Đang tải... (xem toàn văn)
Trong đề tài này nhằm nghiên cứu chiết xuất, phân lập các alkaloid của bình vôi cam bốt để định hướng cho các nghiên cứu tiếp theo về tiêu chuẩn hoá dược liệu, tác dụng dược lý hay ứng dụng trong thực tế của dược liệu này. Mời các bạn cùng tham khảo đề tài qua bài viết này.
Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 Nghiên cứu Y học PHÂN LẬP HAI PROTOBERBERIN ALKALOID TỪ LỒI BÌNH VƠI CAM BỐT (STEPHANIA CAMBODICA GAGNEP MENISPERMACEAE) Mã Chí Thành*, Trần Hùng** TÓM TẮT Mục tiêu: Chiết xuất, phân lập alkaloid Bình vơi Cam bốt để định hướng cho nghiên cứu tiêu chuẩn hoá dược liệu, tác dụng dược lý hay ứng dụng thực tế dược liệu Nguyên liệu phương pháp nghiên cứu: củ Bình vơi Cam bốt thu hái tỉnh An giang (02/2007), phơi khô xay nhỏ đến dạng bột thô Từ 50 kg dược liệu tươi thu 4,5 kg bột thô Chiết xuất phân lập: Dược liệu ngấm kiệt với cồn citric 5% nhiệt độ phòng Các phân đoạn phân tách phân bố lỏng – lỏng với dung môi CHCl3 theo gradient pH Việc phân lập chất tinh khiết thực phương pháp sắc ký cột chân không, sắc ký cột cổ điển Silica gel Sephadex kết tinh phân đoạn Cấu trúc chất phân lập xác định liệu phổ MS, NMR Kết quả: Từ 4,5 kg nguyên liệu thơ củ Bình vơi Cam bốt thu alkaloid toàn phần Từ cao chiết thu phân đoạn theo thứ tự A (167 g), B (85 g), C (13 g), D (14 g), E (22 g) F (102 g) Từ phân đoạn hợp chất tinh khiết phân lập Trong đó, cấu trúc chất phân lập xác định palmatin jatrorrhizin Kết luận: Từ củ Bình vơi Cam bốt (S cambodica Gagnep Menispermaceae) phân lập hợp chất có cấu trúc protoberberin Đây lần palmatin jatrorrhizin báo cáo loài Việc phân lập xác định cấu trúc alkaloid khác tiến hành Từ khóa: Stephania cambodica, protoberberin alkaloid, palmatin, jatrorrhizin ABTRACTS TWO PROTOBERBERINE ALKALOIDS ISOLATED FROM TUBER OF STEPHANIA CAMBODICA GAGNEP (MENISPERMACEAE) Ma Chi Thanh, Tran Hung* Y Hoc TP Ho Chi Minh * Vol 15 - Supplement of No - 2011: 565 - 569 Objective: Extraction, isolation and structure elucidation of Stephania cambodica alkaloids for further studies on quality controls of herb, pharmacological activities and the practical uses of this medicinal resource Materials and Method: The tubers of S cambodica were collected in An giang Province (20/02/2007), dried in indirect sunlight and ground to coarse powders From 50 kg of fresh tubers, 4.5 kg of powder was obtained Extraction and separation: The material was percolated by 5% citric acid in ethanol 95% to give extract The extract was fractionated by liquid-liquid distribution with CHCl3 using gradient pH Fractions were chromatographed on a VLC and conventional column chromatography using silica gel and Sephadex as stationary phases and purified by recrystallization to achieve pure compounds The structure of isolated compounds were deduced by the means of MS and NMR spectral data Result: From 4.5 kg of Stephania cambodica dry tubers, the total alkaloidal extract was obtained Five fractions, namely A (167 g), B (85 g), C (13 g), D (14 g), E (22 g) and F (102 g) was obtained from the extract *Labo hoá học hợp chất tự nhiên, Khoa Dược, Đại học Y Dược Tp Hồ Chí Minh ** Bộ môn Dược liệu, Khoa Dược, Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh Tác giả liên hệ: PGS TS Trần Hùng ĐT: 0918057096 Email: tranhung@uphcm.edu.vn Chuyên Đề Dược Khoa 565 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 From these fractions, by using VLC and conventional column chromatography, pure compounds were isolated Of these, the structure of two compounds were identified as palmatine, jatrorrhizine Conclusion: From tubers of Stephania cambodica, two protoberberine alkaloids were isolated This is for the first time palmatine, jatrorrhizine are reported as constituents of this plant The isolation, structure elucidation of other alkaloids in S cambodica is still in process Keywords: Stephania cambodica, protoberberine alkaloids, palmatine, jatrorrhizine ĐẶT VẤN ĐỀ Chi Stephania (chi Bình vơi, chi Lõi tiền) họ Tiết dê (Menispermaceae) có nhiều lồi sử dụng y học cổ truyền nhiều nước y học đại(1) Y học đại chứng minh alkaloid phân lập từ lồi thuộc chi Stephania có nhiều tác dụng dược lý hữu ích rotundin dùng làm thuốc an thần, ngủ, cycleanin làm thuốc hạ sốt chống viêm, stepharin có tác dụng ức chế men cholinesterase, dehydroremerin, cepharanthin, tetrandrin có hoạt tính kháng viêm, hạ huyết áp, có tác dụng chẹn dòng calci gây tê bề mặt(1,3,5) Bình vơi Cam bốt (Stephania cambodica Gagnep.) loài thuộc chi Stephania phân bố khu vực An giang với trữ lượng tương đối lớn(8) Thành phần hoá học loài chưa biết tới Trong hướng nghiên cứu thuốc thuộc chi Stephania có tỉnh phía nam, chúng tơi đặt vấn đề nghiên cứu chiết xuất phân lập chất có lồi Stephania cambodica Gagnep nhằm làm tiền đề cho nghiên cứu tiêu chuẩn hoá dược liệu, khảo sát tác dụng dược lý hướng ứng dụng thuốc NGUYÊN LIỆU - PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Ngun liệu: Củ Bình vơi Cam bốt thu hái An giang (02/2007) thái nhỏ phơi mát khô xay đến dạng bột thô Từ 50 kg dược liệu tươi thu 4,5 kg bột thô Sắc ký cột cổ điển sắc ký cột chân khơng dùng silica gel 60 (Merck, 40-63 µm) Sắc ký lớp mỏng sử dụng silica gel F254 tráng sẵn (Art.1.05554, Merck) phát vết đèn UV 254/365 nm thuốc thử Dragendorff 566 Phổ MS thực máy Quattro Micro API (Waters) Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh Phổ NMR thực máy Bruker AM500 FT-NMR Phòng cấu trúc, Viện hố học, Trung tâm Khoa học Cơng nghệ quốc gia, Hà nội, sử dụng tetramethylsilane (TMS) chất chuẩn nội Phương pháp: Ngun liệu thơ củ Bình vôi chiết xuất với cồn citric 5% nhiệt độ phòng Cao alkaloid tồn phần tiến hành chiết phân bố với dung môi CHCl3 theo gradient pH để thu phân đoạn alkaloid đơn giản Các phân đoạn sắc ký qua cột silica gel thu hợp chất tinh khiết Các chất phân lập được kiểm tra mức độ tinh khiết sắc ký lớp mỏng nhiều hệ dung môi, xác định điểm chảy phổ IR, MS NMR Cấu trúc chất xác định liệu phổ MS NMR (1H, 13C, DEPT, COSY, NOESY, HMBC, HSQC) KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU Củ Bình vơi (4,5 kg) chiết ngấm kiệt với cồn citric 5% nhiệt độ thường, dịch chiết cồn acid sau cô thu hồi dung môi đến cao đặc Cao cồn acid hồ lỗng với nước theo tỉ lệ (1:2) chiết phân bố với dung môi CHCl3 theo gradient pH pH 23, pH cuối pH 9-10 Dịch chiết CHCl3 cô thu hồi dung môi thu phân đoạn A (167 g), B (85 g), C (13 g), D (14 g), E (22 g) F (102 g) Phân đoạn A (8 g) sắc ký với cột silica gel giảm hoạt 10% nước, khai triển v/CD3OD δC δH (ppm) (ppm) 110,6 151,2 154,2 112,6 130,2 27,9 7,72 (1H, s) 3,22 (2H, t) 112,2 149,7 152,4 109,8 129,5 26,9 57,5 4,96 (2H, t) 56,3 146,2 123,3 145,9 152,0 9,90 (1H, s) 146,3 122,3 144,6 151,5 128,5 8,16 (1H, d) 127,7 124,4 8,06 (1H, d) 124,4 6,91 (1H, s) Palmatin(3)/CD3OD δC δH (ppm) (6)/CD3OD Vị trí C δH (ppm) δC (ppm) (ppm) Hz) 12a 13 13a 13b 2-OCH3 3-OCH3 9-OCH3 8,78 (1H, s) 4,01 (3H, s) 3,96 (3H, s) 4,23 (3H, s) 10-OCH3 4,12 (3H, s) 135,4 121,3 139,9 120,6 57,2 56,8 62,6 3,93 (3H, s) 3,86 (3H, s) 4,10 (3H, s) 134,1 120,9 138,6 119,9 57,2 56,8 62,9 4,06(3H, s) 58,0 9,12 (1H, s) 57,8 H3CO H3CO N + OCH3 OCH3 Hình Cấu trúc palmatin Jatrorrhizin (7): tinh thể hình khối màu đỏ cam tan tốt nước dung môi phân cực MeOH, EtOH, tan dung mơi phân cực Phổ ESI-MS positive chất (7) cho ion [M]+ m/z 338,2 tương ứng với công thức nguyên C20H20NO4+ Ngồi có phân mảnh [M – CH3] + m/z = 322,2 [M – CH3 – CH3] + m/z = 308,1 [M – CH3 – CH3 – OCH3] + m/z = 277,2 Phổ 13C-NMR phổ DEPT (7) cho thấy hợp chất có 20 carbon với carbon bậc IV, carbon bậc III, carbon bậc II carbon bậc I Trong đó, carbon bậc III bậc IV (7) carbon sp2 đặc trưng vòng thơm nhóm methyl phân tử cộng hưởng vùng trường thấp (δC 56,4; 62,0; 56,8 ppm; δH 4,01 (3H, s); 4,22 (3H, s); 4,07 (3H, s) ppm, đặc trưng nhóm methoxy Độ dịch chuyển hố học carbon khung (7) gần với palmatin Tuy nhiên, (7) có palmatin nhóm methyl gắn oxy (14 amu) Nói cách khác, nhóm methoxy palmatin thay nhóm OH Vị trí nhóm OH xác định vòng A (C2 C3) carbon mang nhóm Chun Đề Dược Khoa Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 methoxy C9 C10 cho thấy tương tác rõ với H-8 (C-9) H11, H12 (C-10) phổ HMBC Việc xác định vị trí nhóm OH dựa vào tương tác NOESY proton nhóm CH3 với proton H1 HO 3.50 brs δC (ppm) NOESY 7,45 (1H, s) 108,5 7,69 (1H, s) 109,3 - 148,1 - 149,9 - 150,3 - 147,7 6,86 (1H, s) 114,7 6,85 (1H, s) 114,8 4a - 128,3 - 3,20 (2H, t, 6,5 Hz) 4,94 (2H, t, 6,5 Hz) 26,5 56,3 3,15 (2H, t, 6,1 Hz) 4,92 (2H, t, 6,1 Hz) a 25,8 55,4 138.6 H H 7.45 s 144.3 121.6 119.7 H 9.75 s 62.0 4.22 s OCH3 144.1 133.7 150.0 126.6 H OCH3 56.9 4.07 s Hình Cấu trúc jatrorrhizin Tương tác H-H COSY Tương taùc xa H-C HMBC KẾT LUẬN VÀ BÀN LUẬN Từ củ Bình vơi Cam bốt (S cambodica Gagnep Menispermaceae) phân lập alkaloid Hai số xác định palmatin jatrorrhizin Đây lần alkaloid báo cáo lồi Bình vơi Cam bốt Cấu trúc alkaloid lại trình bày báo cáo khác Việc phân lập xác định cấu trúc alkaloid khác tiến hành 145,1 8a - 121,7 - 117,5 - 144,2 - 149,9 10 - 150,0 - 147,7 11 7,89 (1H, d, 9Hz) 126,6 8,19 (1H, d, 9,1 Hz) 123,2 12 7,98 (1H, d, 9Hz) 123,1 8,01 (1H, d, 9,1 Hz) 126,6 128,7 TÀI LIỆU THAM KHẢO 13 8,61 (1H, s) 119,7 8,98 (1H, s) 119,3 13a - 138,6 - 133,1 13b - 117,6 - 121,1 4,01 (3H, s) 56,4 3,94 (3H, s) 57,0 - 150,3 - 9-OCH3 4,22 (3H, s) 62,0 4,06 (3H, s) 61,9 10-OCH3 4,07 (3H, s) 56,8 4,09 (3H, s) 56,2 - a: khơng thấy tín hiệu Chuyển dịch hoá học tương tác phổ COSY HMBC jatrorrhizin trình bày Hình Chuyên Đề Dược Khoa + N 7.89 d J= Hz 9,85 (1H, s) 3-OH H 117.6 108.5 4.94 t J= 6.5 Hz1 56.3 128.3 H 144,3 2-OCH3 H 26.5 114.7 7.98 d J= Hz 9,75 (1H, s) 133,8 H 123.1 12a H 8.61 s Jatrorrhizin(4)/DMSO δC δH (ppm) (ppm) H 150.3 H3CO Bảng Dữ liệu phổ (7) so sánh với jatrorrhizin δH (ppm) 3.20 t J= 6.5Hz 56.4 4.01 s Các liệu phổ 1H 13C jatrorrhizin trình bày bảng Vị trí C 6.86 s 148.1 Kết hợp yếu tố phổ NMR MS (7) xác định jatrorrhizin (7)/CD3OD Nghiên cứu Y học Đỗ Tất Lợi (2000), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, NXB Y Học, Hà Nội, tr 512 – 515, 779 – 781 Lenka Grycova´, Jirˇı´ Dosta´l, Radek Marek (2007), “Quaternary protoberberin alkaloids”, Phytochemistry, 68, pp 150–175 Phạm Thanh Kỳ, Vũ Xuân Giang, Nguyễn Tiến Vững (2007), “Nghiên cứu alkaloid lồi Bình vơi Stephania viridiflavens H.S.Lo et Yang”, Tạp chí thơng tin y dược số 4, tr 31-35 Trinh Thi Thuy, K Franke, A Porzel, L Wessjohann and Tran Van Sung (2006), “Quaternary protoberberine alkaloids from Stephania rotunda”, Journal of Chemistry, Vol 44, 2, pp 259 – 264 Viện Dược liệu (2003), “Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam”, NXB Khoa học Kỹ thuật, TPHCM, tr 210 – 215(I), 547 – 548(I), 161 – 163(II) Võ Văn Chi (1997), Từ điển thuốc Việt Nam, NXB Y Học, Hà Nội, tr 325 – 327 Võ Văn Chi (2003), Từ điển thực vật thông dụng, NXB Khoa học Kỹ thuật, TPHCM, tr 2334 - 2340 Võ Văn Chi (1991), “Cây thuốc An Giang”, NXB Khoa Học Kỹ thuật An Giang, tr 398 – 399 569 ...ÀN LUẬN Từ củ Bình vơi Cam bốt (S cambodica Gagnep Menispermaceae) phân lập alkaloid Hai số xác định palmatin jatrorrhizin Đây lần alkaloid báo cáo loài Bình vơi Cam bốt Cấu trúc alkaloid lại t... calci gây tê bề mặt(1,3,5) Bình vơi Cam bốt (Stephania cambodica Gagnep.) lồi thuộc chi Stephania phân bố khu vực An giang với trữ lượng tương đối lớn(8) Thành phần hoá học loài chưa biết tới Trong... elucidation of other alkaloids in S cambodica is still in process Keywords: Stephania cambodica, protoberberine alkaloids, palmatine, jatrorrhizine ĐẶT VẤN ĐỀ Chi Stephania (chi Bình vơi, chi Lõi