Xây dựng quy trình định lượng một số chất bảo quản nhóm paraben trong chế phẩm kem bôi da bằng HPCL PDA

9 130 0
Xây dựng quy trình định lượng một số chất bảo quản nhóm paraben trong chế phẩm kem bôi da bằng HPCL PDA

Đang tải... (xem toàn văn)

Thông tin tài liệu

Nghiên cứu này được thực hiện với mục tiêu xây dựng một quy trình nhanh chóng, đơn giản, ít tiêu tốn dung môi khi tiến hành định lượng đồng thời một số paraben trong chế phẩm kem bôi da đang có trên thị trường.

Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số * 2018 XÂY DỰNG QUY TRÌNH ĐỊNH LƢỢNG MỘT SỐ CHẤT BẢO QUẢN NHĨM PARABEN TRONG CHẾ PHẨM KEM BƠI DA BẰNG HPLC-PDA Huỳnh Xuân Vinh*, Nguyễn Đức Tuấn* TÓM TẮT Mở đầu – Mục tiêu: Cùng với phát triển kinh tế, nhu cầu làm đẹp người ngày tăng, kéo theo đời nhiều loại mỹ phẩm Trong thị trường mang tính cạnh tranh cao, có khơng nhà sản xuất sẳn sàng lợi nhuận đưa thị trường sản phẩm chất lượng việc đưa vào chất hóa học bị cấm vượt giới hạn cho phép, có chất bảo quản nhóm paraben Vì vậy, nghiên cứu thực với mục tiêu xây dựng quy trình nhanh chóng, đơn giản, tiêu tốn dung mơi tiến hành định lượng đồng thời số paraben chế phẩm kem bơi da có thị trường Đối tượng – Phương pháp nghiên cứu: Đối tượng nghiên cứu: Methylparaben, ethylparaben, propylparaben, butylparaben isobutylparaben Phương pháp nghiên cứu: Khảo sát số điều kiện sắc ký ảnh hưởng đến trình phân tích paraben hệ dung mơi, tỷ lệ pha động, pH, nhiệt độ cột, v.v Sau tìm điều kiện sắc ký thích hợp, tiến hành thẩm định quy trình phân tích bao gồm khảo sát tính phù hợp hệ thống, tính đặc hiệu, giới hạn định lượng, giới hạn phát hiện, hiệu suất chiết, tính tuyến tính miền giá trị, độ xác độ Quy trình sau thẩm định ứng dụng để kiểm tra paraben số chế phẩm kem bơi da có mặt thị trường Kết quả: Đã xác định điều kiện sắc ký thích hợp để định lượng đồng thời methylparaben, ethylparaben, propylparaben, butylparaben isobutylparaben sau: cột sắc ký Phenomenex Gemini-NX C18 (150 x 4,6 mm; µm), đầu dò PDA, bước sóng phát 254 nm, pha động acetonitril nước acid acetic pH (35:65), thể tích tiêm mẫu 10 µl, tốc độ dòng ml/phút Quy trình phân tích thẩm định đạt tính phù hợp hệ thống, có tính đặc hiệu, khoảng tuyến tính rộng, đạt yêu cầu độ (tỷ lệ phục hồi khoảng 94% – 109%) độ lặp lại (RSD < 2%), hiệu suất chiết cao ổn định, giới hạn phát giới hạn định lượng thấp Kết kiểm tra paraben số chế phẩm kem bôi da lưu hành Việt Nam cho thấy hàm lượng paraben nằm mức giới hạn cho phép Kết luận: Quy trình định lượng đồng thời methylparaben, ethylparaben, propylparaben, butylparaben, isobutylparaben phương pháp HPLC với đầu dò PDA xây dựng thẩm định, sử dụng chương trình rửa giải đẳng dòng pha động khơng có dung dịch đệm Quy trình ứng dụng để kiểm tra paraben số chế phẩm kem bơi da có thị trường Từ khóa: Methylparaben, ethylparaben, propylparaben, butylparaben, isobutylparaben, chất bảo quản nhóm paraben, kem bơi da, HPLC-PDA ABSTRACT SIMULTANEOUS DETERMINATION OF SEVERAL PARABEN PRESERVATIVES IN SKIN CREAMS BY HPLC – PDA Huynh Xuan Vinh, Nguyen Duc Tuan * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Supplement Vol 22 - No 2- 2018: 436 - 444 Background – Objectives: Along with development of economy, the demand for aestheticizing people is * Khoa Dược, Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh Tác giả liên lạc: PGS TS Nguyễn Đức Tuấn 436 ĐT: 0913 799 068 Email: ductuan@ump.edu.vn Chuyên Đề Dƣợc Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số * 2018 Nghiên cứu Y học increasing, that leads to launch variety of cosmetics In a highly competitive market and in order to achieve high profits, many manufacturers have launched poor quality cosmetics by using banned or over accepted limit chemicals, such as paraben preservatives Therefore, this study was carried out with the aim of development of a fast, simple and less-solvent-consumption HPLC method for simultaneous quantitative determination of several paraben preservatives in skin creams Method: The subject of this study was methyl paraben, ethyl paraben, propyl paraben, butyl paraben and isobutyl paraben Method: Several chromatographic conditions such as mobile phase, pH, column temperature, etc that affects selectivity and separation efficiency, were investigated Once the appropriate chromatographic conditions were achieved, the analytical procedure was validated, including system suitability, selectivity, limit of quantitation, limit of detection, extraction recovery, linearity and range, precision and accuracy Then the validated procedure was applied for simultaneous determination of parabens in some available skin creams Results: The appropriate chromatographic conditions for complete separation of methyl paraben, ethyl paraben, propyl paraben, butyl paraben, isobutyl paraben were obtained on Gemini-NX C18 column (150 x 4.6 mm; µm), PDA detector with detection wavelength at 254 nm, mixture of acetonitrile and acetic acid pH 3.0 (35:65) as mobile phase, injection volume of 10 µL, flow rate of 1.0 ml/min Validation results showed that the method was suitable for the HPLC system, selective, linear, accurate (the recoveries in the range of 94.0%-109.0% of the expected values), precise (RSD ≤ 2%), high and stable extraction recovery, and high sensitivity All the calculations concerning the quantitative analysis showed that several available skin creams in Vietnam market contained an amount of paraben preservatives that was below accepted limits Conclusion: The RP-HPLC method for simultaneous determination of methyl paraben, ethyl paraben, propyl paraben, butyl paraben, and isobutyl paraben was successfully developed and validated, using isocratic mode and mobile phase without buffer The proposed method was applied for quantitation of paraben preservatives in some skin creams available in the market Keyword: methyl paraben, ethyl paraben, propyl paraben, butyl paraben, isobutyl paraben, paraben preservatives, skin cream, HPLC-PDA isopropylparaben (isoPP), isobutylparaben ĐẶT VẤN ĐỀ (isoBP), pentylparaben (PenP), phenylparaben Cùng với phát triển kinh tế, nhu (PheP) v| benzylparaben (BenP) Khi công văn cầu l|m đẹp người ng|y c|ng tăng, kéo ban hành, hàng loạt mẫu mỹ phẩm có theo l| đời nhiều loại mỹ phẩm chứa chất paraben bị cấm thu hồi, Trong thị trường mang tính cạnh tranh cao, song tồn đọng mẫu khơng đạt có khơng nhà sản xuất sẳn sàng lợi nhuận chất lượng lưu h|nh thị trường Bên đưa thị trường sản phẩm chất cạnh đó, nồng độ chất bảo quản paraben lượng việc đưa v|o chất hóa học bị nhỏ, theo quy định ASEAN(3), giới hạn cấm vượt giới hạn cho phép, cho phép methylparaben ethylparaben có chất bảo quản nhóm paraben Ngày 13 tháng 0,4% chất dùng riêng lẻ 0,8% năm 2015, Cục Quản lý Dược ban hành công dùng hỗn hợp; với propylparaben văn số 6577/QLD-MP(1) việc cập nhật danh butylparaben 0,14% dạng đơn lẻ lẫn hỗn s{ch c{c paraben phép sử dụng mỹ hợp; tổng h|m lượng paraben không phẩm với h|m lượng giới hạn gồm 0,8% chế phẩm Một số nhà sản methylparaben (MP), ethylparaben (EP), xuất không sử dụng paraben cấm propylparaben (PP), butylparaben (BP) tăng h|m lượng paraben cho phép sử paraben bị cấm dùng mỹ phẩm, bao gồm dụng vượt giới hạn cho phép Một khảo sát Chuyên Đề Dƣợc 437 Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số * 2018 Nghiên cứu Y học năm 2016 cuả Trung tâm Kiểm nghiệm Thuốc, Mỹ phẩm, Thực phẩm TPHCM ph{t có 2/10 mẫu kem khảo s{t không đạt giới hạn hàm lượng paraben Việc định lượng đồng thời paraben MP, EP, PP v| BP hướng dẫn cụ thể tài liệu ACM INO 04 ASEAN(4), sử dụng kỹ thuật HPLC Tuy nhiên, quy trình có số hạn chế tiêu hao lượng dung môi hóa chất lớn sử dụng pha động gồm loại dung mơi, thời gian ph}n tích d|i, chưa khảo sát khả t{ch c{c paraben l| đồng phân vị trí propylparaben v| isopropylparaben, butylparaben isobutylparaben, < v| c{c chất phép không phép sử dụng nhóm paraben Với lý trên, nghiên cứu n|y thực để góp phần khắc phục hạn chế quy trình ph}n tích đồng thời chất bảo quản nhóm paraben mẫu kem bôi da kỹ thuật sắc ký lỏng hiệu cao cải thiện khả t{ch, r t ngắn thời gian phân tích tiêu tốn dung mơi, hóa chất ĐỐI TƢỢNG-PHƢƠNGPHÁP NGHIÊNCỨU Đối tƣợng nghiên cứu Methylparaben, ethylparaben, propylparaben, butylparaben isobutylparaben mẫu kem bôi da giả lập Nguyên vật liệu Chất đối chiếu Bảng 1: Danh mục chất đối chiếu dùng nghiên cứu MP EP PP BP isoBP Nhà cung cấp Viện Kiểm Nghiệm thuốc Thành phố Hồ Chí Minh Số lơ QT128 060815 NLQT004 011214 QT130 060816 NLQT002 020716 NLQT003 011214 Độ tinh khiết theo nguyên trạng 100,08% 96,62% 100,01% 99,2% 99,16% Trang thiết bị Hệ thống HPLC Alliance 2695XE ghép nối với đầu dò PDA 2996, hệ thống HPLC Alliance e2695 ghép nối với đầu dò PDA 2998, cột sắc ký Phenomenex C18 (150 x 4,6 mm; µm), cân phân tích Satorius CP 225D (max = 220 g, d = 0,01 mg), bể siêu âm T840 DH – Elma, m{y đo pH S220 Metler Toledo, bể cách thủy Memmert Hóa chất dung môi Acetonitril v| methanol đạt tiêu chuẩn dùng sắc ký lỏng (Merck) Acid acetic băng v| ethanol đạt tiêu chuẩn phân tích (Merck) Mẫu kem bơi da không paraben Mẫu kem bôi da không paraben sử dụng để tạo mẫu giả lập INNISFREE OLIVE REAL MOISTURE HAND CREAM với thành phần nước, glycerin, butylen glycol, ceatearyl alcol,< sản xuất công ty Innisfree Hàn Quốc, số lô T13805, hạn dùng 28/12/2019 438 Chuẩn bị mẫu Từ mức giới hạn cho phép paraben chế phẩm kem bôi da, dung dịch chuẩn mẫu giả lập chuẩn bị cho nồng độ sau c{c paraben tương ứng với mức giới hạn cho phép, cụ thể sau: MP EP 40 ppm, PP BP 14 ppm Với isoBP chất không phép sử dụng mỹ phẩm chuẩn bị nồng độ ppm Sau khảo sát LOD LOQ paraben, isoBP chuẩn bị nồng độ tương đương với LOQ Khi thẩm định quy trình phân tích, ngoại trừ tiêu tính đặc hiệu, tiêu kh{c tiến hành mức nồng độ isoBP với LOQ Dung dịch đối chiếu gốc paraben Cân xác khoảng 10 mg MP (với EP 10 mg PP, BP, BP mg), cho vào bình định mức 25 ml, thêm khoảng 15 ml dung môi pha mẫu gồm ethanol v| nước (9:1), lắc cho tan, thêm dung môi pha mẫu đến vạch, lắc đều, thu dung dịch đối chiếu gốc có Chun Đề Dƣợc Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số * 2018 Nghiên cứu Y học nồng độ MP EP 400 ppm; PP, BP isoBP 200 ppm Dung dịch mẫu giả lập Dung dịch đối chiếu gốc hỗn hợp paraben Cân xác khoảng 32 mg MP EP, 11,2 mg PP BP, cho v|o bình định mức 50 ml (bình A) Cân xác khoảng mg isoBP, cho vào bình định mức 200 ml, thêm khoảng 40 ml dung môi pha mẫu, lắc cho tan, thêm dung môi pha mẫu đến vạch, lắc đều, thu dung dịch isoBP có nồng độ 25 ppm (dung dịch B) Hút xác 8,65 ml dung dịch B, cho vào bình A, thêm khoảng 25 ml dung môi pha mẫu, lắc cho tan, thêm tiếp dung môi pha mẫu đến vạch, lắc đều, thu dung dịch đối chiếu gốc hỗn hợp paraben có nồng độ MP, EP 640 ppm, PP BP 224 ppm, isoBP 4,32 ppm khơng paraben, cho v|o bình định mức 100 Dung dịch đối chiếu Hút xác ml dung dịch đối chiếu gốc MP, ml dung dịch đối chiếu gốc EP; 0,7 ml dung dịch đối chiếu gốc PP; 0,7 ml dung dịch đối chiếu gốc BP 0,45 ml dung dịch đối chiếu gốc isoBP, cho v|o bình định mức 10 ml, thêm dung môi pha mẫu đến vạch, lắc đều, thu dung dịch có nồng độ MP EP khoảng 40 ppm, PP BP khoảng 14 ppm isoBP khoảng ppm Dung dịch đối chiếu Hút xác 625 µl dung dịch đối chiếu gốc hỗn hợp paraben, cho v|o bình định mức 10 ml, thêm dung mơi pha mẫu đến vạch, lắc đều, thu dung dịch có nồng độ MP EP khoảng 40 ppm, PP BP khoảng 14 ppm, isoBP khoảng 0,27 ppm Dung dịch mẫu kem khơng paraben Cân xác khoảng 1000 mg mẫu kem ml Hút xác 10 ml dung dịch đối chiếu gốc MP, 10 ml dung dịch đối chiếu gốc EP; ml dung dịch đối chiếu gốc PP; ml dung dịch đối chiếu gốc BP; 4,5 ml dung dịch đối chiếu gốc isoBP; thêm ml dung dịch H2SO4 M, thêm dung môi pha mẫu đến vạch, lắc đều, siêu }m 10 ph t, đun c{ch thủy 60oC khoảng ph t, để yên tủ lạnh sau để ổn định nhiệt độ phòng khoảng 30 phút, lọc qua màng lọc PTFE 0,45 µm Mẫu trắng Pha động dung mơi pha mẫu Phƣơng pháp nghiên cứu Dựa v|o đặc tính paraben chất phân cực, đồng thời tham khảo số quy trình định lượng đồng thời paraben kỹ thuật HPLC(3-5), kỹ thuật sắc ký pha đảo với hệ dung môi phân cực áp dụng với điều kiện sắc ký ban đầu sau: cột sắc ký Phenomenex Gemini-NX C18 (150 x 4,6 mm; m), đầu dò PDA, bước sóng phát 254 nm, thể tích tiêm mẫu 10 µl Tiến hành khảo sát số điều kiện sắc ký ảnh hưởng đến qu{ trình ph}n tích c{c paraben hệ dung môi, tỷ lệ pha động, pH, nhiệt độ cột, v.v Sau tìm điều kiện sắc ký thích hợp, tiến hành thẩm định quy trình phân tích bao gồm khảo sát tính phù hợp hệ thống, tính đặc hiệu, Cân xác khoảng 1000 mg kem khơng giới hạn định lượng, giới hạn phát hiện, hiệu paraben, cho v|o bình định mức 100 ml, thêm suất chiết, tính tuyến tính miền giá trị, độ ml dung dịch H2SO4 M, thêm dung mơi pha x{c v| độ đ ng Quy trình sau mẫu đến vạch, lắc đều, siêu }m 10 ph t, đun thẩm định ứng dụng để kiểm tra cách thủy 60oC khoảng ph t, để yên paraben số chế phẩm kem bơi da có tủ lạnh sau để ổn định nhiệt độ thị trường phòng khoảng 30 phút, lọc qua màng lọc PTFE 0,45 µm Chuyên Đề Dƣợc 439 Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số * 2018 Nghiên cứu Y học KẾT QUẢ Khảo sát điều kiện sắc ký Bảng 2: Kết khảo sát hệ dung môi pha động Tỷ lệ dung mơi Tốc độ dòng Thời gian sắc Độ phân giải Hệ số bất đối pha động (ml/phút) ký (phút) BP IsoBP pic 10:60:25:5 1,0 28 1,91 1,1-1,2 MeOH – Nƣớc – ACN – THF 15:60:20:5 1,0 23,5 1,94 1,1-1,2 ACN – Nước acid acetic pH 35:65 0,8 24 1,73 1,1-1,2 Pha động Hình 1: Sắc ký đồ mẫu đối chiếu điều kiện pha động MeOH - nước - ACN - THF (10:60:25:5) Độ tinh khiết pic h ng đạt Đạt Đạt Hình 2: Sắc ký đồ mẫu đối chiếu điều kiện pha động MeOH - nước - ACN - THF (15:60:20:5) Hình 3: Sắc ký đồ mẫu đối chiếu điều kiện pha động ACN - nước acid acetic pH (35:65) lựa chọn, tiếp tục khảo sát tỷ lệ dung môi Nhận xét: MP, EP v| PP tách hoàn pH pha động đồng thời điều chỉnh tốc độ tồn hệ dung mơi Tuy nhiên, dòng nhiệt độ cột để lựa chọn điều hệ dung môi ACN – nước acid acetic pH kiện sắc ký thích hợp lựa chọn để tiếp tục khảo sát gồm thành phần, thời gian phân tích ngắn, pic tinh khiết có hệ số bất đối nằm khoảng 0,8-1,5, đồng thời pic BP isoBP tách hồn tồn (Rs > 1,5) Bảng tóm tắt kết khảo sát với hệ pha động ACN - nước acid acetic điều kiện khác Hình đến hình minh họa sắc ký đồ dung dịch đối chiếu điều kiện khảo sát Với hệ ACN – nước acid acetic pH Bảng 3: Kết khảo sát với hệ ACN – nước acid acetic pH pH 3,75 pH Tỷ lệ 3,00 3,00 3,00 3,75 3,00 35:65 35:65 40:60 40:60 45:55 440 Tốc độ dòng (ml/phút) 1 0,8 1 Nhiệt độ cột Thời gian sắc Độ phân giải Hệ số bất đối o ( C) ký (phút) BP IsoBP pic 18,0 1,69 1,1-1,3 40 16,8 1,59 1,1-1,3 14,7 1,43 1,0-1,1 12,4 1,54 1,0-1,2 9,8 1,17 - Độ tinh khiết pic Đạt Đạt Đạt Đạt h ng đạt Chuyên Đề Dƣợc Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số * 2018 Hình 4: Sắc ký đồ mẫu đối chiếu điều kiện pha động ACN - nước acid acetic pH (35:65),1 ml/phút Nghiên cứu Y học Hình 5: Sắc ký đồ mẫu đối chiếu điều kiện pha động ACN - nước acid acetic pH (35:65), ml/phút, nhiệt độ cột 40oC Hình 6: Sắc ký đồ mẫu đối chiếu điều kiện pha Hình 7: Sắc ký đồ mẫu đối chiếu điều kiện pha động ACN - nước acid acetic pH (40:60); 0,8 ml/phút động ACN - nước acid acetic pH 3,75 (40:60), 1ml/phút Hình 8: Sắc ký đồ mẫu đối chiếu điều kiện pha động ACN - nước acid acetic pH (45:55), ml/phút Nhận xét: MP, EP v| PP tách hoàn toàn Như điều kiện sắc ký thích hợp để định c{c điều kiện sắc ký Tuy nhiên, hệ lượng đồng thời paraben phương ph{p pha động ACN – nước acid acetic pH (35:65) HPLC với đầu dò PDA là: cột sắc ký tốc độ dòng ml/ph t lựa chọn độ Phenomenex Gemini-NX C18 (150 x 4,6 mm; phân giải BP isoBP cao nhất, thời gian m), đầu dò PDA, bước sóng phát 254 nm, sắc ký 20 phút, pic paraben đạt pha động acetonitril – nước acid acetic pH độ tinh khiết có hệ số bất đối nằm (35:65), tốc độ dòng 1,0 ml/phút, thể tích tiêm khoảng 0,8 – 1,5 mẫu 10 µl Chuyên Đề Dƣợc 441 Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số * 2018 Nghiên cứu Y học Thẩm định quy trình Khảo sát tính phù hợp hệ thống Bảng 4: Kết khảo sát tính phù hợp hệ thống mẫu giả lập (n=6) TB RSD TB EP RSD TB PP RSD TB isoBP RSD TB BP RSD MP tR (phút) 3,837 0,08% 5,790 0,10% 9,772 0,07% 16,703 0,08% 17,595 0,07% S (µVxgiây) 2495607 0,16% 2426904 0,17% 820287 0,18% 12022 1.05% 734935 0,28% As 1,35 0,23% 1,24 0,34% 1,27 0,29% 1,14 0,88% 1,1 0,30% Rs 3,06 0,62% 11,01 0,53% 15,30 0,71% 18,24 0,56% 1,78 1,12% Nhận xét: RSD thông số sắc ký chất phân tích mẫu giả lập nhỏ 2%, độ phân giải lớn 1,5 v| hệ số bất đối nằm khoảng 0,8 – 1,5 Vậy quy trình định lượng đồng thời paraben có tính phù hợp hệ thống Tính đặc hiệu Kết khảo s{t tính đặc hiệu cho thấy: sắc ký đồ mẫu trắng mẫu kem không paraben không xuất pic khoảng thời gian lưu tương ứng với thời gian lưu paraben mẫu đối chiếu Sắc ký đồ mẫu giả lập xuất pic có thời gian lưu tương đương thời gian lưu paraben sắc ký đồ mẫu đối chiếu Trên sắc ký đồ mẫu giả lập pic paraben tách hoàn toàn Phổ UV-Vis thời gian lưu pic paraben sắc ký đồ mẫu giả lập giống với phổ UV-Vis thời gian lưu pic tương ứng sắc ký đồ mẫu đối chiếu Hình 9: Sắc ký đồ pha động Hình 10: Sắc ký đồ dung mơi pha mẫu Hình 11: Sắc ký đồ mẫu kem khơng paraben Hình 12: Sắc ký đồ mẫu đối chiếu Hình 13: Sắc ký đồ mẫu giả lập Khoảng tuyến tính, giới hạn phát (LOD), giới hạn định lượng (LOQ), hiệu suất chiết, độ xác độ 442 Chuyên Đề Dƣợc Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số * 2018 Nghiên cứu Y học Bảng 5: Kết khảo sát khoảng tuyến tính, LOD, LOQ, hiệu suất chiết, độ xác độ Phƣơng trình hồi qui Khoảng tuyến tính (ppm); R LOD (ppm) LOQ (ppm) * Hiệu suất chiết (RSD) (n=9) Độ độ * xác (RSD) (n=9) MP ŷ = 59646x EP ŷ = 56617x 24 - 64; 0,9995 24 - 64; 0,9992 0,017 0,050 92,45%-100,00% (0,16%-0,92%) 101,02% – 108,47% (0,72% - 1,19%) PP isoBP BP ŷ = 50186x ŷ = 42468x ŷ = 45870x 8,4 - 22,4; 0,9994 0,16 - 0,43; 0,9995 8,4 - 22,4; 0,9995 0,044 0,047 0,090 0,130 0,140 0,270 94,26%-100,83% 93,67%-100,83% 91,21%-96,18% (0,15%-0,35%) (0,18%-0,43%) (1,05%-1,65%) 97,94%-105,58% 99,28%-107,90% 95,76%-105,55% (0,26%-1,10%) (0,64%-1,31% (1,29%-1,55%) 0,140 0,420 97,77%-105,40% (0,28%-0,40%) 94,20%-101,18% (0,26%-1,25%) * Hiệu suất chiết, độ xác độ thực mức nồng độ 80%, 100% 120% giới hạn cho phép MP, RP, PP, BP isoBP mức nồng độ LOQ Các pic paraben sắc ký đồ mẫu đối chiếu và mẫu giả lập tinh khiết Vậy quy trình ph}n tích có tính đặc hiệu Hình đến hình 13 minh họa kết khảo s{t tính đặc hiệu ổn định (RSD < 2%) Phương ph{p ph}n tích đạt yêu cầu độ đ ng (tỷ lệ hồi phục khoảng 85% - 109%) v| độ xác (RSD < 5,3%)(6) Bảng trình bày kết xử lý thống kê cho thấy giá trị F paraben lớn F0,05 nên phương trình hồi quy tương thích Giá trị t hệ số B paraben lớn t0,05 nên giá trị B có ý nghĩa Gi{ trị t hệ số Bo paraben nhỏ t0,05 nên hệ số Bo khơng có ý nghĩa Hệ số tương quan r có gi{ trị lớn 0,999 Hiệu suất chiết paraben mẫu giả lập cao (> 90%) Như quy trình định lượng đồng thời paraben phương ph{p sắc ký lỏng hiệu cao với đầu dò PDA có tính đặc hiệu, khoảng tuyến tính rộng, giới hạn phát giới hạn định lượng thấp, hiệu suất chiết cao ổn định, đạt độ x{c v| độ đ ng nên ứng dụng để định lượng paraben chế phẩm kem bơi da Ứng dụng quy trình định lƣợng paraben số chế phẩm kem bơi da có thị trƣờng ảng Kết định lượng paraben chế phẩm kem bôi da (n=4) Mẫu kem KN1 Xuất xứ Việt Nam Số lô Hạn dùng 20/5/2018 KN2 Việt Nam 220816 RJY 09/09/2019 KN3 KN4 Việt Nam Thái Lan 001 LOT30 04/01/2018 1/11/2019 KN5 Thái Lan 012016 5/11/2019 KN6 Việt Nam 67056103 06/06/2018 Nhận xét: Kết khảo sát cho thấy mẫu kem sử dụng đ ng c{c paraben công bố nhãn ngoại trừ sản phẩm kem bôi da KN3 (sử dụng MP PP làm chất bảo quản công bố nhãn chất bảo quản MP) Tất sản phẩm có h|m lượng paraben nhỏ mức giới hạn cho phép Khơng có mẫu kem chứa paraben cấm isobutylparaben Chuyên Đề Dƣợc Chất bảo quản công bố nhãn Không công bố Methylparaben Propylparaben Methylparaben Propylparaben Methylparaben Propylparaben Methylparaben Propylparaben Hàm lượng paraben MP: < LOD 0,20% 0,10% MP: 0,15%; PP: 0,08% 0,13% 0,15% 0,08% 0,14% 0,05% BÀN LUẬN Có nhiều cơng trình nghiên cứu định lượng đồng thời paraben mỹ phẩm, có đa dạng thành phần pha động từ MeOH, ACN đến THF, đệm phosphat, v.v với đầu dò thay đổi từ PDA, MS đến đầu dò quang hóa, v.v Thời gian tiến hành sắc ký thay đổi tùy theo số lượng paraben 443 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số * 2018 cần định lượng thành phần pha động Nhìn chung, nghiên cứu tìm điều kiện sắc ký thích hợp để tách hỗn hợp paraben, có paraben đồng phân vị trí (như isobutylparaben butylparaben) với ưu điểm sau: - Thời gian phân tích rút ngắn xuống 18 phút phân tích đồng thời paraben So với đề tài định lượng đồng thời paraben (MP, EP, PP, BP) với thời gian phân tích thường từ 25 đến 30 phút(1) - Chế độ rửa giải đẳng dòng, sử dụng hệ dung môi đơn giản bao gồm acetonitril nước acid acetic pH Trong số cơng trình định lượng đồng thời chất bảo quản nhóm paraben cơng bố, có tác giả sử dụng pha động có đệm phosphat(1) nên cần tăng thời gian rửa hệ thống sắc ký, cần chuyển đổi cẩn thận kênh dung môi để tránh gây kết tủa muối hệ thống, gây ăn mòn hệ thống sắc ký; thời gian rửa cột phải kéo dài Mặt khác, loại mỹ phẩm có thành phần đa dạng, chất phức tạp nên việc thẩm định quy trình mẫu kem khơng paraben cụ thể chưa mang tính đại diện cho tất mẫu kem Các paraben phép sử dụng MP, EP, PP, BP có giá thành rẻ, hiệu lực diệt khuẩn cao hàm lượng nhỏ nên nhà sản xuất không d{m “mạo hiểm” sử dụng paraben cấm sản phẩm họ KẾT LUẬN butylparaben, isobutylparaben phương pháp HPLC với đầu dò PDA xây dựng thẩm định, sử dụng chương trình rửa giải đẳng dòng v| pha động khơng có dung dịch đệm Quy trình chứng minh có tính đặc hiệu, khoảng tuyến tính rộng, giới hạn phát giới hạn định lượng thấp, hiệu suất chiết cao ổn định, đạt độ x{c v| độ đ ng Quy trình ứng dụng để kiểm tra paraben số chế phẩm kem bôi da có thị trường TÀI LIỆU THAM KHẢO Akhtar MJ, Khan S, Roy IM, Jafri IA (1996), “High performance liquid chromatographic determination of phenoxetol, methyl paraben, ethyl paraben, n-propyl paraben, iso-butyl paraben, n-butyl paraben and croconazole.HCl”, Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 14, 1609-1613 Annexes of The Asean Cosmetic Directive (2016), Annex VI – List of preservatives allowed for use in cosmetic products, p Asean (2005), Identification and Determination of 2-phenoxyethanol, methyl, ethyl, propyl, and butyl 4-hydroxybenzoate in cosmetic products by TLC and HPLC, pp 1-10 Bộ Y Tế, Cục Quản lý Dược Việt Nam (2015), Công văn số 6577/QLD-MP việc cập nhật quy định chất sử dụng mỹ phẩm, ngày 13/04/2015 Ludwig H (2007), “Validation and qualification in analytical laboratories, second edition”, pp 144, 146 Trần Công Dũng, Đặng Văn Kh{nh (2014), “Nghiên cứu xây dựng quy trình định tính định lượng đồng thời số chất bảo quản nhóm 4-hydroxybenzoat (paraben) mỹ phẩm”, Đề tài nghiên cứu khoa học Trung tâm Kiểm nghiệm Thuốc, Mỹ phẩm, Thực phẩm Thừa Thiên Huế Ngày nhận báo: 18/10/2017 Ngày phản biện nhận xét báo: 01/11/2017 Ngày báo đăng: 15/03/2018 Quy trình định lượng đồng thời methylparaben, ethylparaben, propylparaben, 444 Chuyên Đề Dƣợc ... phẩm kem bơi da Ứng dụng quy trình định lƣợng paraben số chế phẩm kem bơi da có thị trƣờng ảng Kết định lượng paraben chế phẩm kem bôi da (n=4) Mẫu kem KN1 Xuất xứ Việt Nam Số lô Hạn dùng 20/5/2018... “Nghiên cứu xây dựng quy trình định tính định lượng đồng thời số chất bảo quản nhóm 4-hydroxybenzoat (paraben) mỹ phẩm , Đề tài nghiên cứu khoa học Trung tâm Kiểm nghiệm Thuốc, Mỹ phẩm, Thực phẩm Thừa... cho thấy mẫu kem sử dụng đ ng c{c paraben công bố nhãn ngoại trừ sản phẩm kem bôi da KN3 (sử dụng MP PP làm chất bảo quản công bố nhãn chất bảo quản MP) Tất sản phẩm có h|m lượng paraben nhỏ mức

Ngày đăng: 22/01/2020, 07:17

Từ khóa liên quan

Tài liệu cùng người dùng

  • Đang cập nhật ...

Tài liệu liên quan