Đang tải... (xem toàn văn)
Nuôi cấy vi sinh tạo vitB12 cho người ăn chay. Do các sản phẩm đậu nành thiếu vitamin nầy. Trong bữa ăn chay (theo đạo Phật) thường ngày của người Việt Nam thiếu cân bằng, không bảo đảm sức khỏe nếu dùng lâu ngày.
c g n o r t i m p h p g m n ẩ h p ế Ph h c c c v h n nà i b hế u ậ đ n ế Sinh viên thực hiện: Nguyễn Tấn Khiêm Nội dung trình bày • • • • Dẫn nhập: đặt vấn đề sở lý thuyết Vật liệu phương pháp Kết dự kiến Kiến nghị Dẫn nhập • Đặt vấn đề: ăn chay, xu hướng thời đại? Tốt cho sức khỏe Tốt cho môi trường Tốt cho muôn lồi • • Cơ sở lý thuyết: đậu nành chế phẩm Nutritional value of soybean? What is the component that makes soybean to become as a difficulty digesting food? Sữa đậu nành Tàu hũ Chao Dẫn nhập Các vấn đề đối mặt: thiếu chất Fe, Zn, acid béo omega-3, Ca, vitamin D vitamin B12 Vật liệu phương pháp Thu mẫu Giữ giống Khảo sát đặc tính sinh lý - hóa Phân lập Định danh Tạo sản phẩm Phân lập • Chọn lựa nguồn phân lập Cơ chất thực phẩm có nguồn gốc đậu nành như: chao, tàu hũ thúi, sữa chua đậu nành tạo nhiều vitB12:bánh bột chua (sourdough bread), lên men chua truyền Hàm lượng thống Á Đông như: kimchi, nukazuke, cải chua Trong nghiên cứu cơng bố • Phân lập LAB (lactic acid bacteria) Thu mẫu với kích cỡ mong muốn NaCl 0.85% (pha loãng 10 lần) máy dập mẫu (smasher) Đồng nhứt Cấy trải Ủ Lựa chọn • MRS (Man-Rogosa-Sharpe) agar với 0.5% CaCO3 o 37 C tuần khuẩn lạc có vòng tan bao quanh Cấp phân loại nhận dạng: nhuộm Gram, thử nghiệm catalase, sản phẩm lên men… • Sàng lọc sơ khởi Tăng sinh Ly tâm mẫu canh MRS 24h không lắc thu cặn vi khuẩn sau huyền phù PBS (phosphate buffer saline) vi khuẩn cấy chuyền qua môi trường thử nghiệm không vitB 12 Huyền phù Ủ Định lượng • (vitB12-free assay medium) o 37 C tuần qua giá trị OD660 Chủng có đạt giá trị OD660 ≥ 0.5 giữ cho sàng lọc thứ khởi (ly tâm lạnh thu dịch trữ – 20oC) • Sàng lọc thứ khởi o Dựa theo phương pháp phân tích thành phần dinh dưỡng thức ăn nước (thí dụ: The manual for Standard Tables of Food Composition in Japan) 2ml dịch thêm 5ml NaCOOH pH 4.5 0.2ml KCN 0.05% hỗn hợp nâng Xử lý lên 100oC 30min phương pháp sinh học với chủng vi sinh vật chuẩn không sinh trưởng mơi trường • Thử nghiệm thiếu vitB12 (Lactobacillus delbrueckii subsp Lactis ATCC 7830) Đường chuẩn xây dựng với dãy nồng độ vitB12 – 30pg Sự phát triển chủng khuyết dưỡng ước lượng qua giá trị OD 660 Giữ giống • Mục đích: bảo quản giống có đặc tính q hàm lượng sản sinh vitB 12, đặc tính kháng nhiệt độ, muối, chất bảo quản • Các phương pháp bảo quản: o Cấy truyền: lặp lại thời gian hạn định trình cấy bảo quản định kì o Đơng khơ: loại nước khơng khí nhiệt độ lạnh o Lạnh sâu: bất hoạt dạng nước hoạt động nhiệt độ lạnh nitrogen lỏng chẳng hạn Khảo sát đặc tính sinh lý – hóa • • Các tiêu: nhiệt độ, pH ban đầu, NaCl, NaNO2 EtOH Thí dụ: o Nhiệt độ: 15, 20, 25, 37 45oC o pH ban đầu: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 37oC o NaCl: 6, 7, 8, 10% với pH ban đầu 5.7 37oC o NaNO2: 0.5, 1, 1.5, 3% với pH ban đầu 5.7 37oC o EtOH: 2.5, 5, 10 15% với pH ban đầu 5.7 37oC Sự tăng trưởng xác định thông qua giá trị OD660 sau tăng sinh canh MRS biến đổi thành phần (modified MRS broth) Định danh Tách chiết o Chủng LAB sản sinh nhiều vitB12 tăng sinh tách chiết DNA kit tự tách o Primer: chuyên biệt cho vùng trình tự bảo tồn gene 16S rRNA Khuếch đại Tạo dòng o Tinh sản phẩm: sử dụng kit loại gel tinh DNA o Tạo dòng: sử dụng plasmid (pGEM-T) biến nạp vào tế bào chủ (E coli JM109) o Chọn lọc dòng biến nạp: chọn lọc dựa khả kháng kháng sinh chuyên biệt thiết kế plasmid o Xác nhận kích thước vùng trình tự chèn PCR với mồi chuyên biệt cho plasmid (T7 Sp6) Giải trình tự o Xài phương pháp Sanger (kết thúc dựa vào dideoxyribonucleotide đánh dấu huỳnh quang) So sánh o Dò tương đồng trình tự với thư viện liệu GenBank phần mềm chuyên biệt (FASTA) Tạo sản phẩm Khảo sát điều kiện lên men o Tỉ lệ phối trộn sữa đậu nành, sữa bò đường đơn: 100% sữa đậu nành; 97% sữa đậu nành 3% lactose; 90% sữa đậu nành 10% sữa bò… o Thời gian ủ: – – – 10h Các tiêu kiểm tra o Độ nhớt (viscosity) o Mùi vị o pH lúc sau o Định lượng acid tổng số Kết dự kiến Thử nghiệm sinh học Đặc tính sinh lý – hóa Các tiêu thành phẩm Kiến nghị • Các nghiên cứu mơ hình động vật hoạt tính hay tính khả dụng sinh học (bioavailability) vitB 12 có nguồn gốc từ chủng vừa phân lập • Các nghiên cứu độ an toàn chủng vừa phân lập Tài liệu tham khảo • M Masuda et al (2012), Production potency of Folate, vitamin B12, and thiamine by lactic acid bacteria isolated from Japanese pickles, Biosci Biotechnol Biochem., 76 (11), 2061-2067 • María P Taranto et al (2003), Lactobacillus reuteri CRL1098 Produces Cobalamin, Journal of Bacteriology, 185 (18), 5643–5647 • N.T Le and N.D Cao, Fermented soy milk using lactic acid bacteria Cảm ơn thầy bạn lắng nghe ... phẩm Khảo sát điều kiện lên men o Tỉ lệ phối trộn sữa đậu nành, sữa bò đường đơn: 100% sữa đậu nành; 97% sữa đậu nành 3% lactose; 90% sữa đậu nành 10% sữa bò… o Thời gian ủ: – – – 10h Các tiêu kiểm... nguồn gốc đậu nành như: chao, tàu hũ thúi, sữa chua đậu nành tạo nhiều vitB12:bánh bột chua (sourdough bread), lên men chua truyền Hàm lượng thống Á Đông như: kimchi, nukazuke, cải chua Trong nghiên... thuyết Vật liệu phương pháp Kết dự kiến Kiến nghị Dẫn nhập • Đặt vấn đề: ăn chay, xu hướng thời đại? Tốt cho sức khỏe Tốt cho môi trường Tốt cho mn lồi • • Cơ sở lý thuyết: đậu nành chế phẩm Nutritional