BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ HỌC VIỆN Y DƯỢC HỌC CỔ TRUYỀN VIỆT NAM VŨ THANH TUYỀN ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG CỦA BÀI THUỐC ‟HV” TRÊN CHỨC NĂNG SINH SẢN CỦA CHUỘT CÁI LUẬN VĂN THẠC SĨ Y HỌC HÀ NỘI - 2019 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ HỌC VIỆN Y DƯỢC HỌC CỔ TRUYỀN VIỆT NAM VŨ THANH TUYỀN ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG CỦA BÀI THUỐC ‟HV” TRÊN CHỨC NĂNG SINH SẢN CỦA CHUỘT CÁI Chuyên ngành: Y học cổ truyền Mã số: 8720115 LUẬN VĂN THẠC SĨ Y HỌC Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS ĐOÀN MINH THỤY PGS.TS TRỊNH THẾ SƠN HÀ NỘI - 2019 LỜI CẢM ƠN Sau thời gian học tập nghiên cứu, tơi hồn thành khóa học luận văn tốt nghiệp Với tất lòng, tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới: Đảng ủy, Ban Giám đốc Học viện Y Dược học cổ truyền Việt Nam, Học viện Quân Y, Bệnh viện Đa khoa tỉnh Hải Dương; Phòng Sau đại học - Học viện Y Dược học cổ truyền Việt Nam, Bộ môn Dược lý- Học viện Quân Y; Khoa Y học cổ truyền – Bệnh viện Đa khoa tỉnh Hải Dương tạo điều kiện thuận lợi cho suốt trình học tập thực đề tài Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới PGS.TS Đoàn Minh Thụy, PGS.TS Trịnh Thế Sơn - hai người thầy tận tình hướng dẫn, động viên dẫn cho kiến thức, phương pháp luận, tư khoa học để tơi hồn thành luận văn Với tất lòng kính trọng, tơi xin chân thành cảm ơn thầy hội đồng thông qua đề cương, hội đồng chấm luận văn đóng góp nhiều ý kiến q báu để tơi hồn chỉnh luận văn Xin tri ân công lao trời biển cha mẹ! Xin cảm ơn vợ con, gia đình, bạn bè đồng nghiệp thường xuyên động viên, khích lệ giúp đỡ tơi suốt q trình học tập thực đề tài Hà Nội – 3/2019 Vũ Thanh Tuyền LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu tơi với hướng dẫn khoa học tập thể cán hướng dẫn Các kết nêu luận văn trung thực công bố phần báo khoa học Luận văn chưa công bố Nếu có điều sai tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm Tác giả Vũ Thanh Tuyền DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT AFC AMH BMI E2 FSH GnRH hCG hMG LH POI YHCT YHHĐ : Antral Follicle Count : Anti – Mullerrian Hormon : Body Mass Index : Estradiol : Follicle stimulating Hormone : Gonadotropin Releasing Hormone : Human Chorionic Gonadotropin : Human Menopausal Gonadotropin : Luteinizing Hormone : Premature ovarian insufficience : Y học cổ truyền : Y học đại MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ Chương 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Suy buồng trứng sớm theo YHHĐ 1.1.1 Sinh lý sinh sản vai trò trục đồi tuyến yên buồng trứng 1.1.2 Suy buồng trứng sớm theo YHHĐ 1.2.Tổng quan suy buồng trứng sớm theo YHCT 15 1.2.1 Cơ sở lý luận YHCT sinh sản 15 1.2.2.Nhận thức YHCT suy buồng trứng sớm 1.3.Tổng quan thuốc ‟HV” 19 1.3.1 Xuất xứ thuốc 19 1.3.2.Tác dụng thuốc 19 1.3.3.Phân tích thuốc 19 1.3.4.Thành phần thuốc 16 20 1.4 Các cơng trình nghiên cứu liên quan đến mơ hình dùng Tripterygium glycoside (TG ) gây suy buồng trứng đánh giá tác dụng thuốc YHCT với suy buồng trứng 24 Chương 2: CHẤT LIỆU, ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 27 2.1.Chất liệu nghiên cứu 27 2.2.Động vật nghiên cứu 27 2.3 Thời gian địa điểm nghiêm cứu 29 2.4 Các trang thiết bị, hóa chất phục vụ cho nghiên cứu 29 2.5 Phương pháp nghiên cứu 30 2.5.1 Nghiên cứu độc tính cấp thuốc ‟HV” thực nghiện 30 2.5.2 Nghiên cứu độc tính bán trường diễn thuốc ‟HV” thực nghiệm 30 2.5.3 Nghiên cứu tác dụng dược lí thuốc mơ hình chuột gây suy buồng trứng 32 2.5.4 Một số kỹ thuật thực động vật thực nghiệm 34 2.6 Xử lý số liệu 38 Chương 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 40 3.1 Kết nghiên cứu độc tính cấp bán trường diễn thuốc‟HV” 40 3.1.1 Độc tính cấp 40 3.1.2 Kết nghiên cứu độc tính bán trường diễn thuốc ‟HV” 41 3.2.3 Đánh giá mức độ gây tổn thương tế bào gan 43 3.2.4 Đánh giá ảnh hưởng thuốc‟HV” tới chức thận 45 3.2 Kết mô bệnh học gan, lách, thận chuột nghiên cứu 46 3.2.1 Đại thể 46 3.2.2 Vi thể 46 3.3 Kết đánh giá tác dụng thuốc ‟HV” chức sinh sản chuột nhắt 48 3.3.1 Kết đánh giá trọng lượng thể chu kỳ động dục chuột 48 3.3.2 Kết đánh giá nồng độ FSH, E2 huyết thanhcủa chuột 3.3.3 Kết qủa đánh giá số buồng trứng tử cung52 3.3.4 Kết đánh giá mô bệnh học 53 Chương 4: BÀN LUẬN 55 4.1 Bàn luận luận thuốc nghiên cứu 55 4.1.1 Về nguồn gốc cấu tạo thuốc 55 51 4.1.2.Phương pháp bào chế dạng thuốc sử dụng nghiên cứu 56 4.2 Về kết nghiên cứu độc tính thuốc ‟HV” 4.2.1 Độc tính cấp 57 57 4.2.2 Độc tính bán trường diễn 58 4.3 Bàn luận tác dụng thuốc chức sinh sản chuột nhắt gây suy buồng trứng 62 4.3.1 Bàn luận mơ hình gây suy buồng trứng chuột nhắt 62 4.3.2 Về tác dụng thuốc ‟HV” với chức sinh sản chuột nhắt gây suy buồng trứng KẾT LUẬN 67 KIẾN NGHỊ 68 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC 63 DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Bài thuốc ‟HV” .20 Bảng 2.2 Số lượng động vật thực nghiệm 28 Bảng 3.1 Kết xác định độc tính cấp thuốc ‟HV” chuột nhắt trắng 40 Bảng 3.2 Ảnh hưởng viên thuốc ‟HV” đến thể trọng chuột .41 Bảng 3.3 Ảnh hưởng thuốc ‟HV”đến số lượng hồng cầu chuột 41 Bảng 3.4 Ảnh hưởng thuốc ‟HV” đến hàm lượng huyết sắc tố 42 Bảng 3.5 Ảnh hưởng thuốc ‟HV” đến số lượng bạch cầu 42 Bảng 3.6 Ảnh hưởng thuốc ‟HV” đến số lượng tiểu cầu 43 Bảng 3.7 Ảnh hưởng thuốc ‟HV” đến hoạt độ AST (GOT) ALT (GPT) 43 Bảng 3.8 Ảnh hưởng thuốc ‟HV” đến Albumin 44 Bảng 3.9 Ảnh hưởng thuốc ‟HV” Cholesterol toàn phần 44 Bảng 3.10 Ảnh hưởng thuốc ‟HV” đến nồng độ creatinin 45 Bảng 3.11 Trọng lượng thể chuột lô chuột nghiên cứu 48 Bảng 3.12 Kết đánh giá chu kỳ động dục chuột 21 ngày cuối uống TG 49 Bảng 3.13 Đánh giá chu kỳ động dục chuột 20 ngày uống thuốc ‟HV” .50 Bảng 3.14 Đánh giá nồng độ FSH, E2 huyết chuột 51 Bảng 3.15 Đánh giá số buồng trứng, tử cung chuột 52 DANH MỤC HÌNH, ẢNH Hình 3.1 Hình ảnh đại thể gan, lách, thận chuột thí nghiệm 46 Hình 3.2 Hình ảnh vi thể gan, lách, thận chuột nghiên cứu .48 Ảnh 2.1 Máy XN sinh hóa .29 Ảnh 2.2 Máy XN huyết học 29 Ảnh 2.3 Cân điện tử 30 Ảnh 2.4 Kim tiêm đầu tù 30 Ảnh 2.5 Lồng nuôi chuột nhắt 31 Ảnh 2.6 Lồng nuôi chuột cống .31 Ảnh 2.7 Chuột uống thuốc kim đầu tù 34 Ảnh 2.8 Lấy máu hốc mắt chuột .35 Ảnh 2.9 Các giai đoạn chu kỳ động dục chuột .35 Ảnh 2.10 Pipet nhựa ml 36 Ảnh 2.11 Bơm nước muối sinh lý vào âm đạo chuột .36 57 24 giờ, khơng có chuột chết không thấy biểu bất thường chuột Vì thế, chúng tơi chưa xác định độc tính cấp chưa tính LD50 thuốc HV chuột nhắt trắng theo đường uống (Bảng 3.1) Trong nghiên cứu độc tính cấp thuốc ‟HV”, chuột thực nghiệm uống đến mức liều cao nhất, gấp gần lần (8,68 lần) liều tương đương liều điều trị người chưa thấy có biểu độc Bài thuốc ‟HV” khơng thể độc tính cấp chuột nhắt trắng liều dùng Lý giải điều chúng tơi thấy: vị thuốc có thành phần thuốc ‟HV” dược liệu dùng từ lâu đời sử dụng thường xun lâm sàng, số vị khơng có độc tính, phối ngũ vị thuốc tuân thủ theo nguyên tắc điều trị YHCT Tuy nhiên để khẳng định tính an tồn thuốc cần có nghiên cứu chuyên sâu 4.2.2 Độc tính bán trường diễn Nghiên cứu độc tính bán trường diễn thực cách cho động vật thí nghiệm uống thuốc thử hàng ngày, liên tục khoảng thời gian định Theo hướng dẫn Tổ chức Y tế giới và quy định Bộ y tế Việt Nam, thời gian nghiên cứu bán trường diễn động vật thường gấp lần thời gian dự kiến dùng người Chúng tiến hành đánh giá độc tính bán trường diễn thuốc ‟HV” lô chuột cống trắng lô 10 con, lô chứng sinh lý: uống nước cất; lô dùng thuốc ‟HV” với liều 30,24g/kg/ngày (tương đương mức liều dự kiến người) lô dùng liều 90,72g/kg /ngày (tương đương gấp lần liều dùng người), uống liên tục 90 ngày Các tiêu để đánh giá bao gồm: tình trạng chung thay đổi thể trọng, số huyết học, số sinh hoá đánh giá chức gan, thận đặc 58 điểm giải phẫu bệnh gan, lách, thận Kết nghiên cứu độc tính bán trường diễn thuốc ‟HV” sau 90 ngày chuột cống trắng cho thấy: 4.2.2.1 Tình trạng chung thay đổi trọng lượng Trong thời gian uống thuốc, chuột lô hoạt động bình thường, nhanh nhẹn, ăn uống tốt, phân khơ, lơng mượt, khơng có chuột bị chết có biểu bất, hàm lượng hemoglobin xét nghiệm khảo sát hình ảnh đại thể thường Chuột lơ thử lô thử trọng lượng so với lô đối chứng thời điểm nghiên cứu khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) (Bảng 3.2), chứng tỏ thuốc ‟HV” liều tương đương người gấp liều người khơng ảnh hưởng xấu đến tình trạng chung gia tăng trọng lượng chuột 4.2.2.2 Ảnh hưởng thuốc ‟ HV” đến quan tạo máu Khi thuốc có ảnh hưởng đến quan tạo máu trước hết thành phần máu bị thay đổi Vì thay đổi thành phần công thức máu phản ánh chức quan tạo máu Lách quan phản ánh chức tạo máu đời sống tế bào máu Theo WHO, đánh giá nhiều thơng số máu có khả đánh giá xác độc tính thuốc Vì vậy, nghiên cứu này, tiến hành định lượng thành phần máu gồm: số lượng hồng cầu, bạch cầu, tiểu cầu, vi thể lách Kết nghiên cứu cho thấy, xét nghiệm máu số huyết học thời điểm 45 90 ngày sau uống thuốc ‟HV” khơng có khác biệt có ý nghĩa lô dùng thuốc ‟HV” (liều 30,24g/kg/ngày 90,72g/kg/ngày) so với lô chứng so với trước dùng thuốc tất số nghiên cứu (p > 0,05) Kết phù hợp với kết nghiên cứu mô bệnh học cấu trúc vi thể lách Sau 90 ngày uống thuốc liên tục, mơ bệnh học cho thấy 59 kích thước, màu sắc, mật độ nhu mô cấu trúc vi thể lách hồn tồn bình thường, khơng có khác biệt lô thử lô chứng (Ảnh3.2) Các kết phản ánh thuốc ‟HV” hai mức liều không gây ảnh hưởng xấu lên chức tạo máu chuột thí nghiệm sau 90 ngày uống thuốc 4.2.2.3 Ảnh hưởng thuốc ‟HV”đến gan Gan tạng lớn thể, trung tâm chuyển hóa quan trọng thể Vì vậy, nghiên cứu ảnh hưởng thuốc đến gan cần thiết, thiếu đánh giá độc tính thuốc Sự tổn thương tế bào gan làm tăng hoạt độ số enzym có nguồn gốc gan huyết thanh, quan trọng enzym ALT AST ALT enzym có nhiều gan, khu trú bào tương tế bào nhu mô gan Khi tổn thương hủy hoại tế bào gan, chí cần thay đổi tính thấm màng tế bào gan, hoạt độ ALT máu tăng cao Khác với ALT, 2/3 AST khu trú ty thể 1/3 lượng AST khu trú bào tương tế bào Khi tổn thương tế bào gan mức độ tế bào, AST ty thể giải phóng Do đó, tổn thương gan, AST ALT tăng cao so với bình thường, mức độ tăng ALT cao so với AST, tăng sớm trước có vàng da, tuần đầu vàng da Trong nghiên cứu này, hoạt độ ALT AST máu chuột hai lơ uống thuốc ‟HV” khơng có khác biệt có ý nghĩa so với lơ chứng so sánh thời điểm trước sau uống thuốc thử 45 90 ngày (Bảng 3.7), chứng tỏ liều thuốc ‟HV” dùng không gây độc cho gan không làm tổn thương hủy hoại tế bào gan Một chức quan trọng gan tổng hợp protein, Albumin loại protein quan trọng thể với hai chức trì từ 70 đến 80% áp lực thẩm thấu huyết tương, đồng thời liên kết vận chuyển chất có dạng phân tử nhỏ Bilirubin, acid béo 60 thuốc có bên máu Khi gan bị tổn thương kéo theo chức gan bị suy giảm, làm giảm khả hấp thụ protein tổng hợp Albumin, việc xét nghiệm số nồng độ Albumin có máu có giá trị đánh giá tổn thương chức gan Kết nghiên cứu (Bảng 3.8) cho thấy thuốc ‟HV” dùng mức liều 30,24g/kg/ngày 90,72g/kg/ngày 90 ngày không gây ảnh hưởng lên số Albumin máu chuột Đây số khảng định thuốc không ảnh hưởng đến chức gan Tế bào gan tổng hợp Cholesterol để sản xuất muối mật, phần Cholesterol thải theo dịch mật để giữ định Cholesterol máu Theo kết (Bảng 3.9) ta thấy hàm lượng Cholesterol lô chứng, lô thử lơ thử có thay đổi thay đổi khơng có ý nghĩa thống kê với p> 0,005 Kết mô bệnh học phù hợp với kết xét nghiệm hóa sinh máu Quan sát đại thể gan chuột lô chứng lơ trị (30,24g/kg/ngày 90,72g/kg/ngày) khơng thấy có biểu bệnh lý Hình thái vi thể gan chuột lơ chứng lơ thử khơng thấy có khác biệt, tế gan tiểu thùy gan không thay đổi cấu trúc, tế bào gan không bị tổn thương thối hóa, khơng có xâm nhập viêm (Ảnh3.2) Bài thuốc ‟HV” qua đánh giá sử dụng kéo dài (90 ngày) không gây tổn thương tế bào gan không làm suy giảm chức gan, điều bước đầu cho thấy ưu điểm thuốc ‟HV” điều trị 4.2.2.4 Ảnh hưởng thuốc‟HV”đến thận Thận dễ bị tổn thương chất độc nội sinh ngoại sinh Khi đưa thuốc vào thể gây tổn thương thận, ảnh hưởng đến chức thận Để đánh giá ảnh hưởng thuốc đến chức thận, người ta định lượng nồng độ Creatinin huyết Creatinin thành phần đạm máu ổn định nhất, không phụ thuộc vào chế độ ăn 61 thay đổi sinh lý mà phụ thuộc vào khả đào thải thận Khi cầu thận bị tổn thương, Creatinin huyết tăng sớm Ure Vì vậy, định lượng Creatinin huyết sử dụng nhiều để đánh giá chức thận, tiêu tin cậy quan trọng Urê Trong nghiên cứu chúng tôi, kết xét nghiệm máu thời điểm trước sau 90 ngày uống thuốc cho thấy: nồng độ Creatinin máu chuột hai lô uống thuốc ‟HV” khơng có khác biệt có ý nghĩa (p> 0,05) so với lô chứng so sánh thời điểm trước sau 90 ngày uống thuốc Các kết hoàn toàn phù hợp với kết mô bệnh học thận Quan sát đại thể thận tất chuột nghiên cứu, cấu trúc vi thể thận 30% số chuột thực nghiệm lô cho thấy rõ tiểu cầu thận, khoang Bowman, tế bào ống thận nhau, rõ cấu trúc, tế bào biểu mơ ống thận bình thường, hình ảnh cấu trúc vi thể vùng vỏ vùng tủy thận, cầu thận ống thận bình thường chuột lơ chứng, khơng thấy hình ảnh tổn thương hai lơ uống thuốc ‟HV”, hình ảnh cấu trúc vi thể vùng chức thận bình thường chuột lơ chứng (Ảnh 3.1; 3.2) Kết chứng tỏ: thuốc thuốc ‟HV” với liều 30,24g/kg/ngày 90,72g/kg/ngày không làm ảnh hưởng đến cấu trúc, chức thận chuột thí nghiệm sau 90 ngày uống thuốc thử Như vậy, nghiên cứu này, chưa thấy thuốc ‟HV” gây độc bán trường diễn động vật thực nghiệm 4.3 Bàn luận tác dụng thuốc chức sinh sản chuột nhắt gây suy buồng trứng 4.3.1 Bàn luận mơ hình gây suy buồng trứng chuột nhắt Suy buồng trứng mơ tả tình trạng làm giảm chức buồng 62 trứng Nó khơng gây ảnh hưởng đến tình trạng sức khỏe chung thể mà ngun nhân gây vơ sinh, ảnh hưởng đến 1% phụ nữ 40 tuổi tỷ lệ bệnh nhân mắc POI ngày tăng cao Việc tăng bệnh nhân bị POI, đồng nghĩa với tăng tỷ lệ vô sinh mối quan tâm toàn xã hội việc nghiêm cứu mơ hình gây suy buồng trứng cần thiết Tuy nhiên khó tiến hành nghiên cứu vấn đề người, nên phải có mơ hình lý tưởng bắt chước biểu xảy bệnh nhân bị POI Mơ hình chuột có ý nghĩa quan trọng Mơ hình dùng TG gây POI chuột nhiều tác giả Trung Quốc áp dụng Trong nghiên cứu sử dụng TG đường uống với liều 100mg/kg/24h liều cao gấp đôi liều tác giả Xiu-Ying Chen cộng dùng, với thời gian 35 ngày liên tục với mong muốn gây mơ hình POI rõ rệt Các tiêu theo dõi: trọng lượng thể chu kỳ động dục chuột, hormon FSH E2 huyết thanh, số buồng trứng, tử cung với trọng lượng thể đánh giá mô bệnh học Với thông số việc đánh giá tác dụng cao lỏng ‟HV” với chức sinh sản chuột tương đối rõ nét Tuy nhiên với mong muốn có mơ hình POI đa dạng hơn, hiệu ngồi sử dụng TG đường uống truyền thống để gây POI dùng thêm dùng tiêm da tiêm mang bụng Để đánh giá sâu tác dụng chế tác dụng chế phẩm nghiên cứu mở rộng tiêu nghiên cứu số AMH, LH, PRL đầy đủ bám sát với lâm sàng điều trị 4.3.2 Về tác dụng thuốc ‟HV” với chức sinh sản chuột nhắt gây suy buồng trứng Một phụ nữ gọi suy buồng trứng sớm tuổi nhỏ 40 có ba tiêu chuẩn: thiểu kinh vơ kinh tháng, FSH tăng cao E2 giảm 63 Như triệu chứng lâm sàng bật, dễ nhận biết triệu chứng để bệnh nhân đến khám bệnh triệu chứng thiểu kinh, chứng vô kinh Điều hồn tồn tương đồng với YHCT, YHCT khơng có bệnh suy buồng trứng chứng tương dương với chứng bế kinh Bài thuốc ‟HV” thuốc ‟Dật kinh thang” gia thêm vị Câu kỷ tử, Thỏ ty tử Tỏa dương có tác dụng bổ thận, ích khí kiện tỳ, tán uất thuốc dùng từ hàng ngàn năm có tác dụng tốt điều trị chứng bệnh nói chung đặc biệt chứng kinh bế Đã có nhiều tác giả nghiêm cứu chứng minh dùng ‟Dật kinh thang” gia giảm đạt hiệu cao điều trị chứng bế kinh Năm 2010 Thoát Trường Vũ Kim Lệ Quân nghiêm cứu chứng minh dùng ‟Dật kinh thang” gia vị điều trị chứng kinh nguyệt đem lại hiệu tốt Năm 2011 Đổng Nhan Thóa Trần Hội Thắng nghiêm cứu chứng minh ‟Dật kinh thang” đạt hiệu cao bệnh bế kinh Bài thuốc ‟HV” gồm có 14 vị thuốc có tác dụng: bổ thận, ích khí kiện tỳ, tán uất Như toàn thuốc khẳng định có tác dụng điều trị chức sinh sản phụ nữ, đặc biệt chứng bế kinh Điều hồn tồn tương ứng với kết mơ hình, tần số chu kỳ động dục chuột lô trị 1, trị cao cho lơ mơ hình nhỏ so với lơ chứng Vì nghiên cứu chọn thuốc ‟HV” có sở Trong thuốc gồm nhóm thuốc: Nhóm thuốc bổ thận gồm vị: Thục địa, Đỗ trọng, Thỏ ty tử, Tỏa dương Thận hư bệnh chủ yếu chứng ‟bế kinh”, thận gốc sinh sản, sách Lưu Tiển Quần viết hệ thống Thận - Thiên quý - Xung nhâm tương tự chức Vùng đồi - Tuyến yên - Buồng trứng thận có tác dụng điều chỉnh toàn hệ thống trục Theo Đỗ Tất Lợi: Thục địa có tác dụng dược lý tốt cho hệ thống tim mạch, tăng cường hệ miễn dịch Trên mô hình thực nghiện chuột năm 2011 hai tác giả Tru Nghiên Từ Sướng chứng minh Thục địa có tác dụng tốt cho tim mạch, chống huyết 64 khối, tăng tạo máu, chống oxi hóa cao Đỗ trọng chứng minh có tác dụng hạ áp, tăng cường miễn dịch, tác giả Trung quốc nghiên cứu thấy cho chuột uống nước sắc Đỗ trọng làm tử cung chuột tăng co bóp, tăng hưng phấn tình dục chống oxy hóa tốt Cho chuột trưởng thành uống nước sắc Thỏ ty tử ngày lần ngày làm tăng trọng lượng tuyến yên, buồng trứng tử cung chuột, LH không thay đổi rõ rệt, FSH không thay đổi, ngồi có tác dụng tăng tạo máu, đề phòng thiếu máu tim điều hòa hoạt động Trục đồi - Tuyến yên - Buồng trứng Hai tác giả Diệp Mẫn, Nghiêm Ngọc Ngưng (2000) nghiên cứu tác dụng dược lý Thỏ ty tử khảng định Thỏ ty tử có tác dụng điều hòa lên hoạt động trục hormon sinh dục Mã Kiến Tân, Đỗ Ngọc Dung nghiên cứu chứng minh Tỏa dương có ảnh hưởng đến quan sinh sản thúc đẩy q trình thành thục hành vi giao hợp chuột cái, kích thích hình thành xương , Trong thuốc nghiên cứu phối hợp vị thuốc bổ thận với để thành tễ đại bổ thận Từ tạo nên tác dụng thuốc Kết mô hình cho thấy nồng độ FSH giảm, nồng độ E2 tăng, trọng lượng buồng trứng tử cung tăng phải tác dụng phối hợp nhóm vị thuốc bổ thận Tuy nhiên tăng tác dụng thuốc lô trị lô trị chưa có khác biệt có ý nghĩa thống kê, phải thời gian dùng thuốc 20 (tương đương với chu ký sinh sản chuột) ngắn nên chưa thể rõ điều Cơ chế tác dụng nhóm thuốc bổ thận nên chức Trục đồi - Tuyến yên - Buồng trứng cần nghiên cứu nhiều đề tài khác Nhóm thuốc có tác dụng bổ khí kiện tỳ gồm vị: Nhâm sâm, Hồi sơn, Bạch truật Tỳ khí yếu tố quan trọng ‟Vạn thị phụ khoa” viết: nữ tử bế kinh tổn thương tỳ vị, ăn kém, khiến cho khí huyết hao tổn nên khơng có kinh nguyệt Tỳ chủ vận hóa gốc hậu thiên, tỳ hư khiến cho nguồn sinh hóa bất túc làm cho nguồn sinh kinh thủy bị thiếu, bào cung thất dưỡng Thấp đình trệ thành đàm mà gây trở trệ Năm 2009 Lê Dương 65 Trương Thiết Quân nghiên cứu chứng Nhân sâm có tác dụng có tác dụng thúc đẩy tuyến yên tiết hormon sinh dục, làm tăng tốc trình thành thục sinh dục chuột, chuột kéo dài q trình động dục, có tác dụng rõ rệt làm tăng trọng lượng tử cung buồng trứng, tăng hưng phấn giao phối, kéo dài giai đoạn động dục chu kỳ động dục Hoài sơn, Bạch truật vị thuốc tốt cho hệ thống miễn dịch, có tính kháng oxy hóa cao kéo dài tuổi thọ, tốt cho tiêu hóa Nhóm thuốc bổ khí kiện tỳ giúp đại bổ ngun khí tốt cho ăn uống từ chuột cải thiện toàn trạng trọng lượng chuột Điều tương ứng với kết mơ hình chúng tôi, trọng lượng thể trọng lượng tử cung, buồng trứng chuột lô trị 1, trị cao với nhóm gây POI, tồn trạng chuột nhóm dùng thuốc nghiên cứu lông mượt, mắt trong, phân khô Tỷ lệ buồng trứng tử cung nhóm dùng thuốc nghiên cứu cao nhóm gây POI Nhóm thuốc tán uất: Sài hồ, Táo nhân Can chủ sơ tiết tàng huyết Can uất khiến cho khí thất điều, khí trệ huyết ứ, gây nên kinh thủy thất điều Uất hóa hỏa, trực tiếp làm tổn thương khí huyết, huyết hải trống rổng, bào cung ni dưỡng Ngồi can khí uất kết khiến tâm khí khơng điều tiết, tỳ khí bất hóa làm khí trệ huyết ứ, bào mạch tắc trở, kinh nguyệt khơng đến Trình Linh năm 2012 chứng minh Sài hồ có tác dụng kháng viêm, giảm đau, an thần, bảo vệ tế bào gan, tăng miễn dịch kháng virus, kháng khuẩn Táo nhân có tác dụng dược lý chống oxy hóa, tốt cho tim mạch, cải thiện trí nhớ, năm 2017 Liên Viên Dương Từ Hy Minh nghiên cứu chứng minh Đối chiếu với YHHĐ tất bệnh nhân mắc bệnh mãn tính nói chung bệnh nhân POI nói riêng, đặc biệt bệnh nhân trẻ điều trị vơ sinh thường có chứng can khí uất kết trính điều trị kéo dài chi phí trị bệnh tốn Vì theo chúng tơi sử dụng nhóm thuốc làm tăng tác dụng hỗ trợ điều trị POI thuốc lâm sàng Ngoài biểu lâm sàng bệnh nhân suy buồng trứng thường tương ứng với triệu chứng thể thận âm hư chứng bế kinh Bệnh nhân 66 thường người gầy, miệng khô họng táo, lưng gối mỏi, ngũ tâm phiền nhiệt, ngủ mồ hôi trộm, chất lưỡi đỏ, thưa kinh vô kinh Trong thuốc có vị thuốc điều trị triệu chứng Các vị thuốc bổ âm: Bạch thược, Sa sâm, Kỷ tử; Đương quy bổ huyết hoạt huyết, Mẫu đơn bì hư hỏa Theo nghiên cứu tác giả Lý Tố Cầm, Lý Tuyết Vân Đương quy có tác dụng cải thiện chức tim, giảm đau, tăng cường chức miễn dịch, hệ sinh sản Đương quy làm tăng co bóp tử cung, tăng hưng phấn tính dục , Năm 2017 Vu Hồng nghiên cứu chứng minh Kỷ tử tốt cho hệ thống miễn dịch, chống oxy hóa, tốt cho tim mạch , Bài thuốc kết hợp nhóm thuốc trên, tạo tễ đại bổ thận, bố khí kiện tỳ, tán uất Kết tương ứng với kết mơ hình Tuy nhiên cần nghiên cứu để hiểu rõ chế thuốc 67 KẾT LUẬN Độc tính cấp độc tính bán trường diễn thuốc ‟HV” 1.1.Độc tính cấp Chuột nhắt trắng uống thuốc ‟HV” với liều tối đa chuột uống 450g/kg/ngày (gấp 8,68 lần liều tương đương liều điều trị người) khơng có chuột chết không quan sát thấy biểu bất thường chuột Vì vậy, chưa xác định độc tính cấp chưa tính LD50 thuốc ‟HV” chuột nhắt trắng theo đường uống 1.2 Độc tính bán trường diễn Bài thuốc ‟HV” với liều 30,24g/kg/ngày (tương đương liều điều trị người) liều 90,72g/kg/ngày (gấp lần liều điều trị người), uống 90 ngày liên tục khơng gây độc tính bán trường diễn chuột cống trắng; thể không ảnh hưởng tới tình trạng chung chuột, khơng làm thay đổi số gia tăng trọng lượng thể, số đánh giá chức tạo máu, mức độ tổn thương gan chức thận, không gây tổn thương cấu trúc lách, gan, thận chuột nghiên cứu Kết luận tác dụng thuốc ‟HV” Bài thuốc ‟HV” liều 51,84g dược liệu/kg/ngày liều 103,68g dược liệu/kg/ngày thể hiệu điều trị mơ hình gây suy buồng trứng chuột nhắt Chuột gây suy buồng chứng uống TG 100mg/kg/ngày 35 ngày liên tục, sau uống thuốc ‟HV” 20 ngày làm thay đổi có ý nghĩa thống kê số suy buồng trứng so với lơ mơ hình, cụ thể: Làm giảm FSH nồng độ, làm tăng nồng độ E2; Làm tăng số tử cung buồng trứng; cải thiện hình ảnh mô bệnh học tử cung, buồng trứng so với lơ mơ hình 68 KIẾN NGHỊ Kết nghiên cứu bước đầu cho thấy thuốc ‟HV” có độ an tồn cao có tác dụng cải thiện chức sinh sản chuột gây suy buồng trứng Để mở rộng phạm vi ứng dụng thuốc, cần có nghiên cứu đầy đủ thuốc ‟HV” Do đó, chúng tơi xin kiến nghị: - Tiếp tục nghiên cứu chuyên sâu để đánh giá hiệu cải thiện chức sinh sản chế tác dụng thuốc ‟HV” thực nghiệm - Bước đầu áp dụng nghiên cứu đánh giá hiệu lâm sàng người tình nguyện số bệnh lý sinh sản TÀI LIỆU THAM KHẢO Phụ lục Một số hình ảnh nghiên cứu Máy xét nghiệm Elisa Bơm hóa chất vào giếng Elisa Làm xét nghiệm huyết học máu Mổ chuột lấy buồng trứng tử cung Buồng trứng tử cung chuột ...BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ HỌC VIỆN Y DƯỢC HỌC CỔ TRUYỀN VIỆT NAM VŨ THANH TUYỀN ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG CỦA BÀI THUỐC ‟HV” TRÊN CHỨC NĂNG SINH SẢN CỦA CHUỘT CÁI Chuyên ngành: Y... cứu cụ thể tác dụng hỗ trợ điều trị POI thuốc thực nghiệm lâm sàng Do vậy, tiến hành nghiêm cứu đề tài: Đánh giá tác dụng thuốc ‟HV” chức sinh sản chuột cái với hai mục tiêu sau: Đánh giá độc... thận chuột nghiên cứu 46 3.2.1 Đại thể 46 3.2.2 Vi thể 46 3.3 Kết đánh giá tác dụng thuốc ‟HV” chức sinh sản chuột nhắt 48 3.3.1 Kết đánh giá trọng lượng thể chu kỳ động dục chuột 48 3.3.2 Kết đánh