Đang tải... (xem toàn văn)
Nội dung bài viết với mục tiêu: Ứng dụng kỹ thuật multiplex ligation‐dependent probe amplification (MLPA) chẩn đoán đột biến mất đoạn gen alpha globin. Nghiên cứu tiến hành trên 36 bệnh nhân được chẩn đoán alpha thalassemia dựa vào triệu chứng lâm sàng và cận lâm sàng, 30 người bình thường được dùng để chuẩn kỹ thuật và làm mẫu đối chứng.
Nghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ bản của Số 4 * 2013 NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG KỸ THUẬT MLPA ĐỂ CHẨN ĐỐN ĐỘT BIẾN MẤT ĐOẠN GEN ALPHA GLOBIN GÂY BỆNH ALPHA THALASSEMIA Lê Trần Hồng Phúc*, Đỗ Thị Thanh Thủy**, Hồng Anh Vũ**, Nguyễn Thị Băng Sương** TĨM TẮT Mở đầu: Bệnh thiếu máu α thalassemia là một căn bệnh thiếu máu tan máu do di truyền khá phổ biến. Ngun nhân gây bệnh là do đột biến gen α globin, đột biến gen gây giảm hoặc mất tổng hợp chuỗi α globin. Việc phát hiện sớm đột biến gen gây bệnh có ý nghĩa rất lớn đối với điều trị cũng như giúp chẩn đốn trước sinh và tư vấn di truyền. Mục tiêu: Ứng dụng kỹ thuật Multiplex Ligation‐dependent Probe Amplification (MLPA) chẩn đốn đột biến mất đoạn gen alpha globin. Đối tượng và phương pháp nghiên cứu: 36 bệnh nhân được chẩn đốn alpha thalassemia dựa vào triệu chứng lâm sàng và cận lâm sàng, 30 người bình thường được dùng để chuẩn kỹ thuật và làm mẫu đối chứng. DNA của tất cả các mẫu được phân tích bằng kỹ thuật MLPA và điện di mao quản trên máy Berman Coulter. Kết quả: Trong số 36 mẫu bệnh nhân tham gia nghiên cứu có 24 mẫu bị đột biến mất đoạn (chiếm tỷ lệ 66,67%) và 12 mẫu khơng mang gen đột biến (chiếm 33,33%). Kết luận: Nghiên cứu ứng dụng thành cơng kỹ thuật MLPA phát hiện đột biến mất đoạn gen alpha globin gây bệnh alpha thalassemia, giúp ích cho việc chẩn đốn bệnh, phát hiện các đột biến trên vùng gen α globin, là cơ sở vững chắc cho chẩn đốn trước sinh bệnh alpha thalassemia. Từ khóa: bệnh alpha thalassemia, MLPA, đột biến mất đoạn, gen α globin. ABSTRACT APPLICATION OF MLPA (Multiplex Ligation‐dependent Probe Amplification) IN DIAGNOSTIC ALPHA‐ GLOBIN GENES DELETION MUTATION CAUSING ALPHA THALASSEMIA Le Tran Hoang Phuc, Do Thi Thanh Thuy, Hoang Anh Vu, Nguyen Thi Bang Suong * Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Vol. 17 ‐ Supplement of No 4 ‐ 2013: 29 ‐ 35 Introduction: Alpha thalassemia is a blood disorder that reduces the production of hemoglobin. Alpha thalassemia typically results from deletions involving the α globulin genes and decreased alpha‐globin production. Objectives: Multiplex ligation‐dependent probe amplification (MLPA) has been used to detect deletions and mutations of the α‐globin gene for diagnosis of α‐thalassemia Patients and Methods: Blood samples were collected from 36 thalassemia A patients. 30 samples of people without thalassemia were used as control the experiments. MLPA assay were performed using SALSA MLPA P140 HBA probe mix (MRC ‐ Holland) Kit. Results: We report 24 (66.67%) deletion mutants and 12 (33.33%) cases without deletions on α‐globin gene. Conclusion: MLPA were applied successfully in identification of deletion mutants on α‐globin genes and in * Khoa sinh‐ Đại học Sư phạm TP. Hồ Chí Minh ** Trung tâm Y sinh học Phân tử‐ Đại học Y Dược TP.HCM Tác giả liên lạc: TS.BS. Nguyễn Thị Băng Sương, ĐT: 0914007038, Email: suongnguyenmd@gmail.com. 30 Chuyên Đề Điều Dưỡng Kỹ Thuật Y Học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ bản của Số 4 * 2013 Nghiên cứu Y học diagnostic α thalassemia. Keywords: alpha thalassemia, MLPA, deletion, α‐globin genes. cả 2 gen trên cùng allele thì sẽ gây dạng α0 ĐẶT VẤN ĐỀ thalassemia(3). Ở Việt Nam đột biến mất đoạn Bệnh thiếu máu alpha thalassemia là một gây bệnh alpha thalassemia thường gặp là dạng căn bệnh thiếu máu tan máu do di truyền khá ‐‐SEA (Đông Nam Á), dạng ‐α4.2 và dạng ‐α3.7. phổ biến, đây là rối loạn di truyền đơn gen Phát hiện đột biến gen gây bệnh có ý nghĩa rất thường gặp nhất, bệnh di truyền theo quy luật lớn đối với điều trị cũng như giúp chẩn đoán alen lặn trên nhiễm sắc thể thường. Thalassemia trước sinh và tư vấn di truyền. Các kỹ thuật sinh được phát hiện ở 60 nước, tỷ lệ mắc bệnh cao học phân tử thường được sử dụng để xác định nhất ở vùng Địa Trung Hải, vùng Bắc và Tây đột biến ở bệnh nhân thalassemia là kỹ thuật Phi, Trung Đơng, Nam Á và Đơng Nam Á. Mỗi PCR đơn mồi, PCR đa mồi,… Gần đây, kỹ thuật năm, trên thế giới có khoảng 100.000 em bé sinh MLPA (Multiplex Ligation‐dependent Probe ra mắc bệnh. Các nhà khoa học tiên đoán Amplification) ra đời và được áp dụng rộng rãi thalassemia sẽ trở thành bệnh lý tồn cầu(18). trong chẩn đốn mất đoạn và lặp đoạn gen nói Ngun nhân gây bệnh là do đột biến gen α chung hay bệnh alpha thalassemia nói riêng. Kỹ globin, đột biến gen gây giảm hoặc mất tổng thuật MLPA có ưu điểm là dễ thực hiện, cho kết hợp chuỗi α globin, trong khi đó q trình tổng quả nhanh và có độ chính xác cao(1). Kỹ thuật hợp chuỗi beta globin vẫn diễn ra bình thường. này còn giúp chẩn đốn được kiểu gen dị hợp Ở người bình thường 2 loại chuỗi α globin và tử. Vì vậy mà chúng tơi thực hiện đề tài này với beta globin cặp đơi với nhau theo tỷ lệ 1:1, như mục tiêu: Ứng dụng kỹ thuật MLPA giúp chẩn vậy bệnh nhân alpha thalassemia sẽ có sự mất đốn đột biến mất đoạn gen alpha globin gây bệnh cân bằng giữa các chuỗi globin. Loại chuỗi beta alpha thalassemia. globin trở nên dư thừa vì khơng được cặp đơi, sẽ ĐỐI TƯỢNG ‐PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU tích tụ trong tế bào hồng cầu và gây phá hủy hồng cầu(17). Bệnh nhân cần phải được truyền Đối tượng nghiên cứu máu thường xuyên, có thể gây ra các biến chứng ‐ Nhóm nghiên cứu: 36 bệnh nhân được khác như: lá lách to, sỏi mật, tăng nguy cơ chẩn đoán alpha thalassemia dựa vào triệu nhiễm trùng, vàng da,… Đặc biệt thai nhi mắc chứng lâm sàng và cận lâm sàng. Hemoglobin Bart (alpha thalassemia thể nặng) ‐ Nhóm chứng: 30 người bình thường. thì phù nhau thai, gan lách to, thai chết lưu Được dùng để chuẩn kỹ thuậtu đối chứng (người bình thường) để phát hiện đột biến mất đoạn gen α globin. Phân tích việc khảo sát các probe khuếch đại gen α globin: trường hợp bệnh nhân khơng bị đột biến mất đoạn gen α globin thì tỷ lệ chiều cao đỉnh probe tương ứng của bệnh nhân/mẫu đối chứng xấp xỉ bằng 1. Nếu chiều cao đỉnh probe của bệnh nhân/mẫu đối chứng giảm còn khoảng 0,75 thì bệnh nhân bị đột biến mất 1 gen α globin, nếu giảm còn khoảng 0,5 thì bệnh nhân bị đột biến mất 2 gen α globin, nếu giảm còn 0,25 thì bệnh nhân bị đột biến mất 3 gen α globin. KẾT QUẢ Kết quả của bệnh nhân HBA10 Hình 1. Kết quả phân tích gen alpha thalassemia bệnh nhân HBA10. Màu nhạt (bên trái): mẫu đối chứng. Màu đậm (bên phải): mẫu bệnh nhân HBA10. Nhận xét: tỷ lệ chiều cao đỉnh probe của bệnh nhân/mẫu đối chứng ở các probe có số thứ tự 20, 32 21 có giá trị gần bằng 1. Trong khi đó tỷ lệ các probe có số thứ tự 1, 2, 3, 5, 12, 14, 18, 24, 25 có Chun Đề Điều Dưỡng Kỹ Thuật Y Học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ bản của Số 4 * 2013 giá trị xấp xỉ 0,5. Các chỉ số này phù hợp với chỉ số mong đợi về các dạng đột biến SALSA MLPA promix P140‐B4 HBA đưa ra và chứng tỏ mẫu Nghiên cứu Y học HBA10 có đột biến gây bệnh thalassemia dạng ‐‐ SEA/αα. Kết quả của bệnh nhân HBA30 Hình 2. Kết quả phân tích gen alpha thalassemia bệnh nhân HBA30. Màu nhạt (bên trái): mẫu đối chứng. Màu đậm (bên phải): mẫu bệnh nhân HBA30. Nhận xét: Tỷ lệ chiều cao đỉnh probe của bệnh nhân/mẫu đối chứng ở các probe có số thứ tự 11, 17, 18, 20, 21 có giá trị gần bằng 1. Trong khi đó tỷ lệ probe có số thứ tự 12, 14 có giá trị xấp xỉ 0,5 và tỷ lệ probe có số thứ tự 24 có giá trị xấp xỉ 0,75 Các chỉ số này phù hợp với chỉ số mong đợi về các dạng đột biến SALSA MLPA promix P140‐B4 HBA đưa ra và chứng tỏ mẫu HBA30 có đột biến gây bệnh thalassemia dạng dị hợp ‐α4.2/αα Kết quả của bệnh nhân HBA34 Hình 3. Kết quả phân tích gen alpha thalassemia bệnh nhân HBA34. Màu nhạt (bên trái): mẫu đối chứng. Màu đậm (bên phải): mẫu bệnh nhân HBA34. Nhận xét: Tỷ lệ chiều cao đỉnh probe của bệnh nhân/mẫu đối chứng ở các probe có số thứ Chuyên Đề Điều Dưỡng Kỹ Thuật Y Học tự 20, 21 có giá trị gần bằng 1. Trong khi đó tỷ lệ các probe có số thứ tự 1, 2, 3, 5, 12, 14, 18, 24, 25 33 Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ bản của Số 4 * 2013 Nghiên cứu Y học có giá trị xấp xỉ 0,5. Các chỉ số này phù hợp với chỉ số mong đợi về các dạng đột biến SALSA MLPA promix P140‐B4 HBA đưa ra và chứng tỏ mẫu HBA10 có đột biến gây bệnh thalassemia dạng ‐‐ SEA/αα. Tỷ lệ đột biến mất đoạn ở bệnh nhân alpha thalassemia Bảng 1: Tỷ lệ đột biến mất đoạn ở bệnh nhân alpha thalassemia Bệnh nhân Không đột biến đoạn Bị đột biến đoạn Tổng số Số mẫu (n) 12 24 36 Tỷ lệ (%) 33.33 66.67 100 Bảng 2: Sự phân bố vị trí bị mất đoạn của gen alpha thalassemia Đột biến Mất đoạn SEA Mất đoạn – α3.7 Mất đoạn –α4.2 Tổng số Số lượng bệnh nhân 13 24 Tỷ lệ % 54.17 33.33 12.50 100 Nhận xét: Trong số 36 mẫu bệnh nhân tham gia nghiên cứu có 24 mẫu bị đột biến mất đoạn (chiếm tỷ lệ 66,67%) và 12 mẫu khơng mang gen đột biến (chiếm 33,33%). Trong số 24 mẫu bị đột biến mất đoạn có 13 mẫu mất đoạn SEA (chiếm 54,17%), 8 mẫu mất đoạn – α3.7 (chiếm 33,33%) và 3 mẫu mất đoạn – α4.2 (chiếm 12,50%). BÀN LUẬN Phát hiện sớm bệnh thalassemia có thể giúp điều trị sớm, tránh các biến chứng của bệnh và nguy cơ tử vong. Đột biến gây bệnh alpha thalassemia thường gặp là đột biến mất đoạn gen alpha globin nên các kĩ thuật sinh học phân tử thường được sử dụng để xác định đột biến ở bệnh nhân thalassemia là multiplex PCR, HPLC…(2,9). Gần đây, kỹ thuật MLPA ra đời và được áp dụng rộng rãi trong chẩn đoán mất đoạn gen gây bệnh alpha thalassemia với nhiều ưu điểm là dễ thực hiện, cho kết quả nhanh và có độ chính xác cao(1). Trong kết quả của kỹ thuật MLPA, mỗi một đỉnh tín hiệu (peak) thể hiện sản phẩm của một 34 probe (khi một probe nào đó bắt cặp được với trình tự DNA đích, nối lại được thì mới được khuếch đại và xuất hiện tín hiệu)(16). Chiều cao của mỗi peak cho thấy sự liên quan với số lượng bản sao (copy) của trình tự DNA bổ sung với probe(12). Nếu bệnh nhân bị đột biến mất đoạn cả 4 gen α globin thì khơng có hiện tượng lai probe, khơng tạo thành đoạn dò hồn chỉnh và probe đó sẽ khơng được khuếch đại, do đó khi điện di mao quản sẽ không thấy xuất hiện đỉnh của probe. Tuy nhiên, đột biến này thường khơng gặp trong thực tế vì thai chết lưu trong tử cung. Nếu tỷ lệ chiều cao của probe mẫu bệnh nhân/mẫu chứng xấp xỉ là 0,75‐0,80 thì bệnh nhân mang đột biến mất đoạn tại probe đó ở 1 trong 4 gen α globin, nếu tỷ lệ này xấp xỉ bằng 0,35‐0,5 chứng tỏ bệnh nhân mất đoạn 2 gen α globin và mếu tỷ lệ là 0,25 nghĩa là bệnh nhân mất đoạn 3 trong 4 gen α globin. Trong kết quả MLPA của bệnh nhân HBA30 thể hiện trong hình 2, tỉ lệ probe số 24 có giá trị gần bằng 0.75 mà khơng phải là 0.5. Lý giải điều này, theo kit SALSA MLPA promix P140‐B4 HBA mà MRC‐Holland hướng dẫn thì probe số 24 dò tìm trình tự exon 3 ở cả 2 gen HBA1, HBA2 nên tỉ lệ điển hình cho đột biến mất đoạn ‐α4.2/αα, ‐α3.7/αα là 0,75 Dựa vào bảng các dạng đột biến mất đoạn gen HBA thường gặp và tỉ lệ chiều cao đỉnh của các probe mà SALSA MLPA promix P140‐B4 HBA (MRC‐Holland) đưa ra, kết hợp với hình ảnh chiều cao các đỉnh (trong hình 1, 2, 3: màu nhạt ‐bên trái là mẫu đối chứng; màu đậm ‐bên phải là mẫu bệnh nhân), cũng như số liệu về tỉ lệ chiều cao các đỉnh trong hình ảnh MLPA của mỗi mẫu nghiên cứu, cho thấy việc xác định kết quả dạng đột biến alpha thalassemia mà bệnh nhân mắc phải hoàn toàn phù hợp với triệu chứng lâm sàng và cận lâm sàng mà họ biểu hiện. Qua kết quả thu được từ 36 mẫu nghiên cứu, chúng tôi thấy rằng đột biến mất đoạn gen alpha globin gây bệnh alpha thalassemia khá phổ biến ở Việt Nam với các dạng đột biến thường gặp là dạng ‐‐SEA (Đơng Nam Á), dạng Chun Đề Điều Dưỡng Kỹ Thuật Y Học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ bản của Số 4 * 2013 – α3.7 và dạng –α4.2. Trong đó, đột biến có tần suất cao nhất la đột biến –SEA chiếm 54,17%; tiếp theo là đột biến dạng – α3.7chiếm 33,33% và cuối cùng là đột biến dạng –α4.2chiếm 12,5%. Lý Thị Thanh Hà (2010) đã nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật Multilex PCR và C‐ARMS PCR trong chẩn đoán trước và sau sinh bệnh alpha thalassemia tại Bệnh Viện Nhi Trung Ương. Trong kết quả nghiên cứu này có 58.8% đột biến dạng –SEA(11). Theo Lin M (2013) thì ở vùng Meizhou miền Nam Trung Quốc (7), đột biến dạng ‐‐SEA là khoảng 46.45%, mất đoạn – α3.7 là 7%, mất đoạn –α4.2 là 5%. Tác giả Liu SC(8) (2011) nghiên cứu về các bệnh liên quan đến Hemoglobin tại Đài Loan, ông cho rằng dạng đột biến thường gặp nhất của bệnh alpha thalassemia là đột biến dạng SEA (Southeast Asian) với tần số 87,79%, đột biến dạng – α3.7 chiếm 4,85%, đột biến dạng – α4.2 chiếm 1,41%. Một nghiên cứu khác của tác giả Wu JY(20) (2004) thì ở miền Nam Trung Quốc tần số đột biến gen alpha globin như sau: dạng ‐‐SEA chiếm 68,9%, – α3.7 chiếm 10,3%, đột biến dạng – α4.2 chiếm 5,52%. Theo Hung CC(4) (2007) thì ở Đơng Nam Á tỉ lệ đột biến dạng SEA chiếm tỉ lệ 45%, dạng – α3.7 chiếm 35%, đột biến dạng – α4.2 chiếm 20%. Cùng với nhiều nghiên cứu khác như của Pan HF (2007), Xiong F (2010)(14, 21) thì dạng đột biến phổ biến nhất ở Đơng Nam Á là –SEA theo sau là đột biến dạng – α3.7 và –α4.2, các kết quả của chúng tôi tương tự như nghiên cứu của các tác giả khác về sự phổ biến của các dạng đột biến thường gặp của alpha thalassemia. Qua các số liệu đó, chúng tơi thấy rằng đột biến dạng ‐‐SEA chiếm tỉ lệ rất cao ở khu vực Đơng Nam Á, tiếp theo là dạng – α3.7. Điều này hồn tồn phù hợp với kết quả nghiên cứu của chúng tơi. Sự khác biệt về tần số của các dạng đột biến này trong các nghiên cứu có thể là mặc dù alpha thalassemia có mặt trên tồn thế giới, nhưng sự phân bố rất khác nhau giữa các quần thể người, giữa các dân tộc khác nhau, do sự đa dạng di truyền giữa các cá nhân, tần số đột biến có thể thay đổi từ sự gia tăng các cuộc hơn nhân Chuyên Đề Điều Dưỡng Kỹ Thuật Y Học Nghiên cứu Y học giữa nước này với nước khác (như giữa người Đài Loan và những người nhập cư gốc Đông Nam Á), sự khác nhau trong q trình thu thập mẫu nghiên cứu (với nghiên cứu này, chúng tơi đã thu mẫu từ những bệnh nhân đến khám tại bệnh viện dựa vào những triệu chứng lâm sàng, cận lâm sàng và tiến hành kiểm tra), quan trọng là tần số đột biến thay đổi tùy thuộc vào dân số, thời gian nghiên cứu. Trong số 36 mẫu bệnh nhân được chẩn đốn mắc bệnh α thalassemia, bằng kỹ thuật MLPA chúng tơi phát hiện được 24 bệnh nhân cò mang đột biến mất đoạn. 12 bệnh nhân còn lại khơng phát hiện được đột biến mất đoạn, những bệnh nhân này có thể mang đột biến điểm, và những đột biến này không được phát hiện bằng phương pháp MLPA mà phải sử dụng các phương pháp như giải trình tự gen, phương pháp RFLP, STR… KẾT LUẬN Nghiên cứu đã ứng dụng thành cơng kỹ thuật MLPA để chẩn đốn đột biến mất đoạn gen alpha globin gây bệnh alpha thalassemia. Việc xác định các kiểu đột biến gen alpha globin thường gặp ở Việt Nam giúp cho chúng ta có cái nhìn bao qt về tình hình bệnh alpha thalassemia tại nước ta, để có những dẫn chứng, dữ liệu cho các nghiên cứu tiếp theo cũng như giúp ích cho việc dự báo, chẩn đốn, phát hiện sớm và điều trị được chính xác, hiệu quả hơn, là cơ sở vững chắc cho chẩn đốn trước sinh bệnh alpha Thalassemia. TÀI LIỆU THAM KHẢO Cao M, Liu Z, Jia X, Tang N, Cai R, Wang L, Chen C, Xiao B, Wang J and Liu J (2011).“Detection of α‐globin gene deletions using denaturing high‐performance liquid chromatography and multiplex ligation‐dependent probe amplification”, Journal of clinical laboratory analysis, 25(6), pp. 426‐431. Chong SS, Boehm CD, Higgs DR and Cutting GR (2000), “Single‐tube multiplex ‐ PCR screen for common deletional determinants of α –thalassemia”, Blood, 95, pp. 360 ‐ 362. Elliott PV (2009), “Alpha thalassemia major ‐ new mutations, intrauterine management, and outcomes”, Hematology, 35(1), pp. 35 ‐ 41 Hung CC, Lee CN, Chen CP, Jong YJ et al. (2007), “Molecular assay of alpha (3.7) and alpha (4.2) deletions causing alpha 35 Nghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ bản của Số 4 * 2013 thalassemia by denaturing high‐performance liquid chromatography”, Clinical Biochemistry, 40 (11), pp. 817‐821 14 Hung CC, Su YN, Lin CY, Yang CC, Lee WT et al. (2005), “Denaturing HPLC coupled with multiplex PCR for rapid detection of large deletions in Duchenne muscular dystrophy carriers”, Clinical Biochemistry, 51(7), pp. 1252‐6. Pan HF, Long GF, Li Q, Feng YN, Lei ZY et al. (2007), “Current status of thalassemia in minority populations in Guangxi, China”, Clin Genet, 71, pp.419–426. 15 Sankaran VG, Nathan DG (2010), “Thalassemia: an overview of 50 years of clinical research”. Hematology/Oncology Clinics of North America Journal, 24(6), pp. 1005 ‐ 1020. 16 Schouten JP, Mc Elgunn CJ et al. (2002), Relative quantification of 40 nucleic acid sequences by multiplex ligation‐dependent probe amplification”, Nucleic acids Research, 30 (12), pp. 2‐11. 17 Suemasu CN, Kimura EM, Oliveira DM, Bezerra MA, Araújo AS, Costa FF and Sonati MF (2011), “Characterization of alpha thalassemic genotypes by multiplex ligation‐dependent probe amplification in the Brazilian population”, Brazilian journal of medical and biological research, 44(1), pp. 16‐22. Lalic T, Vossen RH et al. (2005), “Deletion and duplication screening in the DMD gene using MLPA”, European Journal of Human Genetics, 13, pp. 1231–1234 Lin M, Wen YF et al. (2013), “Hemoglobinopathy: molecular epidemiological characteristics and health effects on Hakka people in the Meizhou region, Southern China”, PLoS One, 8(2), pp. 5 – 7. Liu SC, Peng CT, Lin TH, Wang SJ et al. (2011), “Molecular lesion frequency of hemoglobin gene disorders in Taiwan”, Hemoglobin, 35 (3), pp. 228‐236. 18 Liu YT, Old JM, Miles K, Fisher CA, Weatherall DJ and Clegg JB (2000), “Rapid detection of alpha‐thalassaemia deletions and alpha‐globin gene triplication by multiplex polymerase chain”. British journal of haematology, 108(2), pp. 295 ‐ 299. Tạ Thành Văn (2011), Bệnh học phân tử, Nxb Y Học, tr. 67 ‐ 80. 19 Loryn NS and Graham RT (2004), “MLPA and MAPH: New Techniques for Detection of Gene Deletions”, Human mutation, 23, pp. 413‐419 Wang X, Wang Z, Yan M, Huang S et al. (2008), “Similarity of DMD gene deletion and duplication in the Chinese patients compared to global populations”, Behavioral and Brain Functions, 4 (20), pp. 1‐9. 20 Lý Thị Thanh Hà, Ngô Diễm Ngọc, Nguyễn Thị Phương Mai, Nguyễn Thị Tân Sinh, Dương Bá Trực, Bùi Văn Viên, Nguyễn Thanh Liêm (2010). “Ứng dụng kỹ thuật sinh học phân tử trong chẩn đốn trước và sau sinh bệnh alpha thalassemia tại Bệnh viện nhi Trung ương”. Tạp chí Nhi khoa, tập 3 ‐ số 3&4, tr. 337 ‐ 342. Wu JY, Liao C, Li J, Huang YN (2004), “Multiplex PCR for detecting genotypes of deletional alpha‐thalassemia”, Zhongguo Shi Yan Xue Ye Xue Za Zhi (Journal of experimental hematology), 12(4), pp. 472‐474. 21 Xiong F, Sun M, Zhang X, Cai R, Zhou Y et al. (2010), “Molecular epidemiological survey of haemoglobinopathies in the Guangxi Zhuang Autonomous Region of southern China”, Clin Genet, 78, pp.139–148. 10 11 12 Marzese DM, Mampel A et al. (2008), “Detection of deletions and duplications in the Duchenne muscular dystrophy gene by the molecular method MLPA in the first Argentine affected families”, Genet. Mol. Res., 7 (1), pp. 223‐233 13 Neishabury M, Azarkeivan A, Oberkanins C, Esteghamat F, Amirizadeh N and Najmabadi H. (2008), “Molecular mechanisms underlying thalassemia intermedia in Iran”, Genetic Testing, 12(4), pp. 549 ‐ 556. 36 Ngày nhận bài 29/08/2013. Ngày phản biện nhận xét bài báo 04/09/2013. Ngày bài báo được đăng: 18/10/2013 Chuyên Đề Điều Dưỡng Kỹ Thuật Y Học ...ử vong. Đột biến gây bệnh alpha thalassemia thường gặp là đột biến mất đoạn gen alpha globin nên các kĩ thuật sinh học phân tử thường được sử dụng để xác định đột biến ở bệnh nhâ... beta globin cặp đơi với nhau theo tỷ lệ 1:1, như mục tiêu: Ứng dụng kỹ thuật MLPA giúp chẩn vậy bệnh nhân alpha thalassemia sẽ có sự mất đốn đột biến mất đoạn gen alpha globin ... thalassemia sẽ trở thành bệnh lý tồn cầu(18). trong chẩn đốn mất đoạn và lặp đoạn gen nói Ngun nhân gây bệnh là do đột biến gen α chung hay bệnh alpha thalassemia nói riêng. Kỹ globin, đột