Đang tải... (xem toàn văn)
Nghiên cứu có mục tiêu nhằm xác định tỷ lệ gen tổ hợp BCR/ABL ở bệnh nhân bạch cầu kinh dòng hạt bằng kỹ thuật khuếch đại chuỗi gen. So sánh tỷ lệ gen tổ hợp BCR/ABL (kỹ thuật PCR) với tỷ lệ nhiễm sắc thể philadelphia (kỹ thuật nuôi cấy tế bào) ở bệnh nhân bạch cầu kinh dòng hạt.
Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 17 * Số 5 * 2013 Nghiên cứu Y học ỨNG DỤNG KỸ THUẬT REVERSE TRANSCRIPTASE‐PCR ĐỂ PHÁT HIỆN TỔ HỢP GEN BCR/ABL TRONG BỆNH BẠCH CẦU KINH DỊNG HẠT TẠI BỆNH VIỆN TRUNG ƯƠNG HUẾ Bùi Thị Thu Thanh*, Nguyễn Duy Thăng*, Nguyễn Thị Hồng Hạnh*, Ngơ Tứ Cương*, Hồ Thành*, Nguyễn Văn Sơn*, Nguyễn Thị Thu Hiền*, Phan Hồng Duy*, Hồng Thị Thanh Trang*, Trần Ngọc Vũ* Bạch cầu kinh dòng hạt là bệnh lý hay gặp nhất trong hội chứng tăng sinh tủy, được đặc trưng bởi sự tăng sinh nổi trội của bạch cầu dòng hạt và sự hiện diện của nhiễm sắc thể Philadelphia. Nhiễm sắc thể Philadelphia có khoảng hơn 90% trường hợp và được xem là tiêu chuẩn vàng trong chẩn đốn bạch cầu kinh dòng hạt. Trong thời đại điều trị bệnh bằng liệu pháp nhắm đích dựa trên cơ chế bệnh sinh của bệnh, đòi hỏi phải hiện đại hóa các kỹ thuật khảo sát nhiễm sắc thể Philadelphia. Khuếch đại chuỗi gen là phương pháp tiên tiến, được ứng dụng để xác định sự tồn tại của tổ hợp gen BCR/ABL trong bệnh bạch cầu kinh dòng hạt. Đây là kỹ thuật có độ nhạy và độ đặc hiệu cao, giúp cho việc chẩn đốn bệnh bạch cầu kinh dòng hạt nhanh chóng và chính xác hơn. Mục tiêu: Xác định tỷ lệ gen tổ hợp BCR/ABL ở bệnh nhân bạch cầu kinh dòng hạt bằng kỹ thuật khuếch đại chuỗi gen. So sánh tỷ lệ gen tổ hợp BCR/ABL (kỹ thuật PCR) với tỷ lệ nhiễm sắc thể Philadelphia (kỹ thuật ni cấy tế bào) ở bệnh nhân bạch cầu kinh dòng hạt. Đối tượng và phương pháp: 30 bệnh nhân được chẩn đốn bạch cầu kinh dòng hạt dựa vào hình thái học tế bào đến điều trị tại khoa Huyết học Lâm sàng‐Bệnh viện Trung ương Huế. Những bệnh nhân này được tiến hành đồng thời 3 kỹ thuật: ni cấy tế bào tủy xương tìm NST Ph, ni cấy tế bào máu ngoại vi tìm NST Ph và kỹ thuật khuếch đại chuỗi gen tìm tổ hợp gen BCR/ABL. Kết quả: Tỷ lệ NST Ph bằng phương pháp ni cấy tế bào là 70%, tỷ lệ BCR/ABL bằng phương pháp PCR là 96,7%. Kết luận: Khi khảo sát tỷ lệ NST Ph hoặc tỷ lệ tổ hợp gen BCR/ABL, có sự khác biệt có ý nghĩa thống kê giữa hai phương pháp ni cấy tế bào và phương pháp PCR với p 0,05). Với kỹ thuật RT‐PCR phát hiện tổ hợp gen BCR/ABL, 100% các mẫu trong nghiên cứu của chúng tôi đều thành công. Điều này khẳng định sự ưu việt của phương pháp PCR so với phương pháp ni cấy tế bào cổ điển. Bảng 5. Tỷ lệ Ph (+) hoặc gen tổ hợp BCR/ABL (+) theo từng phương pháp Kết Dương tính Âm tính Tổng cộng Nuôi cấy TB tủy 20 (87%) (13%) 23 Nuôi cấy TB máu 18 (66,7%) (33,3%) 27 PCR 29 (96,7%) (3,3%) 30 Kết quả cho thấy: Ph (+) với kỹ thuật nuôi cấy tủy là 20 trường hợp và với kỹ thuật nuôi cấy máu là 18 trường hợp. Khi kết hợp cả hai phương pháp cấy tủy xương và cấy máu thì có 21 trường hợp (70%) Ph (+). Mặc dù tỷ lệ thành cơng khi ni cấy cao hơn so với cấy tủy, nhưng tỷ lệ NST Ph (+) trong cấy máu lại thấp hơn. Điều này có lẽ do loại PHA sử dụng trong cấy máu chưa mang lại hiệu quả tối ưu. Gen tổ hợp BCR/ABL (+) với kỹ thuật PCR là 96,7% → PCR có độ nhạy cao. PCR đã góp phần chẩn đốn sớm và chính xác bệnh lý CML, đồng thời là tiêu chuẩn vàng để điều trị nhắm đích (ức chế tyrosine kinase) nhằm mục đích điều trị khỏi bệnh cho bệnh nhân. Bảng 6. Kết quả thu được của các phương pháp Ph1 BCR/ABL Dương tính (%) Âm tính thất bại kỹ thuật (%) Nuôi cấy PCR tế bào 70 96,7 30 3,3 p K < 0,05 0,18 Kết quả nghiên cứu của chúng tơi cho thấy: 70% có Ph (+) với kỹ thuật ni cấy tế bào. Bằng 210 phương pháp RT‐PCR, tỷ lệ BCR/ABL (+) là 96,7%. Do có độ nhạy cao, PCR có tỷ lệ gây dương tính giả cao. Tuy nhiên, vấn đề này có thể được khắc phục bằng một số biện pháp như: thực hiện các cơng đoạn ly trích, phản ứng PCR, điện di sản phẩm PCR ở từng địa điểm riêng biệt bằng các dụng cụ riêng biệt; dùng tia tử ngoại để loại bỏ các sản phẩm còn lại từ những lần thao tác trước; chia nhỏ các thành phần của phản ứng sao cho vừa đủ với một hoặc hai lần thao tác. Có sự khác biệt có ý nghĩa thống kê giữa tỷ lệ Ph (+) của phương pháp nuôi cấy tế bào và BCR/ABL(+) của PCR (p