Đang tải... (xem toàn văn)
Nội dung nghiên cứu với mục tiêu nhằm trình bày một gia đình với một trẻ nam 4 tuổi bị bệnh DMD và 6 thành viên nữ thuộc 3 thế hệ mang cùng một loại đột biến mất đoạn của gen dystrophin. Mời các bạn cùng tham khảo bài viết để nắm rõ nội dung chi tiết.
YHọcTP.HồChíMinh*Tập17*Số4*2013 NghiêncứuYhọc NHÂN TRƯỜNG HỢP MỘT GIA ĐÌNH MANG CÙNG LOẠI ĐỘT BIẾN MẤT ĐOẠN CỦA BỆNH LOẠN DƯỠNG CƠ DUCHENNE Đỗ Thị Thanh Thủy*, Trần Thụy Vân Ngọc ** TĨMTẮT Mục tiêu: Trình bày gia đình với trẻ nam tuổi bị bệnh DMD thành viên nữ thuộc hệ mang loại đột biến đoạn gen dystrophin Phương pháp: Nghiên cứu phân tích gen Dystrophin trường hợp bệnh DMD thành viên nữ gia đình bệnh nhân phương pháp MLPA Kết quả: Bệnh nhân nam tuổi bị bệnh DMD, phát có đột biến đoạn gen dystrophin exon Đồng thời thành viên nữ gia đình bệnh nhân, gồm: bà ngoại, mẹ bệnh nhân, dì bé gái dì mang đột biến đoạn gen dystrophin exon tương tự bệnh nhân Kết luận: Đây trường hợp gặp kỹ thuật MLPA cho thấy ưu điểm phát đột biến đoạn gen dystrophin phát người nữ mang gen bệnh, giúp cho công tác tư vấn di truyền sở cho chẩn đoán trước sinh thai phụ, nhằm giảm gánh nặng cho gia đình xã hội, góp phần nâng cao chất lượng sống cho người dân Từ khóa: Bệnh loạn dưỡng Duchenne (DMD), Kỹ thuật khuếch đại đa đoạn dò (MLPA), đoạn dò ABSTRACT PRESENTING A FAMILY CARRYING THE SAME DELETION MUTATIONS OF THE DYSTROPHIN GENE Đo Thi Thanh Thuy, Tran Thuy Van Ngoc * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Vol 17 - No - 2013: 213 - 217 Background:Aim: Presenting a family with a 4-year-old male with DMD and female members of generations carrying the same deletion mutations of the dystrophin gene Method: Analyze the dystrophin gene of the boy with DMD and the females in the family by MLPA method Result: the years old boy with DMD has deletion mutations in exon and of dystrophin gene and other female members in the patient’s family, including his grandmother, his mother, aunts and aunt’s girl also carry the same kinds of deletion mutation in the dystrophin gene as patient’s Conclusion: This is rare case MLPA technique has shown the advantages of detecting deletion mutations in the dystrophin gene and discovered the female dystrophin mutation carriers, supporting the work of genetic counseling and helping prenatal diagnostic for patient’s pregnancies, reducing the burden of families and society and contributing to improving the quality of life for people Key words: Duchene Muscular Dystrophy (DMD), MLPA (Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification), probe trưng tình trạng yếu tiến triển tuần tiến ĐẶT VẤN ĐỀ Trẻ mắc bệnh thường xuất triệu chứng Bệnh loạn dưỡng Duchenne (Duchenne lâm sàng lúc đến tuổi, teo dấu hiệu Muscular Dystrophy – DMD) bệnh lý thần thường gặp giả phì đại cẳng chân kinh thường gặp với tần suất mắc bệnh phổ biến, phần lớn trẻ khả lại khoảng 1/3500 trẻ trai sinh sống(4) Bệnh đặc * Đại học Y Dược TP HCM ** Bệnh viện Đa khoa Bình Dương, Bình Dương Tác giả liên lạc: TS Đỗ Thị Thanh Thủy ĐT: 0908487425 214 Email: thuyprenatal@gmail.com YHọcTP.HồChíMinh*Tập17*Số4*2013 tuổi 12 tử vong trước 25 tuổi suy hơ hấp tổn thương tim(1,6) Đây bệnh di truyền lặn liên kết với NST giới tính X Trên lý thuyết người mẹ mang gen bệnh kết hôn với người chồng khỏe mạnh có khả truyền gen bệnh cho 50% số trai 50% số gái họ(1,2) Do đặc điểm di truyền nên bệnh gặp trẻ trai mà gặp trẻ gái Trẻ trai cần nhận gene bệnh từ mẹ thể bệnh, trẻ gái phải nhận gen bệnh từ bố mẹ thể bệnh, trẻ trai bị bệnh thường chết trước tuổi lập gia đình nên khả kết sinh gặp Như nhìn chung người nam mang gen đột biến biểu bệnh, người nữ mang gen đột biến người mang mầm bệnh Vì thế, việc phân tích gen xác định đột biến giúp chẩn đoán bệnh sớm để có hướng điều trị sớm tích cực nhằm giảm biến chứng cho bệnh nhân, ngồi giúp phát thành viên nữ mang gen bệnh (bà ngoại, mẹ, chị em gái, dì) gia đình bệnh nhân, phân tích sơ đồ phả hệ, giúp ích cho cơng tác tư vấn di truyền chẩn đốn trước sinh, nhằm giảm gánh nặng cho gia đình xã hội ĐỐITƯỢNG–PHƯƠNGPHÁPNGHIÊNCỨU Đối tượng nghiên cứu Bệnh nhân thành viên nữ gia đình bệnh nhân Thiết kế nghiên cứu Nghiên cứu mô tả cắt ngang Địa điểm phân tích lưu trữ mẫu Trung tâm Y sinh học phân tử - Đại học Y Dược TP HCM Cách lấy mẫu Lấy ml máu tĩnh mạch chống đông EDTA Mẫu bảo quản 40C trước tách DNA bảo quản -200C sau tách DNA Phương pháp nghiên cứu Máu toàn phần ly trích DNA từ bạch cầu phương pháp kết tủa ly tâm qua cột với hóa chất QIAamp DNA blood Mini kit NghiêncứuYhọc (QIAGEN - Đức) Đo nồng độ độ tinh DNA bước sóng 260/280nm (máy hãng Eppendorf), chấp nhận mẫu có tỉ số mật độ quang khoảng 1,8 – 2,0 Tiến hành phản ứng MLPA với giai đoạn gồm: biến tính DNA, lai hóa, nối đoạn dò gắn tín hiệu huỳnh quang khuếch đại đoạn dò Sau phân tách sản phẩm sau khuếch đại hệ thống điện di mao quản GenomeLab GeXP phân tích kết phát đột biến nhờ phần mềm GeneMarker 1.6 (Softgenetics) Kết hiển thị dạng bảng dạng biểu đồ sóng Mỗi đỉnh tín hiệu (peak) sản phẩm đoạn dò Kích thước đỉnh tín hiệu xác định nhờ so sánh với thang kích thước chuẩn mẫu đối chứng để tính tỉ lệ DQ (Dosage quotients) Chiều cao đỉnh tín hiệu thay đổi cho thấy thay đổi số đoạn DNA có trình tự bổ sung với đoạn dò(7) KẾT QUẢ Bệnh nhân nam tuổi, với triệu chứng lâm sàng phì đại cẳng chân bên khó khăn lên xuống cầu thang, nồng độ creatin kinase huyết 33.480 U/L Chẩn đoán lâm sàng bị bệnh loạn dưỡng Duchenne Bệnh nhân xét nghiệm phân tích gen kỹ thuật MLPA Trung tâm Y sinh học phân tử - Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh, với kết bị đột biến đoạn gen dystrophin exon Kết từ hình cho thấy, khơng xuất đỉnh tín hiệu đoạn dò tương ứng với exon (DQ = 0), chứng tỏ bệnh nhân bị đoạn gen đồng exon 9(8) Chúng tơi tiến hành phân tích gen thành viên nữ gia đình bệnh nhân, bao gồm: bà ngoại, mẹ bệnh nhân, dì em gái dì Kết trình bày hình Kết từ Bảng cho thấy, đỉnh tín hiệu đoạn dò (probe) tương ứng với exon thành viên nữ gia đình bệnh nhân (bà ngoại, mẹ, dì 1, dì 2, dì gái dì 3) 215 YHọcTP.HồChíMinh*Tập17*Số4*2013 NghiêncứuYhọc khoảng ½ so với mẫu đối chứng nữ (DQ tương ứng khoảng 0,441 đến 0,598), chứng tỏ thành viên nữ bị đoạn dị hợp tử exon Theo Hwa H.L (2007), đỉnh tín hiệu exon bị đột biến người nữ ½ so với chứng nữ người nữ xem bị đột biến đoạn dị hợp tử(3) Mẫu bệnh nhân Mẫu chứng Hình Đột biến đoạn exon bệnh nhân Bà ngoại Người mẹ Dì thứ Dì thứ2 Dì thứ Hình Đột biến đoạn exon thành viên khác 216 Con dì thứ YHọcTP.HồChíMinh*Tập17*Số4*2013 NghiêncứuYhọc Bảng 1: Tín hiệu đoạn dò đột biến đoạn thành viên nữ gia đình bệnh nhân STT Probe Name Bin Size Bà ngoại Mẹ Theo Lai K.K cộng (2006), chiều cao đỉnh tín hiệu người mẹ giảm từ 35 – 50% so với mẫu chứng nữ người mẹ bị đột biến đoạn exon tương ứng với đỉnh tín hiệu đó(5) Khi phân tích phả hệ gia đình, chúng tơi ghi nhận bệnh nhân có người cậu mắc bệnh DMD chết lúc 26 tuổi (được chẩn đoán Bệnh viện Trung ương Huế) người cậu 18 tuổi mắc bệnh DMD không lại (cũng chẩn đoán Bệnh viện Trung ương Huế), bệnh nhân Dì thứ Dì thứ Dì thứ Con Dì thứ không lại nên không lấy mẫu để làm xét nghiệm di truyền Điều chứng tỏ có yếu tố di truyền gia đình (thể qua sơ đồ 1) Như vậy, bà ngoại mẹ bệnh nhân dị hợp tử bắt buộc gen bệnh trai họ di truyền từ người mẹ, điều hoàn toàn phù hợp phân tích gen bà ngoại mẹ bệnh nhân Trong gia đình có thành viên nữ nhỏ tuổi (9 tháng tuổi lúc tiến hành nghiên cứu, dì thứ 3) phát có mang 217 YHọcTP.HồChíMinh*Tập17*Số4*2013 NghiêncứuYhọc gen đột biến đoạn gen dystrophin mẹ bé dì thứ bệnh nhân bị đột biến tương tự, thế, bé gái mang exon đột biến thừa hưởng từ người mẹ Sơ đồ 1: Ngồi ra, phân tích gen người dì lại phát đột biến đoạn exon tương tự bệnh nhân thành viên nữ khác gia đình Nam bình thường Nam đồng hợp tử Nữ bình thường ●Nữ dị hợp tử Nam đồng hợp tử chết Như vậy, gia đình bệnh nhân tất thành viên nữ người mang gen bệnh, riêng bà ngoại 100% có bà mang gen bệnh bà truyền cho (gồm trai gái) phát người nữ mang gen bệnh, giúp cho công tác tư vấn di truyền sở cho chẩn đoán trước sinh thai phụ, nhằm giảm gánh nặng cho gia đình xã hội, góp phần nâng cao chất lượng sống cho người dân Bệnh DMD bệnh di truyền lặn liên kết NST giới tính X mà khơng có allen tương ứng NST Y, lý thuyết người mẹ mang gen bệnh kết với người chồng khỏe mạnh có khả truyền gen bệnh cho 50% số trai 50% số gái họ(1,9) Tuy nhiên, gia đình 100% số trai bà ngoại bị bệnh 100% số gái bà mang gen dị hợp tử Điều cho thấy khả lan truyền gen bệnh người mẹ mang gen dị hợp tử cao nhanh cộng đồng Gia đình cần tư vấn di truyền cách kỹ lưỡng chi tiết, tư vấn cơng tác chẩn đốn trước sinh dì lập gia đình có ý định sinh (vì dì lứa tuổi sinh sản) để tránh sinh đứa trẻ tiếp tục bị bệnh mang gen bệnh, nhằm làm giảm gánh nặng cho gia đình xã hội TÀI LIỆU THAM KHẢO KẾT LUẬN Đây trường hợp gặp kỹ thuật MLPA cho thấy ưu điểm phát đột biến đoạn, lặp đoạn gen dystrophin 218 Emery AEH (2002), “The muscular dystrophies”, Lancet, 359, pp 687 – 695 Harvey B.S (1996), “Neuromuscular Disorders”, Nelson textbook of pediatrics, 15th edition, Vol 2, pp 1746 – 1748 Hwa HL, Chang YY, Chen CH et al (2007), “Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification identification of deletions and duplications of the Duchenne muscular dystrophy gene in Taiwanese subjects”, J Formos Med Assoc, 106, pp 339 – 346 Kneppers ALJ, Ginjaar IB, Bakker E (2004), “Duchenne and Becker muscular dystrophy”, Molecular diagnosis of genetic diseases, Humana Press, New Jersey,2nd edition, pp 311 – 342 Lai KK., Lo I.F., Tong T.M et al (2006), “Detecting exon deletions and duplications of the DMD gene using Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification (MLPA)”, Clin Biochem, 39, pp 367 – 372 Patterson V., Morrison O., Hicks E (1991), “Mode of death in Duchenne muscular dystrophy”, Lancet, 337, pp 801 – 802 Prior T.W and Bridgeman S.J (2005), “Experience and Strategy for the Molecular Testing of Duchenne Muscular Dystrophy”, Journal of Molecular Diagnostics, 7(3), pp 317 – 326 Schwartz M and Duo M (2004), “Multiplex ligationdependent probe amplification is superior for detecting deletions/duplications in Duchenne muscular dystrophy”, Clin Genet., 67, pp 189 – 191 Tạ Thành Văn (2011), “Bệnh loạn dưỡng Duchene Becker”, Bệnh học phân tử, Nhà xuất Y học, tr 152 – 169 ... đoạn dị hợp tử exon Theo Hwa H.L (2007), đỉnh tín hiệu exon bị đột biến người nữ ½ so với chứng nữ người nữ xem bị đột biến đoạn dị hợp tử(3) Mẫu bệnh nhân Mẫu chứng Hình Đột biến đoạn exon bệnh. .. dì lại phát đột biến đoạn exon tương tự bệnh nhân thành viên nữ khác gia đình Nam bình thường Nam đồng hợp tử Nữ bình thường ●Nữ dị hợp tử Nam đồng hợp tử chết Như vậy, gia đình bệnh nhân tất thành... nam mang gen đột biến biểu bệnh, người nữ mang gen đột biến người mang mầm bệnh Vì thế, việc phân tích gen xác định đột biến giúp chẩn đốn bệnh sớm để có hướng điều trị sớm tích cực nhằm giảm biến