BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP HỒ CHÍ MINH KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP KHẢO SÁT MỘT SỐ ĐẶC TÍNH SINH HỌC CỦA VI KHUẨN PASTEURELLA MULTOCIDA CHỦNG TG VÀ V Sinh viên thực : PHẠM NGỌC THÙY LIÊN Ngành : THÚ Y Lớp : TC03TYTP Niên Khóa : 2003 - 2008 Thành phố Hồ Chí Minh Tháng - 2009 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP HỒ CHÍ MINH KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP KHẢO SÁT MỘT SỐ ĐẶC TÍNH SINH HỌC CỦA VI KHUẨN PASTEURELLA MULTOCIDA CHỦNG TG VÀ V Giáo viên hướng dẫn Sinh viên thực ThS TRẦN THỊ BÍCH LIÊN PHẠM NGỌC THÙY LIÊN ThS NGUYỄN MẠNH THẮNG Thành phố Hồ Chí Minh Tháng - 2009 i CẢM TẠ Em xin chân thành gửi lời cảm ơn sâu sắc tới: ThS Trần Thị Bích Liên, giảng viên trường Đại Học Nơng Lâm tận tình hướng dẫn, góp ý giúp em hồn thành khóa luận tốt nghiệp ThS Lê Cơng Tiến, trưởng phòng kỹ thuật thuộc Công ty thuốc Thú Y TW tạo điều kiện thuận lợi trình thực tập phòng kỹ thuật ThS Nguyễn Mạnh Thắng, cán kỹ thuật thuộc phòng kỹ thuật Cơng ty thuốc Thú Y TW hết lòng quan tâm bảo hướng dẫn em thời gian thực tập Công Ty Quý thầy cô khoa Chăn nuôi-Thú y Trường Đại Học Nơng Lâm Tp.HCM tận tình giảng dạy em năm học vừa qua Ban Giám đốc Công Ty Thuốc Thú Y TW, cô chú, anh chị phòng kỹ thuật, phân xưởng vi trùng, khu chăn ni Thạnh Lộc thuộc phòng kiểm nghiệm Cơng ty thuốc Thú y TW giúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợi thời gian em thực tập Cơng ty Gia đình, bạn bè hết lòng quan tâm, động viên em trình học tập hồn thành khóa luận tốt nghiệp ii TĨM TẮT Đề tài nghiên cứu ”Khảo sát số đặc tính sinh học vi khuẩn Pasteurella multocida chủng Tg V” thực phòng Kỹ thuật, phân xưởng Vi trùng, khu chăn ni Thạnh Lộc thuộc phòng Kiểm nghiệm Công ty thuốc thú y TW, thời gian thực từ 04/8/2008 đến 04/12/2008, nhằm mục đích tìm hiểu vi khuẩn Pasteurella multocida chủng Tg V đặc điểm hình thái, tính chất sinh hóa, đặc tính nuôi cấy chủng nuôi cấy tĩnh nuôi cấy lên men, khảo sát độc lực chủng vi khuẩn chuột bạch Đặc tính hình thái chủng vi khuẩn xác định cách nhuộm màu Gram, quan sát kính hiển vi điện tử Cấy vi khuẩn đĩa petri thạch máu xem khuẩn lạc Đặc tính sinh hóa chủng vi khuẩn xác định phản ứng thông thường kết hợp với Kit API 20E Pháp Sử dụng mơi trường Hottinger để khảo sát đặc tính ni cấy chủng nuôi cấy tĩnh nuôi cấy lên men thông qua thông số độ đục, nồng độ vi khuẩn vật chất khô lượng vi khuẩn Khảo sát độc lực chủng chuột: tiêm canh khuẩn pha loãng nồng độ 10-5,10-6,10-7,10-8,10-9, 10-10 cho chuột, quan sát theo dõi thời gian chết, số chết Kết thí nghiệm sau: - Vi khuẩn Pasteurella multocida chủng Tg V có đặc tính hình thái hồn tồn giống nhau, dạng cầu trực khuẩn, Gram âm (-), kích thước nhỏ Trên thạch máu khuẩn lạc vi khuẩn có màu trắng đục, mặt vồng, rìa gọn Trên thạch máu sau 24 ni cấy khuẩn lạc có đường kính từ 1,0 – 1,5mm - Vi khuẩn Pasteurella multocida chủng Tg V có đặc tính sinh hóa giống Vi khuẩn cho phản ứng dương tính (+) với oxidase, catalase, citrat, VP, indol Phản ứng âm tính (-) với urease, H2S Khơng làm tan chảy gelatin Lên men đường iii manitol, saccharose, glucose, không lên men đường inositol, sorbitol, rhamnose, melibiose, anygladin arabinose - Vi khuẩn Pasteurella multocida chủng Tg V phát triển giống nuôi cấy tĩnh Trong hệ thống lên men, sau 4,5 nuôi cấy nồng độ vi khuẩn đạt xấp xỉ 30.109CFU/ml - So sánh với nghiên cứu công bố độc lực vi khuẩn Pasteurella multocida vi khuẩn chủng Tg V có độc lực tương đối cao chuột bạch iv MỤC LỤC Trang Trang tựa i Cảm tạ .ii Tóm tắt iii Mục lục .v Danh mục hình ảnh, đồ thị viii Danh mục bảng ix Chương MỞ ĐẦU .1 1.1 ĐẶT VẤN ĐỀ .1 1.2 MỤC ĐÍCH VÀ YÊU CẦU 1.2.1 Mục đích 1.2.2 Yêu cầu .2 Chương TỔNG QUAN .3 2.1 MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM CỦA VI KHUẨN PASTEURELLA MULTOCIDA 2.1.1 Lịch sử nghiên cứu 2.1.2 Vi khuẩn Pasteurella multocida .3 2.1.2.1 Ðặc điểm hình thái vi khuẩn Pasteurella multocida .3 2.1.2.2 Sức đề kháng 2.1.2.3 Ðặc tính sinh hóa vi khuẩn 2.1.2.4 Đặc điểm nuôi cấy vi khuẩn 2.1.2.5 Độc lực vi khuẩn 12 2.1.2.6 Đặc tính kháng nguyên .14 2.1.2.6.1 Kháng nguyên giáp mô (K) .14 2.1.2.6.2 Kháng nguyên thân (O) .15 2.1.2.6.3 Kháng nguyên protein .15 2.1.2.7 Sự phân bố serotype gây bệnh giới 17 2.2 MỘT SỐ BỆNH DO VI KHUẨN PASTEURELLA MULTOCIDA 21 v 2.2.1.Bệnh tụ huyết trùng gia cầm (Fowl cholera) 21 2.2.2 Bệnh tụ huyết trùng trâu bò .21 2.2.3 Bệnh tụ huyết trùng heo 23 Chương NÔI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 25 3.1 THỜI GIAN VÀ ĐỊA ĐIỂM 25 3.2 NỘI DUNG THÍ NGHIỆM 25 3.3 VẬT LIỆU THÍ NGHIỆM 25 3.3.1 Giống vi khuẩn 25 3.3.2 Động vật thí nghiệm 25 3.3.3 Mơi trường, hóa chất, thiết bị dụng cụ thí nghiệm .26 3.4 PHƯƠNG PHÁP THÍ NGHIỆM .26 3.4.1 Phương pháp nghiên cứu đặc điểm hình thái, đặc tính sinh hóa, đặc điểm ni cấy vi khuẩn Pasteurella multocida chủng Tg V 26 3.4.1.1 Phương pháp khảo sát đặc điểm hình thái, cấu tạo vi khuẩn Pasteurella multocida chủng Tg V .26 3.4.1.2 Phương pháp kiểm tra đặc tính sinh hóa vi khuẩn Pasteurella multocida chủng Tg V 26 3.4.1.3 Phương pháp kiểm tra đặc điểm nuôi cấy vi khuẩn Pasteurella multocida chủng Tg V 27 3.4.1.3.1 Nuôi cấy tĩnh 27 3.4.1.3.2 Nuôi cấy lên men .27 3.4.1.4 Phương pháp kiểm tra độ đục .27 3.4.1.5 Phương pháp xác định số lượng vi khuẩn Pasteurella multocida chủng Tg V 28 3.4.1.6 Phương pháp xác định lượng vật chất khô vi khuẩn Pasteurella multocida chủng Tg V 28 3.4.2 Phương pháp kiểm tra độc lực vi khuẩn Pasteurella multocida chủng Tg V chuột bạch .29 Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 30 4.1 Đặc điểm hình thái, đặc tính sinh hóa, đặc điểm ni cấy vi khuẩn Pasteurella multocida chủng Tg V .30 vi 4.1.1 Ðặc điểm hình thái, khuẩn lạc vi khuẩn Pasteurella multocida chủng Tg V 30 4.1.2 Ðặc tính sinh hóa vi khuẩn Pasteurella multocida chủng Tg V 32 4.1.3 Đặc điểm nuôi cấy (Khảo sát phát triển vi khuẩn Pasteurella multocida chủng Tg V ) 35 4.1.3.1 Nuôi cấy tĩnh 35 4.1.3.2 Nuôi cấy lên men 36 4.2 Độc lực vi khuẩn Pasteurella multocida chủng Tg V chuột 40 Chương KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 43 5.1 KẾT LUẬN 43 5.2 ĐỀ NGHỊ 43 TÀI LIỆU THAM KHẢO .43 PHỤ LỤC 51 vii DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH, ĐỒ THỊ Trang Hình 2.1: Vi khuẩn Pasteurella multocida kính hiển vi Hình 2.2: Khuẩn lạc vi khuẩn Pasteurella multocida thạch máu .5 Hình 4.1: Khuẩn lạc vi khuẩn Pasteurella multocida chủng Tg môi trường thạch máu cừu 31 Hình 4.2: Khuẩn lạc vi khuẩn Pasteurella multocida chủng V môi trường thạch máu cừu 31 Hình 4.3: Kết sinh hóa vi khuẩn Pasteurella multocida chủng Tg V .34 Đồ thị 4.1: Sự phát triển vi khuẩn Pasteurella multocida chủng Tg V 36 Đồ thị 4.2: Gía trị độ đục theo thời gian ni cấy 37 Đồ thị 4.3: Vật chất khô theo thời gian nuôi cấy .39 viii DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 2.1: Đặc tính sinh hóa Pasteurella multocida Bảng 2.2: Khả sống chủng vi khuẩn môi trường khác 10 Bảng 2.3: Lượng vật chất khô vi khuẩn môi trường khác 11 Bảng 2.4: Phân bố serotype 53 chủng Pasteurella multocida phân lập từ gà Srilanka 18 Bảng 2.5: Serogroup OMP 100 phân lập Pasteurella multocida Anh xứ Wales 20 Bảng 4.1: Đặc tính sinh hóa Pasteurella multocida chủng Tg V 33 Bảng 4.2: Sự phát triển vi khuẩn Pasteurella multocida chủng Tg V 35 Bảng 4.3: Sự phát triển vi khuẩn Pasteurella multocida chủng Tg V hệ thống lên men 37 Bảng 4.4: Kết đếm số vi khuẩn 38 Bảng 4.5: Lượng vật chất khô xác vi khuẩn 38 Bảng 4.6: Độc lực vi khuẩn Pasteurella multocida chủng Tg chuột bạch 40 Bảng 4.7: Độc lực vi khuẩn Pasteurella multocida chủng V chuột bạch 41 ix tiếng thứ sau ni cấy, sau 30 phút chúng tơi lại mẫu kiểm tra lần Giá trị độ đục trung bình đo bước sóng 620nm tổng hợp từ lô sản xuất Bảng 4.3: Sự phát triển Pasteurella multocida chủng Tg V hệ thống lên men Giá trị độ đục trung bình sau ni cấy (Bước sóng 620nm) giờ 2,5 giờ 3,5 giờ 4,5 0,066 0,485 0,852 1,165 1,473 1,613 1,630 Hệ thống lên men nuôi cấy vi khuẩn ví buồng phản ứng sinh học, hệ thống vi khuẩn phát triển nhanh, nhiên môi trường sử dụng phải môi trường cao lượng đủ sức cung cấp chất dinh dưỡng cho vi khuẩn phát triển môi trường Hottinger có bổ sung thêm số chất khác mà Công ty thuốc Thú y TW sử dụng phù hợp cho trình lên men vi khuẩn hệ thống lên men Căn vào giá trị đo độ đục (OD), thấy vi khuẩn Pasteurella multocida chủng Tg V phát triển tốt vòng đầu sau ni cấy Sau ni cấy đến 4,5 giá trị độ đục lần đo tăng lên không đáng kể, điều chứng tỏ vi khuẩn phát triển tối đa sử dụng hết dinh dưỡng môi trường 1.800 1.600 1.400 Độ đục 1.200 1.000 0.800 0.600 0.400 0.200 0.000 giờ 2,5 giờ 3,5 giờ Thời gian sau nuôi cấy Đồ thị 4.2: Giá trị độ đục theo thời gian nuôi cấy 37 4,5 Nhìn vào đồ thị biểu diễn thông qua giá trị đo độ đục, thấy phát triển vi khuẩn Pasteurella multocida chủng Tg V hệ thống lên men trình tăng dần đều, đường biễu diễn gần đường thẳng từ bắt đầu nuôi cấy thứ 3,5 bắt đầu chậm lại thứ sau có tăng tiếp ít, đường biều diễn nằm ngang Song song với trình đo độ đục suốt thời gian nuôi cấy, tiến hành đếm số lượng vi khuẩn đạt vào vào tiếng thứ Bảng 4.4: Kết đếm số vi khuẩn Lơ thí nghiệm Giá trị độ đục thứ Nồng độ vi khuẩn (109CFU/ml) 1,774 34,0 1,632 31,0 1,723 34,0 1,310 27,0 1,624 32,0 Tại số nước giới, nồng độ kháng nguyên vacxin tụ huyết trùng xác định khối lượng xác vi khuẩn phải đạt từ 1,3mg/ml vacxin Trong lô khảo sát, tiến hành xác định lượng vật chất khô xác vi khuẩn suốt q trình ni cấy vào thời điểm giờ, 2,5 giờ; giờ, 3,5 Bảng 4.5: Lượng vật chất khơ xác vi khuẩn Lơ thí nghiệm Lượng vật chất khô xác vi khuẩn (mg/ml) 2,5 giờ 3,5 giờ 1,24 2,45 3,81 4,02 4.16 0,96 1,34 2,18 3,87 4,06 1,02 2,38 3,67 3,94 4,25 0,74 1,24 1,98 2,90 3,80 1,34 2,54 3,25 3,80 4,04 Trung bình 1,06 1,99 2,98 3,71 4,06 38 4.50 V ật ch ất kh ô (m g /m l) 4.00 3.50 3.00 2.50 2.00 1.50 1.00 0.50 0.00 2,5 giờ 3,5 giờ Thời gian sau nuôi cấy Đồ thị 4.3: Vật chất khô theo thời gian nuôi cấy Kết khảo sát thể bảng 4.5 đồ thị 4.3 cho thấy lượng vật chất khô tăng dần vào thời điểm lấy mẫu Đường biểu diễn từ thứ đến thứ 3,5 gần đường thẳng Điều phù hợp với đồ thị biểu diễn phát triển vi khuẩn thông qua giá trị đo độ đục (Đồ thị 4.2) Từ thứ 3,5 đến thứ lượng vật chất khô tương tự giá trị đo độ đục, tăng không nhiều đường biểu diễn đồ thị có độ dốc thấp Theo nghiên cứu Bain cộng (1982), lượng vật chất khô đạt cao thêm chất chiết men bia, tụy đệm tụy tự tiêu vào môi trường phổ thông nuôi cấy vi khuẩn Pasteurella multocida 4,5mg/ml Nếu thêm chất chiết men bia, tụy đệm gan tiêu hố men tụy vào mơi trường ni cấy phổ thơng lượng vật chất khơ đạt 3,5mg/ml Tuy nhiên Bain cộng không nói rõ ni phương pháp thời gian nuôi cấy Nếu vào lượng vật chất khơ đạt q trình ni cấy hệ thống lên men với môi trường Hottinger phù hợp cho phát triển vi khuẩn Pasteurella multocida 39 4.2 Độc lực vi khuẩn Pasteurella multocida chủng Tg V chuột Độc lực vi khuẩn Pasteurella multocida phức tạp khơng ổn định, tùy thuộc vào chủng vi khuẩn, lồi vật mà ký sinh Giáp mơ vi khuẩn yếu tố độc lực quan trọng, ảnh hưởng tới khả xâm nhập phát triển vi khuẩn ký chủ Độc lực vi khuẩn phụ thuộc vào thời gian ni cấy, canh khuẩn già, độc lực vi khuẩn thấp Cấy chuyển nhiều lần độc lực vi khuẩn giảm Trong thí nghiệm kiểm tra độc lực vi khuẩn chuột sử dụng canh khuẩn nuôi cấy 16 cấy chuyển tối đa lần môi trường nhân tạo Canh khuẩn nuôi cấy mơi trường nước thịt Hottinger Pha lỗng canh khuẩn từ 10-1 10-10, tiêm cho chuột với liều 0,1ml/con nồng độ pha loãng từ 10-5 đến 10-10, nồng độ tiêm cho chuột vào da phía đùi Thống kê tỷ lệ chuột chết vòng ngày tính liều LD50 vi khuẩn Pasteurella multocida chủng Tg V chuột theo công thức Red-Muench Bảng 4.6: Độc lực Pasteurella multocida chủng Tg chuột bạch Nồng độ Số Số Số Số chết Số sống chuột chết/t.số sống/t.số dồn dồn 10-5 5/5 0/5 14 10-6 5/5 0/5 10-7 3/5 10-8 10-9 10-10 pha loãng Tỷ số Tỷ lệ 14/14 100% 9/9 100% 2/5 4/6 66,66% 1/5 4/5 1/7 14,28% 0/5 5/5 11 0/11 0% 0/5 5/5 16 0/16 0% 10-7,31 LD50 40 Bảng 4.7: Độc lực Pasteurella multocida chủng V chuột bạch Nồng độ Số Số Số Số chết Số sống pha loãng chuột chết/t.số sống/t.số dồn dồn 10-5 5/5 0/5 14 10-6 4/5 1/5 10-7 4/5 10-8 10-9 10-10 Tỷ số Tỷ lệ 14/14 100% 9/10 90% 1/5 5/7 71,43 1/5 4/5 1/7 14,28% 0/5 5/5 11 0/11 0% 0/5 5/5 16 0/16 0% 10-7,37 LD50 Canh khuẩn gốc dùng để pha lỗng chủng Tg có nồng độ 3,5.109CFU/ml chủng V có nồng độ 3,2.109CFU/ml Như liều LD50 vi khuẩn Pasteurella multocida chủng Tg chuột bạch 17CFU/con chủng V chuột bạch 14CFU/con Nhìn vào số cụ thể LD50 chuột bạch vi khuẩn chủng Tg có cao so với LD50 vi khuẩn chủng V Tuy nhiên chênh lệch không nhiều nên coi độc lực chuột bạch Pasteurella multocida chủng Tg chủng V tương đương Nghiên cứu số tác giả khác Pasteurella multocida cho thấy độc lực chuột chủng khác có chênh lệch tương đối lớn LD50 Pasteurella multocida chủng Iran 2CFU/chuột (Đỗ Quốc Tuấn, 2007), chủng phân lập từ trâu bò miền Trung 2CFU/chuột (Nguyễn Thiên Thu, 1996), Pasteurella multocida chủng TN20 phân lập từ heo khu vực miền núi phá Bắc 40CFU/chuột (Đỗ Quốc Tuấn, 2007) Tuy nhiên, vi khuẩn chủng Tg V thuộc serotype A vi khuẩn Pasteurella multocida chủng Iran hặc phân lập từ trâu bò heo thuộc serotype B Trên giới nghiên cứu cho thấy độc lực vi khuẩn Pasteurella multocida khác Chủng M1404 gây bệnh tụ huyết trùng trâu bò có LD50 chuột bạch 20CFU/con, sau 18 tiêm canh khuẩn chuột có triệu chứng nhiễm trùng, xuất huyết chết (Ramdani Alder, 1993) Một số chủng thuộc serotype A phân lập Australia có LD50 chuột lên tới 100CFU/con, số chủng khác không gây chết chuột tiêm với liều cao (Diallo cộng 41 sự, 1995) Vi khuẩn Pasteurella multocida gây bệnh tụ huyết trùng gia cầm Nhật có liều LD50 chuột 3,9.102CFU/con LD50 chim cút 4,3.104CFU/con (Goto cộng sự, 2001) Như vậy, so sánh liều LD50 vi khuẩn Pasteurella multocida chủng Tg V với chủng mà tác giả khác nghiên cứu thấy độc lực vi khuẩn chủng Tg V chuột bạch tương đối cao 42 Chương KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 KẾT LUẬN - Vi khuẩn Pasteurella multocida chủng Tg V mang đặc tính hình thái chung Pasteurella Vi khuẩn có dạng cầu trực khuẩn nhỏ, Gram âm Khuẩn lạc mơi trường thạch máu có màu trắng đục, mặt vồng, rìa gọn, đường kính khuẩn lạc từ 1,0 – 1,5mm - Hai chủng Tg V vi khuẩn Pasteurella multocida có đặc tính sinh hóa giống Vi khuẩn cho phản ứng dương tính (+) với oxidase, catalase, citrat, VP, indol Phản ứng âm tính (-) với urease, H2S Không làm tan chảy gelatin Lên men đường manital, saccharose, glucose, không lên men đường inositol, sorbitol, rhamnose, melibiose, anygladin arabinose - Vi khuẩn Pasteurella multocida chủng Tg V phát triển tốt môi trường nước thịt Hottinger nuôi cấy tĩnh nuôi cấy lên men hệ thống lên men Trong hệ thống lên men, sau 4,5 nuôi cấy nồng độ vi khuẩn đạt xấp xỉ 30.109CFU/ml - Vi khuẩn Pasteurella multocida chủng Tg V độc chuột bạch Liều LD50 chủng Tg chuột bạch 17 CFU/con LD50 chủng V chuột bạch 14 CFU/con 5.2 ĐỀ NGHỊ Nghiên cứu sâu đặc tính sinh miễn dịch đặc tính ni cấy vi khuẩn để nâng cao chất lượng vacxin sử dụng hai chủng vi khuẩn 43 TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT Đỗ Quốc Tuấn, Nguyễn Quang Tuyên, 2007 Kết kiểm tra độc lực tính mẫn cảm kháng sinh Pasteurella multocida phân lập từ lợn khu vực miền núi phía Bắc Tạp chí khoa học kỹ thuật Thú y, số 6-2007 Trang 46 – 51 Hoàng Đạo Phấn, 1986 Về đặc tính Pasteurella multocida type huyết chúng Tạp chí khoa học kỹ thuật nơng nghiệp, số 4, trang – Nguyễn Lương, 1997 Dịch tễ học thú y tập II, phần chuyên bệnh Tủ sách đại học Nơng Lâm thành phố Hồ Chí Minh Nguyễn Thiên Thu (1998) Nghiên cứu số đặc tính sinh vật học kháng nguyên vi khuẩn Pasteurella multocida phân lập từ trâu bò mang trùng khu vực miền Trung Việt Năm Luận án PTS Khoa học Nông nghiệp, Hà Nội Phùng Duy Hồng Hà, 1990 Nghiên cứu sản xuất vacxin tụ huyết trùng gia cầm dạng nhũ dầu Tạp chí khoa học kỹ thuật nơng nghiệp, số 4, trang 168 - 172 Phạm Quang Thái, 2008 Nghiên cứu chế tạo vắc xin nhũ dầu tụ huyết trùng trâu bò từ chủng P52 Luận án Tiến sỹ khoa học nông nghiệp, Hà Nội Trần Xn Hạnh, Tơ Thị Phấn, 2007 Một số đặc tính vi khuẩn Pasteurella multocida phân lập từ trâu bò, lợn Tạp chí khoa học kỹ thuật Thú y, tập XIV, số Trang 30 – 41 Trần Đình Từ, Nguyễn Mạnh Thắng, Võ Công Minh, Trần Đức Minh, Nguyễn Tấn, Đỗ Văn Dũng, Đỗ Thị Lợi, Phạm Quang Thái, Nguyễn Thị Bích Hà, Lê Cơng Tiến, 2000 Nghiên cứu quy trình cơng nghệ lên men vi khuẩn để áp dụng sản xuất loại vacxin phòng bệnh tụ huyết trùng cho gia súc, gia cầm Báo cáo khoa học sở Khoa học - Công nghệ thành phố Hồ Chí Minh TIẾNG NƯỚC NGỒI Ali H.A., Sawada T., Hatakeyama H., Ohtsuki N., Itoh O., 2004 Characterization of a 39kDa capsular protein of avian Pasteurella multocida using monoclonal antibodies Vet Microbiology 100(1-2) Pages: 43 – 53 44 10 Angela J.C., Meredith L.H., John D.B., Ben A., 2004 Functional characterization of HgbB, a new hemoglobin binding protein of Pasteurella multocida Microbiol Pathogenesis 34(6) Pages: 287 – 296 11 Antonio R., Fernandez de H., Ignacio B., Montaerrat S., Ana M., 1997 Importance of the galE gene on the virulence of Pasteurella multocida FEMS microbiology letters 154(2) Pages: 311 – 316 12 Bain R.V.S, De Alwis M.C.L., Carter G.R., Gupta B.K., 1982 Haemorrhagic septicaemia Animal production and health Paper No 33, FAO, Rome 13 Barbara J.M., Qing Z., Ling L.L., Michael L.P., Thomas S.W., Vivek K., 2001 Complete genomic sequence of Pasteurella multocida Pm70 Journal of microbiology 98(6) Pages: 3460 – 3465 14 Blackall P.J., Pahoff J.L., Bowler R., 1997 Phenotypic characterizatoin of Pasteurella multocida isolates from Australia pig Veterinary Microbiollogy 57 Pages: 354-360 15 Blackall P.J., Fegan N., Chew G.T., Hampson D.J., 1998 Population structure and diversity of avian isolates of Pasteurella multocida from Australia Microbiology 144 ( 2) Pages: 279 – 342 16 Blanco-Viera F.J., Trigo F.J., Jaramillo-Meza L., 1995 Serotypes of Pasteurella multocida and Pasteurella haemolytica isolated from pneumonic lesions in cattle and sheep from Mexico Rev Latinoam Microbiol 37(2) Pages: 121-127 17 Borrathybay E., Sawada T., Kataoka Y., Okiyama E., Kawamoto E., Amao H., 2003 Capsule thickness and amounts of 39kDa capsular protein of avian Pasteurella multocida type A strains correlate with their pathogenicity for chickens Vet Microbiol 97 (3-4) Pages: 215 – 242 18 Boyce J.D., Wilkie I., Harper M., Paustian M.L., Kapur V., Adler B., 2002 Genomic scale analysis of Pasteurella multocida gene expression during growth within the natural chicken host Infect Immunn 70(12) Pages: 6871 – 6880 19 Boyce J.D., Wilkie I., Harper M., Paustian M.L., Kapur V., Adler B., 2004 Genomic scale analysis of Pasteurella multocida gene expression during 45 growth within liver tissue of chicken with fowl cholera Microbes and Infection Pages: 190 – 198 20 Boyce J.D., Wilkie I., Harper M., Paustian M.L., Kapur V., Adler B., 2004 Genomic scale analysis of Pasteurella multocida gene expression during growth within liver tissue of chicken with fowl cholera Microbes and Infection Pages: 190 – 198 21 Chaudhuri P., Goswami P.P., 2001 Cloning of 87kDa outer membrane protein gene of Pasteurella multocida P52 Res Vet Sci 70(3) Pages: 255 – 261 22 Chung J.Y., Zhang Y., Adler B., 1998 The capsule biosynthetic locus of Pasteurella multocida A:1 FEMS Microbiology letters 166 Pages: 289 – 296 23 Chung J.Y., Wilkie I., Boyce J.D., Townsend K.M., Frost A.J., Ghoddusi M., Adler B., 2001 Role of capsule in the pathogenesis of fowl cholera caused by Pasteurella multocida serogroup A Infect Immun 69(4) Pages: 2487 – 2492 24 Conrad R.S., Galanos C., Champlin F.R., 1996 Biochemical characterization of lipopolysaccharides extracted from a hydrophobic strain of Pasteurella multocida Vet Research Communications 20 Pages: 195 – 204 25 Davies R.L., MacCorquodale R., Caffrey B., 2003 Diversity of avian Pasteurella multocida strains based on capsular PCR typing and variation of OmpA and OmpH outer mambrane proteins Vet Microbiol 91(2-3) Pages: 169 - 193 26 De Alwis M.C.L., 1992 Pasteurellosis in production animals: A review An International workshop sponsored by ACIAR held at Bali, Indonesia 10 – 13 August, 1992 27 Diallo I.S., Bensink J.C., Frost A.J., Spradbrow P.B., 1995 Mulecular studies on avian strains of Pasteurella multocida in Australia Vet Microbiol 46 Pages: 335 – 342 28 Dziva F., Mohan K., Pawandiwa A., 2000 Capsular serogroups of Pasteurella multocida isolated from animals in Zimbabwe Onderstepoort Jour Vet Res 67(4) Pages: 225 – 233 46 29 Eiichi K., Takuo S., Tsutomu M., 1997 Evaluation of transport media for Pasteurella multocida isolates from rabbit nasal specimens Journal of clinical microbiology 35(8) Pages: 1948 – 1951 30 Fegan N., Blackall P.J Pahoff J.L., 1995 Phenotypic characterisation of Pasteurella multocida isolates from Australian poultry Vet Microbiology 47 Pages: 281 – 286 31 Frank St., Jianjun Li, Larocque V.S., Andrew D.C., 2005 Structural analysis of the lipopolysaccharide of Pasteurella multocida strain VP161 Carbonhydrate researches 340(1) Pages: 59 - 68 32 Frank St., Jianjun Li, Andrew D.C., 2005 Structural analysis of the core oligosaccharide from Pasteurella multocida strain X-73 Carbonhydrate researches 340(6) Pages: 1253 – 1257 33 Gatto N.T., Dabo S.M., Hancock R.E., Confer A.W., 2002 Characterization of, and immune responses of mice to the purified OmpA- equivalent outer membrane protein of Pasteurella multocida serotype A:3 (Omp28) Vet Microbiology 87(3) Pages: 221 – 235 34 Goto Y., Nakura R., Nasu T., Sawada T., Shinjo T., 2001 Isolation of Pasteurella multocida during an outbreak of infectious septicemia in jopan quails Jour Vet Med Sci 62(9) Pages: 1055 – 1061 35 Gunawardana G.A., Townsend K.M., Frost A.J., 2000 Molecular characterisation of avian Pasteurella multocida isolates from Australia and Vietnăm by REP-PCR and PFGE Vet Microbiology 72 Pages: 97 – 109 36 Heddleston K.L., Reber P.A., 1972 Fowl cholera: Cross – immunity induced in turkeys with formalin – killed in vivo propagated Pasteurella multocida Avian Dis 1972 Pages: 578 – 586 37 Hunt M.L., Adler B., Townsend K.M., 2000 The molecular biology of Pasteurella multocida Vet Microbiology 72(1-2) Pages: – 25 38 Jablonski P.E., Jaworski M., Hovde C.J., 1996 A minimal medium for growth of Pasteurella multocida FEMS Microbiol Lett 140(2-3) Pages: 165 – 174 47 39 John D.B., Jing Y.C., Ben A., 2000 Pasteurella multocida capsule: composition, function and genetics Journal of biotechnology 83(1) Pages: 153-160 40 Jonas M., Morishita T.Y., Angrick E.J., Jahja J., 2001 Characterization of nine Pasteurella multocida isolates from avian cholera outbreaks in Indonesia Avian Dis 45 (1) Pages : 34 – 42 41 Kardos G., Kiss I., 2005 Molecular epidemiology investigation of outbreaks of fowl cholera in geographically related poultry flocks Jour of Clin Microbiology 43(6) Pages: 2959 – 3020 42 Kwon Y.K., Kang M.I., 2003 Outbreak of fowl cholera in Baikal teals in Korea Avian Dis 47 (4) Pages : 1491 – 1497 43 Mariana S., Hirst R., 2000 The immunogenicity and pathogenicity of Pasteurella mutocida isolated from poultry in Indonesia Vet Microbiol 72(2) Pages: 27 – 36 44 Michael L.P., Barbara J.M., Vivek K., 2002 Transcriptional response of Pasteurella multocida to nutrient limitation Journal of bacteriology 184(13) Pages: 3734 – 3739 45 Miranda L., John D.B., Ian W.W., Ben A., 2004 Characterization of two lipoprotein in Pasteurella multocida Microbes and infection 6(1) Pages: 58 – 67 46 Montserrat B., Elena G., Montserrat L., Ana M., Ignacio B., Jordi B., 2002 Pasteurella multocida exbB, exbD and tonB genes are physically linked but independently transcribed FEMS microbiology letters 210(2) Pages: 101 – 108 47 Nămioka S, Murata M., 1961 Serological studies on Pasteurella mutocida II Characteristics of somatic “O” antigen of organism Cornell Veterinarian 51 Pages: 507 – 521 48 OIE, 2004 Manual of diagnostic testes and vaccines for terrestrial animals 5th edition Chapter 2.7.11: Fowl cholera 48 49 Pati U.S., Srivastava S.K., Roy S.C., More T., 1996 Immunogenicity of outer membrane protein of Pasteurella multocida in buffalo calves Vet Microbiol 52(3-4) Pages: 301 – 311 50 Peter E., Martha J., Carolyn J.H., 1996 A minimal medium for growth of Pasteurella multocida FEMS microbiology letters 140(2-3) Pages: 165 – 169 51 Pijoan C., 1999 Diseases of swine, 8th edition Ed Barbar E straw, Iowa State Univ Press, Iowa, USA 52 Ramdani R., Adler B.S., 1993 Opsonic monoclonal antibodies against lipopolysaccharide (LPS) antigens of Pasteurella multocida and role of lipopolysaccharide in immunity Veterinary Microbiol 26 Pages: 335-347 53 Rhoades K.R., Rimler R.B., 1990 Virulence and toxigenicity of capsular serogroup D Pasteurella multocida strains isolated from avian hosts Avian diseases 34(2) Pages: 384 – 392 54 Rhoades K.R., Rimler R.B., Bagley R.A., 1992 Fowl cholera epornitic: antigenic characterization and virulence of selected Pasteurella multocida isolates Avian Dis 36 (1) Pages 84 – 91 55 Richard E.I., Emilio T., 1995 Pili of Pasteurella multocida of porcine origin FEMS microbiology letters 132(3) Pagse: 247 – 251 56 Rimler R.B., 1992 Pasteurella: Laboratory techniques for typing and diagnosis of infection ACIAR proceedings No 43, 1992 Pages: 199 – 202 57 Rimler R.B., Glisson J.R., 1997 Diseases of poutry Tenth edition Pages: 368371 58 Robert L.D., MacCorquodale R., Reilly S., 2003 Characterization of bovine strains of Pasteurella multocida and comparison with isolates of avian, ovine and porcine origin Veterinary Microbiology 99(2) Pages: 145 – 158 59 Ryu H.I., Kim C.J., 2000 Immunologic reactivity of a lipopolysaccharideprotein complex of type A Pasteurella multocida in mice Jour of Vet Sci (2) Pages: 87 – 95 60 Samưal M.D., Shadduck D.J., Goldberg D.R., Jonhson W.P., 2003 Comparision of methods to detect Pasteurella multocida in carrier waterfowl Jour of Wildlife diseases 39(1) Pages: 125 – 135 49 61 Shivachandra S.B., Kumar A.A., Gautam R., Singh V.P., Saxena M.K., Srivastava S.K., 2006 Identification of avian strains of Pasteurella multocida in India by conventional and PCR assays Vet Journal 172(3) Pages: 561 – 565 62 Tatum F.M., Yersin A.G., Briggs R.E., 2005 Construction and virulence of a Pasteurella multocida fhaB2 mutant in turkeys Microb Pathog 2005 Pages: 267 – 294 63 Tomer P., Chaturvedi G.C., Minakshi, Malik P., 2002 Comperative analysis of outer membrane protein profiles of isolates of Pasteurella multocida (B:2) assosiated with haemorrhagic septicaemia Vet Res Commun 26(7) Pages: 513 – 528 64 Vasfi M., Mittal K.R., 1996 Characterization of an outer membrane protein of Pasteurella multocida belonging to the OmpA family Vet Microbiol 53(3-4) Pages: 303 – 314 65 Wijewardana T.G., Gunawardana G.A., De Alwis M.C.L., Talagoda S.A., 1994 Serotyping and biochemical characteristics of Pasteurella multocida isolated from outbreaks of fowl cholera in chicken in Srilanka Srilanka Vet Journal 41 Pages: – 66 Wu J.R., Shieh H.K., Gong S.R., Chang P.C., 2003 Molecular characterization of plasmids with antimicrobial resistant genes in avian isolates of Pasteurella multocida Avian diseases 47(4) Pages: 1384 – 142 67 Yue S.L., Lai W., Paker S.P., Stefanu C., 1991 The outer membrane of Pasteurella multocida 3:A protects rabbits against homologous challenge Infection and Immunity 59 Pages: 4517 – 4523 50 PHỤ LỤC Hình Tiêm chuột để xác định độc lực vi khuẩn Pasteurella multocida Hình Chuột chết sau cơng vi khuẩn Pasteurella multocida 51 ... GIÁO DỤC V ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP HỒ CHÍ MINH KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP KHẢO SÁT MỘT SỐ ĐẶC TÍNH SINH HỌC CỦA VI KHUẨN PASTEURELLA MULTOCIDA CHỦNG TG V V Giáo vi n hướng dẫn Sinh vi n thực... multocida chủng Tg V .30 vi 4.1.1 Ðặc điểm hình thái, khuẩn lạc vi khuẩn Pasteurella multocida chủng Tg V 30 4.1.2 Ðặc tính sinh hóa vi khuẩn Pasteurella multocida chủng Tg V 32... số đặc điểm hình thái, đặc tính sinh hóa, đặc điểm nuôi cấy vi khuẩn Pasteurella multocida chủng Tg V - Kiểm tra độc lực vi khuẩn Pasteurella multocida chủng Tg V chuột Chương TỔNG QUAN 2.1 MỘT