.Đoạn nhận biết phổ biến nhất có chiều dài 4, 5 hoặc 6 nucleotit tương ứng với khoảng 44 = 256 cặp bazo, 45 =1024 cặp bazo, hoặc 46 =4096 cặp bazo có khả năng lặp lại một lần trong cấu trúc chung của DNA. Như vậy enzyme gới hạn nhận biết đoạn trình tự 4 nucleotit sẽ cắt phân tử DNA ngắn hơn các enzyme gới hạn nhận biết đoạn trình tự 5 hoặc 6 nucleotit.- Có 2 kiểu cắt của enzyme gới hạn:+ Cắt tạo ra đầu so le( cohesive ends): Enzyme gới hạn cắt đầu so le tạo đầu dính. Sau khi cắt chúng có thể tự nối lại với nhau theo nguyên tắc bổ xung.Vi dụ: Cắt tạo đầu so le 5’ hoặc 3’ Cắt tạo đầu so le 5’ or 3’5’GAATTCCTTAAG5’G AATTCCTTAA G+5’ CTGCAGGACGTC5’ CTGCA GG ACGTC +Eco RIPst I+ Cắt tạo ra đầu bằng( blunt ends).Enzyme giới hạn cắt đầu bằng không tự nối các đoạn DNA lại với nhau. Để nối các đoạn DNA sau khi cắt cần sử dụng enzyme nối ligase và các adaptor chuyên dụng cho mỗi loại enzyme.Ví dụ: SmalCCC↓GGG CCC GGG +GGG↑CCC GGG CCCMột số enzyme giới hạn thường dùngEnzyme Vi khuẩn có enzyme Đoạn nhận biết và cắt trên DNABamHI Bacillus amyloliquefaciens G↓GATCCC CTAG↑GEcoRI EcoliRY13 G↓AATTCC TTAA↑GHhal Haemophilus haemolyticus G CG↓CC↑GC GHindIII Haemophilus ìnfluenzae A↓AGCT TT TCGA↑A Pstl Providencia stuartii C TGCA↓GG↑ACGT CHaeIII Haemophilus aegyptipus GG↓CCCC↑GGSmal Seratia martesens CCC↓GGGGGG↑CCCTạo phân tử DNA tái tổ hợpPhân tử A Phân tử B5’-G-G-A-T-C-C-3’ 5’-G-G-A-T-C-C-3’3’-C-C-T-A-G-G-5’ 3’-C-C-T-A-G-G-5’ Enzyme giới hạn BamHI nhận biết và cắt các nucleotit ở vị trí đặc thù-G G-A-T-C-C--C-C-T-A-G G- -G .G-A-T-C-C- -C-C-T-A-G .G- Nối bởi DNA ligase -G-G-A-T-C-C- -C-C-T-A-G-G- DNA tái tổ hợpHai loại enzyme tạo đầu so le 3’ và 5’ thường được dùng trong công nghệ di truyền do khả năng tự nối lại với nhau, hoặc bởi các đoạn DNA khác có đầu tương tự. Khi sử dụng từng loại enzyme giới hạn cần có các điều kiện nhiệt độ, pH, dung môi thích hợp.Đầu dính . hỏi: Trình tự nhận biết và các kiểu cắt DNA của enzyme gới hạn. Bài làm- Enzyme giới hạn là enzyme có khả năng nhận biết những đoạn trình tự DNA nhất định và. trúc chung của DNA. Như vậy enzyme gới hạn nhận biết đoạn trình tự 4 nucleotit sẽ cắt phân tử DNA ngắn hơn các enzyme gới hạn nhận biết đoạn trình tự 5 hoặc