Đang tải... (xem toàn văn)
Thảo quyết minh có anthanoid nhóm nhuận tẩy, có hai nhóm OH ở vị trí 1,8.Anthranoid tự do (aglycon) dễ tan trong dung môi kém phân cực, do đó khi ngâm dược liệu vào Cloroform, anthranoid tự do sẽ bị hòa tan trong Cloroform, ta thu được dịch chiết có anthranoid tự do.Khi lắc dịch chiết với NaOH 10%, nhóm OH sẽ tác dụng với kiềm tạo hợp chất phenolat có màu đỏ tan trong nước.
BÁO CÁO THỰC HÀNH DƯỢC LIỆU BÀI: DƯỢC LIỆU CHỨA ANTHRANOID I/ CƠ SỞ LÍ THUYẾT Khái niệm anthranoid? Anthranoid hợp chất hữu có khung 9,10-diceton anthracen, khung dạng khử (anthron, anthranol, dihydroanthranol) dạng oxy hóa (anthraquinon) Trong dược liệu, anthranoid dạng kết hợp (glycosid, anthraglycoid) dạng tự (aglycon, anthraquinon) Phân loại? Anthraquinon phân thành nhóm: - Nhóm phẩm nhuộm: dẫn chất thuộc nhóm cấu trúccó nhóm OH kề cận vị trí α β nên gọi 1,2-dihydroxyanthranoid - Nhóm nhuận tẩy: Những dẫn chất thuộc nhóm thường có nhóm OH đính vị trí 1,8 vị trí thường nhóm –CH3, -CH2OH, -CHO – COOH nên gọi nhóm oxymethylanthraquinon Phản ánh thực nghiệm đặc hiệu? Phản ứng định tính đặc hiệu cho anthranoid (chủ yếu nhóm nhuận tẩy) là: - Phản ứng Borntrager: hợp chất anthranoid phản ưngs với kiềm tạo phenolat có màu đỏ, đỏ tím tan nước - Phản ứng với p-nitroso dimethylanilin: dẫn chất anthranol có phản ứng với p-nitroso dimethylanilin để tạo thành azomethin có màu - Phản ứng Schoutelen: trường hợp C-glycosid anthron, phát phản ứng Schoutelen: có mặt natri borat xuất hện huỳnh quang Dược liệu chứa anthranoid ? - Họ Đậu (Fabaceae): Phan Tả Diệp, Thảo Quyết Minh, Cốt Khí Muồng, Muồng Trâu - Họ Rau răm (Polygonaceae): Đại Hồng, Cốt Khí Củ, Hà Thủ Ơ, Chút Chít - Họ Cà phê (Rubiaceae): Ba Kích, Nhàu - Họ Lơ hội (Asphodelaceae): Lơ Hội II/ THỰC HÀNH Dược liệu: Thảo Quyết Minh Định tính anthranoid tự dạng oxy hóa (= dạng aglycon, anthraquinon) Lấy khoảng 20g bột dược liệu Thêm Cloroform cho thấm ngập mặt dược liệu, lắc kỹ Gạn lọc dịch chiết Dịch chiết + NaOH 10%, lắc kỹ Bã dược liệu giữ lại cho TN2 Chiết nhiều lần đến hết anthranoid tự (thử với NaOH 10% khơng màu hồng) Dịch chiết Dịch chiết + NaOH 10%, lắc kỹ Phần dịch chiết lại dùng để định tính tiếp acid chrysophanic *Hiện tượng: Lớp kiềm có màu hồng *Kết luận: Phản ứng dương tính *Giải thích: - Thảo minh có anthanoid nhóm nhuận tẩy, có hai nhóm OH vị trí 1,8 - Anthranoid tự (aglycon) dễ tan dung môi phân cực, ngâm dược liệu vào Cloroform, anthranoid tự bị hòa tan Cloroform, ta thu dịch chiết có anthranoid tự - Khi lắc dịch chiết với NaOH 10%, nhóm OH tác dụng với kiềm tạo hợp chất phenolat có màu đỏ tan nước Định tính Anthranoid dạng kết hợp (=dạng glycosid, anthraglycosid) Cho bột 0.5g bột dược liệu vào bình nón, thêm acid sulfuric 25% thấm vào ngập mặt dược liệu khoảng 0.5cm Đun bình nón bếp cách thuỷ acid sôi 2-3 phút để thuỷ phân Thêm cloroform vào dịch lọc thu được, lắc kĩ, đưa vào bình lắng gạn Gạn lấy lớp cloroform Lấy 2ml dung dịch thu cho vào ống nghiệm chứa sẵn 20-40ml dung dịch NaOH 10%, lắc - Hiện tượng: Lớp kiềm phía có màu đỏ Kết luận: Phản ứng dương tính Giải thích: - Sau thuỷ phân H2SO4 chiết tách Chloroform, thu hỗn hợp anthranoid dạng tự mang tính oxy-hố Các dẫn chất có nhóm –OH vị trí Carbon số số nên chúng tan NaOH, bị khử tạo thành Phenolat có màu đỏ tan nước Định tính acid chrysophanic ( chrysophanol) Gộp dịch chiết cloroform vào bình lắng gạn Lắc với dung dịch amoniac 10% nhiều lần, gạn bỏ lớp amoniac sau lần lắc Chiết lớp amoniac khơng màu hồng ngưng Chiết dung dịch clorofom vào ống nghiệm, cho vào 1-2ml dung dịch NaOH 10% Hiện tượng: lớp kiềm NaOH có màu hồng Giải thích: Xét cấu tạo anthranoid ta có tính acid giảm dần theo thứ tự: Rhein > Emodin > Chrysophanol, cho phản ứng với NH4OH (có tính kiềm yếu ) acid mạnh trường hợp Rhein phản ứng trước, tiếp tục lắc Emodin bị trung hòa tạo muối phenolat có màu hồng đỏ, Chrysophanol có tính acid yếu nên khơng phản ứng => dung dịch sau gạn bỏ lớp amoniac lại Chrysophanol Để xác nhận có mặt Chysophanol, ta tiếp tục cho NaOH kiềm mạnh vào tác dụng với dung dịch Cloroform Khi này, Chrysophanol có tính acid yếu phản ứng tạo muối phenolat có màu hồng đỏ => chứng tỏ dược liệu chứa Acid Chysophanol Thử nghiệm vi thăng hoa cho bột thảo minh vào chén nung nhỏ Nung cho nước bốc sau đậy lam kính lên trên, bên có miếng bơng ẩm Nung khoảng 10-15 phút Dẫn chất anthraquinon thăng hoa & bám vào mặt lam kính Tinh thể hình kim màu vàng soi kính hiển vi Nhỏ vào phiến kính giọt NaOH 10% *Giải thích: -Đặt bơng tẩm nước lên lam kính để làm lạnh, dẫn chất anthraquinon dễ ngưng tụ -Dẫn chất anthraquinon dễ thăng hoa đun nóng, ngưng tụ lại mặt lam kính gặp lạnh Dẫn chất có màu vàng, tinh thể có hình kim -Chất màu vàng dẫn chất 1,8 dihydoxy anthraquinon, Cryzophanol, Aloe emodin, Rein, Reum emodin, -Màu đỏ xuất sau nhỏ giọt NaOH lên phiến kính có dẫn chất anthraquinon có phản ứng Borntrager xảy Sắc ký lớp mỏng 5.1 Chuẩn bị bảng mỏng: Bản silicagel tráng sẵn Cắt miếng Kích thước 2,5×10cm Sấy hoạt hố (100-120oC 30’) 5.2 Chuẩn bị bình sắc kí dung mơi: Bình sắc kí Rửa Để thật khơ Lót miếng giấy lọt quanh lòng bình Cho hệ dung mơi toluen – ethyl acetat (9:1) vào bình sắc kí cao khoảng 0,5cm Đậy nắp, đặt nới phẳng, để yên 15-30’ cho dung mơi bão hồ 5.3 Chuẩn Bị Mẫu Thử Dịch DCM phần định tính acid chrysophanic trước lắc với ammoniac 5.4 Đưa mẫu lên mỏng khai triển: Dùng mao quản lấy mẫu, chấm lên mỏng thành vạch 1×3mm cách mép mép bên 1-1.5cm Chờ cho vết chấm khô Đưa mỏng vào bình sắc kí đạy nắp Khi dung mơi cách mép 0.5cm lấy ra, để sấy nhẹ cho khô dung môi 5.5 Soi Đèn UV Lấy mỏng khỏi bình chạy sắc kí Để khô thuốc thử sấy nhẹ mỏng Soi mỏng đèn UV bước sóng 254nm 365nm Quan sát ghi nhận kết Kết quan sát (365nm) 5.6 Báo cáo kết - Sau quan sát mỏng đèn UV bước sóng 254nm 365nm, sử dụng ảnh mỏng thu làm excel ta thu : * nhận định : vết mẫu thử rõ bước sóng 365 nm *Ta tính Rf : Với lA : quãng đường chất thử lO : quãng đường dung mơi * thích : khơng nhìn rõ vạch dung môi chạy ( 0.5 từ mép mỏng xuống ) nên tính dựa vào mép mỏng đến vạch chấm sk ( cm từ mép mỏng lên = 8.5 đơn vị đo ) => 0.5 cm tương ứng 4.25 đơn vị đo Ta tính lO ...II/ THỰC HÀNH Dược liệu: Thảo Quyết Minh Định tính anthranoid tự dạng oxy hóa (= dạng aglycon, anthraquinon) Lấy khoảng 20g bột dược liệu Thêm Cloroform cho thấm ngập mặt dược liệu, lắc... có hai nhóm OH vị trí 1,8 - Anthranoid tự (aglycon) dễ tan dung môi phân cực, ngâm dược liệu vào Cloroform, anthranoid tự bị hòa tan Cloroform, ta thu dịch chiết có anthranoid tự - Khi lắc dịch... màu đỏ tan nước Định tính Anthranoid dạng kết hợp (=dạng glycosid, anthraglycosid) Cho bột 0.5g bột dược liệu vào bình nón, thêm acid sulfuric 25% thấm vào ngập mặt dược liệu khoảng 0.5cm Đun bình