ĐỊNH DANH VÀ PHÂN NHÓM NẤM Trichoderma spp. PHÂN LẬP TẠI VIỆT NAM

87 609 0
ĐỊNH DANH VÀ PHÂN NHÓM NẤM Trichoderma spp. PHÂN LẬP TẠI VIỆT NAM

Đang tải... (xem toàn văn)

Tài liệu hạn chế xem trước, để xem đầy đủ mời bạn chọn Tải xuống

Thông tin tài liệu

Nấm Trichoderma là một loại nấm mốc có phổ đối kháng rộng đối với các loại nấm gây bệnh hại cây trồng và có khả năng kích thích sự phát triển của bộ rễ cây. Việc khai thác tiềm năng của Trichoderma dƣới dạng chế phẩm sinh học nhƣ một tác nhân sinh học phòng trừ nhiều bệnh hại cây trồng, giúp cho cây sinh trƣởng và phát triển tốt hơn đã và đang đƣợc các nƣớc trên thế giới trong đó có nƣớc ta rất quan tâm nhằm tạo sản phẩm nông nghiệp không có dƣ lƣợng thuốc hóa học là một yêu cầu bắt buộc vì sức khỏe cộng đồng, xuất khẩu và cân bằng môi trƣờng sinh thái, hƣớng đến một nền nông nghiệp bền vững. Vì thế, việc định danh chính xác tên loài và xác định mối quan hệ di truyền của chúng trở nên thật cần thiết. Nhƣng do hệ thống định danh và phân loại của Trichoderma vẫn chƣa hoàn chỉnh nên việc chỉ dựa đơn lẻ vào hình thái, trình tự vùng bảo tồn hoặc trình tự các vùng chức năng thì không thể định danh chính xác tên loài của chúng (Gary J. Samuels, 2004). Khóa luận tốt nghiệp này nhằm mục đích định danh tên loài với độ chính xác cao, bằng cách kết hợp kết quả định danh dựa vào hình thái với trình tự vùng bảo tồn ITS – rDNA và một phần vùng chức năng tef1 (4th large intron) mà phƣơng pháp định danh chỉ bằng hình thái không hoàn toàn chính xác. Đồng thời, phân nhóm tạo phổ hệ di truyền để thành lập dữ liệu chi tiết về quần thể nấm Trichoderma phân lập từ các vùng sinh thái, địa lý khác nhau trên lãnh thổ nƣớc ta.

BỘ GIÁO DỤC ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP. HCM ------ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỊNH DANH PHÂN NHÓM NẤM Trichoderma spp. PHÂN LẬP TẠI VIỆT NAM Ngành học: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Niên khóa: 2003 – 2007 Sinh viên thực hiện: NGUYỄN THỊ KHẢ TÚ Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 9/2007 iii BỘ GIÁO DỤC ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP. HCM BỘ MÔN CÔNG NGHỆ SINH HỌC ------- ĐỊNH DANH PHÂN NHÓM NẤM Trichoderma spp. PHÂN LẬP TẠI VIỆT NAM Giáo viên hƣớng dẫn Sinh viên thực hiện TS. LÊ ĐÌNH ĐÔN NGUYỄN THỊ KHẢ TÚ Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 9/2007 iii                                                          iv TÓM TẮT         Trichoderma                Mục đích Trichoderma  Trichoderma spp Trichoderma spp. (Trichoderma  Phƣơng pháp thực hiện   rDNA (Internal Transcribed Space   tef1 (4 th large intron) (EF                  tef1    Trichoderma             TreeView 1.6.6.  tef1  Trichoderma   Kết quả đạt đƣợc Trichoderma. Trichoderma. Trichoderma T. longibrachiatum, T. asperellum, T. atroviride, T. harzianum, T. virens T. asperellum   v T. asperellum   Kết luận    tef1   Trichoderma.  tef1  Trichoderma   vi ABSTRACT Trichoderma spp. colle carried out by Nguyen Thi Kha Tu, from 19 Mar, 2007 to 19 Aug, 2007 at Plant Protection Pepartment, Argonomy Faculty, Nong Lam University and Phytobiotechnology Laboratory, Reseach Institute Biological and Enviromental Technology, Nong Lam University. This thesis was based on molds identified results then using Clustal 1.83 and Treeview 1.6.6 software to compare ITS  rDNA (Internal Transcribed Space  rDNA) stable and apart of tef1 (EF   1 alpha) funtional regions with their data on NCBI to identifying species and grouping of 11 Trichoderma genus. Finally, ITS  rDNA and apart of tef1 regions of 11 Trichoderma genus were compared with their data at different ecological, geographic areas on over the world to clear the genetic relationship. The results show that confirming exactly the species of 10 Trichoderma genus, T68 genus was identified T. atroviride. Establishing and clearing the genetic relationship among 11 Trichoderma genus. In which, 11 Trichoderma genus in Viet Nam of 5 species T. longibrachiatum, T. asperellum, T. atroviride, T. harzianum , T. virens (except T. asperellum genus (T6)) have a rather far genetic relationship from others in the world. 10 genus orginated from locality and T. asperellum (T6) is the one migrated in our country. Genetic relationship among 5 species is stable and suitable with morphological characteristics. vii MỤC LỤC  . iv ABSTRACT vi  . vi  . x  . xii  xii  . 0  . 0 1.1.  0 1.2.  0 1.3.  0  . 2  . 2 2.1. Trichoderma . 2 2.1.1.  . 2 2.1.2.  2 2.1.3.  . 3 2.1.4.  . 4 2.1.5.  . 4 2.2. Trichoderma . 6 2.3. Trichoderma 7 2.4.  rDNA . 9 2.5. tef1 . 10 2.6.   . 10 2.7. Trichoderma  11 2.8.  Trichoderma . 13  . 15 viii  15 3.1.  15 3.1.1.  . 15 3.1.2. u 15 3.2.  . 16 3.3.  . 17 3.4.  . 17 3.5. Trichoderma 17 3.6.  . 18 3.7.  . 18 3.8.  19 3.9.  . 21 3.10. Trichoderma . 22 3.11.  24 Trichoderma   24 g 4 . 25  . 25 4.1.  . 25 4.2.   tef1 . 26 4.3.  . 27 4.4.  . 35 4.4.1.  tef1 35 4.4.2.  rDNA 37 4.5.   39 4.6.   tef1  . 41  . 44 ix   . 44 5.1.  44 5.2.  . 44   x DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT    dNTP: Deoxyribonucleotide triphosphate. DNA: Deoxyribonucleic acid EDTA: Ethylene diamin tetracetic acid. PCR: Polymerase chain reaction. RAPD: Random amplified polymorphism DNA. RNA: Ribonucleic acid. SDS: sodium dodecyl sulfate. Taq: Thermus aquaticus. TAE: Tris-glacial acetic acid- ethylenne diamine tetra acetic acid. TE: Tris ethylene diamine tetra acetate. Tm: Melting Tempereture . . . Trichoderma spp. colle carried out by Nguyen Thi Kha Tu, from 19 Mar, 2007 to 19 Aug, 2007 at Plant Protection Pepartment, Argonomy.  Trichoderma, Longibrachiatum, Saturnisporum, Pachybasium và Hypocreanum.    Saturnisporum     

Ngày đăng: 03/09/2013, 10:00

Hình ảnh liên quan

2.1.3. Đặc điểm hình thái (Gary J. Samuels, 2004) - ĐỊNH DANH VÀ PHÂN NHÓM NẤM Trichoderma spp. PHÂN LẬP TẠI VIỆT NAM

2.1.3..

Đặc điểm hình thái (Gary J. Samuels, 2004) Xem tại trang 16 của tài liệu.
Hình 2.2 Kết quả Blast từ trình tự vùng ITS– rDNA của dòng có mã số truy cập là AF 3362109 trên NCBI  - ĐỊNH DANH VÀ PHÂN NHÓM NẤM Trichoderma spp. PHÂN LẬP TẠI VIỆT NAM

Hình 2.2.

Kết quả Blast từ trình tự vùng ITS– rDNA của dòng có mã số truy cập là AF 3362109 trên NCBI Xem tại trang 22 của tài liệu.
Bảng 2.1 Các thông số về nồng độ gốc và nồng độ sử dụng của phân tử Mass - ĐỊNH DANH VÀ PHÂN NHÓM NẤM Trichoderma spp. PHÂN LẬP TẠI VIỆT NAM

Bảng 2.1.

Các thông số về nồng độ gốc và nồng độ sử dụng của phân tử Mass Xem tại trang 24 của tài liệu.
Bảng 3.1 Các dòng nấm sử dụng để định danh và phân nhóm trong đề tài - ĐỊNH DANH VÀ PHÂN NHÓM NẤM Trichoderma spp. PHÂN LẬP TẠI VIỆT NAM

Bảng 3.1.

Các dòng nấm sử dụng để định danh và phân nhóm trong đề tài Xem tại trang 28 của tài liệu.
Hình 3.1 Sơ đồ phân vùng và vị trí primer trên vùng từ 18S đến 28 S– rDNA và vị trí vùng khuếch đại (vùng đánh dấu ellip) với cặp primer ITS4 và ITS5  - ĐỊNH DANH VÀ PHÂN NHÓM NẤM Trichoderma spp. PHÂN LẬP TẠI VIỆT NAM

Hình 3.1.

Sơ đồ phân vùng và vị trí primer trên vùng từ 18S đến 28 S– rDNA và vị trí vùng khuếch đại (vùng đánh dấu ellip) với cặp primer ITS4 và ITS5 Xem tại trang 33 của tài liệu.
Bảng 3.2 Các primer dùng trong đề tài và trình tự của chúng - ĐỊNH DANH VÀ PHÂN NHÓM NẤM Trichoderma spp. PHÂN LẬP TẠI VIỆT NAM

Bảng 3.2.

Các primer dùng trong đề tài và trình tự của chúng Xem tại trang 33 của tài liệu.
Bảng 3.4 Chu kỳ nhiệt phản ứng PCR - ĐỊNH DANH VÀ PHÂN NHÓM NẤM Trichoderma spp. PHÂN LẬP TẠI VIỆT NAM

Bảng 3.4.

Chu kỳ nhiệt phản ứng PCR Xem tại trang 34 của tài liệu.
Bảng 3.3 Thành phần phản ứng PCR và liều lƣợng dùng cho một phản ứng - ĐỊNH DANH VÀ PHÂN NHÓM NẤM Trichoderma spp. PHÂN LẬP TẠI VIỆT NAM

Bảng 3.3.

Thành phần phản ứng PCR và liều lƣợng dùng cho một phản ứng Xem tại trang 34 của tài liệu.
Loài đƣợc định danh dựa vào hình thái. - ĐỊNH DANH VÀ PHÂN NHÓM NẤM Trichoderma spp. PHÂN LẬP TẠI VIỆT NAM

o.

ài đƣợc định danh dựa vào hình thái Xem tại trang 35 của tài liệu.
Bảng 3.6 Trình tự vùng tef1 của các dòng Trichoderma trên NCBI - ĐỊNH DANH VÀ PHÂN NHÓM NẤM Trichoderma spp. PHÂN LẬP TẠI VIỆT NAM

Bảng 3.6.

Trình tự vùng tef1 của các dòng Trichoderma trên NCBI Xem tại trang 36 của tài liệu.
Hình 4.1 Kết quả điện di DNA tổng số Trichoderma ly trích đƣợc,  trên gel agarose 1 % ở 110 V, 400 A trong 20 phút  - ĐỊNH DANH VÀ PHÂN NHÓM NẤM Trichoderma spp. PHÂN LẬP TẠI VIỆT NAM

Hình 4.1.

Kết quả điện di DNA tổng số Trichoderma ly trích đƣợc, trên gel agarose 1 % ở 110 V, 400 A trong 20 phút Xem tại trang 39 của tài liệu.
Hình 4.2 Kết quả điện di DNA tổng số Trichoderma ly trích đƣợc sau khi pha loãng 10 lần, trên gel agarose 1 % ở 110 V, 400 A trong 20 phút - ĐỊNH DANH VÀ PHÂN NHÓM NẤM Trichoderma spp. PHÂN LẬP TẠI VIỆT NAM

Hình 4.2.

Kết quả điện di DNA tổng số Trichoderma ly trích đƣợc sau khi pha loãng 10 lần, trên gel agarose 1 % ở 110 V, 400 A trong 20 phút Xem tại trang 39 của tài liệu.
Hình 4.3 Kết quả điện di trên gel agarose 1% ở 110V, 400A trong 20 phút, sản phẩm PCR khuếch đại vùng ITS – rDNA với cặp primer ITS4 và ITS5, có kích thƣớc 600 bp  - ĐỊNH DANH VÀ PHÂN NHÓM NẤM Trichoderma spp. PHÂN LẬP TẠI VIỆT NAM

Hình 4.3.

Kết quả điện di trên gel agarose 1% ở 110V, 400A trong 20 phút, sản phẩm PCR khuếch đại vùng ITS – rDNA với cặp primer ITS4 và ITS5, có kích thƣớc 600 bp Xem tại trang 40 của tài liệu.
Hình 4.4 Kết quả điện di trên gel agarose 1% ở 110V, 400A trong 20 phút, sản phẩm PCR khuếch đại một phần vùng  tef1 với cặp primer EF1 – 728F và EF1 – 986R, có kích thƣớc 320 bp  - ĐỊNH DANH VÀ PHÂN NHÓM NẤM Trichoderma spp. PHÂN LẬP TẠI VIỆT NAM

Hình 4.4.

Kết quả điện di trên gel agarose 1% ở 110V, 400A trong 20 phút, sản phẩm PCR khuếch đại một phần vùng tef1 với cặp primer EF1 – 728F và EF1 – 986R, có kích thƣớc 320 bp Xem tại trang 40 của tài liệu.
Bảng 4.2 Độ tƣơng đồng di truyền (%) dòng T42 với các loài trên NCBI - ĐỊNH DANH VÀ PHÂN NHÓM NẤM Trichoderma spp. PHÂN LẬP TẠI VIỆT NAM

Bảng 4.2.

Độ tƣơng đồng di truyền (%) dòng T42 với các loài trên NCBI Xem tại trang 41 của tài liệu.
Bảng 4.1 Độ tƣơng đồng di truyền (%) dòng T37 với các loài trên NCBI - ĐỊNH DANH VÀ PHÂN NHÓM NẤM Trichoderma spp. PHÂN LẬP TẠI VIỆT NAM

Bảng 4.1.

Độ tƣơng đồng di truyền (%) dòng T37 với các loài trên NCBI Xem tại trang 41 của tài liệu.
Dòng T19: đƣợc định danh dựa vào hình thái là T.asperellu m, kết hợp với kết quả  tính  độ tƣơng đồng di truyền (%)  vùng  ITS  –  rDNA  với các  loài trên  NCBI,  chúng tôi khẳng định tên loài chính xác của dòng T19 là Trichoderma asperellum - ĐỊNH DANH VÀ PHÂN NHÓM NẤM Trichoderma spp. PHÂN LẬP TẠI VIỆT NAM

ng.

T19: đƣợc định danh dựa vào hình thái là T.asperellu m, kết hợp với kết quả tính độ tƣơng đồng di truyền (%) vùng ITS – rDNA với các loài trên NCBI, chúng tôi khẳng định tên loài chính xác của dòng T19 là Trichoderma asperellum Xem tại trang 42 của tài liệu.
Bảng 4.5 Độ tƣơng đồng di truyền (%) dòng T33 với các loài trên NCBI - ĐỊNH DANH VÀ PHÂN NHÓM NẤM Trichoderma spp. PHÂN LẬP TẠI VIỆT NAM

Bảng 4.5.

Độ tƣơng đồng di truyền (%) dòng T33 với các loài trên NCBI Xem tại trang 43 của tài liệu.
Dòng T2: Tƣơng tự đƣợc định danh dựa vào hình thái là T.asperellum hoặc T. harzianum , kết hợp với kết quả tính độ tƣơng đồng di truyền (%) vùng ITS – rDNA  và một phần vùng tef1 với các loài trên NCBI, chúng tôi khẳng định tên loài chính  xác của dòng T2 - ĐỊNH DANH VÀ PHÂN NHÓM NẤM Trichoderma spp. PHÂN LẬP TẠI VIỆT NAM

ng.

T2: Tƣơng tự đƣợc định danh dựa vào hình thái là T.asperellum hoặc T. harzianum , kết hợp với kết quả tính độ tƣơng đồng di truyền (%) vùng ITS – rDNA và một phần vùng tef1 với các loài trên NCBI, chúng tôi khẳng định tên loài chính xác của dòng T2 Xem tại trang 43 của tài liệu.
Bảng 4.7 Độ tƣơng đồng di truyền (%) dòng T14 với các loài trên NCBI - ĐỊNH DANH VÀ PHÂN NHÓM NẤM Trichoderma spp. PHÂN LẬP TẠI VIỆT NAM

Bảng 4.7.

Độ tƣơng đồng di truyền (%) dòng T14 với các loài trên NCBI Xem tại trang 44 của tài liệu.
Dòng T14: đƣợc định danh dựa vào hình thái là T.harzianu m, kết hợp với kết quả  tính  độ tƣơng đồng di truyền (%)  vùng  ITS  –  rDNA  với các  loài trên  NCBI,  chúng tôi khẳng định tên loài chính xác của dòng T14 là Trichoderma harzianum - ĐỊNH DANH VÀ PHÂN NHÓM NẤM Trichoderma spp. PHÂN LẬP TẠI VIỆT NAM

ng.

T14: đƣợc định danh dựa vào hình thái là T.harzianu m, kết hợp với kết quả tính độ tƣơng đồng di truyền (%) vùng ITS – rDNA với các loài trên NCBI, chúng tôi khẳng định tên loài chính xác của dòng T14 là Trichoderma harzianum Xem tại trang 44 của tài liệu.
Bảng 4 .9 Độ tƣơng đồng di truyền (%) dòng T88 với các loài trên NCBI - ĐỊNH DANH VÀ PHÂN NHÓM NẤM Trichoderma spp. PHÂN LẬP TẠI VIỆT NAM

Bảng 4.

9 Độ tƣơng đồng di truyền (%) dòng T88 với các loài trên NCBI Xem tại trang 45 của tài liệu.
Dòng T88: đƣợc định danh dựa vào hình thái là T.asperellu m, kết hợp với kết quả tính độ tƣơng đồng di truyền (%) vùng ITS – rDNA và một phần vùng tef1  với  các  loài  trên  NCBI,  chúng  tôi  khẳng  định  tên  loài  chính  xác  của  dòng  T88  là  - ĐỊNH DANH VÀ PHÂN NHÓM NẤM Trichoderma spp. PHÂN LẬP TẠI VIỆT NAM

ng.

T88: đƣợc định danh dựa vào hình thái là T.asperellu m, kết hợp với kết quả tính độ tƣơng đồng di truyền (%) vùng ITS – rDNA và một phần vùng tef1 với các loài trên NCBI, chúng tôi khẳng định tên loài chính xác của dòng T88 là Xem tại trang 45 của tài liệu.
Bảng 4. 11 Độ tƣơng đồng di truyền (%) dòng T68 với các loài trên NCBI Percent Identity  Matrix - created by ClustalX (1.83)   - ĐỊNH DANH VÀ PHÂN NHÓM NẤM Trichoderma spp. PHÂN LẬP TẠI VIỆT NAM

Bảng 4..

11 Độ tƣơng đồng di truyền (%) dòng T68 với các loài trên NCBI Percent Identity Matrix - created by ClustalX (1.83) Xem tại trang 46 của tài liệu.
Dòng T68: định danh dựa vào hình thái là T.atroviride nhƣng kết quả tính độ tƣơng đồng di truyền (%) vùng ITS – rDNA với dữ liệu trên NCBI chỉ giúp kết luận  tên loài dòng T68 không phải là T - ĐỊNH DANH VÀ PHÂN NHÓM NẤM Trichoderma spp. PHÂN LẬP TẠI VIỆT NAM

ng.

T68: định danh dựa vào hình thái là T.atroviride nhƣng kết quả tính độ tƣơng đồng di truyền (%) vùng ITS – rDNA với dữ liệu trên NCBI chỉ giúp kết luận tên loài dòng T68 không phải là T Xem tại trang 46 của tài liệu.
Hình 4.8 Kết quả so sánh trình tự vùng ITS– rDNA của 11 dòng Trichoderma ViệtNam với dữ liệu của chúng trên thế giới (mã số truy cập/ kí hiệu dòng-tên loài-vùng lấy mẫu (quốc gia))  - ĐỊNH DANH VÀ PHÂN NHÓM NẤM Trichoderma spp. PHÂN LẬP TẠI VIỆT NAM

Hình 4.8.

Kết quả so sánh trình tự vùng ITS– rDNA của 11 dòng Trichoderma ViệtNam với dữ liệu của chúng trên thế giới (mã số truy cập/ kí hiệu dòng-tên loài-vùng lấy mẫu (quốc gia)) Xem tại trang 54 của tài liệu.

Từ khóa liên quan

Tài liệu cùng người dùng

Tài liệu liên quan