BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ HẰNG XÂY DỰNG PHƢƠNG PHÁP ĐỊNH TÍNH VÀ ĐỊNH LƢỢNG CLEISTANTOXIN TRONG QUẢ CỦA MỘT SỐ LOÀI THUỘC CHI CÁCH HOA (CLEISTANTHUS) LUẬN VĂN THẠC SỸ DƢỢC HỌC HÀ NỘI 2018 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ HẰNG XÂY DỰNG PHƢƠNG PHÁP ĐỊNH TÍNH VÀ ĐỊNH LƢỢNG CLEISTANTOXIN TRONG QUẢ CỦA MỘT SỐ LOÀI THUỘC CHI CÁCH HOA (CLEISTANTHUS) LUẬN VĂN THẠC SỸ DƢỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH: KIỂM NGHIỆM THUỐC & ĐỘC CHẤT MÃ SỐ: 8720210 Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS.Đoàn Thị Mai Hƣơng NCS.Ths.Nguyễn Lâm Hồng HÀ NỘI 2018 LỜI CẢM ƠN Với lòng kính trọng biết ơn sâu sắc, tơi xin cảm ơn PGS.TS.Đồn Thị Mai Hƣơng - Viện Hóa sinh biển Việt Nam, NCS.Ths.Nguyễn Lâm Hồng – Giảng viên mơn Hóa phân tích, trường Đại học Dược Hà Nội, người thầy trực tiếp hướng dẫn, dành nhiều thời gian tâm huyết giúp tơi hồn thành luận văn Tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới Ban Giám hiệu, phòng Quản lý Đào tạo sau đại học, mơn Hóa phân tích trường Đại học Dược Hà Nội thầy cô trực tiếp giảng dạy giúp đỡ suốt trình học tập trường q trình thực luận văn Tơi xin chân thành cảm ơn PGS.TS.Trần Việt Hùng – Viện trưởng Viện kiểm nghiệm Thuốc TPHCM, ThS.Trần Thúy Hạnh anh chị em, bạn bè đồng nghiệp Khoa Kiểm nghiệm nguyên liệu - Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi để tơi thực hồn thành khóa luận tốt nghiệp thuận lợi Cuối tơi xin gửi lời cảm ơn tới gia đình, bạn bè ủng hộ động viên suốt trình học tập vừa qua Xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 01 tháng năm 2018 Học viên Nguyễn Thị Hằng MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC HÌNH DANH MỤC CÁC BẢNG ĐẶT VẤN ĐỀ PHẦN 1: TỔNG QUAN 1.1 TỔNG QUAN VỀ NGHIÊN CỨU PHÁT TRIỂN THUỐC TỪ THỰC VẬT 1.2 TỔNG QUAN VỀ THỰC VẬT CỦA CHI CÁCH HOA 1.2.1 Vị trí phân loại 1.2.2 Họ Thầu Dầu (Euphorbiaceca) .6 1.2.3 Chi Cleistanthus .6 1.2.4 Loài Cleistanthus tonkinensis 1.2.5 Loài Cleistanthus indochinensis 1.2.5.1 Đặc điểm thực vật phân bố 1.2.5.2 Thành phần hóa học hoạt tính sinh học: 1.3 TỔNG QUAN VỀ HỢP CHẤT CLEISTANTOXIN 1.3.1 Sơ lƣợc hợp chất cleistantoxin 1.3.2 Các nghiên cứu trƣớc hợp chất cleistantoxin 10 1.4 TỔNG QUAN VỀ CÁC KĨ THUẬT CHIẾT XUẤT DƢỢC LIỆU .10 1.4.1 Khái niệm chiết xuất: 10 1.4.2 Các yếu tố ảnh hƣởng tới trình chiết xuất 11 1.4.2.1 Chênh lệch nồng độ chất cần chiết nguyên liệu dung môi phải cao để trình khuếch tán phân tử cần chiết mạnh 11 1.4.2.2 Hình thái, tính chất cấu tạo tổ chức nguyên liệu: 11 1.4.2.4 Dung môi chiết cần thỏa mãn điều kiện sau: 12 1.4.3 Các kĩ thuật chiết xuất 12 1.4.3.1 Chiết gián đoạn .12 1.4.3.2 Chiết bán liên tục .13 1.4.3.3 Chiết liên tục 13 1.4.4 Vài kỹ thuật chiết đại dùng để chiết xuất 14 1.4.4.1 Chiết nhờ siêu âm (Ultrasound-assisted extraction) 14 1.4.4.2 Chiết siêu tới hạn (SFE: Supercritical Fluid Extraction) 14 1.4.4.3 Chiết dung môi tăng tốc (ASE: Accelerated Solvent Extraction) hay chiết áp suất cao (PFE : Pressurized Fluid Extraction) 15 1.4.4.4 Chiết xuất vi sóng (MAE) 16 1.5 TỔNG QUAN VỀ MỘT SỐ KĨ THUẬT PHÂN TÍCH DƢỢC LIỆU .16 1.5.1 Sắc ký lớp mỏng (SKLM) 16 1.5.2 Sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) .17 CHƢƠNG 2: NGUYÊN LIỆU, THIẾT BỊ, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18 2.1 NGUYÊN LIỆU 18 2.1.1 Đối tƣợng nghiên cứu .18 2.1.2 Thiết bị, dụng cụ .18 2.1.3 Dung mơi, hóa chất 18 2.2 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 19 2.2.1 Phƣơng pháp chiết xuất Cleistantoxin từ số loài chi cách hoa (Cleistanthus) 19 2.2.1.1 Xác định độ ẩm bột thuộc chi Cleistanthus 19 2.2.1.2 Chiết xuất 19 2.2.1.3 Tính hiệu suất chiết 20 2.2.2 Xây dựng thẩm định phƣơng pháp định tính, định lƣợng Cleistantoxin 20 2.2.2.1 Xây dựng thẩm định phương pháp định tính cleistantoxin HPTLC 20 2.2.2.2 Xây dựng thẩm định phương pháp định tính, định lượng cleistantoxin HPLC 21 2.2.3 Xác định hàm lƣợng cleistantoxin số loài thuộc chi Cleistanthus 25 2.2.3.1 Định tính cleistantoxin 25 2.2.3.2 Định lượng cleistantoxin số loài chi cách hoa phương pháp HPLC 25 2.2.4 Phƣơng pháp xử lý số liệu .25 PHẦN 3: KẾT QUẢ 27 3.1 XÂY DỰNG PHƢƠNG PHÁP ĐỊNH TÍNH, ĐỊNH LƢỢNG CLEISTANTOXIN BẰNG HPLC/DAD 27 3.1.1 Xây dựng qui trình sắc kí phân tích cleistantoxin từ số loài thuộc chi Cleistanthus HPLC/DAD 27 3.1.1.1 Chuẩn bị mẫu 27 3.1.1.2 Lựa chọn điều kiện sắc ký 27 3.1.1.3 Xây dựng phương pháp phân tích cleistantoxin số loài thuộc chi Cách hoa 34 3.1.2 Xây dựng qui trình chiết xuất cleistantoxin từ của Chà chôi Cleistanthus tonkinensis 35 3.1.2.1 Lựa chọn dung môi chiết 35 3.1.2.2 Lựa chọn kỹ thuật chiết 38 3.1.2.2 Qui trình chiết xuất bột khơ số lồi thuộc chi Cách hoa (Cleistanthus) 42 3.1.3 Thẩm định phƣơng pháp định tính, định lƣợng cleistantoxin HPLC/DAD .43 3.1.3.1 Thẩm định phương pháp định tính cleistantoxin HPLC/DAD 43 3.1.3.2 Thẩm định phương pháp định lượng cleistantoxin số loài thuộc chi Cách hoa 46 3.2 XÂY DỰNG PHƢƠNG PHÁP ĐỊNH TÍNH CLEISTANTOXIN BẰNG HPTLC .53 3.2.1 Xây dựng phƣơng pháp định tính cleistantoxin HPTLC 53 3.2.1.1 Chuẩn bị mẫu 53 3.2.1.2 Lựa chọn hệ dung mơi pha động thể tích tiêm mẫu 54 3.2.1.3 Chương trình triển khai HPTLC 55 3.2.2 Thẩm định phƣơng pháp định tính cleistantoxin HPTLC .56 3.3 SƠ BỘ ĐỊNH TÍNH, ĐỊNH LƢỢNG CLEISTANTOXIN TRONG QUẢ CỦA MỘT SỐ LỒI THUỘC CHI CLEISTANTHUS 58 3.3.1 Xác định hàm ẩm mẫu thuộc chi Cleistanthus 58 3.3.2 Định tính cleistantoxin số loài chi cách hoa (Cleistanthus) phƣơng pháp HPTLC 58 3.3.2.1 Chuẩn bị mẫu: 58 3.3.2.2 Điều kiện sắc ký: 59 3.3.2.3 Kết 59 3.3.3 Định tính, định lƣợng cleistantoxin phƣơng pháp HPLC/DAD 60 3.3.3.1 Điều kiện sắc ký .60 3.3.3.2 Tiến hành 60 3.3.3.3 Kết 61 CHƢƠNG 4: BÀN LUẬN 65 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 68 KẾT LUẬN .68 ĐỀ XUẤT 70 TÀI LIỆU THAM KHẢO 71 PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT APG Hệ thống phân loại thực vật GLP Thực hành tốt phòng thí nghiệm HPLC Sắc ký lỏng hiệu cao HPTLC Sắc ký lớp mỏng hiệu nâng cao HT29 Tế bào ung thư Đại tràng IC50 Nồng độ ức chế 50% số lượng cá thể IUPAC Hiệp hội quốc tế hóa học ứng dụng KB Tế bào biểu mơ LOD Giới hạn phát LOQ Giới hạn định lượng MCF7 Tế bào ung thư vú MCF7R Tế bào ung thư vú kháng thuốc SK Sắc ký SKĐ Sắc ký đồ TLC Sắc ký lớp mỏng WHO Tổ chức Y Tế Thế giới DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1: Tiêu Cleistanthus tonkinensis Hình 1.2: Quả Cleistanthus tonkinensis Hình 1.3: Cơng thức cấu tạo cleistantoxin Hình Hóa chất, dung mơi sử dụng nghiên cứu 19 Hình 3.1 SKĐ xác định khả tách cleistantoxin cleistonkinensis A (8A) cột phenyl với pha động gồm acetonitril đệm acetat pH 4,0 28 Hình 3.2 Sắc ký đồ khảo sát khả tách cleistantoxin (7B) cleistonkinensis A (8A) cột C18, với hệ pha động Acetonitril –a.formic 0,1% 29 Hình 3.3 SKĐ xác định khả tách cleistantoxin cleistonkinensis A (8A) cột RP18 Phenomenex (250 x 4,6 mm; 5µm), hệ pha động Acetonitril – nước 29 Hình 3.4 Sắc kí đồ xác định khả tách cleistantoxin cleistonkinensis A (8A) cột RP18 Phenomenex (150 x 4,6 mm; 5µm) 30 Hình 3.5 Sắc ki đồ xác định khả tách cleistantoxin cleistonkinensis A (8A) cột RP18 Phenomenex nhiệt độ khác 31 Hình 3.6 Phổ UV cleistantoxin 32 Hình 3.7 Sắc ký đồ khảo sát tốc độ dòng pha động để tách cleistantoxin cleistonkinensis A cột C18, hệ pha động Acetonitril – nước 32 Hình 3.8 Sắc ký đồ khảo sát tốc độ dòng để tách cleistantoxin cleistonkinensis A cột C18, hệ pha động Acetonitril – nước 33 Hình 3.9 Đồ thị biểu diễn hiệu suất chiết cleistantoxin dung môi khác 37 Hình 3.10 Sắc ký đồ dịch chiết cleistanthus tonkinensis dung môi methanol 37 Hình 3.11 Sắc ký đồ dịch chiết cleistanthus tonkinensis hệ dung môi CH2Cl2: MeOH=1:1 37 Hình 3.12 Hiệu suất chiết cleistantoxin kĩ thuật chiết khác .39 Hình 3.13 Đồ thị biểu diễn hiệu suất chiết cleistantoxin loại dung môi MeOH EtOH kĩ thuật siêu âm, hồi lưu shoxlet 40 Hình 3.14 Sơ đồ chiết xuất cleistantoxin từ thuộc chi Cleistanthus 42 Hình 3.15 SKĐ mẫu chuẩn, mẫu thử, thử thêm chuẩn mẫu trắng 43 Hình 3.16 Phổ tinh khiết píc mẫu chuẩn, mẫu thử thử thêm chuẩn 44 Hình 3.17 Chồng phổ UV-Vis pic cleistantoxin mẫu chuẩn mẫu thử 44 Hình 3.18 Độ phân giải pic cleistantoxin với pic tạp SKĐ mẫu thử 45 Hình 3.19 SKĐ dung dịch thử phân huỷ điều kiện 100oC/2 giờ, H2O2 30% UV 254 nm/24 .45 Hình 3.20 SKĐ mẫu thử phân huỷ điều kiện H2SO4 0,1N NaOH 0,1 N 46 Hình 3.21 SKĐ dung dịch chuẩn hỗn hợp cleistonkinensis B (17B), cleistantoxin (7B) cleistonkinensis A (8A) 46 Hình 3.22 SKĐ dung dịch chuẩn cleistonkinensis B-17B (a) cleistonkinensis A-8A (b) 47 Hình 3.23 Đồ thị biểu diễn mối tương quan nồng độ dãy dung dịch chuẩn diện tích pic cleistantoxin .49 Hình 3.24: SKĐ giới hạn phát (LOD) giới hạn định lượng (LOQ) .53 Hình 3.25 SKĐ dịch chiết loài thuộc chi Cleistanthus HPTLC chạy hệ pha động là: Dichloromethane:aceton= 99:1 54 Hình 3.26 SKĐ dịch chiết loài thuộc chi Cleistanthus HPTLC chạy hệ pha động là: CH2Cl2:aceton= 98:2 .55 Hình 3.27: SKĐ mẫu chuẩn, thử, thử thêm chuẩn soi đèn UV 254nm 366nm 56 Hình 3.28: Hình ảnh quét phổ chồng phổ mẫu thử mẫu chuẩn .57 Hình 3.29 : Hình ảnh quét phổ chồng phổ mẫu thử thêm chuẩn mẫu chuẩn 57 Hình 3.30 Hình ảnh HPTLC định tính cleistantoxin số lồi thuộc chi cleistanthus 59 Hình 3.31 SKĐ định lượng cleistantoxin thuộc chi Cleistanthus .62 Hình 3.32 Chồng phổ UV -VIS mẫu thử mẫu chuẩn, hệ số match 1,0000 63 Report(Report Editor) Status:Temporary ==== TDPP DINH LUONG CLEISTANTOXIN ==== @H:\Kiem nghiem nguyen lieu\VKN_HLI_06.24\2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\TUYEN TINH\TT 200%.lcd Acquired by : HANG Sample Name : Sample ID : Tray# :1 Vail # : 25 Injection Volume : 20 uL Data File Name : TT 200%.lcd Method File Name : Cleistantoxin.lcm Batch File Name : BATCH.lcb Report File Name : Default.lcr Data Acquired : 10/03/2018 2:28:22 SA Data Processed : 10/03/2018 10:42:32 SA 19.310 @H:\Kiem nghiem nguyen lieu\VKN_HLI_06.24\2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\TUYEN TINH\TT 200%.lcd mAU 400 PDA Multi 300 200 100 0 10 15 20 25 30 PDA Multi 1/286nm 4nm PeakTable @H:\Kiem nghiem nguyen lieu\VKN_HLI_06.24\2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\TUYEN TINH\TT 200%.lcd PDA Ch1 286nm 4nm Name Ret Time Area Height Resolution Tailing Factor RT19.310 19.310 5478516 376479 0.000 0.982 Spectrum @H:\ \VKN_HLI_06.24\2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\TUYEN TINH\TT 200%.lcd ID# Retention Time Compound Name Spectrum Operation :1 : 19.310 : RT19.310 : None mAU 202.24 205.84 214.76 260.14 284.70317.06 327.31360.81 419.05 666.25 nm Purity @H:\Kiem nghiem nguyen lieu\VKN_HLI_06.24\2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\TUYEN TINH\TT 200%.lcd ID# Retention Time Compound Name :1 : 19.310 : RT19.310 19.0 19.1 19.2 19.3 19.4 19.5 19.6 Impurity Peak purity index Single point threshold Minimum peak purity index :Detected at 19.34 : 0.998739 : 0.999986 : -1247 H:\Kiem nghiem nguyen lieu\VKN_HLI_06.24\2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\TUYEN TINH\TT 200%.lcd Report(Report Editor) ==== TDPP DINH LUONG CLEISTANTOXIN ==== @H:\Kiem nghiem nguyen lieu\VKN_HLI_06.24\2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\TUYEN TINH\TT 300%.lcd Acquired by : HANG Sample Name : Sample ID : Tray# :1 Vail # : 26 Injection Volume : 20 uL Data File Name : TT 300%.lcd Method File Name : Cleistantoxin.lcm Batch File Name : BATCH.lcb Report File Name : Default.lcr Data Acquired : 10/03/2018 3:03:49 SA Data Processed : 10/03/2018 10:00:52 SA 19.324 @H:\Kiem nghiem nguyen lieu\VKN_HLI_06.24\2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\TUYEN TINH\TT 300%.lcd mAU PDA Multi 500 250 0 10 15 20 25 30 PDA Multi 1/286nm 4nm PeakTable @H:\Kiem nghiem nguyen lieu\VKN_HLI_06.24\2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\TUYEN TINH\TT 300%.lcd PDA Ch1 286nm 4nm Name Ret Time Area Height Resolution Tailing Factor 7B 19.324 7869514 531495 0.000 0.965 Spectrum @H:\ \VKN_HLI_06.24\2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\TUYEN TINH\TT 300%.lcd ID# Retention Time Compound Name Spectrum Operation :1 : 19.324 : 7B : None mAU 202.23 205.81 219.73 260.16 284.41318.91 327.40 399.18 645.99681.85 nm Purity @H:\Kiem nghiem nguyen lieu\VKN_HLI_06.24\2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\TUYEN TINH\TT 300%.lcd ID# Retention Time Compound Name :1 : 19.324 : 7B 19.00 19.25 19.50 19.75 Impurity Peak purity index Single point threshold Minimum peak purity index :Detected at 19.40 : 0.994915 : 0.999988 : -5072 H:\Kiem nghiem nguyen lieu\VKN_HLI_06.24\2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\TUYEN TINH\TT 300%.lcd Report(Report Editor) ==== TDPP DINH LUONG CLEISTANTOXIN ==== @H:\Kiem nghiem nguyen lieu\VKN_HLI_06.24\2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\DO DUNG\DD 50% 01.lcd Acquired by : HANG : Sample Name : Sample ID :1 Tray# Vail # : 27 : 20 uL Injection Volume : DD 50% 01.lcd Data File Name Method File Name : Cleistantoxin.lcm Batch File Name : BATCH.lcb Report File Name : Default.lcr Data Acquired : 10/03/2018 3:39:17 SA Data Processed : 10/03/2018 10:01:00 SA 19.328 @H:\Kiem nghiem nguyen lieu\VKN_HLI_06.24\2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\DO DUNG\DD 50% 01.lcd mAU 100 PDA Multi 50 0 10 15 20 25 30 PDA Multi 1/286nm 4nm PeakTable @H:\Kiem nghiem nguyen lieu\VKN_HLI_06.24\2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\DO DUNG\DD 50% 01.lcd PDA Ch1 286nm 4nm Name Ret Time Area Height Resolution Tailing Factor 7B 19.328 1266237 94664 0.000 1.028 Spectrum @H:\ \VKN_HLI_06.24\2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\DO DUNG\DD 50% 01.lcd ID# Retention Time Compound Name Spectrum Operation : 19.328 : 7B : None mAU 202.34 260.12085.11 338825.2263 445.08 5926.21636.0362.74 688.34 nm Purity @H:\Kiem nghiem nguyen lieu\VKN_HLI_06.24\2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\DO DUNG\DD ID# Retention Time Compound Name 01.lcd :1 : 19.328 : 7B 19.0 19.1 19.2 19.3 19.4 19.5 19.6 19.7 Impurity Peak purity index Single point threshold Minimum peak purity index :Not Detected : 0.999999 : 0.999948 : 51 H:\Kiem nghiem nguyen lieu\VKN_HLI_06.24\2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\DO DUNG\DD 50% 01.lcd Report(Report Editor) ==== TDPP DINH LUONG CLEISTANTOXIN ==== @H:\Kiem nghiem nguyen lieu\VKN_HLI_06.24\2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\DO DUNG\THU DL DD 01.lcd Acquired by : HANG Sample Name : Sample ID : Tray# :1 Vail # : 38 Injection Volume : 20 uL Data File Name : THU DL DD 01.lcd Method File Name : Cleistantoxin.lcm Batch File Name : BATCH.lcb Report File Name : Default.lcr Data Acquired : 10/03/2018 1:06:16 CH Data Processed : 12/03/2018 10:40:32 SA 19.327 @H:\Kiem nghiem nguyen lieu\VKN_HLI_06.24\2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\DO DUNG\THU DL DD 01.lcd mAU PDA Multi 100 50 0 10 15 20 25 30 PDA Multi 1/286nm 4nm PeakTable @H:\Kiem nghiem nguyen lieu\VKN_HLI_06.24\2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\DO DUNG\THU DL DD 01.lcd PDA Ch1 286nm 4nm Name Ret Time Area Height Resolution Tailing Factor 7B 19.327 1302852 98075 0.000 1.038 Spectrum @H:\ \VKN_HLI_06.24\2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\DO DUNG\THU DL DD 01.lcd ID# Retention Time Compound Name Spectrum Operation :1 : 19.327 : 7B : None mAU 202.28 260.18 285.07319.19 326.84 430.09468.24 482.58514.21 688.44 nm Purity @H:\ \VKN_HLI_06.24\2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\DO DUNG\THU DL DD 01.lcd ID# Retention Time Compound Name :1 : 19.327 : 7B 19.0 19.1 19.2 19.3 19.4 19.5 19.6 19.7 Impurity Peak purity index Single point threshold Minimum peak purity index :Not Detected : 0.999999 : 0.999948 : 51 H:\Kiem nghiem nguyen lieu\VKN_HLI_06.24\2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\DO DUNG\THU DL DD 01.lcd Report(Report Editor) Status:Temporary ==== TDPP DINH LUONG CLEISTANTOXIN ==== @H:\Kiem nghiem nguyen lieu\VKN_HLI_06.24\2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\DO LAP LAI\THU 1.lcd Acquired by : HANG Sample Name : Sample ID : Tray# :1 Vail # :4 Injection Volume : 20 uL Data File Name : THU 1.lcd Method File Name : Cleistantoxin.lcm Batch File Name : BATCH.lcb Report File Name : Default.lcr Data Acquired : 09/03/2018 4:25:25 CH Data Processed : 09/03/2018 5:00:27 CH @H:\Kiem nghiem nguyen lieu\VKN_HLI_06.24\2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\DO LAP LAI\THU 1.lcd 19.301 mAU 150 PDA Multi 100 20.345 50 0 10 15 20 25 30 PDA Multi 1/286nm 4nm PeakTable @H:\Kiem nghiem nguyen lieu\VKN_HLI_06.24\2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\DO LAP LAI\THU 1.lcd PDA Ch1 286nm 4nm Name Ret Time Area Height Resolution Tailing Factor 7B 19.301 2463558 181003 0.000 1.011 8A 20.345 197423 14430 2.831 1.061 Spectrum @H:\ \VKN_HLI_06.24\2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\DO LAP LAI\THU 1.lcd ID# Retention Time Compound Name Spectrum Operation :1 : 19.301 : 7B : None mAU 202.03 260.12 284.99 374.23 377.95 433.78 484.41 656.02 743.90775.76 nm ID# Retention Time Compound Name Spectrum Operation :2 : 20.345 : 8A : None mAU 199.45 195.46 235.20 248.74 276.23 342.93 441.36 484.42 535.22 656.02 nm Purity @H:\Kiem nghiem nguyen lieu\VKN_HLI_06.24\2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\DO LAP LAI\THU 1.lcd H:\Kiem nghiem nguyen lieu\VKN_HLI_06.24\2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\DO LAP LAI\THU 1.lcd Report(Report Editor) Status:Temporary ==== TDPP DINH LUONG CLEISTANTOXIN ==== @H:\Kiem nghiem nguyen lieu\VKN_HLI_06.24\2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\DO LAP LAI\THU 2.lcd Acquired by : HANG Sample Name : Sample ID : Tray# :1 Vail # :5 Injection Volume : 20 uL Data File Name : THU 2.lcd Method File Name : Cleistantoxin.lcm Batch File Name : BATCH.lcb Report File Name : Default.lcr Data Acquired : 09/03/2018 5:00:53 CH Data Processed : 09/03/2018 5:35:56 CH @H:\Kiem nghiem nguyen lieu\VKN_HLI_06.24\2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\DO LAP LAI\THU 2.lcd 19.290 mAU 150 PDA Multi 100 20.334 50 0 10 15 20 25 30 PDA Multi 1/286nm 4nm PeakTable @H:\Kiem nghiem nguyen lieu\VKN_HLI_06.24\2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\DO LAP LAI\THU 2.lcd PDA Ch1 286nm 4nm Name Ret Time Area Height Resolution Tailing Factor 7B 19.290 2469364 181218 0.000 1.012 8A 20.334 196171 14337 2.830 1.072 Spectrum @H:\ \VKN_HLI_06.24\2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\DO LAP LAI\THU 2.lcd ID# Retention Time Compound Name Spectrum Operation :1 : 19.290 : 7B : None mAU 202.18 260.15 285.05320.22 327.40363.77 443.69 572.43 628.00661.51 nm ID# Retention Time Compound Name Spectrum Operation :2 : 20.334 : 8A : None mAU 199.81 193.99 235.77 249.21 276.04 342.93 443.47 486.09 530.12 542.74 nm Purity @H:\Kiem nghiem nguyen lieu\VKN_HLI_06.24\2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\DO LAP LAI\THU 2.lcd H:\Kiem nghiem nguyen lieu\VKN_HLI_06.24\2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\DO LAP LAI\THU 2.lcd Report(Report Editor) ==== TDPP DINH LUONG CLEISTANTOXIN - DCXTG==== @H:\ \VKN_HLI_HAD.2.GF\2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\TDPP\THHT\DDFG (CHUAN 7B+8A+17B).lcd Acquired by : Thien Huong Sample Name : Sample ID : Tray# :1 Vail # :1 Injection Volume : 20 uL Data File Name : DDFG (CHUAN 7B+8A+17B).lcd Method File Name : cleistantoxin.lcm Batch File Name : cleistantoxin.lcb Report File Name : Default.lcr Data Acquired : 3/8/2018 4:01:48 PM Data Processed : 3/9/2018 8:52:36 AM @H:\ \2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\TDPP\THHT\DDFG (CHUAN 7B+8A+17B).lcd 21.064 PDA Multi 22.153 18.902 mAU 25 0 10 15 20 25 30 PDA Multi 1/286nm 4nm PeakTable @H:\ \2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\TDPP\THHT\DDFG (CHUAN 7B+8A+17B).lcd PDA Ch1 286nm 4nm Peak# Ret Time Area Height Tailing Factor Resolution 18.902 956632 41592 1.097 0.000 21.064 812849 33994 1.108 3.512 22.153 463444 18852 1.066 1.728 Spectrum @H:\ \2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\TDPP\THHT\DDFG (CHUAN 7B+8A+17B).lcd ID# Retention Time Compound Name Spectrum Operation :1 : 18.902 : RT18.902 : None mAU 202.92 260.29 193.30 285.61 -0 200 300 416.30 431.00 400 486.83 500 662.26 600 700 nm ID# Retention Time Compound Name Spectrum Operation :2 : 21.064 : RT21.064 : None mAU 203.27 260.12 193.50 285.54 -0 200 300 485.54 400 500 668.19 600 765.95 700 nm H:\Kiem nghiem nguyen lieu\VKN_HLI_HAD.2.GF\2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\TDPP\THHT\DDFG (CHUAN 7B+8A+17B).lcd Report(Report Editor) ==== TDPP DINH LUONG CLEISTANTOXIN - DCXTG==== @H:\ \VKN_HLI_HAD.2.GF\2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\TDPP\THHT\CHUAN 1.01.lcd Acquired by : Thien Huong Sample Name : Sample ID : Tray# :1 Vail # :2 Injection Volume : 20 uL Data File Name : CHUAN 1.01.lcd Method File Name : cleistantoxin.lcm Batch File Name : cleistantoxin.lcb Report File Name : Default.lcr Data Acquired : 3/7/2018 11:40:02 AM Data Processed : 3/7/2018 1:54:11 PM @H:\ \VKN_HLI_HAD.2.GF\2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\TDPP\THHT\CHUAN 1.01.lcd mAU PDA Multi 22.744 150 100 50 0 10 15 20 25 30 PDA Multi 1/286nm 4nm PeakTable @H:\ \VKN_HLI_HAD.2.GF\2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\TDPP\THHT\CHUAN 1.01.lcd PDA Ch1 286nm 4nm Peak# Ret Time Area Height Tailing Factor Resolution 22.744 2620808 156489 0.971 0.000 Spectrum @H:\ \2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\TDPP\THHT\CHUAN 1.01.lcd ID# Retention Time Compound Name Spectrum Operation :1 : 22.744 : RT22.744 : None mAU 202.13 260.14 285.41 -0 200 300 400.53440.94480.46 485.13 400 500 580.54 657.46 600 700 nm Purity @H:\ \VKN_HLI_HAD.2.GF\2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\TDPP\THHT\CHUAN 1.01.lcd ID# Retention Time Compound Name :1 : 22.744 : RT22.744 22.25 Impurity Peak purity index Single point threshold Minimum peak purity index 22.50 22.75 23.00 23.25 :Not Detected : 1.000000 : 0.999948 : 51 H:\Kiem nghiem nguyen lieu\VKN_HLI_HAD.2.GF\2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\TDPP\THHT\CHUAN 1.01.lcd Report(Report Editor) ==== TDPP DINH LUONG CLEISTANTOXIN - DCXTG==== @H:\ \VKN_HLI_HAD.2.GF\2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\TDPP\THHT\CHUAN 1.02.lcd Acquired by : Thien Huong Sample Name : Sample ID : Tray# :1 Vail # :2 Injection Volume : 20 uL Data File Name : CHUAN 1.02.lcd Method File Name : cleistantoxin.lcm Batch File Name : cleistantoxin.lcb Report File Name : Default.lcr Data Acquired : 3/7/2018 12:15:31 PM Data Processed : 3/7/2018 3:45:04 PM @H:\ \VKN_HLI_HAD.2.GF\2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\TDPP\THHT\CHUAN 1.02.lcd mAU PDA Multi 22.755 150 100 50 0 10 15 20 25 30 PDA Multi 1/286nm 4nm PeakTable @H:\ \VKN_HLI_HAD.2.GF\2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\TDPP\THHT\CHUAN 1.02.lcd PDA Ch1 286nm 4nm Peak# Ret Time Area Height Tailing Factor Resolution 22.755 2614787 156287 0.972 0.000 Spectrum @H:\ \2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\TDPP\THHT\CHUAN 1.02.lcd ID# Retention Time Compound Name Spectrum Operation :1 : 22.755 : RT22.755 : None mAU 202.14 260.13 285.41 336.38 -0 200 300 412.21 400 484.08 500 657.51 673.52 600 760.98 700 nm Purity @H:\ \VKN_HLI_HAD.2.GF\2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\TDPP\THHT\CHUAN 1.02.lcd ID# Retention Time Compound Name :1 : 22.755 : RT22.755 0 22.25 22.50 Impurity Peak purity index Single point threshold Minimum peak purity index :Not Detected : 1.000000 : 0.999948 : 51 22.75 23.00 23.25 H:\Kiem nghiem nguyen lieu\VKN_HLI_HAD.2.GF\2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\TDPP\THHT\CHUAN 1.02.lcd Report(Report Editor) ==== TDPP DINH LUONG CLEISTANTOXIN - DCXTG==== @H:\ \VKN_HLI_HAD.2.GF\2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\TDPP\DO LAP LAI\THU 1.lcd Acquired by : Thien Huong Sample Name : Sample ID : Tray# :1 Vail # : 32 Injection Volume : 20 uL Data File Name : THU 1.lcd Method File Name : cleistantoxin.lcm Batch File Name : cleistantoxin.lcb Report File Name : Default.lcr Data Acquired : 3/8/2018 9:22:52 PM Data Processed : 3/9/2018 8:55:00 AM @H:\ \VKN_HLI_HAD.2.GF\2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\TDPP\DO LAP LAI\THU 1.lcd mAU PDA Multi 20.997 75 50 22.067 25 0 10 15 20 25 30 PDA Multi 1/286nm 4nm PeakTable @H:\ \VKN_HLI_HAD.2.GF\2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\TDPP\DO LAP LAI\THU 1.lcd PDA Ch1 286nm 4nm Peak# Ret Time Area Height Tailing Factor Resolution 20.997 2429282 79458 0.924 0.000 22.067 187166 6536 0.000 1.456 Spectrum @H:\ \2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\TDPP\DO LAP LAI\THU 1.lcd ID# Retention Time Compound Name Spectrum Operation :1 : 20.997 : RT20.997 : None mAU 202.89 260.13 285.36 -0 200 300 380.90 400 767.02 500 600 700 nm ID# Retention Time Compound Name Spectrum Operation :2 : 22.067 : RT22.067 : None mAU 202.88247.88 194.08 236.02 278.56 343.68 -0 200 300 485.56 400 500 655.00 663.24 600 700 nm Purity @H:\ \VKN_HLI_HAD.2.GF\2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\TDPP\DO LAP LAI\THU 1.lcd H:\Kiem nghiem nguyen lieu\VKN_HLI_HAD.2.GF\2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\TDPP\DO LAP LAI\THU 1.lcd Report(Report Editor) ID# Retention Time Compound Name :1 : 20.997 : RT20.997 0 20.25 20.50 20.75 21.00 21.25 21.50 Impurity Peak purity index Single point threshold Minimum peak purity index ID# Retention Time Compound Name :Detected at 21.72 : 0.922258 : 0.989963 : -67705 :2 : 22.067 : RT22.067 21.75 22.00 22.25 22.50 22.75 Impurity Peak purity index Single point threshold Minimum peak purity index :Detected at 21.72 : 0.983062 : 0.991462 : -8400 H:\Kiem nghiem nguyen lieu\VKN_HLI_HAD.2.GF\2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\TDPP\DO LAP LAI\THU 1.lcd Report(Report Editor) ==== DINH LUONG CLEISTANTOXIN ==== @H:\ \VKN_HLI_HAD.2.GF\2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\TDPP\TUYEN TINH\LOQ (0.1PPM) 01.lcd Acquired by : : Sample Name : Sample ID :1 Tray# Vail # : 13 : 20 uL Injection Volume : LOQ (0.1PPM) 01.lcd Data File Name : cleistantoxin.lcm Method File Name : cleistantoxin.lcb Batch File Name : Default.lcr Report File Name : 3/11/2018 6:42:59 PM Data Acquired Data Processed : 3/17/2018 2:27:21 PM 19.300 @H:\ \VKN_HLI_HAD.2.GF\2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\TDPP\TUYEN TINH\LOQ (0.1PPM) 01.lcd mAU PDA Multi 0.0 -0.1 -0.2 -0.3 10 15 20 25 30 PDA Multi 1/286nm 4nm PeakTable @H:\ \VKN_HLI_HAD.2.GF\2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\TDPP\TUYEN TINH\LOQ (0.1PPM) 01.lcd PDA Ch1 286nm 4nm Peak# Ret Time Area Height Theoretical Plate# Resolution Tailing Factor 19.300 1609 80 20732.025 0.000 0.970 Spectrum @H:\ \2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\TDPP\TUYEN TINH\LOQ (0.1PPM) 01.lcd ID# Retention Time Compound Name Spectrum Operation : 19.300 : RT19.300 : None 307.88 40401.02.509 4875.0065.67 582.34 654.81 726.83761.16 nm H:\Kiem nghiem nguyen lieu\VKN_HLI_HAD.2.GF\2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\TDPP\TUYEN TINH\LOQ (0.1PPM) 01.lcd Report(Report Editor) ==== DINH LUONG CLEISTANTOXIN ==== @H:\ \VKN_HLI_HAD.2.GF\2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\TDPP\TUYEN TINH\LOQ (0.1PPM) 02.lcd Acquired by : : Sample Name : Sample ID :1 Tray# Vail # : 13 : 20 uL Injection Volume : LOQ (0.1PPM) 02.lcd Data File Name : cleistantoxin.lcm Method File Name : cleistantoxin.lcb Batch File Name : Default.lcr Report File Name : 3/11/2018 3:45:34 PM Data Acquired Data Processed : 3/17/2018 2:23:44 PM @H:\ \VKN_HLI_HAD.2.GF\2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\TDPP\TUYEN TINH\LOQ (0.1PPM) 02.lcd mAU PDA Multi 0.0 -0.1 -0.2 19.438 -0.3 -0.4 -0.5 -0.6 10 15 20 25 30 PDA Multi 1/286nm 4nm PeakTable @H:\ \VKN_HLI_HAD.2.GF\2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\TDPP\TUYEN TINH\LOQ (0.1PPM) 02.lcd PDA Ch1 286nm 4nm Peak# Ret Time Area Height Theoretical Plate# Resolution Tailing Factor 19.438 1682 83 23590.727 0.000 1.200 H:\Kiem nghiem nguyen lieu\VKN_HLI_HAD.2.GF\2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\TDPP\TUYEN TINH\LOQ (0.1PPM) 02.lcd Report(Report Editor) ==== TDPP DINH LUONG CLEISTANTOXIN ==== @H:\Kiem nghiem nguyen lieu\VKN_HLI_06.24\2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\CAY 3-eber\THU 1.lcd Acquired by : HANG : Sample Name : Sample ID Tray# :1 Vail # : 47 Injection Volume : 20 uL : THU 1.lcd Data File Name Method File Name : Cleistantoxin.lcm Batch File Name : BATCH.lcb Report File Name : Default.lcr Data Acquired : 10/03/2018 4:04:15 CH Data Processed : 12/03/2018 9:21:22 SA @H:\ \VKN_HLI_06.24\2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\CAY 3-eber\THU 1.lcd 50 19.323 mAU PDA Multi 25 0 10 15 20 25 30 PDA Multi 1/286nm 4nm PeakTable @H:\ \VKN_HLI_06.24\2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\CAY 3-eber\THU 1.lcd PDA Ch1 286nm 4nm Name Ret Time Area Height Resolution Tailing Factor 7B 19.323 608404 44573 0.000 1.047 Spectrum @H:\ \VKN_HLI_06.24\2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\CAY 3-eber\THU 1.lcd ID# Retention Time Compound Name Spectrum Operation :1 : 19.323 : 7B : None mAU 202.37 260.2185.08 398.37 51502.626.64561.24 606.00 646.49 728.56 nm Purity @H:\ \VKN_HLI_06.24\2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\CAY 3-eber\THU 1.lcd ID# Retention Time Compound Name 19.0 :1 : 19.323 : 7B 19.1 Impurity Peak purity index Single point threshold Minimum peak purity index 19.2 :Not Detected : 0.999998 : 0.999894 : 103 19.3 19.4 19.5 19.6 19.7 H:\Kiem nghiem nguyen lieu\VKN_HLI_06.24\2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\CAY 3-eber\THU 1.lcd Report(Report Editor) ==== TDPP DINH LUONG CLEISTANTOXIN ==== @H:\Kiem nghiem nguyen lieu\VKN_HLI_06.24\2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\CAY 3-eber\THU 2.lcd Acquired by : HANG : Sample Name : Sample ID Tray# :1 Vail # : 48 Injection Volume : 20 uL : THU 2.lcd Data File Name Method File Name : Cleistantoxin.lcm Batch File Name : BATCH.lcb Report File Name : Default.lcr Data Acquired : 10/03/2018 4:39:44 CH Data Processed : 12/03/2018 9:21:32 SA @H:\ \VKN_HLI_06.24\2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\CAY 3-eber\THU 2.lcd 50 19.319 mAU PDA Multi 25 0 10 15 20 25 30 PDA Multi 1/286nm 4nm PeakTable @H:\ \VKN_HLI_06.24\2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\CAY 3-eber\THU 2.lcd PDA Ch1 286nm 4nm Name Ret Time Area Height Resolution Tailing Factor 7B 19.319 604303 44088 0.000 1.049 Spectrum @H:\ \VKN_HLI_06.24\2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\CAY 3-eber\THU 2.lcd ID# Retention Time Compound Name Spectrum Operation :1 : 19.319 : 7B : None mAU 202.36 260.12684.92 41402.217.47 489.85115653.3 504 5099 716.47 nm Purity @H:\ \VKN_HLI_06.24\2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\CAY 3-eber\THU 2.lcd ID# Retention Time Compound Name :1 : 19.319 : 7B 19.0 Impurity Peak purity index Single point threshold Minimum peak purity index 19.1 19.2 :Not Detected : 0.999997 : 0.999892 : 104 19.3 19.4 19.5 19.6 19.7 H:\Kiem nghiem nguyen lieu\VKN_HLI_06.24\2018\Thang 3\Thien Huong\Cleistantoxin\CAY 3-eber\THU 2.lcd ... tài: "Xây dựng phương pháp định tính, định lượng Cleistantoxin số loài thuộc chi cách hoa Cleistanthus" với mục tiêu : Xây dựng quy trình chi t xuất Cleistantoxin từ số loài thuộc chi Cách hoa. .. hoa Cleistanthus Xây dựng thẩm định phương pháp định tính, định lượng Cleistantoxin số loài thuộc chi Cách hoa Cleistanthus Sơ xác định hàm lượng cleistantoxin số loài thuộc chi Cleistanthus...BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ HẰNG XÂY DỰNG PHƢƠNG PHÁP ĐỊNH TÍNH VÀ ĐỊNH LƢỢNG CLEISTANTOXIN TRONG QUẢ CỦA MỘT SỐ LOÀI THUỘC CHI CÁCH HOA (CLEISTANTHUS)