BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI BỘ Y TẾ NGUYỄN MẠNH KIÊN PHÂN TÍCH GIÁ TRỊ MỘT SỐ STR MARKER TRONG CHẨN ĐOÁN TRƯỚC SINH MỘT SỐ LỆCH BỘI NHIỄM SẮC THỂ Chuyên ngành Mã số : Y Sinh học Di truyền : 60720106 LUẬN VĂN THẠC SĨ Y HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS.BS Đoàn Thị Kim Phượng PGS.TS Trần Đức Phấn HÀ NỘI - 2018 LỜI CẢM ƠN Với lòng kính trọng biết ơn sâu sắc, xin gửi lời cảm ơn tới TS.BS Đoàn Thị Kim Phượng PGS.TS Trần Đức Phấn, hai Người Thầy hết lòng quan tâm, tận tình giảng dạy, bảo cho tơi đường nghiên cứu khoa học, người trực tiếp hướng dẫn tơi hồn thành luận văn Từ tình cảm chân thành nhất, tơi xin bày tỏ lòng biết ơn tới thầy cô Bộ môn Y sinh học – Di truyền, Trường Đại học Y Hà Nội ln tận tình dạy dỗ, đào tạo tơi suốt trình học tập rèn luyện Bộ môn Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới thầy cô hội đồng thông qua đề cương đưa góp ý vơ giá trị, giúp cho tơi có điều chỉnh để hồn thành luận văn tốt Tôi xin trân trọng cảm ơn Ban Giám hiệu, Phòng Đào tạo sau đại học, Phòng Kế hoạch tổng hợp Trường Đại học Y Hà Nội giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho tơi q trình học tập nghiên cứu Cuối cùng, suốt thời gian học tập nghiên cứu, nguồn động lực để cố gắng tình cảm q giá gia đình bạn bè Vì vậy, tơi xin gửi lời cảm ơn tới gia đình bạn bè, người ủng hộ, giúp đỡ, động viên học tập sống Hà Nội, ngày 22 tháng năm 2018 Tác giả Nguyễn Mạnh Kiên LỜI CAM ĐOAN Tôi Nguyễn Mạnh Kiên, học viên lớp Cao học khóa 25, Trường Đại học Y Hà Nội, chuyên ngành Y sinh học – Di truyền, xin cam đoan: Đây luận văn thân trực tiếp thực hướng dẫn TS.BS Đoàn Thị Kim Phượng PGS.TS Trần Đức Phấn Cơng trình khơng trùng lặp với nghiên cứu khác công bố Việt Nam Các số liệu thông tin nghiên cứu hồn tồn xác, trung thực khách quan, xác nhận chấp thuận sở nghiên cứu Tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm trước pháp luật cam kết Hà Nội, ngày 22 tháng năm 2018 Tác giả Nguyễn Mạnh Kiên DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT BP : Base pair DNA : Deoxyribonucleic Acid FISH : Fluorescence In Situ Hybridization FSH : Follicle-stimulating hormone MSI : Microsatelitte instability NST : Nhiễm sắc thể PCR : Polymerase Chain Reaction QF-PCR : Quantiative Fluorescence-Polymerase Chain Reaction RNA : Ribonucleic Acid STR : Short Tandem Repeat TAQ : Theramus aquaticus MỤC LỤC Nguyễn Mạnh Kiên DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT .4 MỤC LỤC .5 ĐẶT VẤN ĐỀ Chương TỔNG QUAN 1.1 Các bất thường lệch bội thường gặp .3 1.1.1 Hội chứng Down .3 1.1.2 Hội chứng Edwards 1.1.3 Hội chứng Patau Tiến triển bệnh thường xấu: 80% trẻ bị bệnh chết năm đầu Các xét nghiệm di truyền sinh hố giúp ta chẩn đốn sớm giai đoạn phôi thai hội chứng NST 13 Với cặp vợ chồng có nguy cao gia đình có người sinh bị bệnh này, lớn tuổi mà muốn sinh con… có thai cần đến phòng khám di truyền để chẩn đốn trước sinh cho thai nhi, phòng tránh xuất trẻ bị bệnh rối loạn NST nói chung có bệnh NST 13 1.1.4 Một số hội chứng lệch bội NST giới 1.2 Các phương pháp chẩn đoán trước sinh .11 1.2.1 Phương pháp di truyền tế bào .11 - Nuôi cấy tế bào lập karyotyp phương pháp truyền thống xem tiêu chuẩn vàng phân tích rối loạn NST người Ứng dụng kỹ thuật vào chẩn đoán trước sinh bắt đầu nghiên cứu thực vào năm 1966 Steele Breg báo cáo nuôi cấy tế bào ối để xác định NST thai Tế bào ối, máu cuống rốn gai đem ni cấy từ 3-14 ngày, sau dừng chu kỳ tế bào chu kỳ tạc động colchicin Tiến hành thu hoạch tế bào trải lên lam kính, nhuộm băng phân tích NST phần mềm chuyên dụng .11 - Kỹ thuật xác định bất thường số lượng cấu trúc NST với độ xác cao, từ 99,4-99,8% đáng tin cậy 11 - Tuy nhiên nhược điểm phương pháp thời gian trả kết kéo dài từ 14-21 ngày Điều tạo tâm lý bất an kéo dài thai phụ khiến việc chấm dứt thai kỳ định trở nên phức tạp nguy hiểm Bên cạnh đó, kỹ thuật đòi hỏi tay nghề chuyên môn cao người thực .11 1.2.2 Phương pháp di truyền tế bào - phân tử (kỹ thuật lai chỗ huỳnh quang FISH) 12 Phép lai chỗ thực vào năm 1969 hai nhà khoa học Joseph Gall Mary Lou Pardue Hai người công bố cơng trình chứng minh gắn phóng xạ DNA ribosome sử dụng để phát trình tự DNA bổ sung nhân tế bào 12 Ngày nay, đầu dò huỳnh quang thay đầu dò phóng xạ nhờ tính an tồn, dễ phát độ ổn định cao Trên thực tế, đa số kỹ thuật lai chỗ sử dụng phép lai FISH Kỹ thuật FISH ứng dụng rộng rãi giới nhiều lĩnh vực, số ứng dụng phát bất thường lệch bội chẩn đoán trước sinh 12 FISH sử dụng trình tự ngắn chuỗi DNA sợi đơn đánh dấu huỳnh quang, gọi DNA dò DNA dò lai với DNA đích NST tế bào gian kỳ kỳ giữa, sau phân tích kết kính hiển vi huỳnh quang Kỹ thuật FISH có nhiều hạn chế giá thành cao, đòi hỏi thiết bị chuyên môn cao người đọc kết 12 1.2.3 Phương pháp di truyền phân tử - Kỹ thuật QF-PCR (Quantiative 12 flourescence - polymerase chain reaction) 12 1.3 STR marker ứng dụng y học .16 1.3.1 Khái niệm 16 Kết giải trình tự cho thấy phần lớn hệ gen sinh vật nhân chuẩn bậc cao khơng mã hố mRNA hay RNA khác, có 1,5% mã hố protein, RNA chức trình tự điều hồ kiểm sốt biểu chúng Vùng khơng mã hố lại chiếm đến 98,5%, đơn intron DNA gen .16 DNA phân loại thành loại bao gồm: trình tự có chức mã hoá (coding gene) gồm gen (solitary gene), gen lặp (duplicated gene), gen lặp liên tiếp (tandemly repeated array) trình tự khơng mã hố (non-coding DNA) gồm DNA trình tự đơn giản, yếu tố DNA di động DNA đệm 16 1.3.2 Ứng dụng STR marker y học 18 1.3.3 Các nghiên cứu ứng dụng QF-PCR để chẩn đoán trước sinh lệch bội NST Việt Nam giới .21 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 25 25 2.1 Đối tượng nghiên cứu .25 2.2 Địa điểm nghiên cứu 25 Nghiên cứu tiến hành Trung tâm tư vấn di truyền thuộc bệnh viện Đại học Y Hà Nội 25 2.3 Thời gian nghiên cứu 25 Nghiên cứu tiến hành từ tháng 9/2016 đến tháng 8/2018 25 2.4 Phương pháp nghiên cứu .26 2.4.1 Thiết kế nghiên cứu .26 Là nghiên cứu mô tả cắt ngang .26 2.4.2 Cỡ mẫu 26 Cỡ mẫu nghiên cứu xác định theo công thức sau: 26 2.4.3 Sơ đồ nghiên cứu 27 2.5 Hóa chất, phương tiện sử dụng nghiên cứu 28 Hóa chất nghiên cứu : 28 Kit tách DNA từ tế bào ối: QIAamp DNA Mini Kit 28 Bộ kit Devyser complete v2 cho phản ứng PCR điện di mao quản 28 Phương tiện : 28 Máy PCR Bio – Rad 28 Máy đo nồng độ DNA, máy ly tâm 28 Tủ lạnh sâu, bàn ủ nhiệt 28 Pipet định mức, đầu côn loại, ống PCR, ống Eppendorf 1,5ml, ống Falcon vô trùng 28 Máy điện di mao quản ABI 3500XL .28 Phần mềm phân tích DNA fragment: GenneMapper 28 2.6 Kỹ thuật sử dụng phương pháp QF-PCR 28 2.6.1 Tách chiết DNA 28 2.6.2 Xác định mức độ tinh DNA 29 2.6.3 Thực phản ứng PCR khuếch đại trình tự STR 29 Dùng kit Devyser complete v2 29 2.6.4 Điện di máy ABI 3500XL 32 DNA thai (chiết xuất từ dịch ối) sau PCR khuếch đại trình tự STR điện di máy ABI 3500XL 32 2.6.5 Phân tích kết 32 Kết điện di thu phân tích phần mềm Genmapper 32 Phân tích kết dựa theo Guideline tổ chức Di truyền tế bào học lâm sàng (ACC) Hội di truyền phân tử lâm sàng (CMGS) năm 2012 Hướng dẫn thực hành hãng Devyser 32 Phân biệt marker đồng hợp dị hợp: 32 2.7 Kỹ thuật sử dụng phương pháp di truyền tế bào 34 2.7.1 Nuôi cấy tế bào .34 Sau nhận mẫu, tiến hành cấy mẫu nhanh 34 Ly tâm ống lấy mẫu chứa dịch ối 1000 vòng/phút, 10 phút 34 Tiến hành nuôi cấy tủ an toàn sinh học 34 Dùng bơm kim tiêm hút hết phần dịch nổi, giữ lại tế bào ối Bổ sung thêm 3-4 ml môi trường Amnio Max trộn .34 Chuyển tất môi trường dịch nuôi vào lọ nuôi cấy 34 Chuyển lọ nuôi cấy vào tủ ấm 37 độ C, môi trường CO2 5% .34 Sau khoảng - 10 ngày mang soi kính hiểu vi đảo ngược để đánh giá mức độ bám tế bào Nếu tế bào bám tốt tiến hành thay môi trường Trút dung dịch sang lọ để tiến hành lưu mẫu Bổ sung môi trường vào chai nuôi cấy ban đầu tiếp tục theo dõi 34 2.7.2 Các bước thu hoạch tế bào 35 Sau xác lập thời điểm thu hoạch tế bào, tiến hành bước sau: 35 Nhỏ vào chai nuôi cấy dung dịch Colcemid để dừng trình phân bào Để tủ ấm 37 độ C 35 Đổ bỏ dung dịch chai, bổ sung 3ml dung dịch trypsin EDTA, để tủ ấm 10 phút 35 Kiểm tra kính hiển vi, tế bào bong hết chuyển tồn dịch sang ống falcon 15ml Rửa lại 2ml môi trường chuyển tất vào ống falcon 35 Ly tâm ống falcon 2500v/phút 10 phút 35 Hút bỏ dịch nổi, bổ sung KCL để tủ âm 30 phút .35 Ly tâm 2500 vòng/phút 10 phút 35 Hút bỏ dịch nổi, cố định từ từ dung dịch Carnoy để lạnh 35 Để ngăn mát tủ lạnh 45 phút 35 Ly tâm rửa lại nhiều lần với Carnoy cho 35 2.7.3 Lập tiêu nhuộm tiêu 35 Ly tâm ống thu hoạch 2500 vòng/phút 10 phút 35 Hút bỏ phần dịch phía trên, để lại khoảng 0.5 ml cặn 35 Trộn dùng pipet nhỏ lên lam kính xử lý 35 Để khô, chờ sấy nhuộm .35 Mang lam sấy 80 độ C .36 Chuẩn bị bể nhuộm Giemsa bể nhuộm Trypsin .36 Dừng hoạt độ Trypsin dung dịch Buffer lạnh .36 Nhuộm Giemsa 10 phút rửa sạch, để khô .36 2.7.4 Phân tích tiêu nhiễm sắc thể 36 Chụp hình cụm NST kính hiển vi hệ thống camera có kết nối máy tính 36 Lập karyotyp phân tích bất thường NST với phần mềm phân tích Ikaros analysis 36 Kết luận NST mẫu dịch ối 36 2.8 Xử lý phân tích số liệu 36 Số liệu nghiên cứu xử lý phần mềm SPSS 16.0 36 2.9 Đạo đức nghiên cứu .36 Chương .37 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 37 3.1 Đặc điểm chung đối tượng 37 3.1.1 Tỷ lệ giới tính thai 37 3.1.2 Phân bố tuổi thai 38 3.2 Tỷ lệ dị hợp tử, đồng hợp tử STR marker 39 3.2.1 Tỷ lệ dị hợp tử, đồng hợp tử marker STR NST 13 39 3.2.2 Tỷ lệ dị hợp tử, đồng hợp tử marker NST 18 39 3.2.3 Tỷ lệ dị hợp tử, đồng hợp tử marker NST 21 40 3.2.4 Tỷ lệ dị hợp tử, đồng hợp tử marker NST X 42 3.2.5 Tỷ lệ dị hợp tử, đồng hợp tử marker NST Y 43 Nhận xét: 43 Có marker sử dụng để phát NST Y XY2, XY3, AMELXY, ZFYX SRY Hai marker XY2, XY3 phát đồng thời không phân biệt NST X Y nêu trên, marker lại khơng phải STR nên chúng tơi khơng phân tích tính đồng/dị hợp tử 43 3.3 Giá trị STR marker sử dụng kỹ thuật QF-PCR để chẩn đoán lệch bội NST .43 3.3.1 Tỷ lệ phát alen NST 13 STR marker .43 Tỷ lệ phát alen NST 13 STR marker 43 Khả chẩn đoán tổ hợp marker rút gọn cho NST 13 44 3.3.2 Tỷ lệ phát alen NST 18 STR marker .45 Tỷ lệ phát alen NST 18 STR marker 45 Khả chẩn đoán tổ hợp marker rút gọn cho NST 18 47 3.3.3 Tỷ lệ phát alen NST 21 STR marker .49 Tỷ lệ phát alen NST 21 STR marker 49 Khả chẩn đoán tổ hợp marker rút gọn cho NST 21 50 3.3.4 Tỷ lệ phát alen NST giới STR marker .50 Tỷ lệ phát alen NST X STR marker 51 Tỷ lệ phát alen marker SRY 100% .51 Tỷ lệ phát alen chung cho NST X Y marker 52 3.4 Kết phương pháp chẩn đoán trước sinh (QF-PCR di truyền tế bào) .53 3.4.1 Tỷ lệ thành công phương pháp QF-PCR di truyền tế bào 53 Tuần thai 53 Tỷ lệ thành công % 53 Số lượng 53 Di truyền tế bào .53 QF-PCR 53 16 đến ≤ 17 tuần 53 100 53 100 53 530 53 > 17 đến ≤ 18 tuần 53 57 H T N Lan, B Đ Thắng, H T Hương cộng (2016) Giá trị chẩn đoán bất thường số lượng nhiễm sắc thể marker kỹ thuật QF-PCR Tạp chí y học Việt Nam, 444, 23-26 58 K Mann, S P Fox, S J Abbs, et al (2001) Development and implementation of a new rapid aneuploidy diagnostic service within the UK National Health Service and implications for the future of prenatal diagnosis The Lancet, 358, 1057-1061 59 S.-H Han, J.-S Ryu, J.-W An (2010) Validation of QF-PCR for Rapid Prenatal Diagnosis of Common Chromosomal Aneuploidies in Korea Journal of Genetic Medicine, 7, 59-66 60 Ư Ư KAYA, A K, T R ƯZDEMİR, et al (2017) QF-PCR in invasive prenatal diagnosis: a single-center experience in Turkey Turk J Med Sci, 47 61 Y Huang, Y Qi, J Xi, et al (2012) Analysis of genetic polymorphism of nine short tandem repeat loci in Chinese Han population of Henan province African Journal of Biotechnology, 11 (22), 5988-5994 62 C Bili, A Divane, A Apessos., et al (2002) Prenatal diagnosis of common aneuploidies using quantitative fluorescent PCR Prenat Diagn, 22, 360-365 63 E S Mansfield (1993) Diagnosis of Down Syndrome and other aneuploidies using quantitative polymerase chain reaction and small tandem repeat polymorphisms Hum Mol Genet, 2, 43-50 64 C Badenas, L Rodríguez-Revenga, C Morales, et al (2010) Assessment of QF-PCR as the First Approach in Prenatal Diagnosis The Journal of Molecular Diagnostics, 12 (6), 828-834 65 Z Rosenwaks, A H Handyside (2018) Is preimplantation genetic testing for aneuploidy an essential tool for embryo selection or a costly ‘add-on’of no clinical benefit? Fertility and sterility, 110 (3), 351-352 66 S Gu, M Jernegan, I B Van den Veyver, et al (2018) Chromosomal microarray analysis on uncultured CVS can be complicated by confined placental mosaicism for aneuploidy and microdeletions Prenatal diagnosis PHỤ LỤC Hình ảnh NST đồ QF-PCR trường hợp Klinefelter Karyotyp: 47,XXY (Người nam mắc hội chứng Klinefelter) Chú thích: - Các marker cho NST 13, 18, 21 cho tỷ lệ peak 1:1, trừ marker 21D 21H đồng hợp tử Kết phối hợp marker cho thấy tình trạng lệch bội NST 13, 18 21 - Đối với NST giới: • Hai marker X1, X3 đồng hợp tử; hai markerX2, X9 có tỷ lệ peak 1:1; hai marker T1 T3 có tỷ lệ 1:1 cho thấy tồn alen NST X • Marker SRY dương tính cho thấy tồn alen NST Y • Marker XY2 có tỷ lệ peak 1:1:1, marker XY3 có tỷ lệ peak 2:1, marker AMELXY có tỷ lệ peak 2:1 ZFYX có tỷ lệ peak 1:2 cho thấy tồn tổng alen NST giới X Y - Phối hợp tất marker cho thấy kiểu karyotyp XXY NST giới khơng có bất thường lệch bội NST 13, 18 21 DANH SÁCH BỆNH NHÂN NGHIÊN CỨU TT Tên Mã số STT Tên Mã số DANG THUY D CO17001 26 TRAN THI THANH T CO17052 NGUYEN THI B CO17002 27 DO THI M CO17053 BUI THU H CO17007 28 VUONG THI T CO17054 PHAM THI THANH H CO17008 29 NGUYEN HONG H CO17056 DAO THI T CO17009 30 NGUYEN THI N CO17057 HOANG THI H CO17011 31 NGUYEN THI K CO17058 KIEU THU H CO17014 32 NGUYEN THI D CO17063 TO HOANG ANH N CO17015 33 PHAM THI M CO17064 NGUYEN THI THUY N CO17016 34 NGUYEN THI H CO17065 10 HOANG THUY T CO17017 35 PHUNG THI H CO17066 11 HOANG THI LAN A CO17019 36 LUU THI T CO17067 12 TRAN THI B CO17021 37 NGUYEN THI L CO17069 13 VU THI THANH T CO17022 38 TRINH THI D CO17070 14 DAO THI M CO17023 39 PHAM THI Y CO17072 15 TU THI MINH T CO17024 40 PHAN THI H CO17076 16 DO THI H CO17029 41 NGUYEN THI N CO17076 17 NGUYEN THI BICH N CO17030 42 DOAN THI MY D CO17081 18 DO THI T CO17034 43 NGUYEN BINH A CO17089 19 BUI NGOC H CO17039 44 LAM THI H CO17090 20 NGUYEN THI M CO17040 45 PHAM THI HONG D CO17093 21 VU THI D CO17044 46 PHAM THI T CO17094 22 NGUYEN DO Q CO17045 47 NGUYEN THI THU H CO17101 23 TO THI K CO17046 48 BUI THI D CO17104 24 NGUYEN THI HUONG G CO17049 49 NGUYEN THI N CO17111 25 DAO DIEM H CO17051 50 HOANG DIEU L CO17112 STT Tên Mã số STT Tên Mã số 51 NGUYEN THI H CO17114 76 NGUYEN THI MAI H CO17183 52 NGUYEN THI H CO17124 77 NGUYEN THI D CO17186 53 NGUYEN THI M CO17126 78 TRAN THI THU P CO17187 54 NGUYEN THI V CO17130 79 CAO THI THU H CO17193 55 NGUYEN THI THU H CO17131 80 NGUYEN THI H CO17197 56 LE THI KIM O CO17132 81 NGUYEN THI NHU Q CO17198 57 NGUYEN THI D CO17133 82 CAO THI THUY L CO17201 58 LE THI HUYEN T CO17134 83 NGUYEN THI D CO17203 59 NGUYEN THI T CO17135 84 HOANG THI T CO17204 60 NGUYEN THIEN H CO17147 85 TRAN THANH T CO17225 61 TRAN THI H CO17148 86 NGUYEN THI HAI Y CO17227 62 DINH THI LAN H CO17150 87 DAO THI V CO17231 63 DANG THI LAN A CO17152 88 LE PHUONG M CO17232 64 TRAN THI NGOC P CO17156 89 PHAM THUY H CO17235 65 NGUYEN THI H CO17157 90 TRAN THI THU H CO17238 66 BUI THI N CO17159 91 VUONG THI V CO17242 67 DO THI H CO17161 92 PHAM THI VAN H CO17243 68 NGUYEN THI Q CO17164 93 NGUYEN THI THANH M CO17245 69 BUI THI THU H CO17167 94 TRAN THU H CO17249 70 DUONG THI M CO17170 95 KHUONG THI H CO17250 71 NGO THI K CO17171 96 DO THI T CO17251 72 TRAN THI H CO17173 97 LE THI L CO17252 73 DO THI Y CO17174 98 NGUYEN THI T CO17256 74 LE THI C CO17176 99 VU THI K CO17257 75 DO THI H CO17177 100 KHUONG THI T CO17265 STT Tên Mã số STT Tên Mã số 101 HA THU H CO17266 126 NGUYEN DIEU T CO17350 102 THAI HUYEN T CO17271 127 NGUYEN THI D CO17351 103 NGUYEN THI THANH H CO17276 128 NGUYEN THI BANG T CO17353 104 NGUYEN THI T CO17278 129 NGUYEN HUYEN T CO17354 105 NGUYEN THI H CO17281 130 LE THI T CO17356 106 NGO THI L CO17286 131 NGUYEN THI L CO17375 107 PHAM HONG H CO17287 132 NGUYEN HAI L CO17376 108 NGUYEN THI D CO17288 133 NGUYEN THI D CO17377 109 PHAM THI KIM L CO17291 134 DUONG THI PHUONG L CO17378 110 NGUYEN THI VAN A CO17297 135 LE THI N CO17380 111 HOANG MINH H CO17308 136 DAO THI H CO17381 112 NGUYEN THI THUY H CO17309 137 CAO THI T CO17382 113 VU THI HA T CO17311 138 TO THI VAN A CO17383 114 DAO THI T CO17312 139 DANG THI O CO17385 115 NGUYEN THI T CO17314 140 HOANG THI T CO17387 116 LE THI X CO17316 141 NGUYEN THI C CO17388 117 NGUYEN THI HOAI P CO17320 142 DO THI B CO17389 118 CAO THI N CO17324 143 NGUYEN THI T CO17392 119 LE THI D CO17326 144 NGUYEN THI THANH A CO17393 120 LE THI H CO17327 145 LE THI X CO17394 121 NGUYEN THI D CO17334 146 NGUYEN THI L CO17395 122 NGUYEN THI HOA H CO17345 147 DAO HUONG G CO17396 123 TRAN THU T CO17346 148 LE HUONG T CO17398 124 NGUYEN THI PHUONG L CO17348 149 TRAN THI T CO17399 125 NGUYEN THI H CO17349 150 LE THI NH CO17400 STT Tên Mã số STT Tên Mã số 151 NGUYEN THI THUY H CO17401 176 VU HONG P CO17433 152 NGUYEN MY B CO17402 177 HOANG THI H CO17434 153 TRAN THI X CO17403 178 KIEU PHUONG T CO17435 154 PHUNG THI T CO17404 179 BUI THI M CO17436 155 NGUYEN THI H CO17406 180 HOANG THI M CO17437 156 LE THI L CO17407 181 NGUYEN THI L CO17439 157 HA THI BICH H CO17408 182 BUI THI T CO17440 158 NGUYEN THI O CO17409 183 PHAM THI B CO17441 159 TRAN THUY H CO17410 184 LE THI L CO17443 160 NGUYEN THI H CO17411 185 PHAM THI C CO17444 161 LE THI MINH T CO17416 186 NGUYEN THI HUONG S CO17445 162 HA THU H CO17417 187 TRAN THI H CO17446 163 NGUYEN THI PHUONG T CO17419 188 VUONG THI Q CO17447 164 NGUYEN THI N CO17420 189 LE THI QUYNH H CO17448 165 NGUYEN THI THU A CO17421 190 NGUYEN THI M CO17449 166 MA NGOC A CO17422 191 NGUYEN THI U CO17450 167 LE THI H CO17423 192 NGUYEN THI H CO17451 168 PHAM THI L CO17424 193 BUI THI B CO17453 169 TU THI Q CO17425 194 LE THI KIEU A CO17454 170 TA THI O CO17426 195 BUI THI L CO17455 171 DO THI THU H CO17428 196 DOAN THI M CO17456 172 NGUYEN THI MINH H CO17429 197 LE THI KIM T CO17457 173 DUONG THI HONG A CO17430 198 DINH THI T CO17458 174 BUI THU H CO17431 199 NGUYEN THI T CO17459 175 NGUYEN THI T CO17432 200 CHU THI V CO17461 Mã số STT STT Tên Tên Mã số 201 DO QUYNH L CO17462 226 PHAM THI THU H CO17491 202 BUI THI T CO17463 227 HOANG THI A CO17492 203 PHAM THI HAI A CO17464 228 NGUYEN THI MAI H CO17493 204 DUONG THI T CO17465 229 TRAN THI BICH P CO17494 205 LU THUY V CO17466 230 NGUYEN THI PHUONG A CO17495 206 LE THI T CO17467 231 LE THI M CO17496 207 NGUYEN THI Q CO17469 232 DO THI H CO17497 208 VU THI B CO17470 233 TRAN THI H CO17498 209 LAI THI THU H CO17471 234 NGUYEN THI PHUONG T CO17500 210 TRAN THI T CO17472 235 NGUYEN THI L CO17501 211 NGUYEN THI H CO17473 236 NGUYEN THI N CO17502 212 BUI THI QUYNH A CO17474 237 NGUYEN PHUONG H CO17503 213 NGUYEN THI KIM A CO17475 238 NGUYEN THI HONG P CO17504 214 NGUYEN THI L CO17478 239 BUI THI LE H CO17505 215 MAI THI H CO17479 240 HOANG KHANH L CO17506 216 NGUYEN THI O CO17480 241 LE THI BICH C CO17508 217 HOANG THI T CO17481 242 DOAN THI VAN C CO17509 218 VU THI H CO17482 243 NGUYEN NGOC A CO17510 219 KIEU THI C CO17483 244 LE THI KIM D CO17511 220 VU THI T CO17485 245 NGUYEN THU T CO17512 221 KIM THI L CO17486 246 NGUYEN THUY L CO17514 222 TRAN THI THU T CO17487 247 PHAM THI HUONG G CO17515 223 NGUYEN THI N CO17488 248 DINH THI T CO17516 224 NGUYEN THI H CO17489 249 DUONG THI T CO17517 225 VU THI THUY H CO17490 250 NGUYEN THI HANH T CO17518 Mã số STT Tên STT Tên Mã số 251 NGUYEN THU H CO17520 276 NGUYEN THI G CO17548 252 BUI THI L CO17521 277 NGUYEN THI THANH H CO17549 253 NGUYEN THI A CO17522 278 TRAN MINH N CO17550 254 PHAM THI THU H CO17523 279 LE THI THANH L CO17551 255 TRAN THI N CO17524 280 HOANG THI T CO17552 256 LE THI THU H CO17525 281 HOANG THI O CO17553 257 LE THI THANH L CO17526 282 NGUYEN THI A CO17554 258 NGUYEN THI N CO17527 283 TRIEU MY G CO17555 259 TRUONG MAI L CO17528 284 NGUYEN THI THUY N CO17556 260 DUONG THI L CO17529 285 DOAN THI YEN B CO17558 261 NGUYEN THI THUONG H CO17530 286 BUI KIM T CO17559 262 LUONG THI L CO17531 287 NGUYEN THI MINH D CO17561 263 NGUYEN THI BAO N CO17532 288 MAI THI P CO17562 264 LE THI H CO17534 289 PHAN THI KIM O CO17563 265 HOANG THI T CO17536 290 BUI THANH M CO17564 266 NGUYEN THI D CO17537 291 NGUYEN THU T CO17565 267 CHU THI THANH H CO17538 292 CHU THI THU T CO17566 268 HOANG THI T CO17539 293 LE THI H CO17567 269 NGUYEN THI D CO17540 294 NGUYEN THI T CO17568 270 NGUYEN THI V CO17541 295 BUI THI N CO17569 271 LE THI NHU X CO17542 296 LUONG THI H CO17572 272 NGUYEN THI L CO17544 297 NGUYEN THI H CO17573 273 BUI HONG K CO17545 298 LE THI S CO17574 274 TO THI K CO17546 299 NGUYEN THI P CO17575 275 NGUYEN THI HONG N CO17547 300 MAI THI HONG D CO17576 STT Tên Mã số STT Tên Mã số 301 LE THI H CO17577 326 TRAN THI THANH N CO17606 302 VU THI M CO17578 327 HA THI H CO17608 303 LE THI THU H CO17579 328 TRAN THI T CO17609 304 HOANG THI Y CO17580 329 NGUYEN THI THANH X CO17610 305 BUI THUY N CO17581 330 DANG THI P CO17611 306 LE THI THANH N CO17582 331 NGO THI T CO17612 307 NGUYEN THI T CO17583 332 CAO THI P CO17613 308 PHAM THI H CO17584 333 HOANG THI M CO17614 309 NGUYEN TUONG D CO17586 334 TRAN THI KIM P CO17616 310 BUI THI THU H CO17587 335 NGUYEN THI Y T CO17617 311 NGUYEN THI D CO17588 336 DO THI D CO17618 312 TRAN THI N CO17589 337 VU THI T CO17619 313 NGUYEN BICH L CO17591 338 NGUYEN THI T CO17620 314 BUI THI H CO17593 339 DO THI D CO17621 315 LE THI MINH H CO17594 340 PHAN THI H CO17623 316 NGUYEN THI THU H CO17595 341 LE THI KIM L CO17624 317 HOANG THI H CO17596 342 NGUYEN THI N CO17625 318 BUI PHUONG Q CO17597 343 NGUYEN THI CUC P CO17627 319 DO THI THU H CO17598 344 NGUYEN THI H CO17628 320 NGUYEN THI T CO17599 345 NGUYEN THI MINH P CO17630 321 NGUYEN THI THU H CO17601 346 PHAN LE THANH T CO17631 322 TO THI THANH T CO17602 347 LE THI D CO17632 323 NGUYEN QUYNH G CO17603 348 DO THI MINH T CO17633 324 VU THI T CO17604 349 TRINH THU T CO17634 325 TRAN THI L CO17605 350 VU THI M CO17635 STT Tên Mã số STT Tên Mã số 351 NGUYEN PHUONG T CO17636 376 LUONG BAO C CO18025 352 PHAM THI C CO17638 377 TRAN THANH T CO18026 353 NGUYEN THI P CO17640 378 HA THI H CO18029 354 LA THI H CO17641 379 NGUYEN THI H CO18030 355 NGUYEN THI HOAI L CO17642 380 DANG THI D CO18031 356 PHAM THI M CO17643 381 TRAN THI THU H CO18032 357 PHAM THI T CO17644 382 DO THI N CO18034 358 HA THANH H CO17646 383 DOAN THI THU T CO18035 359 LE THI T CO17647 384 PHUNG THI THANH N CO18036 360 PHAM THI T CO17649 385 NGUYEN THI P CO18039 361 DINH THI KIM V CO18001 386 PHAN THI HOAI P CO18040 362 DO THI Y CO18002 387 PHAM THI THUY L CO18041 363 LE THI H CO18003 388 TRAN THI H CO18043 364 TRAN THI G CO18004 389 NGUYEN THI T CO18044 365 DO THI KIM D CO18005 390 TRAN THI THU H CO18045 366 MAI THI VIET H CO18006 391 NGUYEN THI D CO18046 367 NGUYEN THI B CO18007 392 NGUYEN THI H CO18047 368 PHAM THI THANH H CO18008 393 DO THI TUYET N CO18049 369 NGUYEN THI A CO18017 394 TRAN THI Q CO18050 370 LE THI Y CO18018 395 NGUYEN THI QUYNH H CO18051 371 DOAN THI L CO18019 396 PHAM THI O CO18052 372 HAN THI BICH H CO18020 397 TRAN THI T CO18053 373 NGUYEN THI THANH P CO18022 398 NGUYEN THI THUY D CO18055 374 NGUYEN THI N CO18023 399 VU THI T CO18056 375 LE HONG N CO18024 400 DANG ANH N CO18057 STT Tên Mã số STT Tên Mã số 401 NGUYEN THI T CO18058 426 LE THI L CO18096 402 TU THI T CO18059 427 NGUYEN THI MAI L CO18098 403 HOANG HONG V CO18063 428 NGUYEN THI QUYNH T CO18100 404 DO THI THANH T CO18065 429 LE THI T CO18101 405 TRINH THI VAN A CO18068 430 NGUYEN THI VAN A CO18102 406 NGO THI PHUONG T CO18069 431 VU THI Q CO18103 407 PHAM DUY T CO18070 432 HOANG THI LE Q CO18104 408 PHAM THI THU T CO18072 433 TRAN THI T CO18105 409 TRAN THUY N CO18073 434 DAO THI TRA G CO18107 410 DAO THI NGOC A CO18074 435 NGUYEN THI D CO18108 411 NGUYEN THI LAN H CO18076 436 HOANG THI N CO18109 412 DO THI H CO18077 437 NGUYEN THI T CO18110 413 PHAM THI T CO18078 438 BUI THI HANG N CO18111 414 NGO THI HAI Y CO18080 439 TRAN THI THUY N CO18113 415 NGUYEN THI A CO18081 440 PHAM THI D CO18116 416 TRAN THI N CO18082 441 NGUYEN THI T CO18117 417 NGUYEN THI THU T CO18083 442 NGUYEN THI L CO18118 418 CHU MINH T CO18084 443 VU THI H CO18119 419 NGUYEN THI T CO18085 444 NGUYEN THI QUYNH T CO18199 420 DINH THI T CO18087 445 DINH THI PHUONG A CO18120 421 NGUYEN THI H CO18088 446 NGUYEN THI P CO18122 422 DO THI T CO18089 447 CHU THI S CO18123 423 HOANG ANH T CO18090 448 LUU THI T CO18126 424 PHAM THI L CO18092 449 LE THI G CO18127 425 NGUYEN KIM A CO18095 450 NGUYEN THI CAM L CO18128 STT Tên Mã số STT Tên Mã số 451 NGUYEN THI T CO18129 476 TA KIM T CO18167 452 PHAM THI H CO18130 477 DANG THI H CO18168 453 MA THI D CO18131 478 PHAM THI T CO18169 454 LE THI THU H CO18132 479 TRAN THI N CO18175 455 TRINH THI O CO18133 480 DONG THI P CO18176 456 PHAM THI T CO18136 481 LE THI H CO18178 457 NGUYEN THANH G CO18137 482 TRAN THI H CO18180 458 DUONG THI H CO18141 483 DAO THI BICH L CO18181 459 HOANG THI L CO18142 484 NGUYEN THI T CO18182 460 NGUYEN THI T CO18145 485 NGUYEN THI N CO18183 461 TRAN THI T CO18147 486 NGO THI KIM D CO18184 462 TA THI CHUNG T CO18148 487 NGUYEN THI M CO18185 463 NGUYEN THI N CO18149 488 DANG THI H CO18186 464 NGUYEN THI Y CO18153 489 DUONG THI H CO18187 465 VU THI M CO18154 490 NHU THI D CO18188 466 DO THI THANH D CO18155 491 VU THI HONG G CO18189 467 VU THI THANH T CO18156 492 MA THI MINH H CO18190 468 LUU THI H CO18157 493 TRAN THI D CO18191 469 DAO THI H CO18158 494 TRAN THI D CO18193 470 NGUYEN THI HONG L CO18159 495 LE THI L CO18195 471 HOANG GIANG L CO18160 496 DAO THI ANH T CO18196 472 DO THI P CO18161 497 PHAM THI HAI Y CO18197 473 TRAN THI H CO18162 498 TRUONG THI BICH N CO18198 474 TRINH PHUONG L CO18163 499 NGUYEN THI D CO18200 475 LE THI Y CO18166 500 NGUYEN THI P CO18207 STT Tên Mã số STT Tên Mã số 501 TRAN THI H CO18214 516 PHAM THI H CO18238 502 TO THU P CO18216 517 DO THI THANH H CO18239 503 BUI THI ANH Q CO18218 518 HOANG THI L CO18240 504 NGUYEN THUY D CO18219 519 DINH HOAI T CO18241 505 TRUONG NGOC H CO18220 520 DANG THI M CO18242 506 NGUYEN THU P CO18226 521 TRAN THI G CO18243 507 NGHIEM THI QUYNH A CO18227 522 BUI THI KIM T CO18244 508 PHUNG THI N CO18228 523 TRAN THI X CO18245 509 DO THI L CO18229 524 LE THI KIM O CO18247 510 VU THI M CO18230 525 CHU THI N CO18248 511 NGUYEN THI H CO18232 526 NGO THANH T CO18250 512 TRAN THI L CO18233 527 KIEU THI H CO18253 513 PHAM THI THANH N CO18234 528 NGO THUY D CO18254 514 NGUYEN THI T CO18236 529 DANG THI THANH N CO18256 515 PHAM THI D CO18237 530 LAM THI D CO18257 Hà Nội, ngày 22 tháng năm 2018 Xác nhận giáo viên hướng dẫn Xác nhận Phòng KHTH Bệnh viện Đại học Y Hà Nội ... chẩn đoán trước sinh số lệch bội nhiễm sắc thể với mục tiêu: Xác định tỷ lệ đồng hợp tử, dị hợp tử STR marker sử dụng kỹ thuật QF-PCR để chẩn đoán trước sinh số lệch bội nhiễm sắc thể Đánh giá giá... kỹ thuật QF-PCR để chẩn đoán lệch bội nhiễm sắc thể giới 60 4.3 Giá trị phương pháp QF-PCR chẩn đoán lệch bội nhiễm sắc thể 62 Kỹ thuật phân tích nhiễm sắc thể đồ từ tế bào... tế bào chẩn đoán lệch bội NST 54 BÀN LUẬN 55 4.1 Giá trị marker sử dụng kỹ thuật QF-PCR để chẩn đoán lệch bội nhiễm sắc thể 13, 18, 21 55 4.2 Giá trị marker