Đang tải... (xem toàn văn)
Kháng thể đơn dòng là kháng thể kháng một kháng nguyên nào đó được tạo ra từ một dòng tế bào lymphocyte B trong điều kiện in vitro. Và để hiểu rõ hơn về lĩnh vực này, mời các bạn tham khảo bài giảng Sản xuất kháng thể đơn dòng (Monoclonal antibodies-Mab) sau.
SẢN XUẤT KHÁNG THỂ ĐƠN DÒNG (Monoclonal antibodies-Mab) Định nghĩa Là kháng thể kháng kháng nguyên tạo từ dòng tế bào lymphocyte B điều kiện in vitro Là kháng thể với đặc hiệu cho vị trí epitope kháng nguyên (Milstein) : George Kohler César Milstein – Nobel Y-Sinh học 1984 Kháng thể đa dòng Kháng thể đơn dòng Tương tác KN-KT khơng chun biệt Tương tác KN-KT chuyên biệt Dễ sản xuất Đòi hỏi kỹ thuật cao Giới hạn số lượng Không giới hạn số lượng Kháng thể đơn dòng epitope Huyết Kháng thể đa dòng Kháng thể đơn dòng bước tạo MAb • • • • • • Chọn động vật gây nhiễm, chọn Ag Gây đáp ứng miễn dịch Thu TB lách TB myeloma Dung hợp TB lách với TB myeloma Sàng lọc, dòng hóa hybridoma Nhân sinh khối MAb phương pháp in vitro hay in vivo • Tinh chế MAb • Thu nhận, kiểm tra MAb (1a) Chọn động vật gây nhiễm • Động vật thường sử dụng để tạo hybridoma: mouse (chuột nhắt), Sprague Dawley rat (chuột lớn), Armenian hamster, thỏ… • Mouse mơ hình lý tưởng nhất: đáp ứng miễn dịch mạnh tổng hợp kháng thể nhanh • dòng mouse lý tưởng cơng nghệ sản xuất MAb: BALB/c C57BL/6 BALB/c Lai tạo 1967 Đức • • • • C57BL/6 Lai tạo 1982 Mỹ Lai dòng Chuột 6-8 tuần tuổi “sạch tuyệt đối” Rat Hamster Hệ thống chuồng chuột Hệ thống bioreactor nhân sinh khối tế bào (6b) Sản xuất MAb in vivo • Hybridoma tiêm vào khoang bụng vật chủ (ascites) • MAb tiết vào dịch nước báng (ascites fluid) • Ưu điểm: Nồng độ MAb thu cao (115mg/mL nước báng) • Hạn chế: Đạo lí xã hội sử dụng động vật thí nghiệm Mồi chuột pristane Tiêm hybridoma vào khoang bụng (peritoneal cavity) Thu thập nước báng (ascites fluid) Pristane • 2,6,10,14 - tetramethylpentadecane • Tách chiết từ dầu gan cá mập • Gây bệnh viêm khớp Rat, mô hình nghiên cứu bệnh viêm khớp mãn tính người • Gây bệnh lao da chuột, mô hình nghiên cứu bệnh tự miễn • Là yếu tố quan trọng kích thích tạo nước báng khoang bụng chuột, kích thích tạo MAb (7) Tinh chế protein • Sắc ký lực (affinity chromatography) • Sắc ký trao đổi ion (ion exchange chromatography) • Lọc gel (gel filtration) • Sắc ký cao áp • Kết tủa với muối ammonium sulfate hay acid caprylic Hệ thống sắc kí lỏng cao áp HPLC (High pressure liquid chromatography) Sắc ký lực Mab liệu pháp chữa trị ung thư NK cells, Mf ADCC Tế bào khối u Mab kháng Ag ung thư Bổ thể Ag ung thư MAC Kháng thể đơn dòng gắn hạt nano (quantum dot) Kháng thể đơn dòng gắn hạt nano (quantum dot) ứng dụng in vitro KTĐD gắn quantum dot phát huỳnh quang nhận diện thụ thể bề mặt tế bào ung thư đại tràng Kháng thể đơn dòng gắn hạt nano (quantum dot) ứng dụng in vivo Mouse MAb Chimeric MAb MAb Humanized Mouse Mab: toàn phân tử kháng thể có nguồn gốc từ chuột Chimeric MAb: vùng Fab từ chuột, vùng Fc từ người Humanized MAb: vùng hypervariable từ chuột, vùng lại từ người ... 1984 Kháng thể đa dòng Kháng thể đơn dòng Tương tác KN-KT khơng chun biệt Tương tác KN-KT chuyên biệt Dễ sản xuất Đòi hỏi kỹ thuật cao Giới hạn số lượng Không giới hạn số lượng Kháng thể đơn dòng. ..Định nghĩa Là kháng thể kháng kháng nguyên tạo từ dòng tế bào lymphocyte B điều kiện in vitro Là kháng thể với đặc hiệu cho vị trí epitope kháng nguyên (Milstein) : George... Huyết Kháng thể đa dòng Kháng thể đơn dòng bước tạo MAb • • • • • • Chọn động vật gây nhiễm, chọn Ag Gây đáp ứng miễn dịch Thu TB lách TB myeloma Dung hợp TB lách với TB myeloma Sàng lọc, dòng