Đang tải... (xem toàn văn)
Mục tiêu nghiên cứu của bài viết nhằm xác định tỷ lệ bất thường nhiễm sắc thể và tuyển chọn những trường hợp vô sinh không rõ căn nguyên cho phân tích mất đoạn nhỏ nhiễm sắc thể Y. Mời các bạn cùng tham khảo nội dung chi tiết của tài liệu.
TẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 9-2012 BẤT THƢỜNG NHIỄM SẮC THỂ Ở BỆNH NHÂN NAM VÔ SINH DO VÔ TINH Trần Văn Khoa*; Triệu Tiến Sang*; Lưu Xuân Quyết** Phan Thị Hoan***; Lê Văn Vệ**** TÓM TẮT Bất thường nhiễm sắc thể (NST) đoạn nhỏ NST Y coi hai nguyên nhân di truyền thường gặp liên quan đến tượng suy giảm sinh tinh Để đánh giá bất thường NST, thực phân tích băng G 350 bệnh nhân (BN) nam vô sinh vô tinh, phát 27 BN (7,71%) có bất thường NST Trong đó, hội chứng Klinefelter (47,XXY) phổ biến nhất, chiếm 16 BN (59,26%) 323 BN lại với NST bình thường, đối tượng sàng lọc đoạn nhỏ NST Y vùng AZF Kết luận: bất thường NST chiếm tỷ lệ đáng kể BN vơ sinh khơng tinh trùng Việt Nam, cho thấy hai bước quy trình phân tích bất thường di truyền nam giới suy giảm sinh tinh: làm xét nghiệm NST sàng lọc đoạn nhỏ NST Y cần thiết để sàng lọc q trình chẩn đốn vơ sinh nam trước tiến hành thụ tinh ống nghiệm tiêm tinh trùng vào bào tương nỗn * Từ khóa: Vơ sinh nam; Nhiễm sắc thể bất thường; Mất đoạn nhỏ nhiễm sắc thể Y; Vô tinh CHROMOSOMAL ABNORMALITY IN AZOOSPERMIC INFERTILE PATIENTS SUMMARY Chromosomal abnormality and Y chromosome microdeletion are regarded as two frequent genetic causes associated with spermatogenic failure in population To investigate the distribution of the chromosomal aberrations in Vietnamese patients with azoospermia, karyotype analysis by G-banding was carried out in 350 azoopermic infertile men Of 350 patients, 27 (7.71%) were found to have chromosomal abnormalities in which Klinefelter’s syndrome (47,XXY), 16/27 (59.26%) are the most common chromosomal aberration Among the rest of the 323 patients with normal karyotype, were subjected to be screened microdeletions in AZF region In conclusion, the ratio of chromosomal abnormality is noticeable in Vietnamese infertile patients with azoospermia, suggesting the two steps in strategy of analysing genetic abnormalities in spermatogenic failure men and it is essential to screen them during diagnosis of male infertility before in vitro assisted fertilization by intracytoplasmic sperm injection * Key words: Male infertility; Chromosomal abnormality; Y chromosome microdeletion; Azoospermia * Học viện Quân y ** Bệnh viện 103 *** Trường Đại học Y Hà Nội **** Bệnh viện Nam học Hiếm muộn Hà Nội Chịu trách nhiệm nội dung khoa học: GS TS Hoàng Văn Lương PGS TS Quản Hồng Lâm TẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 9-2012 ĐẶT VẤN ĐỀ Khoảng 50% trường hợp vô sinh nam giới Mặc dù nhiều trường hợp nguyên nhân chưa hiểu rõ, yếu tố di truyền liên quan đến vô sinh nam vô tinh (Azoospermia) xác định, bao gồm bất thường NST đoạn nhỏ NST Y Bất thường NST thời gian dài công nhận nguyên nhân thường gặp vô sinh nam Khoảng 13,7% nam giới vô sinh vô tinh 4,6% thiểu tinh mức độ nặng tìm thấy có bất thường NST Trong số đó, bất thường NST giới tính yếu tố bật Ngồi ra, có bất thường cấu trúc NST giới tính NST thường Trong 10 năm gần đây, đoạn nhỏ NST Y thuộc vùng AZF cánh dài NST Y phát nguyên nhân di truyền thường gặp với chứng suy giảm sinh tinh Chúng tiến hành nghiên cứu nhằm: Xác định tỷ lệ bất thường NST tuyển chọn trường hợp vô sinh không rõ nguyên cho phân tích đoạn nhỏ NST Y ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Đối tƣợng nghiên cứu 350 nam giới vơ sinh vơ tinh, có vợ bình thường, đến khám Trung tâm Cơng nghệ Phôi, Học viện Quân y, Bộ môn Y sinh học - Di truyền, Đại học Y Hà Nội Bệnh viện Nam học Hiếm muộn Hà Nội từ 2010 - 2011 * Tiêu chuẩn chọn BN: BN nam xác định vô sinh vô tinh sau khám lâm sàng, xét nghiệm hormon * Tiêu chuẩn loại trừ: BN vơ sinh thứ phát, có bất thường quan sinh dục Các trường hợp lấy tinh dịch xét nghiệm hai lần sau kiêng sinh hoạt tình dục vòng ngày Phân loại mẫu tinh dịch theo tiêu chuẩn Tổ chức Y tế Thế giới (WHO) năm 2009 Phƣơng pháp nghiên cứu Phân tích NST lập karyotype: nuôi cấy tế bào bạch cầu lympho máu ngoại vi theo phương pháp H Ford (1965) có cải biên: ni cấy tế bào ml môi trường RPMI (Gibco), 1,5 ml BSA, 0,5 ml máu 30 µl PHA (1,2 mg/5 ml, Gibco), kháng sinh antibiotic - mycotinic 100X, 1,25 ml/100 ml môi trường nuôi cấy (Gibco) Trước thu 45 phút, nhỏ 30 µl colcemid (nồng độ cuối 10 µ/ml) vào mẫu Thu hoạch tế bào vào thứ 72 Để tiêu tủ 600C qua đêm trước nhuộm Xử lý tiêu trypsin 1:250 1X/PBS từ 15 giây phút Rửa lại nước lạnh Nhuộm Giemsa từ 10 - 20 phút Để khô tiêu phân tích Phân tích 20 cụm NST kỳ cho mẫu, sử dụng kính hiển vi phần mềm chuyên dụng Nếu phát thấy dòng tế bào thứ hai, phân tích 100 cụm NST để phát thể khảm KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ BÀN LUẬN Tỷ lệ bất thƣờng NST BN vô tinh Tất BN định xét nghiệm NST, phân tích lập karyotype, kết quả: 27/350 BN (7,71%) có bất thường karyotype, 323 BN lại (92,29%) có karyotype bình thường TẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 9-2012 Bảng 1: Phân bố kiểu karyotype bất thường BN vô sinh nam giới KIỂU BẤT THƯỜNG n NST giới tÝnh 47,XXY Số lượng 16 47,XY,+21 45,XY,der(13;14)(q10;q10) 45,XY,der(13;15)(q10;q10) 45,XY,der(13;14) NST thường NST giới tÝnh Nam 46,XX Cấu trúc NST thường 46,XY,t(2;8)(q14.2;q24.1) t(3;14)(p23;q13) 46,XY,t(2q;13q) 46,XY,inv(9)(p11;q13) 46,XY,dup(9)(q21;q22) 46,XY,t(5;7;14)(p10;q36;q10) 46,XY,r(22) Tổng 27 Bảng 2: Tỷ lệ bất thường NST khảo sát số nghiên cứu TỶ LỆ CHUNG (%) SỐ TRƯỜNG HỢP BẤT THƯỜNG NST(%) SỐ TRƯỜNG HỢP BẤT THƯỜNG NST THƯỜNG (%) Koulischer L [5] 33/1.000 (3,3%) 27 (2,7%) (0,06%) Chandley AC [4] 51/2.372 (2,1%) 33 (1,4%) Zuffardi O [10] 215/2.542 (8,6%) Bourrouillou G [3] vực cho kết khác Tỷ lệ bất thường NST nghiên cứu 7,71% Đặc biệt, tỷ lệ BN bất thường karyotype thấp so với Trung Thị Hằng (2007): 24,32% (9/37 BN) [1] Nguyễn Đức Nhự: 20,8% [2] Nhìn chung, kết tác giả cho thấy tỷ lệ bất thường NST BN nam vô sinh khác nhau, tỷ lệ thay đổi từ 2,1 - 20,8% Kết nằm khoảng dao động Điều khác cỡ mẫu, nguồn gốc chủng tộc, cách chọn mẫu ngẫu nhiên hay thuận tiện Trong nghiên cứu này, chọn mẫu kiểu ngẫu nhiên, khác với nghiên cứu Trung Thị Hằng Nguyễn Đức Nhự (chọn mẫu kiểu thuận tiện) Một số tác giả gộp đối tượng thiểu tinh vô tinh nên tỷ lệ bất thường có sai khác Phân bố bất thƣờng NST thƣờng NST giới tính số lƣợng cấu trúc Bảng 3: BẤT THƯỜNG NST SỐ LƯỢNG NST CẤU TRÚC NST NST thường 10 (37,04%) < 0,001 18 (0,7%) NST giới tính 16 17 (62,96%) 175 (6,9%) 40 (1,6%) Tổng số 20 27 (100%) 98/952 (10,3%) 65 (6,8%) 33 (3,4%) Bonduelle M [9] 14/568 (2,4%) (0,35%) 12 (2,1%) Nguyễn Đức Nhự [2] 26/125 (20,8%) 21 (16,8%) (4%) Nghiên cứu 27/350 (7,71%) 17 (4,86%) (2,57%) CÁC TÁC GIẢ Mặc dù có nhiều tác giả giới nghiên cứu bất thường NST BN nam vô sinh Tuy nhiên, nước khu TỔNG SỐ (%) p 18/27 trường hợp bất thường NST giới tính, chiếm 66,67% tổng số trường hợp bất thường NST Trong đó, 16 trường hợp bất thường số lượng NST giới tính, trường hợp bất thường cấu trúc NST giới tính Các kiểu bất thường lại xuất 1/27 trường hợp bất thường NST Bất thường NST thường gặp 10/27 trường hợp, chiếm 37,04% Trong đó, trường hợp bất thường số lượng NST thường, trường TẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 9-2012 hợp lại bất thường cấu trúc NST thường NST thường lặp đoạn, NST hình vòng (bảng 1) BN nam vơ sinh Kết nghiên cứu cho thấy, bất thường NST giới tính có tỷ lệ cao so với bất thường NST thường, tương tự nghiên cứu khác Nhìn chung, nghiên cứu cho thấy bất thường NST kiểu (47,XXY) chiếm tỷ lệ cao so với bất thường NST khác BN hội chứng (46,XX) biểu kiểu hình bên ngồi nam giới có kiểu hình nam kiểu nhân 46,X,Xt(Xp,Yp) chiếm tỷ lệ 1/10.000 người có mang chuyển đoạn NST Y lên đầu tận NST X, đoạn mang gen SRY (gen xác định giới tính) Đây trường hợp người bệnh có kiểu hình nam, có hai tinh hồn, hầu hết quan sinh dục giống nam giới bình thường khơng có NST Y Nghiên cứu phát trường hợp nam vơ sinh có karyotype (46,XX) Cho đến nay, hội chứng nam (46,XX) chắn khơng có sinh tinh Do đó, xác định nguời nam bị hội chứng karyotype, việc phẫu thuật tìm tinh trùng tinh hồn vơ ích Các bất thường NST gây ảnh hưởng tới trình bắt cặp NST cặp tương đồng trình giảm phân tạo giao tử Các hợp tử có NST bất thường có nguy bị sảy thai cao, trình mang thai phát triển bình thường làm gia tăng khả sinh mang dị tật bẩm sinh Vì vậy, BN nam vô sinh cần tư vấn di truyền chẩn đoán trước sinh áp dụng kỹ thuật hỗ trợ sinh sản Bên cạnh bất thường số lượng NST, sai lệch cấu trúc NST nhà di truyền học tìm phân thành hai loại bất thường cấu trúc NST thường cấu trúc NST giới tính Bất thường cấu trúc đoạn, đảo đoạn, chuyển đoạn Bất thường NST gây trở ngại cho bắt cặp NST trình giảm phân ảnh hưởng đến trình sinh tinh Như vậy, với phát triển y học, kỹ thuật di truyền ngày cải tiến phát triển, góp phần tìm ngun nhân gây vô sinh nam giới bất thường NST Các tác giả nghiên cứu bất thường NST có liên quan đến vô sinh nam giới cho thấy bất thường NST BN đa dạng Trong đó, có bất thường số lượng cấu trúc NST giới tính NST thường Tuy nhiên, có trường hợp nam giới vô sinh vô tinh thiểu tinh, có karyotype bình thường khơng phát ngun nhân khác cần phân tích bất thường di truyền cấp độ phân tử Chuyển đoạn Robertson NST tâm mút 13, 14, 15, 21 22, thường thấy nam giới vô sinh, đặc biệt chuyển đoạn NST 13 14 hay gặp [9] Kết phát số bất thường liên quan tới chuyển đoạn Ở 323 trường hợp lại, chúng tơi khơng phát thấy có rối loạn cấu trúc hay số lượng NST Tuy nhiên, BN có bất thường di truyền mức độ đột biến gen hay không, cần xét nghiệm ADN để xác định xác Cho đến nay, đoạn nằm vùng AZF nhánh dài NST Y nghiên cứu xác định có liên quan đến thiểu tinh vô tinh BN nam vô sinh Do đó, trường hợp nam vơ sinh mà karyotype bình thường kết phân tích ADN sở tư vấn di truyền, chọn giải pháp thích hợp cho BN TẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 9-2012 KẾT LUẬN Trong số 350 BN nam vô sinh vô tinh, phát 27 trường hợp (7,71%) bất thường NST Trong đó, tỷ lệ bất thường cao hội chứng Kilinefelter (16/27 trường hợp = 59,26%) Kết cho thấy, với nam vô sinh vô tinh, cần xét nghiệm tư vấn di truyền trước tiến hành biện pháp điều trị hỗ trợ sinh sản Koulischer L, Schoysman R Chromosome and human infertility Mitotic and meiotic chromosome studies in 202 consecutive male patients Clin Gent 1974, 5, pp.116-126 Lakshmi Rao, Arvind Babu, Murthy Kanakavalli et al Chromosomal abnormalities and Y chromosome microdeletions in infertile men with varicocele and idiopathic infertility of South Indian origin Journal of Andrology 2004, January/February, 25 (1) TÀI LIỆU THAM KHẢO Lanfranco F, Kamischke A, Zitzmann M, Nieschlag E Klinefelter’s syndrome Lancet 2004, pp.273-283 Trung Thị Hằng Nghiên cứu đặc điểm karyotype nam khơng có tinh trùng Khóa luận tốt nghiệp Bác sỹ Y khoa Đại học Y Hà Nội 2007 Trieu Huynh, Richard Mollard, Alan Trounson Selected genetic factors associated with male infertility Human Reproduction Update 2002, (2), pp.183-198 Nguyễn Đức Nhự Nghiên cứu đặc điểm NST phát đoạn AZFc BN vô sinh nam giới Luận văn Thạc sỹ Y học 2009 Bourrouillou G, Dastugue N Chromosome studies in 952 infertile males with a sperm count below 10 million per ml Hum Gent 1985, 71, pp.366-367 Chandley A.C The chromosomal basis of human infertility Br Med Bull 1979, 35, pp.181-186 Van Assche E, Bonduelle M Cytogentics of infertile men, in: Steirteghem AV, Devroey P, editors Gentics and assisted human conception Hum Reprod 1996, 11 Suppl 4, pp.1-24 10 Zuffardi O, Tiepolo L Frequencies and types of chromosome abnormalities associated with human male infertility, genetic control of gamete production and funtion New York Academic Press 1982, pp.261-273 Ngày nhận bài: 30/9/2012 Ngày giao phản biện: 10/10/2012 Ngày giao thảo in: 16/11/2012 TẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 9-2012 ... nguyên nhân thường gặp vô sinh nam Khoảng 13,7% nam giới vô sinh vô tinh 4,6% thiểu tinh mức độ nặng tìm thấy có bất thường NST Trong số đó, bất thường NST giới tính yếu tố bật Ngồi ra, có bất thường. .. 350 BN nam vô sinh vô tinh, phát 27 trường hợp (7,71%) bất thường NST Trong đó, tỷ lệ bất thường cao hội chứng Kilinefelter (16/27 trường hợp = 59,26%) Kết cho thấy, với nam vô sinh vô tinh, cần... hợp vô sinh nam giới Mặc dù nhiều trường hợp nguyên nhân chưa hiểu rõ, yếu tố di truyền liên quan đến vô sinh nam vô tinh (Azoospermia) xác định, bao gồm bất thường NST đoạn nhỏ NST Y Bất thường