Ức chế sự sinh trưởng và sự chết tế bào theo chương trình bởi kaempferol được điều hòa bởi sự hoạt hóa của mek - mapk ở tế bào ung thư phổi

9 101 0
Ức chế sự sinh trưởng và sự chết tế bào theo chương trình bởi kaempferol được điều hòa bởi sự hoạt hóa của mek - mapk ở tế bào ung thư phổi

Đang tải... (xem toàn văn)

Thông tin tài liệu

Bài viết trình bày các cơ chế bảo vệ chính xác thì vẫn còn được hiểu một cách nghèo nàn. Để làm sáng tỏ các cơ chế này,chúng tôi đã thử nghiệm tế bào ung thư phổi ở người -A549 với Kaempferol và nghiên cứu những ảnh hưởng của nó trên những biểu đồ về sự tăng trưởng và sự dẫn truyền tín hiệu. Mời các bạn tham khảo!

Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập * Phụ Số * 2004 10 ỨC CHẾ SỰ SINH TRƯỞNG VÀ SỰ CHẾT TẾ BÀO THEO CHƯƠNG TRÌNH BỞI KAEMPFEROL ĐƯC ĐIỀU HÒA BỞI SỰ HOẠT HÓA CỦA MEK-MAPK Ở TẾ BÀO UNG THƯ PHỔI A549 Nguyễn Thò Thanh Tuyền* ; Huỳnh Hùng* TÓM TẮT Một số lượng lớn chất khác có thiên nhiên cho thấy có tính đề kháng ung thư thực nghiệm nhiều chứng gợi ý Kaempferol có đặc tính ngăn ngừa hóa trò ung thư Tuy nhiên, chế bảo vệ xác hiểu cách nghèo nàn Để làm sáng tỏ chế này,chúng thử nghiệm tế bào ung thư phổi người -A549 với Kaempferol nghiên cứu ảnh hưởng biểu đồ tăng trưởng dẫn truyền tín hiệu Điều trò tế bào A549 với Kaempferol cho kết ức chế khả sống tế bào va tổng hợp DNA phụ thuộc vào thời gian liều lượng thuốc Cùng lúc đó, điều trò Kaempferol làm tăng hàm lượng protein pro-apoptosis (Bax va Bad) làm giảm hàm lượng protein anti- apoptosis (Bcl-xL va Bcl-2) Trong Akt phospho hóa Akt bò ức chế MAPK lại hoạt hóa.Sự chết tế bào Kaempferol kết hợp với tách (cleavage) Caspase-7 PARP.Sự ức chế MEK1/2 PI-3K ngăn chặn Kaempferol gây hoạt hóa cleave Capsae-7, PARP chết tế bào.Những kết cho thấy bất hoạt Akt thay đổi protein gia đình Bcl-2 không đủ để Kaempferol gây chết tế bào mà hoạt hóa MEKMAPK điều kiện tất yếu để Kaempferol gây chế chết tế bào A549 ABSTRACT KAEMPFEROL-INDUCED GROWTH INHIBITION AND APOPTOSIS IN A549 LUNG CANCER CELLS IS MEDIATED BY ACTIVATION OF MEK-MAPK Nguyen Thi Thanh Tuyen, Huynh Hung * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Vol * Supplement of No * 2004: 72 – 80 A vast variety of naturally occurring substances have been shown to protect against experimental carcinogenesis and an increasing amount of evidence suggests that kaempferol may have cancer chemopreventative properties However, the precise underlying protective mechanisms are poorly understood To elucidate these mechanisms, we challenged human lung cancer cell line A549 with kaempferol and investigated its effects upon cellular growth and signal transduction pathways Treatment of A549 cells with kaempferol resulted in a dose- and time-dependent reduction in cell viability and DNA synthesis with the rate of apoptosis equivalent to 0.9 ± 0.5, 5.2± 1.5, 16.8± 2.0, 25.4± 2.6, and 37.8 ± 4.5 % on treatment with 0, 17.5, 35.0, 52.5 and 70.0 μM kaempferol, respectively Concomitantly, kaempferol treatments led to a 1.2-, 2.7-, 3.3and 3.4-fold increase in Bax Similar elevations were also observed in Bad which increased 1.2-, 3.3-, 3.7- and 4.7-fold respectively as compared to control Bcl-2 and Bcl-xL expression were inhibited in a dose-dependent fashion While the Akt-1 and phosphorylated Akt-1 were inhibited, the mitogen-activated protein kinase (MAPK) was activated upon kaempferol treatment Activation of MAPK and c-Jun was peaked at h and MAPK activity was sustained over 96 h In addition, MEK1/2 phosphorylation was observed in concordance with MAPK activation Kaempferol induced apoptosis was associated with the cleavage of caspase-7 and PARP * Laboratory of Molecular Endocrinology-National Cancer center of Singapore 72 Chuyên đề Hội nghò Khoa học Kỹ thuật BV Bình Dân 2004 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập * Phụ Số * 2004 Nghiên cứu Y học (poly ADP-ribose polymerase) Inhibition of MEK1/2 but not PI-3 kinase blocked kaempferol-induced cleavage of caspase-7, PARP cleavage, and apoptosis The results suggest that inactivation of Akt-1 and alteration of Bcl2 family of proteins are not sufficient for kaempferol to induce apoptosis and activation of MEK-MAPK is a requirement for kaempferol-induced cell death machinery in A549 cells Montesano et al., 1999) Các nghiên cứu với ức MỞ ĐẦU chế phân tử nhỏ hoạt động MEK (Dudley et al., Ung thư phổi ung thư thông 1995; Favata et al., 1998) chứng minh vai trò thường giới ước tính khoảng 28% so MEK việc điều hòa biểu proteinase với tổng số tử vong ung thư gây ra.Khoảng 75% xâm lấn di tế bào ung thư (Reddy ung thư phổi ung thư tề bào phổi không nhỏ et al., 1999; Liu et al., 2000) gián đoạn hình (NSCLC-non-small cell lung cancer) phần lại thái học lớp biểu mô (Lu et al., 1998; Chen et al., tế bào ung thư phổi nhỏ (SCLC-small cell lung 2000) Không có chất dòng MEK cancer) (Midthun va Jett, 1997) Hiệu điều trò xác đònh khác p44/42 MAPK ung thư phổi nghèo nàn Trung bình tỉ lệ (reviewed in Anderson et al.,1990) Điều trò tế sống năm ung thư phổi khu trú 48% di bào với yếu tố tăng trưởng tác nhân hóa trò 2.5% (Feng et al., 2001) Tỉ lệ sống năm liệu khác gây hoạt hóa MEK1/2 bệnh nhân ung thư phổi giai đoạn I với phẫu thuật mục tiêu dòng MAPK điều hòa tăng cắt bỏ phần đạt tới 60% (Feng et al., sinh,biệt hóa sống tế bào (reviewed in 2001) Đa số bệnh nhân bò ung thư phổi bệnh Bllaif Blenis, 2001) Sự hoạt hóa MAPK điều mổ có tiên lượng xấu Chỉ có hòa hoạt động số chất dòng (substrates) 15% bệnh nhân chẩn đoán giai đoạn sớm bao gồm nhân tố phiên mã (Transcription factor) khu trú phần lớn ung thư phổi bắt đầu tăng p62TCF (ELK1), c-myc, ATF2, thành phần APtrưởng cách yên lặng mà không kèm theo 1: c-Jun c-Fos (Favataet al., 1998) MAPK triệu chứng ung thư giai liên quan việc vận chuyển thuộc nhân (nuclear đoạn tiến triển (Gargiullo et al., 2002) Hiện chúng transport), tập hợp tiểu đơn vò cấu trúc nhiễm sắc ta có phương thức điều trò phụ tạm thời có chất (nucleosome assembly) điều hòa xương thể chấp nhận kéo dài sống bệnh tế bào (Lewis et al., 2000) Sự hoạt hóa MAPK nhân ung thư phổi Do việc khám phá phương ảnh hưởng mạnh đề kháng lại chết tế bào thức để chẩn đoán, phòng ngừa điều trò ung (reviewed in Walter, 2002) hay pro-apoptotic (Moos thư phổi cần thiết cấp bách Fitzpatrick, 1998; Bhat Zhang, 1999) Những Một mục tiêu dòng ảnh hưởng phụ thuộc vào chất loại (downstream targets) thông thường tyrosine tế bào kinase có thụ thể protein Ras Điều hòa chết tế bào tiến trình phức tạp kết nối với GTP biểu đồ dẫn truyền tín hiệu liên quan đến số lượng lớn gen tế bào MEK-MAPK (Lewis et al., 1998; Ballif Blenis, bao gồm Bcl-2 (Fisher et al., 1993) thành viên 2001) Các mức độ tăng cao hoạt hóa MEK1 chủ liên quan đến Bcl-2 chẳng hạn Bcl-xL, Bcl-xS, yếu thấy thường xuyên dòng tế bào sinh Bad Bax (Boise et el., 1993) Ức chế Bcl-2 làm cho ung (Amundadottir Leder, 1998; Hoshino et al., thúc đẩy chết tế bào đáp ứng với số chất 1999) Sự hoạt hóa MEK1 chủ yếu góp phần cho kích thích bao gồm thuốc chống ung thư sinh trưởng tế bào (Gupta et al, 1999; Blaif (Hickman., 1992; Fisher et al., 1993) Bcl-2 BclBlenis, 2001), di chuyển (Krueger et al., 2001), xL, góp phần chống lại chết tế bào Chúng biến nạp nguyên bào sợi tế bào biểu mô ngăn ngừa Bax protein pro-apoptotic gây (Mansour et al., 1994; Greulich Erikson, 1998; Chuyên đề Hội nghò Khoa học Kỹ thuật BV Bình Dân 2004 73 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập * Phụ Số * 2004 phóng thích cytochrome c hoạt hóa caspase Nghiên cứu gần chết tế bào chứng minh tầm quan trọng PI-3kinase protein dòng Akt (Franke et al., 1995; Kulik et al., 1997) Akt đóng vai trò chất đề kháng chết tế bào cách chống lại với chất kích thích khác (Franke et al., 1995) Một kết nối trực tiếp PI-3 kinase protein điều hòa chết tế bào thiết lập thông qua Akt phospho hóa Bad (Zha et al., 1996; Datta et al., 1997) Một số nghiên cứu dòch tễ học dẫn chứng mối quan hệ chế độ ăn ung thư chứng cho chế độ ăn nhiều trái rau đưa đến nguy mắc bệnh thấp số loại ung thư (Steinmetz va Potter, 1991; Block et al., 1992) Flavonoides thành phần polyphenolic mà phân bố cách rộng rãi nhiều loại rau trái (Leighton et al., 1992; Messinaet al., 1994; Stavric., 1994) Glycone flavonoids thông thường tìm thấy chế độ ăn Quercetin, Kaempferol, Rutin Robinin (Anton et al., 1988) Trong số Quercetin nghiên cứu cách rộng rãi (Constantinou et al., 1995; Leeet al., 1998; Aligiannis et al., 2001 Hoạt động Flavonoids chẳng hạn Kaempferol quercetin điều hoà tác động qua lại với vò trí kết nối với estrogen loại II đề cập tới (Ranelletti et al., 1992) Trong in vitro, Kaempferol ức chế tăng trưởng tế bào ung thư máu người (Dimas et al., 2000) tế bào NIH3T3 biên nạp với v-H-ras (Kuo et al., 1994), lại bảo vệ tế bào PC12 T47D khỏi độc tố gây β-amyloid (Roth et al., 1999.) Để hiểu sâu chế phân tử Kaempferol, tài liệu chứng minh Kaempferol ức chế sinh trưởng gây chết tế bào tế bào ung thư phổi A549 thông qua hàng loạt thay đổi mức độ phân tử ức chế hoạt hóa Akt, gia tăng protein pro-apoptosis (Bax va Bad), giảm sút protein anti-apoptosis (Bcl-2 va Bcl-xL) hoạt hóa kéo dài MAPK chủ yếu.Mặt khác dùng chất ức chế MAPK –U0126 ngăn 74 chặn hoạt hóa MEK-MAPK làm độc tố tế bào Kaempferol Điều khẳng đònh thêm MEK-MAPK đóng vai trò then chốt chết tế bào Kaempferol tế bào A549 VẬT LIỆU VÀ NGHIÊN CỨU CÁC PHƯƠNG PHÁP Nuôi cấy tế bào điều trò Các tế bào biểu mô phổi A549 nuôi cấy môi trường RPMI 1640 bổ sung với 10% FCS, 1% kháng sinh PN nhiệt độ 37°C 5% CO2 Để nghiên cứu ảnh hưởng Kaempferol, tế bào A549 nuôi cấy với mật độ khác để chúng qua 24 Sau tế bào điều trò với nồng độ gia tăng khác Kaempferol từ 17.5 70 μM môi trường nuôi cấy huyết (Serum free media) Khi đạt thời gian thích hợp, tế bào thu thập xử lí với phương pháp khác Kó thuật hình thái học Để quan sát hình ảnh tế bào chết Sau 24 điều trò với nồng độ khác tế bào cố đònh với dung môi formadehyde 4% khoảng giờ, sau rửa với dung dòch phosphate buffer saline Sự chết tế bào phát xét nghiệm với kit TUNEL (terminal deoxynucleotidyl transferase mediated dUTP nick-end labeling) Kỉ thuật đo lường tỉ lệ tế bào sinh trưởng tế bào có khả sống Bằng cách sủ dụng kit ELISA (Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay) cho việc phát tế bào sinh trưởng xét nghiệm MTT (3-(4,5dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) cho tế bào có khả sống Kỉ thuật thấm western Dùng để quan sát mức độ phân tử Các tế bào điều trò sau 24 giờ, thu nạp chiết xuất phân tử protein với dung dòch tan(lysis buffer) sử dụng kỉ thuật thấm western (Western Blot) Sau màng lai ủ với kháng thể thích hợp Chuyên đề Hội nghò Khoa học Kỹ thuật BV Bình Dân 2004 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập * Phụ Số * 2004 Nghiên cứu Y học Phân tích thống kê KẾT QUẢ Bằng kỉ thuật xác đònh ảnh hưởng Kaempferol sinh trưởng tế bào in vitro.Kaempferol kiềm hãm tăng sinh tế bào phụ thuộc vào thời gian liều lượng a a 24H 48H b A b Hình Sự gây tế bào chết Kaempferol xét nghiệm hình ảnh học (450 nm) The rate of BrdU Incorporation c c d c d e 0 35 70 5 K a e m p f e r o l ( µ M / m l) a 24H 48H B a Absorbance ( 570 nm) a α-tubulin Bax Fold changed (Bax) b 1 b A B 1.15 2.7 3.29 3.41 3.78 4.73 c c Bad c d d 35 5 70 Fold changed (Bad) 1.25 3.36 C K a e m p f e r o l ( µ M /m l) Bcl-2 Hình Ảnh hưởng Kaempferol sinh trưởng khả sống tế bào Sau 48 điều trò cho thấy mật độ tế bào giảm xuống tùy thuộc vào liều lượng thuốc quan sát hình 1B Hình A cho thấy thay đổi hình thái học tế bào màng tế bào bò bóng nước (blebbing) đặc tính tế bào chết Tế bào chết xác đònh xét nghiệm TUNEL cho thấy vỡ mãnh DNA kết tụ nhân tế bào hình 2B Do chết tế bào tế bào động vật có vú cho thấy điều hòa bởI protein Bax, Bad, Bcl-2 va Bcl-xL Để thử nghiệm khả dùng kỉ thuật thấm western kết đạt cho thấy Kaempferol gây gia tăng biểu protein pro-apoptosis Bax Bad (hình 3B 3C) Sự gia tăng quan sát rỏ nồng đồ 52.5 vaø 70μM D 0.52 Fold changed (Bcl-xL) 0.46 0.24 0.2 0.12 Kaempferol (µM/ml) 17.5 35 52.5 70 Fold changed (Bcl-2) 0.31 0.27 0.19 Bcl-xL E Hình Ảnh hưởng kaempferol biểu protein Bcl-2, Bax, Bad Bcl-xL tế bào A549 kỉ thuật western blot Với số lần 3.29- 3.41- Bax, 3.78- 4.73 -lần Bad so sánh với chất kiểm soát (control) Ngược lại protein chống lại chết tế bào Bcl-2 Bcl-xL cho thấy giảm theo nồng độ thuốc (hình 3D 3E) Biểu đồ PI-3 kinase hoạt hóa số chất tăng trưởng khác làm sáng tỏ Các xét nghiệm gần tín hiệu chết tế bào chứng minh quan trọng PI-3 kinase chất dòng Akt Chuyên đề Hội nghò Khoa học Kỹ thuật BV Bình Dân 2004 75 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập * Phụ Số * 2004 α-tubulin A PI-3K B Phospho-Akt Fold changed (pAkt) hóa caspase quan sát nồng độ thấp tăng dần theo với nồng độ hình 5B 5C C 0.75 0.14 0.18 0.076 D Akt Fold changed (Akt) 0.92 0.65 Kaempferol (µM/ml) 17.5 35 0.42 0.33 52.5 70 Hình Những ảnh hưởng Kaempferol lên phân tử protein p85 PI-3K phospho Akt tế bào A549 kỉ thuật western blot Từ hình 4B 4C kết cho thấy biểu p85 PI-3 kinase chất dòng Akt giảm.Điều chứng tỏ Kaempferol có ảnh hưởng đến ức chế protein α-tubulin A Cleavedcaspase B Foldchanged (Cleavedcaspase 7) 1.25 2.51 3.71 5.61 CleavedPARP 89kD Foldchanged (CleavedPARP) 2.1 5.98 9.57 11.5 Kaempferol (µM/ml) 17.5 35 52.5 70 C Hình Những ảnh hưởng Kaempferol lên phân tử protein cleavage caspase PARP tế bào A549 kỉ thuật western blot Một điều chứng minh tách protein PARP (poly ADP-ribo polymerase) kiện sinh hóa xảy sớm trình tế bào chết Do cleaved PARP dấu xác nhận tiêu chuẩn (hallmark) hoạt hóa hệ caspase, xác đònh xem chế tế bào chết có hoạt hóa điều trò với Kaempferol hay không,các kháng thể xét nghiệm sau kết cho thấy tách rời phân tử protein 89 kDa (cleaved PARP) hoạt 76 Hình Ảnh hưởng kaempferol phân tử protein phosphorylated MEK1/2, MAPK, vaø phosphorylated p44/42 MAP kinase (Thr202/Tyr204) vaø phospho C-Jun (Ser63) tế bào A549 kỉ thuật western blot MAPK gây chết tế bào dự đoán độ nhạy hóa trò khối u (Akata et al., 1995; Sabsbury et al., 1997; Lieu et al., 1998; Chen et al., 1999; Koo et al., 1999; Petrache et al., 1999; Alechman et al., 2000) Để nghiên cứu ức chế tăng trưởng tế bào chết có phải Kaempferol hay không,kỉ thuật thấm western với kháng thể kháng phospho-MAPK MAPK thực hiện.Kết cho thấy điều trò tế bào A549 với nồng độ khác Kaempferol sau 48 dẩn đến phospho hóa MAPK tùy thuộc vào nồng độ (hình 6B) MEK1/2 phospho hóa giống MAPK (hình 6D) Bởi cJun đích hoạt động MAPK,nên mức độ phospho c-Jun xác đònh Kết cho thấy c-Jun phospho giống hoạt hóa MAPK (hình 6F), điều cho thấy phospho MAPK MEK1/2 làm gia tăng hoạt động MAPK Do hoạt hóa JNK p38 cho Chuyên đề Hội nghò Khoa học Kỹ thuật BV Bình Dân 2004 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập * Phụ Số * 2004 yếu tố đònh gián đọan chu kỳ tế bào chết tế bào (Sanchez et al., 1994; MacKeigan et al., 2000) Kháng thể kháng phosphoJNK p38 thực hiện.Kết cho thấy mức độ phospho hóa chúng thay đổi, chúng khuynh hướng đóng vai trò quan trọng gây tế bào chết tế bào A549 (hình 6G&H) Nghiên cứu Y học bào (hình 7F) Một lần kết khẳng đònh hoạt hóa MEK-MAPK đóng vai trò chủ yếu việc gây te tế bào Kaempferol MEKMAPK họat động tren dòng (upstream) cũa caspase để đưa đến tế bào chết α-tubulin A Phospho-MAPK B MAPK C Phospho c-Jun D 20 kD Cleaved Caspase E 19 kD Cleaved PARP 89 kD Kaempferol (70 µM/ml) _ _ _ U0126 (10 µM) _ + LY294002 (10 µM) _ _ + _ + _ + + _ + _ _ + F Hinh Ảnh hưởng Kaempferol chất ức Chế MEK1/2 -U0126 PI-3 kinase LY294002 lên phân tử protein gây nên phospho hóa MAPK, c-Jun, cleavage caspase PARP tế bào A549 kỉ thuật Western blot BÀN LUẬN Hình Ảnh hưởng chất ức chế MEK1/2 -U0126 PI-3 kinase -LY294002 lên chết tế bào A549 Kaempferol xét nghiệm hình thái học Từ kết cho thấy hoạt hóa MEKMAPK dẫn đến chết tế bào Để làm sáng tỏ,chất ức chế MEK1/2 dùng để thử nghiệm xem chất có ức chế hoạt hóa MEK-MAPK hay không,U0126-là chất ức chế MEK1/2 sử dụng kết hợp với chất ức chế PI-3kinase -LY294002 Kết cho thấy kết hợp điều trò hai chất Kaempferol chất ức chế U0126 ngăn chặn bào tương co rút màng tế bào bò bong nước qua xét nghiệm hình ảnh học (hình 7E) Và kỉ thuật thấm western cho thấy kết hợp hai chất ngăn ngừa Kaempferol phospho MAPK(hình 8B), c-Jun (hình 8D), cleave capase (hình 8E), PARP (hình 8F) Cùng lúc đó,Kaempferol kết hợp với chất ức chế PI-3kinase không ngăn chận chết tế Mối quan hệ chế độ ăn ung thư đề cập nhiều nghiên cứu dòch tể học (Block et al.,1992) Xuất độ mắc bệnh ung thư giảm đáng kể nhóm người có chế độ ăn bao gồm số lượng lớn rau trái nhóm người có chế độ ăn phần lớn thực phẩm động vật (Steinmetz and potter et al., 1991; Block et al., 1992) Nhiều kết cho thấy rau trái có chứa thành phần có đặc tính chống lại sinh trưởng hình thành khối u (Leighton et al., 1992; Messina et al., 1994; Stavric et al., 1994) Kaempferol thành phần thiên nhiên có nhiều loại trái rau khác cho thấy có ảnh hưởng chống lại sinh trưởng cuả tế bào Trong nghiên cứu này,chúng chứng minh Kaempferol ức chế sinh trưởng chết tế bào ung thư phổi A549 Về phương diện hình ảnh học, tế Chuyên đề Hội nghò Khoa học Kỹ thuật BV Bình Dân 2004 77 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập * Phụ Số * 2004 bào A549 biểu với hình ảnh xếp nếp (ruffling), bóng nước (blebbing), kết tụ bào tương màng nhân (condensation of cytoplasm and nuclear membranes), tập hợp nhiểm sắc chất nhân (aggregation of nuclear chromatin),và mảnh DNA Về khía cạnh mức độ phân tử, thay đổi gia đình Bcl-2 bất hoạt phospho Akt, kết hợp với họat hoá cuả MEK-MAPK đòi hỏi cho Kaempferol gây tế bào chết Bên cạnh đó, Kaempferol gây hoạt hoá MEK-MAPK phụ thuộc vào thời gian liều lượng Hoạt động gia tăng MAPK góp phần gây tế bào chết chứng minh cách quan sát chất ức chế U0126 làm giảm chết tế bào kết hợp với Kaempferol thông qua cleaved capase –7 va PARP bò ngăn chặn Kết chứng minh chức MEKMAPK dòng hoạt hoá caspase để gây nên tín hiệu chết tế bào Có hai biểu đồ gây nên chết tế bào khác mô tả tế bào động vật có vú Biểu đồ thứ nhât liên quan đến caspase Biểu đồ thứ hai liên quan đến lọat phần tử protein sau Tế bào A549 trò liệu với Kaempferol đưa đến gia tăng biểu protein pro-apoptosis Bax Bad, song song với làm giảm biểu protein anti-apoptosis Bcl-2 Bcl-xL, đưa đến cân số lượng protein pro-apoptosis antiapoptosis Hậu gây mở lổ chuyển tiếp thấm thể hạt, gây hàng lọat hoạt hóa phân tử protein cuối dẫn đến tế bào chết Chức chống lại tế bào chết PI-3kinase hoạt hóa protein kinase Akt Kaempferol chứng minh ức chế hoạt hóa protein Chứng tỏ Kaempferol gây tế bào chết thông qua nhiều chế Biểu đồ JNK p38 kết hợp làm tăng thêm tế bào chết (Sanchez et al., 1994; Amato et al., 1998; Lee at al., 1998a; Jujiri et al., 1998; Mackeigan et al., 2000) ngược lại MAPK cho thấy ức 78 chế tế bào chết (Xia et al.,1995) Kết nghiên cứu cho thấy JNK p38 khuynh hướng dự phần gây tế bào chết Kaempferol tế bào A549 Sự khác điều hòa hai protein khác cac loại tế bào kích thích môi trường bên tế bào khác Trái ngược lại,điều trò Kaempferol dẫn đến gia tăng kéo dài hoạt hóa MEK-MAPK Dùng chất ức chế U0126 để điều hòa hoạt động MEKMAPK, lại chứng minh thêm hoạt hóa MEK-MAPK đóng vai trò quan trọng tế bào chết A549 Kết hổ trợ với vài kết nghiên cứu họat động MEK-MAPK mà gây chết tế bào dự đóan độ nhạy hóa trò (Sakata et al., 1995; Sansbury et al., 199; Lieu et al., 1998; Chen et al., 1999; Koo et al., 1999; Petrache et al., 1999; Kalechman et al., 2000) GLOSSARY Apoptosis: The term 'apoptosis' describes the molecular and morphological processes leading to fragmentated of nuclear DNA Frequently, the terms 'apoptosis' and 'programmed cell death' are used as synonyms.This process triggered by pathological conditions such as inflammation, cancer, viral infections, or exposure to a wide variety of chemical and physical stimuli Adjuvant chemotherapy: Chemotherapy designed to eradicate microscopic foci of metastatic disease following local control with surgery or radiotherapy or both Caspases: Cystein Aspartate-specific Proteases: Caspases form a proteolytic network that is of central importance in the initiation and execution of the apoptotic program Chemoprevention: Chemoprevention is the use of pharmacologic or natural agents that inhibit the development of invasive cancer either by blocking the DNA damage that initiates carcinogenesis or by arresting or reversing the progression of premalignant cells in which such damage has already occurred (for Review see Hong and Sporn, Chuyên đề Hội nghò Khoa học Kỹ thuật BV Bình Dân 2004 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập * Phụ Số * 2004 1997, Science, 278: 1073) Downstream: Sequences that are located futher in the direction of expression Inhibitors: A chemical substance that retards or stops enzyme activity MAP kinase (mitogen-activated protein kinase, MAPK): A protein kinase that performs a crucial step in relaying signal from the plasma membrane to the nucleus.Turned on by the wide range of proliferation – or differentiation –inducing signals Phosphorylation: A reaction in which a phosphate group is attached to a protein Phosphorylation is a common way of regulating the activity of protein which play major role in signal transduction Signal transduction: The mechanism through which message are sent from one cell to another,passing through the target cell wall and into the nucleus,where the signal molecule activates various cellular events Target: A molecule (often a protein) Trancription: The normal cellular process of turning a DNA gene copy into messenger RNA (mRNA) Transcriptional factors Any protein required to initiate or regulate transcription in eukaryotes Western blotting: This technique is designed to detect specific protein.After separation of the proteins by gel eletrophoresis,proteins are blotted to a filter paper and specific ones detected by labeled antibodies TÀI LIỆU THAM KHẢO Midthun DE et al,.(1997) Postgrad Med 101: 187-194 Feng G et al., (2001) Cancer Res 61: 7999-8004 Gargiullo P et al., (2002) MMWR 51: 49-53 Steinmetz KA et al., (1991) Cancer Causes Control 2: 325-357 Block G et al., (1992) Nutr Cancer 18: 1-29 Leighton T et al., (1992) (Washington: American Chemical Society) pp 229-238 Messina MJ et al., (1994) Nutr Cancer 21: 113-131 Stavric B (1994) Clin Biochem 27: 245-248 Anton R (1988) (eds.) (New York: Alan R Liss, Inc.) volume 280 pp 423-439 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 Nghiên cứu Y học Aligiannis N et al., (2001) Planta Med 67: 468-470 Constantinou A et al., (1995J Nat Prod 58: 217-225 Lee SC et al., (1998) Anticancer Res 18: 1117-1121 Bokkenheuser VD et al., (1988) (New York: Alan R Liss, Inc.) Whitten P et al., (1991 (New York: Raven Press) Kostrzewska A et al., (1993) Eur J Pharmacol 233: 127-134 Oliveira EJ et al., (2000) FEBS Lett 471: 1-6 Ferrell JE Jr et al., (1979) Mol Pharmacol 16: 556-568 Landolfi R et al., (1984) Biochem Pharmacol 33: 15251530 Rogers JC et al., (1989) Biochem Biophys Res Commun 164: 419-425 Dimas K et al., (2000) Pharmacol Res 41: 85-88 Kuo ML et al., (1994) Cancer Lett 87: 91-97 Roth A et al., (1999) J Neurosci Res 57: 399-404 Ranelletti FO et al., (1992) Int J Cancer 50: 486-492 McCawley LJ et al., (1999) J Biol Chem 274: 43474353 Foey AD et al., (1998) J Immunol 160: 920-928 Moos PJ et al., (1998) Cell Growth Differ 9: 687-697 Warne PH et al., (1993) Nature 364: 352-355 Crews CM et al., (1992) Science 258: 478-480 Her JH et al., (1993) Biochem J 296: 25-31 Anderson NG et al., (1990) Nature 343: 651-653 Marais R et al., (1993) Cell 73: 381-393 Bueno OF et al., (2000) EMBO J 19: 6341-6350 Remacle-Bonnet MM et al., (2000) Cancer Res 60: 20072017 Bhat NR et al., (1999) J Neurochem 72: 112-119 Kulik G et al., (1997) Mol Cell Biol 17: 1595-1606 Franke TF et al., (1995) Cell 81: 727-736 Page C et al., (2000) Anticancer Res 20: 407-416 Datta SR et al., (1997) Cell 91: 231-41 Zha J et al., (1996) Cell 87: 619-628 Fisher TC et al., (1993) Cancer Res 53: 3321-3326 Boise LH et al., (1993) Cell 74: 597-608 Hockenbery D et al., (1990) Nature 348: 334-336 Hickman JA (1992) Cancer Metastasis Rev 11: 121-139 Lim IJ et al., (2001) Plast Reconstr Surg 107: 797-808 Huynh H et al., (2002) Cell Growth Differ 13: 115-122 Cai J et al., (1998) Acta 1366: 139-149 Zou H et al., (1999) J Biol Chem 274: 11549-11556 Germain M et al., (1999) J Biol Chem 274: 2837928384 Lotem J et al., (1995) Cell Growth Differ 6: 647-653 Downward J (1999) Nat Cell Biol 1: E33-E35 He H et al., (1999) Cell Growth Differ 10: 307-315 Guyton KZ et al., (1996) J Biol Chem 271: 4138-4142 Aikawa R et al., (1997) J Clin Invest 100: 1813-1821 Favata MF et al., (1998) J Biol Chem 273: 1862318632 Sanchez I et al., (1994) Nature 372: 794-798 MacKeigan JP et al., (2000) J Biol Chem 275: 3895338956 Amato SF et al., (1998) Cancer Res 58: 241-247 Wei H et al., (1990) Cancer Res 50: 499-502 Zhou JR et al., (1998) Cancer Res 58: 5231-5238 Shao ZM et al., (1998) Cancer Res 58: 4851-4857 Chuyên đề Hội nghò Khoa học Kỹ thuật BV Bình Dân 2004 79 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập * Phụ Số * 2004 61 Muzio M et al., (1998) J Biol Chem 273: 2926-2930 62 Vander Heiden MG et al., (1999) Nat Cell Biol 1: E209-E216 63 Chao DT et al., (1998) 16: 395-419 64 Reed JC (1998) Oncogene 17: 3225-3236 65 Khwaja A (1999) Nature 401: 33-34 80 66 Wang CY et al., (1999) Mol Cell Biol 19: 5923-5929 67 Lee LF et al., (1998) J Biol Chem 273: 28253-28260 68 Yujiri T et al., (1998) Science 282: 1911-1914 69 Lieu CH et al., (1998) Cell Growth Differ 9: 767-776 70 Kalechman Y et al.,(2000) Int J Cancer 86: 281-288 71 Qiao, L et al., (2002) In press Chuyên đề Hội nghò Khoa học Kỹ thuật BV Bình Dân 2004 ... hưởng chất ức chế MEK1 /2 -U0126 PI-3 kinase -LY294002 lên chết tế bào A549 Kaempferol xét nghiệm hình thái học Từ kết cho thấy hoạt hóa MEKMAPK dẫn đến chết tế bào Để làm sáng tỏ,chất ức chế MEK1 /2... tính tế bào chết Tế bào chết xác đònh xét nghiệm TUNEL cho thấy vỡ mãnh DNA kết tụ nhân tế bào hình 2B Do chết tế bào tế bào động vật có vú cho thấy điều hòa bởI protein Bax, Bad, Bcl-2 va Bcl-xL... Để hiểu sâu chế phân tử Kaempferol, tài liệu chứng minh Kaempferol ức chế sinh trưởng gây chết tế bào tế bào ung thư phổi A549 thông qua hàng loạt thay đổi mức độ phân tử ức chế hoạt hóa Akt, gia

Ngày đăng: 22/01/2020, 05:55

Từ khóa liên quan

Mục lục

  • 10 ỨC CHẾ SỰ SINH TRƯỞNG VÀ SỰ CHẾT TẾ BÀO THEO CHƯƠNG TRÌNH BỞI KAEMPFEROL ĐƯC ĐIỀU HÒA BỞI SỰ HOẠT HÓA CỦA MEK-MAPK Ở TẾ BÀO UNG THƯ PHỔI A549

    • TÓM TẮT

    • ABSTRACT

    • KAEMPFEROL-INDUCED GROWTH INHIBITION AND APOPTOSIS IN A549 LUNG CANCER CELLS IS MEDIATED BY ACTIVATION OF MEK-MAPK.

      • MỞ ĐẦU

      • VẬT LIỆU VÀ CÁC PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

        • Nuôi cấy tế bào và điều trò

        • Kó thuật hình thái học

        • Kỉ thuật đo lường tỉ lệ tế bào sinh trưởng và tế bào có khả năng sống

        • Kỉ thuật thấm western

        • Phân tích thống kê

      • KẾT QUẢ

        •  

        •  

      • BÀN LUẬN

      • GLOSSARY

      • TÀI LIỆU THAM KHẢO

Tài liệu cùng người dùng

  • Đang cập nhật ...

Tài liệu liên quan