Đang tải... (xem toàn văn)
Kỹ thuật nuôi cấy mô tế bào thực vật là quá trình điều khiển sự phát sinh hình thái tế bào thực vật (khi nuôi cấy tách rời trong điều kiện nhân tạo vô trùng) một cách có định hướng. Tính toàn năng của tế bào thực vật: từ dạng tế bào bất kỳ nào trong cơ thể thực vật (lá, thân, rễ, hoa…) cũng đều có khả năng phát triển thành một cơ thể hoàn chỉnh trong các điều kiện thích hợp.
Sơ lược về lịch sử • Áp dụng trên hoa lan – 1 năm/1 lần. • Nhân qua protocorms, 1,000,000/năm. Chồi phát sinh từ protocorm Tái sinh thành cây hoàn chỉnh Các phương pháp nhân giống vô tính in vitro • Chồi nách • Tạo chồi bất định • Tạo phôi soma Nuôi cấy chồi nách Ngọn Chồi nách trên trục của lá Thân Lá Lựa chọn mẫu nuôi cấy Các đặc tính mong muốn: • Dễ tiệt trùng • Non • Phản ứng tốt với môi trường nuôi cấy • Ngọn (mô phân sinh đỉnh) • Chồi nách • Hạt • Lá Môi trường • Khi cắt mẫu nuôi cấy ra khỏi cây mẹ, lấy đi nguồn dinh dưỡng ⇒ cần phải cung cấp các chất này cho mẫu nuôi cấy. Ngọn - Auxin và Gibberellin Rễ - Nước, vitamins Chất khoáng và cytokinin Lá - Đường, GA Thành phần môi trường • Môi trường khoáng cơ bản • Đường • Vitamins • Nước • Hormon sinh trưởng TV - auxin, cytokinin, GA • Các chất tạo gel • Các thành phần không xác định Đường • Khi nuôi cấy mô thường quang hợp không đủ cung cấp đủ đường ⇒ thêm saccaroza 2-3% w/v. • Glucoza hay hỗn hợp glucoza và fructoza. • Khi nuôi cấy công nghiệp, các nguồn carbon khác (rỉ đường, dịch thủy phân tinh bột) có thể sử dụng. Nuôi cấy tự dưỡng • Sinh trưởng không có nguồn carbon ⇒ cần kích thích quang hợp • Cường độ ánh sáng lớn (90-150µMole/m 2 /s) điều kiện tự nhiên (30-50). • Nồng độ CO 2 lớn (1000ppm) thông thường 369.4ppm. • Ức chế sự nhiễm VSV và cây dễ thích ứng khi chuyển vào nhà kính. Môi trường khoáng cơ bản • Bao gồm các nguyên tố đa lượng (>mg/l) và vi lượng (<mg/l). • Tồn tại rất nhiều môi trường khoáng cơ bản. • Môi trường MS (Murashige và Skoog, 1965) là môi trường nuôi cấy chồi phổ biến nhất. • Môi trường Gamborgs B5 được sử dụng phổ biến cho canh trường huyền phù tế bào (không chứa NH 4 ). Vitamin • Chức năng là các coenzyme (vitamin nhóm B). • Mẫu nuôi cấy càng nhỏ, nhu cầu vitamin càng chính xác. • Thường sử dụng hỗn hợp vitamin (Nicotinic acid, glycine, Thiamine, pyridoxine). • Inositol thường sử dụng với nồng độ lớn gấp hàng trăm lần (100mg/l) [...]... trong nuôi cấy mô TBTV • Vật liệu nuôi cấy khởi đầu phải phù hợp (một số loại mô phản ứng tốt hơn so với các mô khác) • Môi trường thích hợp • Điều kiện vô trùng • Cấy chuyển Các giai đoạn trong nuôi cấy mô TBTV Các giai đoạn nuôi cấy mô TBTV • Chọn vật liệu khởi đầu: thường từ các mô non, chưa bị phân hóa từ các cây mẹ khỏe, sạch bệnh Các giai đoạn nuôi cấy mô TBTV • Tiệt trùng bề mặt mẫu nuôi cấy: ... Đảm bảo điều kiện vô trùng sau tiệt trùng và trong khi cấy chuyển: tủ cấy vô trùng gió thổi ngang áp suất dương Các giai đoạn nuôi cấy mô TBTV • Đưa mẫu nuôi cấy lên môi trường nuôi cấy thích hợp (mỗi loài, giống cây trồng có môi trường riêng) →Nhân nhanh trong ống nghiệm Các giai đoạn nuôi cấy mô TBTV • Đưa cây vào vườn ươm Các ứng dụng nuôi cấy mô TBTV • Nhân nhanh giống cây • Bảo tồn các giống,... sự phân chia tế bào và sự tăng kích thước Tạo rễ • Được tổng hợp ở mô phân sinh đỉnh Cytokinin • Không thể thay thế • Trong tự nhiên có 1 chất: Zeatin Dẫn xuất tổng hợp: Benyzladenine (BA), Kinetin • Kích thích sự phân chia tế bào • Tạo chồi • Được tổng hợp ở rễ Gibberellin • Tổ hợp 70 hợp chất tương tự gọi là các axit Gibberellic • Thường sử dụng GA3 và GA4+9 • Kích thích sự kéo dài tế bào ⇒ chiều... non Ethylene • Kiểm soát quá trình chín của quả • Tổng hợp ở tất cả các tế bào làm tăng chiều dày thân và gây héo lá • Ngăn cản quá trình tạo chồi bất định ⇒ sử dụng AgNO3 hay norbonadien Axit Abscisic (ABA) • Có duy nhất 1 chất • Kích thích sự héo của lá và ngủ của hạt • Kiểm soát sự đóng khí khổng và tính chịu hạn ở thực vật • Giúp tạo phôi soma Các chất tương tự hormon • Polyamin – vai trò quan . Cytokinin Auxin Đĩa lá Chồi bất định Rễ Mô sẹo Điều kiện trong nuôi cấy mô TBTV • Vật liệu nuôi cấy khởi đầu phải phù hợp (một số loại mô phản ứng tốt hơn. • Phản ứng tốt với môi trường nuôi cấy • Ngọn (mô phân sinh đỉnh) • Chồi nách • Hạt • Lá Môi trường • Khi cắt mẫu nuôi cấy ra khỏi cây mẹ, lấy đi nguồn