BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP XÂY DỰNG QUY TRÌNH TẠO ETHANOL SINH HỌC TỪ VỎ TRÁI CA CAO Ngành học : CÔNG NGHỆ SINH HỌC Sinh viên thực : LÊ HỮU TÀI Niên khóa : 2008 – 20012 Tháng 7/2012 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NƠNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP XÂY DỰNG QUY TRÌNH TẠO ETHANOL SINH HỌC TỪ VỎ TRÁI CA CAO Hướng dẫn khoa học Sinh viên thực ThS VÕ THỊ THÚY HUỆ LÊ HỮU TÀI TS BÙI MINH TRÍ Tháng 7/2012 LỜI CẢM ƠN Trƣớc tiên, xin chân thành cảm ơn ThS Võ Thị Thúy Huệ TS Bùi Minh Trí trực tiếp hƣớng dẫn, hết lòng giúp đỡ, truyền đạt kiến thức, kinh nghiệm để em hồn thành khóa luận tốt nghiệp Xin gửi lời cảm ơn Ban giám hiệu Trƣờng Đại Học Nơng Lâm Thành Phố Hồ Chí Minh, Ban chủ nhiệm Bộ Môn Công Nghệ Sinh Học, Thầy Cô trƣờng truyền đạt kiến thức quý báu tạo điều kiện thuận lợi cho em thời gian học tập trƣờng Cảm ơn Ban giám đốc, Thầy Cô, Anh Chị thuộc Viện Nghiên Cứu Công Nghệ Sinh Học Và Môi Trƣờng tạo điều kiện giúp đỡ em suốt thời gian thực khóa luận Xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến Cha Mẹ nuôi nấng, dạy bảo trƣởng thành nhƣ ngày hôm nay, ngƣời thân gia đình tạo điều kiện động viên suốt trình học tập trƣờng, điểm tựa để vực dậy sau lần vấp ngã, động lực để sống, học tập phấn đấu Cuối cùng, không quên gửi lời cảm ơn đến bạn bè lớp DH08SH giúp đỡ chia khó khăn với suốt nhƣng năm học nhƣ thời gian thực đề tài Thành phố Hồ Chí Minh, tháng 07 năm 2012 Sinh viên Lê Hữu Tài i TÓM TẮT Nhu cầu lƣợng tăng theo phát triển dân số kinh tế Nguồn cung cấp lƣợng nhiên liệu hóa thạch cạn kiệt, chƣa có nguồn thay hữu hiệu Việt Nam có nguồn phụ phẩm nơng nghiệp dồi gây nhiễm mơi trƣờng, có vỏ ca cao Đây nguồn lignocellulose vơ tiềm đƣợc chuyển hóa thành sản phẩm có ích (ethanol sinh học) phục vụ cho nhu cầu ngƣời Vì việc nghiên cứu sử dụng vỏ ca cao để sản xuất ethanol sinh học điều cần thiết Quá trình nghiên cứu gồm ba nội dung sau Nội dung thứ xác định thành phần vỏ trái cao sau thu hoạch Nội dung thứ hai khảo sát ảnh hƣởng nhiệt độ (75oC, 100oC), ảnh hƣởng nồng độ (0,5 M, M, M) acid HCl H2SO4 khoảng thời gian (2 giờ, giờ, giờ) đến trình thủy phân vỏ trái ca cao tạo đƣờng Nội dung thứ ba khảo sát ảnh hƣởng tỉ lệ nấm men: dịch đƣờng (1:60, 2:60, 3:60, 4:60 6:60) thời gian lên men (24 giờ, 48 giờ, 72 giờ, 120 giờ) thích hợp cho việc tạo ethanol từ dịch thủy phân vỏ ca cao HCl H2SO4 Kết xác định đƣợc vỏ trái ca cao tƣơi có độ ẩm 81,32% Vỏ ca cao sau phơi khô chứa cellulose 26,47%, lignin 25,16%, 11,11% tro, 10,32% chất trích ly, pectin 4,33% Nhiệt độ thích hợp để thủy phân vỏ ca cao 100oC Thủy phân đạt hiệu tối ƣu nồng độ HCl M sau giờ, tỉ lệ đƣờng khử thu hồi đạt 21,93% Quá trình lên men hiệu với tỉ lệ dịch nấm men : dịch đƣờng 1: 60, nhiệt độ 28 – 30oC, 72 giờ, hiệu suất chuyển hóa đƣờng khử đạt 53% Kết cho thấy vỏ ca cao nguyên liệu dùng để sản xuất ethanol sinh học, từ kg vỏ trái ca cao khơ tạo đƣợc 51,5 ml ethanol tinh ii SUMMARY Thesis titled “Establishment of a bioethanol production procedure from cocoa pod” Energy demand increases with population and economic development Fossil fuels, the main energy supply so far is becoming exhausted, no effective alternative Vietnam has abundant agricultural byproduct sources, which cause certain environment pollution, including cocoa pod This is a potential lignocellulose source, which can be converted into useful products (bioethanol) to serve human needs Therefore the research using cocoa pod to produce bioethanol is promising The process of research include three contents The first is determination of the composition of cocoa pod husk after harvesting The second content, surveyed the effects of temperatures (75oC, 100oC) on the hydrolysis of cocoa pod for both HCl and H2SO4, to valuate the effects of concentrations (0,5 M, M, M) and time (2, 4, hour) on the hydrolysis of cocoa pod for both HCl and H2SO4 The third content, surveyed the volume ratio between yeast and sugar solution (1:60, 2:60; 4:60, 6:60) and fermentation time (24, 48, 72, 120 hour) suitable for ethanol production from cocoa pod hydrolysate The obtained results indentified moisture content of the fresh cocoa pod was 81.32% The dry cocoa pod containted 26.47% cellulose, 25.16% lignin, 11.11% ash, 10.32% substraction of extraction, 4.33% pectin The suitable temperature for cocoa pod hydrolysis was 100oC The hydrolysis got optimal efficiency at concentration M after hour, the reducing sugar recovery ratio achieved 21,93% Optimal fermentation with the volume ratio of yeast : sugar solution is 1: 60, temperature 28 – 30oC in 72 hour, efficiency reducing sugar conversion obtained 53% This result indicate that the cocoa pod can be used to produce bioethanol Form kg cocoa pod, it can produce 51,5 ml pure ethanol Keywords: bioethanol, cocoa pod, hydrolysate, fermentation iii MỤC LỤC Trang LỜI CẢM ƠN i TÓM TẮT ii SUMMARY iii MỤC LỤC iv DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT viii DANH SÁCH CÁC BẢNG ix DANH SÁCH CÁC HÌNH x Chƣơng MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Yêu cầu đề tài 1.3 Nội dung thực Chƣơng TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Tổng quan ca cao 2.1.1 Đặc điểm thực vật học, nguồn gốc phân bố ca cao 2.1.1.1 Đặc điểm thực vật học ca ca cao 2.1.1.2 Nguồn gốc phân bố ca cao 2.1.2 Đặc điểm cấu tạo trái ca cao, thành phần hóa học vỏ ca cao 2.1.2.1 Đặc điểm cấu tạo trái ca cao 2.1.2.2 Thành phần hóa học vỏ trái ca cao 2.1.3 Diện tích sản lƣợng ca cao Việt Nam 2.1.4 Hiện trạng tình hình sử dụng vỏ ca cao Việt Nam 2.2 Thành phần cấu trúc sinh khối giàu cellulose thực vật 2.2.1 Cấu trúc lignocellulose 2.2.1.1 Thành phần cellulose sinh khối thực vật 2.2.1.2 Thành phần hemicellulose sinh khối thực vật 2.2.1.3 Thành phần lignin sinh khối 10 2.2.2 Các chất trích ly 11 2.2.3 Hợp chất pectic sinh khối thực vật 11 iv 2.2.4 Thành phần protein sinh khối thực vật 11 2.2.5 Thành phần tro sinh khối thực vật 12 2.2.6 Thành phần tanin thực vật 12 2.3 Nhiên liệu sinh học 12 2.3.1 Khái niệm nhiên liệu sinh học 12 2.3.2 Phân loại nhiên liệu sinh học 13 2.3.2.1 Phân loại nhiên liệu sinh học dựa vào chất sản phẩm 13 2.3.2.2 Dựa vào nguồn gốc nguyên liệu 13 2.3.3 Ƣu điểm nguy sử dụng nhiên liệu sinh học 14 2.3.3.1 Ƣu điểm nhiên liệu sinh học 14 2.3.3.2 Nguy sử dụng nhiên liệu sinh học 14 2.4 Tình hình nghiên cứu sản xuất nhiên liệu sinh học 14 2.4.1 Tình hình nghiên cứu sản xuất nhiên liệu sinh học giới 14 2.4.2 Tình hình nghiên cứu sản xuất nhiên liệu sinh học nƣớc ta 15 2.5 Ethanol sinh học 16 2.5.1 Giới thiệu chung ethanol 16 2.5.2 Tình hình phát triển ethanol sinh học giới Việt Nam 17 2.5.2.1 Tình hình phát triển ethanol sinh học giới 17 2.5.2.2 Tại Việt Nam 18 2.6 Cơng nghệ chuyển hóa ethanol 19 2.6.1 Q trình chuyển hóa ngun liệu chứa cellulose thành đƣờng đơn 19 2.6.1.1 Thủy phân đƣờng hóa học 19 2.6.1.2 Thủy phân đƣờng sinh học 20 2.6.2 Quá trình lên men dịch đƣờng 21 2.6.2.1 Cơ sở lý thuyết trình lên men 21 2.6.2.2 Cơ chế trình lên men 21 2.6.2.3 Các yếu tố ảnh hƣởng tới trình lên men 21 2.6.3 Chƣng cất thu nhận ethanol 23 Chƣơng VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 24 3.1 Thời gian địa điểm nghiên cứu 24 v 3.2 Vật liệu nghiên cứu 24 3.2.1 Thu thập mẫu 24 3.2.2 Thiết bị hóa chất sử dụng 24 3.2.2.1 Dụng cụ thiết bị 24 3.2.2.2 Hóa chất sử dụng 25 3.3 Phƣơng pháp nghiên cứu 25 3.3.1 Phân tích thành phần lý hóa vỏ trái ca cao sau thu hoạch 25 3.3.1.1 Xác định phần trăm độ ẩm 25 3.3.1.2 Xác định tỉ lệ tro 26 3.3.1.3 Xác định phần trăm chất trích ly 26 3.3.1.4 Xác định tỉ lệ cellulose 27 3.3.1.5 Phân tích Klason lignin 27 3.3.1.6 Xác định tỉ lệ pectin 28 3.3.2 Nghiên cứu điều kiện thủy phân vỏ ca cao acid để tạo thành đƣờng 29 3.3.2.1 Khảo sát ảnh hƣởng nhiệt độ đến trình thủy phân vỏ ca cao HCl H2SO4 29 3.3.2.2 Khảo sát ảnh hƣởng nồng độ HCl đến trình thủy phân vỏ ca cao 30 3.3.2.3 Khảo sát ảnh hƣởng nồng độ H2SO4 đến trình thủy phân vỏ ca cao 31 3.3.4 Lên men tạo ethanol 31 3.3.4.1 Khảo sát ảnh hƣởng lƣợng nấm men đến khả chuyển hóa đƣờng khử 31 3.3.5 Chƣng cất thu nhận ethanol 32 3.3.6 Phƣơng pháp xử lý số liệu 32 Chƣơng KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 33 4.1 Kết phân tích thành phần vỏ trái ca cao sau thu hoạch 33 4.2 Nghiên cứu điều kiện thủy phân vỏ trái ca cao tạo dịch đƣờng 34 4.2.2 Ảnh hƣởng nhiệt độ đến trình thủy phân trái vỏ ca cao 34 4.2.3 Ảnh hƣởng nồng độ HCl đến trình thủy phân vỏ ca cao 36 4.2.4 Ảnh hƣởng nồng độ H2SO4 đến trình thủy phân vỏ ca cao 37 4.3 Lên men tạo ethanol 38 4.3.1 Ảnh hƣởng lƣơng nấm men thời gian lên men dịch thủy phân HCl M 38 4.3.2 Ảnh hƣởng lƣơng nấm men thời gian lên men dịch thủy phân H2SO4 M 39 vi 4.3.4 Chƣng cất thu nhận ethanol 40 4.4.5 Quy trình sản xuất ethanol sinh học từ vỏ ca cao tƣơi 41 Chƣơng KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 43 5.1 Kết luận 43 5.2 Đề nghị 43 TÀI LIỆU THAM KHẢO 44 PHỤ LỤC vii DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT ANLT An ninh lƣơng thực ANMT An ninh môi trƣờng ANNL An ninh lƣợng B5 5% diesel sinh học 95% diesel dầu mỏ BD Biodiesel BE Bioethanol Ctv Cộng tác viên DP Degree of polymerization E10 Xăng 10% ethanol sinh học 90% xăng E20 Xăng 20% ethanol sinh học 80% xăng E5 Xăng 5% ethanol sinh học 95% xăng MW Molecular weight NLSH Nhiên liệu sinh học viii Phụ lục Định lƣợng đƣờng khử phƣơng pháp Miller Pha thuốc thử DNS: cân 1g DNS pha 20ml dung dịch NaOH 2N, thêm vào 50 ml nƣớc cất 30 g muối kali natri tartrate Đun nhẹ cho tan định mức tới 100 ml Dựng đƣờng chuẩn glucose: Cho vào ống nghiệm 0,5 ml dung dịch glucose nồng độ khác nhau, thêm vào 0,5 ml thuốc thử DNS, đun sôi cách thủy -5 phút , thêm vào ml nƣớc cất Đo OD bƣớc sóng 530 nm Bảng 2.1 Kết đo OD dựng đƣờng chuẩn glucose Nồng độ glucose OD 0,2 0,6 0,115 0,362 0,4 0,243 0,8 0,432 1.0 0,650 0,7 OD 0,6 y = 0,605x R² = 0,970 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0 0,2 0,4 0,6 0,8 1,2 Nồng độ glucose (mg/ml) Hình Đƣờng chuẩn glucose Cách đo nồng độ đƣờng dịch thủy phân (dung dịch B): Pha loãng dịch 10 lần Hút 0,5 ml dịch pha loãng cho vào ống nghiệm Thêm vào 0,5 ml thuốc thử DNS Đun sôi cách thủy – phút Thêm vào ml nƣớc cất Đo OD bƣớc sóng 530 nm Từ đƣờng chuẩn glucose suy nồng độ đƣờng khử dung dịch B đƣợc tính theo cơng thức sau: CB = OD D 0,605 Với : CB: nồng độ đƣờng khử dung dịch B (mg/ml) OD: độ hấp thụ bƣớc sóng 530 nm D: độ pha loãng Phụ lục Phƣơng pháp đếm nấm men Để đánh giá chất lƣợng canh trƣờng nấm men, cần đếm số lƣợng tế bào nấm men có ml Trong ml canh trƣờng nấm men triển bình thƣờng có 107 – 109 tế bào Đếm trực tiếp buồng đếm hồng cầu a Cách tiến hành Rửa kính buồng đếm cồn 70o nƣớc cất Dùng giấy mềm thấm khơ kính buồng đếm Đặt kính lên buồng đếm Lắc dịch tế bào nấm men, dùng pipet để lấy giọt cho vào khe mép buồng đếm kề với cạnh kính, tránh tạo bọt khí Dịch huyền phù di chuyển vào buồng đếm nhờ chế mao dẫn Đặt buồng đếm lên bàn kính hiển vi, để yên -5 phút Điều chỉnh cƣờng độ ánh sáng để quan sát rõ tế bào lẫn đƣờng kẻ Chỉnh kính hiển vi với vật kính 40X, tìm đếm khu vực buồng đếm Chỉnh thị trƣờng cho thị trƣờng có chứa trọn vẹn ô lớn (4 x = 16 ô nhỏ) Đếm số tế bào ô vuông lớn b Cách tính Số lƣợng tế bào ml mẫu nghiên cứu đƣợc tính cơng thức: N = [(a/b)  400/0,1]  103  10n Trong đó: N: số lƣợng tế bào ml mẫu nghiên cứu b: số tế bào ô vuông lớn 400: tổng số ô vuông nhỏ ô trung tâm 0,1: thể tích dịch tế bào chứa trung tâm 103: số chuyển mm3 thành ml 10n độ pha loãng Phụ lục Cách đo nồng độ ethanol Ethanol đƣợc đo khúc xạ kế tính theo độ Baume Dựng đƣờng chuẩn ethanol xác định tƣơng quan độ Baume độ cồn Từ giá trị độ Baume tính độ cồn a Hiệu chuẩn khúc xạ kế Nhỏ giọt nƣớc cất lên bề mặt lăng kính Thực quan sát giống nhƣ cách đo mẫu thông thƣờng Nếu vạch phân cách hai vùng xanh trắng khơng nằm vị trí 0,000, dùng tua vít hiệu chuẩn cho vạch phân cách vị trí 0,000 b Thao tác đo Nhỏ – giọt dung dịch cần đo (dung dịch ethanol) lên lăng kính Đậy chắn lên Khi đậy phải cho nƣớc phủ lăng kính Đƣa lên mắt ngắm Đọc số thang đo Chỉnh tiêu cự cho thấy rõ số Lau khô lăng kính giấy thấm mềm c Dựng đƣờng chuẩn ethanol độ Baume độ cồn Từ dung dịch ethanol 100%, pha lỗng thành dung dịch ethanol có nồng độ xác định đo độ Baume Bảng 4.1 Kết dựng đƣờng chuẩn ethanol Độ cồn 0,5 1,0 2,0 4,0 6,0 8,0 10,0 15,0 20,0 Độ Baume 0,3 0,4 0,6 0,8 1,0 1,4 1,7 2,5 4,4 Độ Baume 4,5 y = 0,194x R² = 0,956 3,5 2,5 1,5 0,5 0 10 15 20 25 Độ cồn (%) Hình Đƣờng chuẩn ethanol Phụ lục Bảng số liệu thô kết thí nghiệm Bảng 5.1 Ảnh hƣởng nhiệt độ trình thủy phân vỏ ca cao HCl Nhiệt độ (oC) Thời gian (giờ) 75 100 LLL 3 3 3 Tỉ lệ đƣờng khử thu hồi (%) 5,55 5,55 8,13 10,71 10,18 11,17 17,59 15,21 15,21 15,74 15,34 15,54 21,95 22,02 21,82 22,28 21,82 22,35 Trung bình (%) SD SE 6,41 1,489 0,860 10,69 0,496 0,287 16,00 1,374 0,793 15,54 0,198 0,115 21,93 0,101 0,058 22,15 0,288 0,166 Bảng 5.2 Ảnh hƣởng nhiệt độ trình thủy phân vỏ ca cao H2SO4 Nhiệt độ (oC) Thời gian (giờ) 75 100 LLL 3 3 3 Tỉ lệ đƣờng khử thu hồi (%) 6,15 5,75 5,49 8,99 16,86 9,72 19,17 19,11 18,98 20,03 20,03 19,77 22,02 22,08 21,82 22,15 22,02 21,82 Trung bình (%) SD SE 5,80 0,333 0,192 11,86 4,348 2,510 19,09 0,101 0,058 19,94 0,153 0,088 21,97 0,138 0,079 21,99 0,166 0,096 Bảng 5.3 Ảnh hƣởng nồng độ HCl đến trình thủy phân Nồng độ (M) Thời gian (giờ) 0,5 6 2 Trung bình (%) SD SE Tỉ lệ đƣờng khử thu hồi (%) 8,86 9,06 8,84 0,232 0,134 8,60 16,60 16,86 16,84 0,232 0,134 17,06 18,71 19,17 19,09 0,339 0,196 19,37 15,74 15,34 15,54 0,198 0,115 15,54 21,95 22,02 21,93 0,101 0,058 21,82 22,28 21,82 22,15 0,288 0,166 22,35 19,04 20,69 20,08 0,903 0,521 20,50 22,15 21,69 22,06 0,339 0,196 22,35 22,74 22,48 22,52 0,202 0,117 22,35 LLL Bảng 5.4 Ảnh hƣởng nồng độ H2SO4 đến trình thủy phân vỏ ca cao Nồng độ (M) Thời gian (giờ) LLL OD H(%) 0,193 12,76 0,194 12,83 0,194 0,326 12,83 21,55 0,291 19,24 0,32 0,32 21,16 21,16 0,322 21,29 0,319 0,303 21,09 20,03 0,303 20,03 0,299 0,333 19,77 22,02 0,334 22,08 0,33 0,335 21,82 22,15 0,333 22,02 0,33 0,315 21,82 20,83 0,313 20,69 0,313 0,332 20,69 21,95 0,333 22,02 0,333 0,33 22,02 21,82 0,334 22,08 0,331 21,88 0,5 2 Trung bình (%) SD SE 12,80 0,038 0,022 20,65 1,238 0,714 21,18 0,101 0,058 19,94 0,153 0,088 21,97 0,138 0,079 21,99 0,166 0,096 20,74 0,076 0,044 21,99 0,038 0,022 21,93 0,138 0,079 Phụ lục Bảng phân tích thống kê kết thí nghiệm 6.1 Ảnh hƣởng nhiệt độ trình thủy phân vỏ ca cao HCl Analysis of Variance for Ti le duong khu thu hoi - Type III Sums of Squares Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value MAIN EFFECTS A:Thoi gian 203,49 101,745 136,10 0,0000 B:Nhiet 351,655 351,655 470,38 0,0000 INTERACTIONS AB 19,6712 9,83562 13,16 0,0009 RESIDUAL 8,97113 12 0,747594 TOTAL (CORRECTED) 583,788 17 All F-ratios are based on the residual mean square error Multiple Range Tests for Ti le duong khu thu hoi by Nhiet -Method: 99,0 percent Duncan Nhiet Count LS Mean Homogeneous Groups -75 11,0333 X 100 19,8733 X -Contrast Difference -75 - 100 *-8,84 -* denotes a statistically significant difference Multiple Range Tests for Ti le duong khu thu hoi by Thoi gian -Method: 99,0 percent Duncan Thoi gian Count LS Mean Homogeneous Groups -2 10,975 X 16,3083 X 6 19,0767 X -Contrast Difference -2-4 *-5,33333 2-6 *-8,10167 4-6 *-2,76833 -* denotes a statistically significant difference 6.2 Ảnh hƣởng nhiệt độ trình thủy phân vỏ ca cao H2SO4 Analysis of Variance for Ti le duong khu thu hoi - Type III Sums of Squares Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value MAIN EFFECTS A:Nhiet 369,195 369,195 38,17 0,0000 B:Thoi gian 176,738 88,3692 9,14 0,0029 RESIDUAL 135,414 14 9,6724 TOTAL (CORRECTED) 681,347 17 All F-ratios are based on the residual mean square error Multiple Range Tests for Ti le duong khu thu hoi by Nhiet -Method: 99,0 percent Duncan Nhiet Count LS Mean Homogeneous Groups -75 12,2467 X 100 21,3044 X -Contrast Difference -75 - 100 *-9,05778 -* denotes a statistically significant difference Multiple Range Tests for Ti le duong khu thu hoi by Thoi gian -Method: 99,0 percent Duncan Thoi gian Count LS Mean Homogeneous Groups -2 12,87 X 16,915 XX 6 20,5417 X -Contrast Difference -2-4 -4,045 2-6 *-7,67167 4-6 -3,62667 -* denotes a statistically significant difference 6.3 Ảnh hƣởng nồng độ HCl đến trình thủy phân vỏ ca cao Analysis of Variance for Ti le duong khu thu hoi - Type III Sums of Squares -Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value -MAIN EFFECTS A:Thoi gian 216,41 108,205 736,02 0,0000 B:Nong HCl 214,055 107,028 728,01 0,0000 INTERACTIONS AB 52,2653 13,0663 88,88 0,0000 RESIDUAL 2,64627 18 0,147015 -TOTAL (CORRECTED) 485,377 26 -All F-ratios are based on the residual mean square error Multiple Range Tests for Ti le duong khu thu hoi by Thoi gian Method: 99,0 percent Duncan Thoi gian Count LS Mean Homogeneous Groups 14,8189 X 20,2778 X 21,2522 X Contrast Difference 2-4 *-5,45889 2-6 *-6,43333 4-6 *-0,974444 * denotes a statistically significant difference Multiple Range Tests for Ti le duong khu thu hoi by Nong HCl Method: 99,0 percent Duncan Nong HCl Count LS Mean Homogeneous Groups 0,5 14,9211 X 19,8733 X 21,5544 X Contrast Difference 0,5 - *-4,95222 0,5 - *-6,63333 1-2 *-1,68111 * denotes a statistically significant difference 6.4 Ảnh hƣởng nồng độ H2sO4 đến trình thủy phân vỏ ca cao Analysis of Variance for Ti le duong khu thu hoi - Type III Sums of Squares Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value -MAIN EFFECTS A:Nong 62,3604 31,1802 171,48 0,0000 B:thoi gian 86,3772 43,1886 237,53 0,0000 INTERACTIONS AB 56,8805 14,2201 78,21 0,0000 RESIDUAL 3,27287 18 0,181826 TOTAL (CORRECTED) 208,891 26 All F-ratios are based on the residual mean square error Multiple Range Tests for Ti le duong khu thu hoi by Nong -Method: 99,0 percent Duncan Nong Count LS Mean Homogeneous Groups -0,5 18,2122 X 21,3044 X 21,5533 X -Contrast Difference -0,5 - *-3,09222 0,5 - *-3,34111 1-2 -0,248889 -* denotes a statistically significant difference Multiple Range Tests for Ti le duong khu thu hoi by thoi gian -Method: 99,0 percent Duncan thoi gian Count LS Mean Homogeneous Groups -2 17,8289 X 21,54 X 21,7011 X -Contrast Difference -2-4 *-3,71111 2-6 *-3,87222 4-6 -0,161111 -* denotes a statistically significant difference 6.5 Ảnh hƣởng lƣợng nấm men đến hiệu suất đƣờng khử dịch lên men thủy phân HCl M Analysis of Variance for KL duong khu lai - Type III Sums of Squares -Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value -MAIN EFFECTS A:luong nam men 17075,0 5691,67 100,53 0,0000 B:Thoi gian len men 1,01539E6 253847,0 4483,62 0,0000 INTERACTIONS AB 5705,83 12 475,486 8,40 0,0000 RESIDUAL 2264,67 40 56,6167 -TOTAL (CORRECTED) 1,04044E6 59 -All F-ratios are based on the residual mean square error Multiple Range Tests for KL duong khu lai by luong nam men -Method: 99,0 percent Duncan luong nam men Count LS Mean Homogeneous Groups -1 15 360,733 X 15 366,533 X 15 387,8 X 15 402,933 X -Contrast Difference -1-2 -5,8 1-3 *-27,0667 1-4 *-42,2 2-3 *-21,2667 2-4 *-36,4 3-4 *-15,1333 -* denotes a statistically significant difference Multiple Range Tests for KL duong khu lai by Thoi gian len men -Method: 99,0 percent Duncan Level Count LS Mean Homogeneous Groups -120 12 293,083 X 72 12 296,0 X 48 12 331,583 X 24 12 339,833 X 12 637,0 X -Contrast Difference -0 - 24 *297,167 - 48 *305,417 - 72 *341,0 - 120 *343,917 24 - 48 8,25 24 - 72 *43,8333 24 - 120 *46,75 48 - 72 *35,5833 48 - 120 *38,5 72 - 120 2,91667 -* denotes a statistically significant difference 6.6 Ảnh hƣởng lƣợng nấm men đến hiệu suất đƣờng khử dịch lên men thủy phân H2SO4 M Analysis of Variance for Luong duong khu lai - Type III Sums of Squares Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value MAIN EFFECTS A:Luong nam men 7501,53 2500,51 38,50 0,0000 B:Thoi gian 336180,0 84045,0 1293,99 0,0000 INTERACTIONS AB 3200,97 12 266,747 4,11 0,0004 RESIDUAL 2598,0 40 64,95 TOTAL (CORRECTED) 349480,0 59 All F-ratios are based on the residual mean square error Multiple Range Tests for Luong duong khu lai by Luong nam men -Method: 99,0 percent Duncan Luong nam men Count LS Mean Homogeneous Groups -1 15 367,333 X 15 369,2 X 15 386,667 X 15 393,467 X -Contrast Difference -1-2 -1,86667 1-3 *-19,3333 1-4 *-26,1333 2-3 *-17,4667 2-4 *-24,2667 3-4 -6,8 -* denotes a statistically significant difference Multiple Range Tests for Luong duong khu lai by Thoi gian -Method: 99,0 percent Duncan Thoi gian Count LS Mean Homogeneous Groups -120 12 321,083 X 72 12 326,083 X 48 12 350,5 X 24 12 374,167 X 12 524,0 X -Contrast Difference -0 - 24 *149,833 - 48 *173,5 - 72 *197,917 - 120 *202,917 24 - 48 *23,6667 24 - 72 *48,0833 24 - 120 *53,0833 48 - 72 *24,4167 48 - 120 *29,4167 72 - 120 5,0 -* denotes a statistically significant difference ... 120 hour) suitable for ethanol production from cocoa pod hydrolysate The obtained results indentified moisture content of the fresh cocoa pod was 81.32% The dry cocoa pod containted 26.47% cellulose,... rãi có mạch đƣợc tạo thành cô đặc hydroxyflavans, leucoanthocyanidin (flavan-3,4-diol) catechin (flavan-3-ol) Tanin dễ thủy phân (hydrolysable) chiếm tỉ lệ nhỏ thực vật hạt kín hai mầm, thƣờng... xuất ethanol sinh học, từ kg vỏ trái ca cao khơ tạo đƣợc 51,5 ml ethanol tinh ii SUMMARY Thesis titled “Establishment of a bioethanol production procedure from cocoa pod” Energy demand increases