1 ĐẶT VẤN ĐỀ Lơxêmi (LXM) cấp nhóm bệnh thường gặp bệnh quan tạo máu Bệnh gặp lứa tuổi, biểu bệnh đa dạng Tại Việt Nam, tác giả Đỗ Trung Phấn Trần Thị Minh Hương (2002) đ`ã nghiên cứu tình hình bệnh máu viện Huyết học-Truyền máu, Bệnh viện Bạch Mai thấy bệnh LXM cấp gặp với tỷ lệ cao (chiếm 38,5%) số bệnh máu gặp Bệnh viện Bạch Mai [1] Ở trẻ em, Lơxêmi cấp loại ung thư phổ biến, chiếm khoảng 31% tổng số ca ung thư trẻ em 15 tuổi năm từ 1990-1995 Mỹ, Lơxêmi cấp dòng lympho chiếm đến 3/4.Ước tính năm Mỹ có khoảng 3250 trường hợp trẻ em chẩn đốn Lơxêmi cấp, khoảng 2400 trường hợp Lơxêmi cấp dòng lympho Tỷ lệ mắc LXM cấp dòng lympho trẻ em Mỹ 3.74.9/100000 người năm [2],[3] Từ nhiều năm nay, với phát triển phương pháp hình thái học, phương pháp hóa học tế bào, việc chẩn đốn LXM cấp dòng lympho có nhiều thuận lợi Tuy nhiên có số khó khăn định phụ thuộc nhiều yếu tố chủ quan phân tích kết quả, số sai sót gặp trình thực kỹ thuật,… làm ảnh hưởng đến cơng tác chẩn đốn thể bệnh, qua ảnh hưởng đến việc điều trị tiên lượng Trong năm gần đây, với phát triển phương pháp Đếm tế bào dòng chảy giới Việt Nam, việc chẩn đoán LXM cấp nói chung LXM cấp dòng lympho trẻ em nói riêng có bước tiến rõ rệt Phương pháp có độ nhạy, độ đặc hiệu cao hơn, đem lại hiệu cao, giúp chẩn đoán thể bệnh xác hơn, từ giúp ích cho việc điều trị tiên lượng bệnh Đã có số nghiên cứu xếp loại MDH LXM cấp sử dụng phương pháp Đếm tế bào dòng chảy Việt Nam, nhiên chưa có nhiều nghiên cứu tiến hành đối tượng trẻ em Vì chúng tơi thực đề tài “Nghiên cứu biểu dấu ấn miễn dịch Lơxêmi cấp dòng lympho trẻ em phương pháp Đếm tế bào dòng chảy Viện Huyết họcTruyền máu Trung ương” với mục tiêu: Nghiên cứu biểu dấu ấn miễn dịch để xếp loại Lơxêmi cấp dòng lympho trẻ em Viện Huyết học- Truyền máu Trung ương từ tháng 10/2013 đến tháng 8/2014 Bước đầu tìm hiểu mối liên quan số dấu ấn miễn dịch với đáp ứng điều trị sau đợt điều trị cảm ứng Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Khái quát dấu ấn q trình sinh sản biệt hóa tế bào máu 1.1.1 Các dấu ấn biệt hóa tế bào máu Trong q trình sinh sản, biệt hóa tế bào máu, tế bào trải qua thay đổi cấu trúc nhân, nguyên sinh chất đặc biệt có hình thành dấu ấn mang tính chất đặc trưng cho dòng, chí cho loại tế bào dấu ấn tương ứng với giai đoạn biệt hóa Việc xác định dấu ấn biệt hóa cho phép nhận dạng xác tế bào máu Dấu ấn màng đặc trưng cho tế bào gốc tạo máu CD34 Sau với q trình sinh sản biệt hóa tế bào gốc thành tế bào gốc định hướng dòng tủy hay định hướng dòng lympho, mật độ dấu ấn CD34 màng tế bào gốc giảm dần xuất thêm dấu ấn khác đặc trưng đánh dấu q trình biệt hóa Năm 1981, hội nghị quốc tế kháng nguyên màng bạch cầu thống đặt tên dấu ấn màng CD (Cluster of Differentiation - cụm biệt hóa) Cho đến người ta phát khoảng 360 CD Các CD không xuất màng tế bào mà số CD xuất bào tương nhân tế bào [4] 1.1.2 Sự trưởng thành dấu ấn biệt hóa tế bào dòng lympho Tế bào mẹ dòng lympho chung (CFU-L) phát triển từ tế bào gốc sinh máu Từ đây, chúng phân chia (theo chức năng) thành nhóm lympho T (85%), lympho B (10%) NK- Natural Killer cell (5-10%) [5] Dòng lympho B: trưởng thành từ tế bào mẹ lympho chung (CFUL), trải qua giai đoạn biệt hóa khác tủy xương, song song với việc xuất hiện, thay đổi mức độ biểu CD để trở thành tế bào trưởng thành máu ngoại vi Sự có mặt tế bào đệm tủy xương tiết cytokine cần thiết cho q trình biệt hóa [6] Trong đó, CD diện sớm ổn định tất giai đoạn biệt hóa cyCD79a, cyCD22, smCD22, CD19, HLA-DR Các dấu ấn trưởng thành CD20, cyIgM, sIgM, Igµ Igλ [7] Dòng lympho T: q trình biệt hóa trưởng thành xảy tủy xương tuyến ức, trải qua nhiều giai đoạn với hình thành biến CD đặc trưng, với hỗ trợ tế bào biểu mô, tế bào đuôi gai đại thực bào tuyến ức [6] Có giai đoạn phát triển [7]: - Giai đoạn T sớm: xảy tủy xương, tế bào gọi tế bào tiền T (Pro-T), xuất chủ yếu CyCD3 CD7 - Giai đoạn T trung gian: xảy vỏ tuyến ức, tế bào T gọi tế bào tuyến ức (T-thymocyte) Đặc trưng xuất CD1a+ Các CD khác xuất hiện: CD3yếu, CD4+, CD8+, CD2+, CD5+ - Giai đoạn T chín: xảy tủy tuyến ức, tế bào xuất tương đối đầy đủ CD dòng lympho T, CD3+ biểu đặc trưng Sơ đồ 1.1 Xếp loại tế bào máu kháng thể đơn dòng đặc hiệu với dấu ấn miễn dịch (Hoffbrand 1995) [8] 1.2 Tóm tắt Lơxêmi cấp Lơxêmi cấp dòng lympho trẻ em phương pháp chẩn đoán 1.2.1 Lịch sử nghiên cứu Lơxêmi cấp nhóm bệnh đặc trưng tăng sinh tích lũy tủy xương máu ngoại vi tế bào non ác tính Những tế bào dần thay ức chế trình trưởng thành phát triển tế bào bình thường tủy xương Bệnh LXM cấp Velpeau ghi nhận lần đầu từ năm 1827 Đến năm 1845, Bennett đặt tên cho bệnh LXM cấp leucocythemia (tăng bạch cầu) Sau đó, Virchow gọi bệnh bệnh máu trắng (white blood), ơng đặt tên cho bệnh tên mà sử dụng, leukemia (tiếng Hy Lạp có nghĩa máu trắng) Năm 1887, phải nhờ có phát minh nhuộm tiêu Ehrlich phân biệt dạng khác dòng bạch cầu Tới năm 1900 cụm từ dòng tủy dòng lympho bắt đầu sử dụng để xếp loại LXM cấp [6] Ngày nay, với tiến phương pháp chẩn đoán, đặc biệt tiến phương pháp miễn dịch học (MDH) di truyền phân tử (DTPT), việc chẩn đoán thể LXM cấp nói chung LXM cấp dòng lympho trẻ em nói riêng cải tiến rõ rệt Các thể LXM trẻ em thống kê rõ ràng với tỷ lệ LXM cấp dòng lympho chiếm đến 80%, LXM cấp dòng tủy, chiếm khoảng 15%, lại 3-5% LXM kinh dòng BC hạt [9] Nhiều nghiên cứu cộng đồng người khác LXM cấp dòng lympho trẻ em chiếm tỷ lệ cao LXM nói riêng ung thư nói chung [10] Ở Mỹ, nghiên cứu LXM cấp dòng lympho loại LXM cấp hay gặp trẻ em, với tần suất mắc bệnh cao độ tuổi từ 2-5 tuổi Trong đó, LXM cấp dòng lympho B chiếm 80% số trường hợp, LXM cấp dòng lympho T chiếm khoảng 10-15% số trường hợp [2],[11] 1.2.2 Các phương pháp chẩn đoán, xếp loại LXM cấp dòng lympho trẻ em 1.2.2.1 Phương pháp hình thái học (HTH) Bằng phương pháp nhuộm giêmsa tiêu máu ngoại vi dịch hút tủy xương, dựa vào đặc điểm hình thái tế bào để xác định tỷ lệ tế bào blast, ngồi nhận biết số khác biệt dòng tế bào ác tính Đây phương pháp để chẩn đốn xác định Lơxêmi cấp 1.2.2.2 Phương pháp hóa học tế bào (HHTB) Từ năm 1940 - 1970, phát rối loạn chuyển hóa đặc trưng cho dòng tế bào áp dụng hình thành kỹ thuật nhuộm hóa học tế bào, kỹ thuật phổ biến sử dụng cho xếp loại LXM cấp như: Myeloperoxydase (MPO), Sudan đen (SB: Sudan Black), Periodic Acid Schiff (PAS), Esterase không đặc hiệu có khơng có ức chế NaF, Esterase đặc hiệu [12] Kỹ thuật nhuộm MPO (myeloperoxidase): Myeloperoxydase enzym tồn hạt nguyên phát ưa azua tế bào dòng tủy Phản ứng dương tính với tế bào dòng hạt Các tế bào dòng mono dương tính, mức thấp hơn, dòng lympho không chứa enzym nên phản ứng âm tính Kỹ thuật nhuộm Sudan đen B (SB) nghiên cứu phân tích mức độ dương tính dòng tế bào máu khác thống nhận định dòng bạch cầu hạt dương tính mạnh nhất, dòng mono dương tính mức độ khác dòng lympho thường âm tính Trên tế bào mức độ dương tính SB thường mạnh MPO Kỹ thuật nhuộm Esterase: Esterase nhóm enzyme đa dạng, số loại sử dụng để phân biệt bạch cầu hạt trung tính bạch cầu mono NASDCA (Napthol ASD chloroacetate) chất sử dụng để nhận biết esterase đặc hiệu có bạch cầu hạt trung tính; tế bào khác bạch cầu ưa acid, mono, lympho, nguyên hồng cầu mẫu tiểu cầu thường âm tính Ngược lại, esterase không đặc hiệu sử dụng để nhận biết bạch cầu mono bị ức chế Sodium fluoride (NaF) Kỹ thuật nhuộm PAS sử dụng periodic (HIO4.2H2O) dùng để phát blast dòng lympho xếp loại LXM cấp Các tế bào non dòng lympho cho phản ứng dương tính hạt, cục Kỹ thuật có ý nghĩa chẩn đốn phân biệt với LXM cấp dòng tủy, nhiên khơng có ý nghĩa chẩn đốn nhóm dòng lympho B hay lympho T [13] Dựa đặc điểm hình thái học HHTB tế bào non ác tính, xếp loại FAB 1986 (French-American-British 1986) sử dụng xếp loại LXM từ nhiều năm Bảng 1.1 Xếp loại LXM cấp dòng lympho theo FAB 1986 [5] Hình thái TB Kích thước L1 Nhỏ chiếm đa số Lớn, không Chất nhiễm sắc Đồng nhất, mịn Hình dạng nhân Hạt nhân L2 Không đồng L3 TB lớn, không Mịn đồng Đều đặn, Không đều, thường Đều đặn hình bầu dục có rãnh, khía có rãnh, khía tròn Khơng thấy Một hay nhiều hạt Một hay nhiều hạt nhỏ nhân to nhân hình túi Tỷ lệ nhân/NSC Thấp Khá cao, thay đổi Cao Độ kiềm NSC Thay đổi Vừa đậm Rất đậm Không bào Thường khơng có Thường khơng có Hốc to nhiều  Hóa học tế bào: Âm tính với MPO, SB, esterase không đặc hiệu Khoảng 50% trường hợp dương tính với PAS 1.2.2.3 Phương pháp di truyền tế bào- di truyền phân tử Nghiên cứu bệnh sinh LXM cấp nhận thấy có liên quan đến tổn thương di truyền tế bào gốc tạo máu làm tăng sinh tích tụ tế bào non gây lấn át dòng tế bào tạo máu bình thường gây bệnh cảnh lâm sàng LXM Việc phát bất thường di truyền có ý nghĩa quan trọng chẩn đoán, tiên lượng theo dõi điều trị Bảng 1.2 Ý nghĩa tiên lượng bất thường di truyền hay gặp LXM cấp dòng lympho trẻ em [14] Bất thường nhiễm sắc Sống năm không bệnh Đa bội thể > 50 NST 80% (65-90%) 47-50 NST 90% (50-98%) Tam bội thể, 66-73 NST Không rõ, tốt Tứ bội thể, 82-94 NST Khơng rõ, 60% Lưỡng bội thể bình thường, 46 NST 80% (65-90%) Thiểu bội thể, < 46 NST 71% (55-85%) Giả lưỡng bội (pseudodiploid) 73% (55-85%) t(1;19) 53% t(4;11) 45% t(9;22) 14% 1.2.2.4 Phương pháp miễn dịch học (MDH) Từ đầu năm 1970, số nhà nghiên cứu bắt đầu áp dụng phương pháp MDH xếp loại LXM cấp Từ đến có nhiều tiến bộ, từ việc xếp loại miễn dịch kính hiển vi (KHV) huỳnh quang, đến xếp loại miễn dịch (XLMD) kỹ thuật Đếm tế bào dòng chảy (Flow Cytometry) cách thường xuyên nhiều trung tâm giới  Phương pháp miễn dịch huỳnh quang trực tiếp, gián tiếp Dựa nguyên lý phản ứng kết hợp kháng nguyên-kháng thể (KNKT) để phát KN biệt hóa tế bào cho chúng kết hợp đặc hiệu với KT đơn dòng có gắn huỳnh quang phát quang đọc kết KHV huỳnh quang Kỹ thuật mang lại giá trị bổ sung cho phương pháp 10 HTH-HHTB (hình thái học-hóa học tế bào) Tuy nhiên có số hạn chế là: Kết phụ thuộc vào người làm, người đọc, chưa tách biệt tuyệt đối quần thể tế bào non ác tính (Blast) cần nghiên cứu, phân tích dấu ấn riêng biệt độ xác chưa cao  Phương pháp nhuộm hóa mơ miễn dịch Hóa mơ miễn dịch phương pháp áp dụng từ lâu việc chẩn đoán, xếp loại bệnh lý LXM cấp bệnh lý ác tính khác hệ tạo máu Phương pháp dựa sở kháng thể đơn dòng gắn chất nhuộm màu liên kết đặc hiệu với kháng nguyên bề mặt tế bào, sau quan sát kính hiển vi để xác định nguồn gốc, đặc tính tế bào Phương pháp có số nhược điểm phân tích số lượng dấu ấn tế bào, độ nhạy thấp phụ thuộc nhiều vào kỹ thuật nhuộm, phụ thuộc chủ quan người phân tích kết quả…  Phương pháp đếm tế bào dòng chảy (Flow Cytometry) Đếm tế bào dòng chảy phương pháp đo phân tích đồng thời nhiều thông số, đặc điểm phần tử (tế bào) cần nghiên cứu bao gồm: Kích thước, tính chất hạt NSC, độ phức tạp bào tương nhân, mức độ gắn huỳnh quang (mức độ kết hợp KT với KN- dấu ấn cần nghiên cứu) Phương pháp trình bày cụ thể mục 1.3 1.3 Tóm tắt phương pháp Đếm tế bào dòng chảy KT đơn dòng (Monoclonal antibody): KT đặc hiệu cho đáp ứng KN Các kỹ thuật sinh học cho phép xác định tế bào mang dấu ấn đặc trưng có mặt bề mặt nhân tế bào bạch cầu người Các tế bào dùng để gây miễn dịch cho động vật thu tế bào lympho B mẫn cảm cá thể động vật Lai tế bào lympho B mẫn cảm với tế bào u plasmo thu tế bào lai có khả sinh lượng khơng giới hạn kháng thể đơn dòng chống lại dấu ấn đặc trưng 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 Vũ Tiến M Hoàng Văn D Đỗ Minh T Trần Lê B Nguyễn Thị L Nguyễn Mạnh H Vũ Thanh G Phùng Nhật M Vũ Huy Q Nguyễn Đức P Dương Diễm Q Vương Duy P Đỗ Tiến S Lê Văn Đ Ngô Quang P Duương Thị Tú A Tống Lê Hương L Phạm Ngọc M Nguyễn Mạnh H Dương Như Y Nguyễn Minh K Nguyễn Thị Thanh N Nguyễn Hoàng Đ Nguyễn Thị T Lương Thanh T Nguyễn Vũ Thành H Nguyễn Vũ Quang H Nguyễn Minh T Phan Bảo A Vũ Hà T Trần Thị A Lương Thanh B Lục Khánh T Kiều Văn H Mùng Văn T Vũ Quang M Vương Văn M Lý Thị V Phan H 1 10 12 5 4 10 12 12 13 12 6 15 13 13 14 14019811 14020262 14019748 14000756 14020319 14020451 14020915 14020958 14020959 14020360 14021178 14020988 14009402 14009001 14009301 14009372 14016489 14009495 14016390 14009405 14009364 14009520 14009970 14009498 14015234 14015227 14017620 14017735 14009500 14009989 14009963 14007245 14009528 14006534 14006391 14001035 14006189 14003074 14004037 13.06.14 19.06.14 20.06.14 21.06.14 23.06.14 23.06.14 27.06.14 27.06.14 27.06.14 20.06.14 01.07.14 05.07.14 29.04.14 26.04.14 26.04.14 28.04.14 26.05.14 09.05.14 27.05.14 08.05.14 28.04.14 29.04.14 09.05.14 09.05.14 23.05.14 23.05.14 03.06.14 30.05.14 09.05.14 12.05.14 09.05.14 18.04.14 29.04.14 13.04.14 01.04.14 17.01.14 27.03.14 14.03.14 12.03.14 PHỤ LỤC BỆNH ÁN NGHIÊN CỨU Họ tên BN:…… Tuổi: Giới:Nam □ Nữ □ Mã số BN:…………………………… Vào viện ngày: ……./……./…… Kết huyết tủy đồ: LXM cấp thể L1 □ LXM cấp thể L2 □ LXM cấp thể L3 □ LXM cấp lai lympho- tủy □ Xét nghiệm xếp loại miễn dịch Đếm tế bào dòng chảy Tên CD + Tỷ lệ + Tên CD + Tỷ lệ + Tên CD + Tỷ lệ + Chẩn đoán xác định: LXM cấp dòng B LXM cấp dòng T B sớm □ B chung □ Tiền B □ B chin □ T sớm □ T trung gian □ T chin □ LXM lai lympho- tủy □ Kết sau đợt điều trị cảm ứng: Lui bệnh hồn tồn □ Lui bệnh khơng hồn tồn □ Khơng lui bệnh □ Tử vong □ Ngày viện/ tử vong:……… BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI HỒNG CHÍ CƯƠNG NGHI£N CøU BIĨU HIƯN DÊU ÊN DÞCH TRONG LƠXÊMI CấP DòNG LYMPHO EM BằNG PHƯƠNG PHáP ĐếM Tế BàO CHảY TạI VIệN HUYếT HọC- TRUYềN TRUNG ƯƠNG MIễN TRẻ DòNG MáU Chuyờn ngnh: Huyt hc- Truyn máu Mã số : 60720151 LUẬN VĂN THẠC SỸ Y HỌC Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS Bạch Khánh Hòa H NI 2014 LờI CảM ƠN Hon thnh lun văn này, em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới Ban giám hiệu, Phòng đào tạo sau Đại học, Bộ môn Huyết học – Truyền máu Trường Đại học Y Hà Nội, Viện Huyết học- Truyền máu Trung ương tạo điều kiện giúp đỡ em trình học tập nghiên cứu Em xin chân thành cảm ơn PGS.TS Bạch Khánh Hòa, người trực tiếp hướng dẫn, tận tình giúp đỡ, bảo động viên em, tạo khơng khí chia sẻ, làm nguồn động lực cho em suốt trình nghiên cứu Cô dạy em không kiến thức chuyên môn mà đạo đức nghề nghiệp, phương pháp luận khoa học Em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới GS.TS.AHLĐ Nguyễn Anh Trí, Giám đốc Viện Huyết học- Truyền máu Trung uwơng, người cho em hội tham gia hồn thành khóa học với điều kiện tốt Em xin cảm ơn tập thể cán nhân viên Khoa Miễn dịch, Viện Huyết họcTruyền máu Trung ương, nơi em công tác, chia sẻ công việc suốt năm em theo học, tạo điều kiện cho em hồn thành khóa học Xin cảm ơn tập thể khoa phòng chức Viện Huyết học- Truyền máu Trung ương, Khoa Tế bào- Tổ chức học, Khoa Bệnh máu trẻ em, Phòng Kế hoạch tổng hợp giúp đỡ em trình thu thập số liệu để thực luận văn Sau cùng, em vô biết ơn công sinh thành, dưỡng dục cha mẹ, xin cảm ơn người vợ gái thương yêu, người thân gia đình, bạn bè ln quan tâm, động viên và chỗ dựa vững cho em nỗ lực, phấn đấu trình học tập nghiên cứu Em xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 17 tháng 10 năm 2014 Hồng Chí Cương LỜI CAM ĐOAN Em Hồng Chí Cương, học viên cao học khóa 21, chuyên ngành Huyết học truyền máu, Trường Đại học Y Hà Nội xin cam đoan: Đây luận văn thân em trực tiếp thực hướng dẫn PGS.TS Bạch Khánh Hòa Cơng trình khơng trùng lặp với nghiên cứu khác công bố Việt Nam Các số liệu thông tin nghiên cứu hồn tồn xác, trung thực khách quan, xác nhận chấp nhận sở nơi nghiên cứu cho phép lấy số liệu Em xin hoàn toàn chịu trách nhiệm cam kết Hà Nội, ngày 17 tháng 10 năm 2014 Tác giả Hồng Chí Cương DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT CD (Cluster of Diferentiation) Cụm biệt hóa CFU-L (Colony-forming unit Tế bào mẹ dòng lympho lymphocyte) CR1 Lui bệnh hoàn toàn DTPT Di truyền phân tử ECD (Energy coupled dye) Chất nhuộm gắn lượng EDTA Ethylenediamin Tetra acetic acid EFS Thời gian sống thêm khơng bệnh EGIL (European Group for the Nhóm nghiên cứu châu Âu đặc điểm Immunological Characterization of miễn dịch Lơ xê mi Leukemia) FITC Fluorescein isothiocyanate FS (FSC- Forward Scatter) Tán xạ thẳng HHTB Hóa học tế bào HH-TM TW Huyết học- Truyền máu Trung Ương HTH Hình thái học KHV Kính hiển vi KN Kháng nguyên KT Kháng thể LCA (Leucocyte Common Kháng nguyên chung dòng bạch cầu Antigen) LXM Lơ xê mi MDH Miễn dịch học MPO Myeloperoxidase NCCN (National Comprehensive Mạng lưới nghiên cứu Ung thư toàn quốc Cancer Network) Mỹ NSC Nguyên sinh chất NST Nhiễm sắc thể PAS Perodic Acid Schif PC5 Chất huỳnh quang Phycoerythrin cyanin PE Chất huỳnh quang Phycoerythrin SB Suđan đen B SS (SSC- Side Scatter) Tán xạ bên TKIs Thuốc ức chế tyrosine kinase XLMD Xếp loại miễn dịch MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ Chương 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Khái quát dấu ấn trình sinh sản biệt hóa tế bào máu 1.1.1 Các dấu ấn biệt hóa tế bào máu 1.1.2 Sự trưởng thành dấu ấn biệt hóa tế bào dòng lympho 1.2 Tóm tắt Lơxêmi cấp Lơxêmi cấp dòng lympho trẻ em phương pháp chẩn đoán 1.2.1 Lịch sử nghiên cứu 1.2.2 Các phương pháp chẩn đốn, xếp loại LXM cấp dòng lympho trẻ em 1.3 Tóm tắt phương pháp Đếm tế bào dòng chảy 10 1.4 Tóm tắt điều trị LXM cấp dòng lympho trẻ em 16 1.4.1 Mục tiêu điều trị 16 1.4.2 Các phương pháp điều trị 16 1.5 Tình hình nghiên cứu xếp loại đặc điểm, mối liên quan dấu ấn miễn dịch với đáp ứng điều trị LXM cấp trẻ em giới Việt Nam 19 1.5.1 Các nghiên cứu giới 19 1.5.2 Các nghiên cứu Việt Nam 21 Chương 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 23 2.1 Đối tượng nghiên cứu 23 2.1.1 Tiêu chuẩn lựa chọn bệnh nhân 23 2.1.2 Tiêu chuẩn loại trừ 23 2.2 Phương tiện nghiên cứu 23 2.2.1 Bệnh phẩm 23 2.2.2 Phương tiện nghiên cứu 24 2.2.3 Hóa chất sinh phẩm 24 2.2.4 Công cụ nghiên cứu 24 2.3 Phương pháp nghiên cứu 25 2.3.1 Thiết kế nghiên cứu 25 2.3.2 Quy trình nghiên cứu 26 2.3.3 Các kỹ thuật sử dụng nghiên cứu 32 2.3.4 Phương pháp phân tích, xử lý số liệu 32 2.4 Khía cạnh đạo đức nghiên cứu 32 Chương 3: KẾT QUẢ 33 3.1 Đặc điểm chung nhóm nghiên cứu 33 3.1.1 Phân bố nhóm LXM cấp theo dòng tế bào ung thư phương pháp Đếm tế bào dòng chảy 33 3.1.2 Đặc điểm tuổi nhóm tuổi 34 3.1.3 Đặc điểm giới 35 3.2 Đặc điểm biểu dấu ấn miễn dịch theo nhóm LXM cấp 36 3.2.1 Đặc điểm biểu CD45 theo nhóm LXM cấp 36 3.2.2 Đặc điểm xếp loại LXM cấp dòng lympho B 37 3.2.3 Đặc điểm xếp loại LXM cấp dòng lympho T 39 3.3 Mối liên quan số dấu ấn miễn dịch với kết điều trị sau đợt điều trị cảm ứng 41 3.3.1 Tình hình điều trị nhóm nghiên cứu 41 3.3.2 Mối liên quan số dấu ấn miễn dịch với kết điều trị sau đợt điều trị cảm ứng bệnh nhi LXM cấp dòng lympho B 42 3.3.3 Mối liên quan số dấu ấn miễn dịch với kết điều trị sau đợt điều trị cảm ứng bệnh nhi LXM cấp dòng lympho T 49 Chương 4: BÀN LUẬN 55 4.1 Một số đặc điểm chung nhóm nghiên cứu 55 4.1.1 Đặc điểm phân bố nhóm LXM cấp theo dòng tế bào non ác tính 55 4.1.2 Đặc điểm tuổi 56 4.1.3 Đặc điểm giới 57 4.2 Đặc điểm biểu dấu ấn miễn dịch theo nhóm LXM cấp 58 4.2.1 Đặc điểm biểu CD45 58 4.2.2 Đặc điểm xếp loại đặc điểm biểu dấu ấn miễn dịch LXM cấp dòng lympho B 59 4.2.3 Đặc điểm xếp loại đặc điểm biểu dấu ấn miễn dịch LXM cấp dòng lympho T 62 4.3 Mối liên quan số dấu ấn miễn dịch với kết điều trị sau đợt điều trị cảm ứng 64 4.3.1 Mối liên quan số dấu ấn miễn dịch với kết điều trị sau đợt điều trị cảm ứng bệnh nhi LXM cấp dòng lympho B 66 4.3.2 Mối liên quan số dấu ấn miễn dịch với kết điều trị sau đợt điều trị cảm ứng bệnh nhi LXM cấp dòng lympho T 68 KẾT LUẬN 71 KIẾN NGHỊ 73 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Xếp loại LXM cấp dòng lympho theo FAB 1986 Bảng 1.2 Ý nghĩa tiên lượng bất thường di truyền hay gặp LXM cấp dòng lympho trẻ em Bảng 2.1 Xếp loại LXM cấp theo FAB1986 27 Bảng 2.2 Xếp loại miễn dịch nhóm LXM cấp dòng lympho B 28 Bảng 2.3 Xếp loại miễn dịch nhóm LXM cấp dòng lympho T 28 Bảng 2.4 Tiêu chuẩn chẩn đoán MDH dấu ấn miễn dịch bất thường LXM cấp thể lai 29 Bảng 2.5 Bảng điểm xếp loại miễn dịch EGIL chẩn đoán LXM cấp thể lai 30 Bảng 3.1 Đặc điểm độ tuổi trung bình theo nhóm bệnh 34 Bảng 3.2 Đặc điểm mức độ biểu CD45 theo nhóm LXM cấp 36 Bảng 3.3 Đặc điểm biểu dấu ấn non bệnh nhi LXM cấp dòng lympho B 37 Bảng 3.4 Đặc điểm biểu dấu ấn đặc trưng dòng lympho B bệnh nhi LXM cấp dòng lympho B 38 Bảng 3.5 Đặc điểm biểu dấu ấn dòng tủy bệnh nhi LXM cấp dòng lympho B 38 Bảng 3.6 Đặc điểm biểu dấu ấn non 39 Bảng 3.7 Đặc điểm biểu dấu ấn đặc trưng dòng lympho T bệnh nhi LXM cấp dòng lympho T 40 Bảng 3.8 Đặc điểm biểu dấu ấn dòng tủy bệnh nhi LXM cấp dòng lympho T 40 Bảng 3.9 Tình hình điều trị nhóm nghiên cứu theo nhóm bệnh đến thời điểm kết thúc nghiên cứu 41 Bảng 3.10 Mối liên quan số dấu ấn miễn dịch với đáp ứng lui bệnh hoàn toàn sau đợt điều trị cảm ứng bệnh nhi LXM cấp dòng lympho B 43 Bảng 3.11 Mối liên quan số tổ hợp dấu ấn miễn dịch với đáp ứng lui bệnh hoàn toàn sau đợt điều trị cảm ứng bệnh nhi LXM cấp dòng lympho B 44 Bảng 3.12 Mối liên quan số dấu ấn miễn dịch đơn độc với tử vong sau đợt điều trị cảm ứng BN LXM cấp dòng lympho B 45 Bảng 3.13 Mối liên quan số tổ hợp dấu ấn miễn dịch với tử vong sau đợt điều trị cảm ứng BN LXM cấp dòng lympho B 46 Bảng 3.14 Mối liên quan số dấu ấn miễn dịch với tử vong toàn BN LXM cấp dòng lympho B 47 Bảng 3.15 Mối liên quan số tổ hợp dấu ấn miễn dịch với tử vong tồn BN LXM cấp dòng lympho B 48 Bảng 3.16 Mối liên quan số dấu ấn miễn dịch với đáp ứng lui bệnh hoàn toàn sau đợt điều trị cảm ứng BN LXM cấp dòng lympho T 49 Bảng 3.17 Mối liên quan số dấu ấn miễn dịch với đáp ứng lui bệnh chung sau đợt điều trị cảm ứng BN LXM cấp dòng lympho T 50 Bảng 3.18 Mối liên quan số tổ hợp dấu ấn miễn dịch với đáp ứng lui bệnh hoàn toàn sau đợt điều trị cảm ứng BN LXM cấp dòng lympho T 51 Bảng 3.19 Mối liên quan số tổ hợp dấu ấn miễn dịch với đáp ứng lui bệnh chung sau đợt điều trị cảm ứng BN LXM cấp dòng lympho T 52 Bảng 3.20 Mối liên quan số dấu ấn miễn dịch với tử vong tồn BN LXM cấp dòng lympho T 53 Bảng 3.21 Mối liên quan số tổ hợp dấu ấn miễn dịch với tử vong toàn BN LXM cấp dòng lympho T 54 Bảng 4.1 Tỷ lệ LXM cấp dòng B/dòng T theo nghiên cứu 55 Bảng 4.2 Tỷ lệ dương tính CD19 CD10 LXM cấp dòng lympho B 61 DANH MỤC BIỂU ĐỒ Biểu đồ 3.1: Phân bố tỷ lệ thể LXM theo dòng tế bào 33 Biểu đồ 3.2 Phân bố nhóm tuổi theo nhóm LXM cấp 34 Biểu đồ 3.3 Phân bố giới tính nhóm nghiên cứu 35 Biểu đồ 3.4 Đặc điểm phân bố nhóm biểu CD45 theo nhóm LXM cấp 36 Biểu đồ 3.5 Phân bố theo nhóm bệnh nhi LXM cấp dòng lympho B 37 Biểu đồ 3.6 Phân bố theo nhóm bệnh nhi LXM cấp dòng lympho T 39 Biểu đồ 3.7 Tình hình đáp ứng sau đợt điều trị cảm ứng theo nhóm bệnh 41 Biểu đồ 3.8 Mối liên quan nhóm bệnh tỷ lệ tử vong tồn 42 DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Cơ chế tán xạ ánh sáng laser qua tế bào 13 Hình 1.2 Phân bố quần thể tế bào Đếm tế bào dòng chảy 14 Hình 4.1 Biểu CD45 bệnh nhân LXM cấp dòng lympho đồ thị SS/CD45 59 DANH MỤC SƠ ĐỒ Sơ đồ 1.1 Xếp loại tế bào máu kháng thể đơn dòng đặc hiệu với dấu ấn miễn dịch Sơ đồ 1.2 Mơ tả hệ thống máy Đếm tế bào dòng chảy sơ lược nguyên lý hoạt động 12 Sơ đồ 1.3 Các vùng cửa sổ blast cửa sổ kết hợp CD45 SSC phương pháp đếm tế bào dòng chảy 15 Sơ đồ 2.1 Các bước tiến hành nghiên cứu 26 ... Lơxêmi cấp dòng lympho trẻ em phương pháp Đếm tế bào dòng chảy Viện Huyết họcTruyền máu Trung ương” với mục tiêu: Nghiên cứu biểu dấu ấn miễn dịch để xếp loại Lơxêmi cấp dòng lympho trẻ em Viện Huyết. .. nghiên cứu xếp loại MDH LXM cấp sử dụng phương pháp Đếm tế bào dòng chảy Việt Nam, nhiên chưa có nhiều nghiên cứu tiến hành đối tượng trẻ em Vì thực đề tài Nghiên cứu biểu dấu ấn miễn dịch Lơxêmi. .. với tế bào dòng bạch cầu hạt [18],[19] Hình 1.2 Phân bố quần thể tế bào Đếm tế bào dòng chảy [15] 15 Ứng dụng phương pháp xếp loại LXM cấp  Xếp loại miễn dịch bệnh Lơxêmi cấp phương pháp Đếm tế