Đang tải... (xem toàn văn)
Mục tiêu của bài viết là nghiên cứu nhằm xác định phân bố và lưu hành týp dengue ở bệnh nhân đến khám tại Khoa Cấp cứu, Bệnh viện Quân y 103 năm 2017. Đối tượng và phương pháp: tổng số 149 bệnh nhân nhiễm dengue trong giai đoạn cấp được thu thập tại Khoa Cấp cứu, Bệnh viện Quân y 103 năm 2017. Thu thập mẫu huyết thanh làm xét nghiệm huyết học và huyết thanh học phát hiện NS1 Ag-IgM/IgG, sử dụng xét nghiệm nhanh OnSite Duo Dengue Ag-IgG/IgM Rapid test - CTK Biotech, Mỹ.
Tạp chí y - dợc học quân số 3-2019 NGHIÊN CỨU PHÂN BỐ CÁC TÝP VIRUT DENGUE Ở BỆNH NHÂN ĐẾN KHÁM TẠI KHOA CẤP CỨU, BỆNH VIỆN QUÂN Y 103 NĂM 2017 Lê Thị Bảo Quyên1; Trịnh Thị Mỹ Anh1; Nguyễn Giang Hòa2; Nguyễn Văn Bằng2 Phạm Văn Tiến2; Bùi Quốc Chính3; Ngơ Q Lâm3; Hồng Xn Sử3 TÓM TẮT Mục tiêu: nghiên cứu nhằm xác định phân bố lưu hành týp dengue bệnh nhân đến khám Khoa Cấp cứu, Bệnh viện Quân y 103 năm 2017 Đối tượng phương pháp: tổng số 149 bệnh nhân nhiễm dengue giai đoạn cấp thu thập Khoa Cấp cứu, Bệnh viện Quân y 103 năm 2017 Thu thập mẫu huyết làm xét nghiệm huyết học huyết học phát NS1 Ag-IgM/IgG, sử dụng xét nghiệm nhanh OnSite Duo Dengue Ag-IgG/IgM Rapid test - CTK Biotech, Mỹ Sử dụng kỹ thuật multiplex onestep RT-PCR để phát định týp virut Dengue lưu hành Kết quả: số 149 bệnh nhân nhiễm Dengue có kết xét nghiệm NS1 Ag IgM dương tính, phân tích PCR cho kết dương tính 111/149 (74,5%), tỷ lệ nhiễm týp DENV1 týp DENV2 69/111 (62,2%) 42/111 (37,8%) Khơng có trường hợp nhiễm týp DENV3 DENV4 đồng nhiễm týp DENV1 týp DENV2 Tỷ lệ phân bố theo nhóm tuổi cho thấy khác biệt có ý nghĩa bệnh nhân nhóm tuổi 20 - 29 (p = 0,015) so với nhóm lại Phân tích phân bố týp Dengue theo khu vực địa bàn Hà Nội cho thấy Hà Đơng quận có tỷ lệ nhiễm virut Dengue cao với 58/111 trường hợp (52,25%), 38/58 trường hợp (65,5%) nhiễm DENV1 20/58 trường hợp (34,5) nhiễm DENV2 Tỷ lệ bệnh nhân nhiễm týp DENV1 giảm số lượng bạch cầu cao so với bệnh nhân nhiễm DENV2 (36,04% so với 13,51%; p = 0,02) Khơng có khác biệt phân bố hai týp DENV1 DENV2 liên quan đến giảm số lượng hồng cầu tiểu cầu Kết luận: nghiên cứu phân bố lưu hành týp Dengue bệnh nhân đến khám Khoa Cấp cứu, Bệnh viện Quân y 103 năm 2017 cho thấy phát týp DENV1 DENV2, týp DENV1 chiếm ưu * Từ khóa: Virut Dengue; Phân bố týp dengue Study of Distribution of Dengue Virus in Patients Admitted into the Emergency Department, 103 Military Hospital in 2017 Summary Objectives: To investigate the distribution of Dengue virus serotypes in acute phase of illness Subject and methods: A total of 149 patients infected with Dengue virus admitted into the Emergency Department of 103 Military Hospital NS1 Ag-IgM tested using OnSite Duo Dengue Ag-IgG/IgM Rapid test CTK Biotech, (USA), whereas, multiplex onestep RT-PCR was used for detecting and typing of Dengue virus Results: Among 149 patients with NS1 Ag-IgM positive detected in 111/149 cases (74.5%) positive with PCR Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia Hà Nội Bệnh viện Quân y 103 Học viện Quân y Người phản hồi (Corresponding): Hoàng Xuân Sử (hoangxuansu@vmmu.edu.vn) Ngày nhận bài: 20/12/2018; Ngày phản biện đánh giá báo: 15/01/2019 Ngày báo đăng: 22/02/2019 36 T¹p chÝ y - dợc học quân số 3-2019 Serotypes were found in 69/111 (62.2%) of DENV1 and 42/111 (37.8%) of DENV2, respectively No cases of DENV3 and DENV4 were observed The significant difference between the distribution of DENV1 and DENV2 associated with age groups ranging from 20 - 29 (p = 0.015) Cases infected with DENV1 had higher leucopenia than those infected with DENV2 (36.04% versus 13.51%; p = 0.02) No differences were found between the DENV serotypes in relation to platelet count and red blood cells at presentation Conclusion: This study indicated that the DENV1 and DENV2 were the most predominant DENV serotypes isolated from patients with dengue infection admitted into in the emergency setting during 2017 * Keywords: Dengue virus; Dengue serotypes ĐẶT VẤN ĐỀ Bệnh sốt dengue (SD) sốt xuất huyết (SXHD) virut Dengue (DENV) gây vấn đề y tế thách thức mang tính tồn cầu, ước tính có khoảng 3,6 tỷ người sống khu vực có nguy nhiễm Dengue, 390 triệu trường hợp mắc năm, 96 triệu người nhiễm DENV có triệu chứng, triệu trường hợp biểu bệnh nặng 21.000 ca tử vong năm [4] Tại Việt Nam, SD SXHD bệnh truyền nhiễm phổ biến lưu hành khắp 63 tỉnh thành nước, gây dịch hàng năm với hàng chục nghìn ca mắc bệnh, diễn biến phức tạp DENV thuộc họ Flaviviridae gồm týp DENV1, DENV2, DENV3, DENV4 Ở nước ta gặp týp, chủ yếu týp DENV1 DENV2 [5] Nhiễm DENV có biểu lâm sàng đa dạng, từ mức độ nhẹ người nhiễm virut không triệu chứng đến nhiễm DENV mức độ nặng, có dấu hiệu cảnh báo hội chứng sốc dengue Các nghiên cứu lâm sàng dịch tễ học phân bố khác týp DENV mức độ gây bệnh khác týp DENV quốc gia khu vực [4] Do đó, nghiên cứu tìm hiểu phân bố đặc điểm di truyền týp DENV vụ dịch có giá trị theo dõi diễn biến bệnh mà giúp hỗ trợ dự báo vụ dịch xảy Chúng tiến hành nghiên cứu nhằm mục tiêu: Xác định tỷ lệ phân bố týp virut Dengue bệnh nhân đến khám Khoa Cấp cứu, Bệnh viện Quân y 103 năm 2017 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Nghiên cứu thực từ tháng - 2017 đến tháng - 2017 Viện Nghiên cứu Y Dược học Quân sự, Học viện Quân y Đối tượng nghiên cứu 149 bệnh nhân (BN) có xét nghiệm IgM dương tính NS1 dương tính với DENV đợt dịch năm 2017 đến khám Khoa Cấp cứu, Bệnh viện Quân y 103 Phương pháp nghiên cứu Thí nghiệm thực theo phương pháp mơ tả phòng thí nghiệm từ tháng đến - 2017 Viện Nghiên cứu Y Dược học Quân sự, Học viện Quân y Chẩn đoán lâm sàng BN SD SXHD theo Hướng dẫn Bộ Y tế, BN có triệu chứng lâm sàng nghi ngờ nhiễm virut Dengue, khơng phân biệt tuổi, giới tính, chọn vào để sàng lọc xét nghiệm chẩn đoán nhanh phân tích PCR xác định týp DENV 37 T¹p chÝ y - dợc học quân số 3-2019 * Thu thập mẫu huyết tương: thu thập ml máu tĩnh mạch ngoại vi BN vào ống chứa chất chống đơng EDTA-K3, sau ly tâm 3.000 vòng/phút 10 phút Hút huyết tương vào tuýp vô trùng, bảo quản lạnh (-20oC) tiến hành xét nghiệm chẩn đoán Tách chiết ARN DENV từ mẫu huyết tương BN sốt xuất huyết Tách chiết ARN từ 200 µl huyết tương theo quy trình hướng dẫn nhà sản xuất (High pure ARN viral kit, Roche, Thụy Sỹ) Ly giải ARN 50 µl elution buffer, bảo quản -80oC phân tích PCR * Kỹ thuật sử dụng nghiên cứu: Xét nghiệm multiplex onestep RT-PCR: thực Phòng Vi sinh vật mầm bệnh sinh học, Viện Nghiên cứu Y Dược học Quân Thực multiplex onestep RT-PCR theo quy trình kít QIAGEN onestep RT-PCR (Đức) Các cặp mồi phát định týp dựa vùng gen CprM DENV [6] Xét nghiệm chẩn đoán nhanh: phát đồng thời kháng thể IgM, kháng thể IgG kháng nguyên DENV-NS1 máu toàn phần, huyết huyết tương BN, sử dụng kít OnSite Duo Dengue Ag-IgG/IgM rapid test-CTK Biotech (Mỹ) Bảng 1: Thông tin mồi sử dụng nghiên cứu Tên mồi F R1 R2 R3 R4 Chức Trình tự Mồi xi 5’- TCAATATGCTGAAACGCGCGAGAAACCG-3’ Mồi ngược týp DENV1 Mồi ngược týp DENV2 Mồi ngược týp DENV3 Mồi ngược týp DENV4 Kích thước (bp) 5’- CGTCTCAGTGATCCGGGGG-3’ 482 5’- CGCCACAAGGGCCATGAACAG-3’ 119 5’- TAACATCATCATGAGACAGAGC-3’ 290 5’- CTCTGTTGTCTTAAACAAGAGA-3’ 392 Phản ứng multiplex onestep RT-PCR thực máy Master cycler PCR (Eppendorf, Đức) với chu trình nhiệt phản ứng sau: 50°C (30 phút), 95°C (15 phút), 35 chu kỳ [94°C (15 giây), 55°C (30 giây), 72°C (30 giây), 72°C (10 phút), (4°C, +∞) Kiểm tra sản phẩm onestep RT-PCR điện di gel agarose 1,2%, nhuộm EtBr 30 phút - Chứng dương ARN: chứng dương ARN týp DENV tổng hợp in vitro theo hướng dẫn kít TranscriptAid T7 High Yield Transcription Kit (Thermo Fisher Scientific, Mỹ) Xác định nồng độ ARN máy Nanodrop (Thermoscientific, Mỹ) Từ dung dịch ARN ban đầu, tiến hành pha loãng dung dịch TE tới nồng độ 104 copies/ml sử dụng làm đối chứng dương phản ứng multiplex onestep RT-PCR 38 T¹p chÝ y - dợc học quân số 3-2019 * Cỏc ch s phân tích: - Về đặc điểm dịch tễ học: tuổi, giới tính, nơi sinh sống làm việc - Về số xét nghiệm: BN làm xét nghiệm huyết học lấy máu làm xét nghiệm multiplex onestep RT-PCR xác định týp virut Dengue gây bệnh, làm xét nghiệm huyết học chẩn đốn tìm kháng thể đặc hiệu dengue (IgG/IgM) - Chỉ trường hợp có kết IgM NS1 dương tính với DENV chọn vào nghiên cứu * Tiêu chuẩn loại trừ: nghi ngờ BN có bội nhiễm thêm bệnh cấp tính khác * Thu thập xử lý số liệu: thông tin BN kết xét nghiệm mã hóa nhập liệu phần mềm Excel Phân tích xử lý số liệu, sử dụng phần mềm SPSS 20.0, giá trị p < 0,05 xem có ý nghĩa thống kê KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ BÀN LUẬN Hình 1: Phát định týp DENV multiplex onestep RT-PCR (1: Marker 50 bp (Thermo Fisher); 2: Đối chứng âm; 3: Đối chứng dương; - 10: Các mẫu bệnh phẩm) Trong nghiên cứu, 270 BN vụ bùng phát dịch dengue năm 2017 đến khám Khoa Cấp cứu, Bệnh viện Quân y 103 chẩn đoán lâm sàng sốt xuất huyết Kết cho thấy 149 BN có IgM NS1 dương tính lựa chọn để phân tích PCR nhằm xác định tỷ lệ nhiễm DENV xác định týp DENV Kết PCR dương tính 111/149 (74,5%) trường hợp Hình ảnh PCR định týp DENV với băng sáng, đậm nét sản phẩm phụ Trong số 111 BN có kết dương tính với PCR định týp DENV, tỷ lệ nhiễm týp DENV1 týp DENV2 69/111 (62,2%) 42/111 (37,8%) Không trường hợp nhiễm týp DENV3 týp DENV4 đồng nhiễm týp DENV1 týp DENV2 Phân bố lưu hành týp DENV 39 Tạp chí y - dợc học quân sù sè 3-2019 nghiên cứu khác biệt so với nghiên cứu Đặng Thị Thúy vụ dịch DENV xảy năm 2011 - 2012 có týp DENV lưu hành gây bệnh, týp DENV2 chiếm ưu (64,4%), týp DENV1 (25,4%), týp DENV3 DENV4 (mỗi týp chiếm 3,4%), đồng nhiễm DENV1 VÀ DENV2 gặp trường hợp (3,4%) [1] Bảng 2: Phân bố týp DENV theo tuổi giới Chỉ tiêu Týp DENV (n = 111) Giới (n = 111) * Tuổi (n = 107) Số ca nhiễm DENV Tỷ lệ (%) p DENV 69 62,2 0,013 DENV 42 37,8 nam 47 42,3 nữ 64 57,7 < 20 17 15,9 20 - 29 40 37,4 30 - 39 24 22,4 > 40 26 24,3 0,128 0,015 (*n = 107 có giá trị bị lỗi tuổi thu thập số liệu) Đi sâu phân tích tỷ lệ BN nhiễm DENV1 với DENV2 cho thấy khác biệt có ý nghĩa thống kê (p = 0,013) Tuy nhiên, khơng có khác biệt tỷ lệ nhiễm DENV nam nữ (p = 0,128) So sánh tỷ lệ nhiễm DENV theo nhóm tuổi khác týp DENV với tỷ lệ nhiễm DENV thấy cao nhóm 20 - 29 tuổi (p = 0,015) Bảng 3: Phân bố týp DENV theo khu vực địa lý Khu vực Hà Nội Tỉnh khác DENV1 DENV2 Đống Đa 1 0,90 Ứng Hòa 1 0,90 Phú Xuyên 1 0,90 Thường Tín 1 0,90 Hồng Mai 2 1,80 Từ Liêm 2 1,80 Chương Mỹ 3 2,70 Thanh Xuân 2 3,60 Hoài Đức 5,41 Thanh Oai 7,21 Thanh Trì 8,11 Hà Đơng 38 20 58 52,25 15 13,51 68 43 111 100 * Tổng Tỷ lệ chung (%) (*: Bao gồm Thái Bình, Thanh Hóa, Nam Định, Nghệ An, Ninh Bình, Bỡnh Phc) 40 Tạp chí y - dợc học quân sù sè 3-2019 Tiếp tục khảo sát phân bố týp DENV theo khu vực địa lý địa bàn Thành phố Hà Nội cho thấy Quận Hà Đơng có tỷ lệ nhiễm DENV cao (58/111 BN = 52,25%), 38/58 BN (65,52%) nhiễm DENV1 20/58 BN (34,48%) nhiễm DENV2 Tỷ lệ nhiễm DENV cao khu vực Hà Đơng giải thích quận có tốc độ thị hóa cao, mật độ dân cư đông đúc khu vực thu dung điều trị Bệnh viện Qn y 103 Ngồi chúng tơi gặp 15/111 BN (13,51%) đến từ tỉnh khác Thái Bình, Nam Định, Ninh Bình, Nghệ An, Thanh Hóa, Bình Phước Kết nghiên cứu phù hợp với báo cáo trước tỷ lệ nhiễm cao quận nội thành Hà Nội lưu hành týp DENV vụ dịch xảy năm 2008 [7] 2011 [1] Nhiều nghiên cứu dịch SD/SXHD xảy Hà Nội với chu kỳ - năm có xu hướng ngày lan rộng với lưu hành týp DENV1 DENV2 chiếm ưu Các týp DENV3 DENV4 xuất hiện, nhiên týp DENV không chiếm ưu vụ dịch bùng phát tỉnh thành khác Hải Phòng năm 2013 [2] TP Huế năm 2014 [8] Bảng 4: Phân bố týp theo số xét nghiệm cận lâm sàng Týp DENV Thông số Tổng (n = 111) p DENV (n = 69) DENV (n = 42) < T/l 25 (22,50%) 17 (15,30%) 42 (37,80%) ≥ T/l 44 (40,00%) 25 (22,50%) 69 (62,50%) < 4,5 G/l 40 (36,04%) 15 (13,51%) 55 (49,55%) ≥ 4,5 G/l 29 (26,13%) 27 (24,32%) 56 (50,45%) < 100 G/l 14 (12,61%) (5,41%) 20 (18,02%) ≥ 100 G/l 55 (49,55%) 36 (32,43%) 91 (81,98%) IgM (+), NS1 (-) (3,6%) (1,8%) (5,4%) 0,81 NS1 (+), IgM (-) 43 (38,74%) 29 (26,13%) 72 (64,87%) 0,47 IgM (+) NS1 (+) 22 (19,82%) 11 (9,91%) 33 (29,73%) 0,52 Hồng cầu Bạch cầu Tiểu cầu Phân tích mối liên quan phân bố týp DENV với số xét nghiệm cận lâm sàng theo hướng dẫn WHO nghiên cứu công bố gần [9, 10] Kết phân tích cho thấy khơng khác biệt có ý nghĩa tình trạng giảm số lượng hồng cầu tiểu cầu Tuy nhiên, khác biệt có ý nghĩa giảm số lượng 0,65 0,02 0,42 bạch cầu với phân bố týp DENV1 DENV2 (p = 0,02) Nghiên cứu gần Trần Thanh Hải CS cho thấy giảm số lượng bạch cầu, tiểu cầu trung bình khác biệt có ý nghĩa thống kê BN nhiễm DENV2 DENV1 [2] Nghiên cứu tác giả khác giới Chee-Fu Yung Singapore cho thấy BN 41 T¹p chÝ y - dợc học quân số 3-2019 nhim DENV2 cú số lượng tiểu cầu trung bình thấp BN nhiễm DENV1 (114 G/l so với 128 G/l; p < 0,01), khơng có khác biệt giảm số lượng bạch cầu nhóm BN nhiễm týp DENV khác [11] Kết nghiên cứu Jeyanthi Suppiah gần Malaysia BN nhiễm DENV2 có số lượng bạch cầu tiểu cầu trung bình thấp so với BN nhiễm DENV1 DENV3, nhiên khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê [12] KẾT LUẬN Nghiên cứu phân bố lưu hành týp DENV BN đến khám Khoa Cấp cứu, Bệnh viện Quân y 103 năm 2017 cho thấy phát týp DENV1 DENV2, týp DENV1 chiếm ưu (62,2% so với 37,8%) Xác định đặc điểm dịch tễ phân bố týp DENV giúp công tác dự báo, giám sát kiểm soát dịch DENV xảy năm Việt Nam TÀI LIỆU THAM KHẢO Đặng Thị Thúy; Bùi Vũ Huy; Văn Kính Đặc điểm dịch tễ týp gây bệnh giai đoạn 8/2011 Tạp chí Nghiên cứu Y học 2013, tr.138-143 Nguyễn dengue 7/2012 83 (3), Trần Thanh Hải Mối tương quan đặc điểm lâm sàng, cận lâm sàng với týp nồng độ virut Dengue sốt xuất huyết dengue trẻ em Tạp chí Y học Dự phòng 2017, 27 (11), tr.232-240 Le Viet T et al A dengue outbreak on a floating village at Cat Ba Island in Vietnam BMC public health 2015, 15 (1), p.940 42 Guzman M.G et al Dengue infection Nature Reviews Disease Primers 2016, 2, p.16055 Thai K.T et al Clinical, epidemiological and virological features of Dengue virus infections in Vietnamese patients presenting to primary care facilities with acute undifferentiated fever Journal of Infection 2010, 60 (3), pp.229-237 Lanciotti R.S et al Rapid detection and typing of Dengue viruses from clinical samples by using reverse transcriptasepolymerase chain reaction Journal of Clinical Microbiology 1992, 30 (3): pp.545-551 Fox A et al Immunological and viral determinants of dengue severity in hospitalized adults in Hanoi, Vietnam PLoS Neglected Tropical Diseases 2011, (3), p.e967 Lee H.S et al Seasonal patterns of dengue fever and associated climate factors in provinces in Vietnam from 1994 to 2013 BMC Infectious Diseases 2017, 17 (1), p.218 Rocha B.A et al Dengue-specific serotype related to clinical severity during the 2012 - 2013 epidemic in centre of Brazil Infectious Diseases of Poverty 2017, (1), p.116 10 Organization W.H Comprehensive guideline for prevention and control of dengue and dengue haemorrhagic fever 2011 11 Yung C.F et al Dengue serotypespecific differences in clinical manifestation, laboratory parameters and risk of severe disease in adults, Singapore The American Journal of Tropical Medicine and Hygiene 2015, 92 (5), pp.999-1005 12 Suppiah J et al Clinical manifestations of dengue in relation to dengue serotype and genotype in Malaysia: A retrospective observational study PLoS Neglected Tropical Diseases 2018, 12 (9), p.e0006817 ... diễn biến bệnh mà giúp hỗ trợ dự báo vụ dịch x y Chúng tiến hành nghiên cứu nhằm mục tiêu: Xác định tỷ lệ phân bố týp virut Dengue bệnh nhân đến khám Khoa Cấp cứu, Bệnh viện Quân y 103 năm 2017 ĐỐI... đợt dịch năm 2017 đến khám Khoa Cấp cứu, Bệnh viện Quân y 103 Phương pháp nghiên cứu Thí nghiệm thực theo phương pháp mơ tả phòng thí nghiệm từ tháng đến - 2017 Viện Nghiên cứu Y Dược học Quân sự,... Nghiên cứu phân bố lưu hành týp DENV BN đến khám Khoa Cấp cứu, Bệnh viện Quân y 103 năm 2017 cho th y phát týp DENV1 DENV2, týp DENV1 chiếm ưu (62,2% so với 37,8%) Xác định đặc điểm dịch tễ phân