Bài 1:XÁC ĐỊNH NĂNG LƯỢNG HOẠT HĨA CỦA Q TRÌNH CO BÓP TIM ẾCH TẮCH RỜI I/ Cơ sở lý thuyết Như ta biết, để phản ứng xảy nguyên tử, phân tử tham gia phản ứng phải tiến lại gần với tạo cấu hình khơng gian Tuy nhiên tới khoảng cách xác định nguyên tử, phân tử xuất lực đẩy culơng làm cản trở q trình hình thành phân tử mới.Vậy cần phải cung cấp lượng cho chúng Năng lượng tối thiểu cần phải cung cấp cho nguên tử, phân tử để thắng đươc lực đẩy culơng gọi lượng hoạt hóa (Ehh) Sự phụ thuộc tốc độ phản ứng vào nhiệt độ thể qua biểu thức toán học Arenius KT = P Z exp() Ehh (1) RT Trong đó: P : hệ số lập thể (biểu thị cấu hình khơng gian ngun tử, phân tử) Z : hệ số va chạm R : số khí T : nhiệt độ tuyệt đối Ngồi ra, ta biểu thức liên hệ Vanhoff: KT 10 (2) Q10 = Từ (1) (2) rút phương trình KT Ehh Q10 = Q10 = ln Q10 = EhhEhhEhh    E hh10 10 exp exp    (T  10)   T (T10)  10)  RT (R    RT Ehh = Q Ehh = 0,46 RT(T+10) lg Q10  RT (T  10) ln 10 II/ Tiến hành  Để ếch bàn mổ, dùng dao kéo mở rộng lồng ngực ếch, tiếp tục cận thận gở bỏ màng bao tim  Xác định chủ động mạch trái, chủ động mạch phải tĩnh mạch màu xanh phía  Dùng cột chặt động mạch chủ phải, đến tĩnh mạch dùng dài cột chặt động mạch chủ trái xa tim Kéo căng sợi động mạch chủ trái, dùng dao mở đường dọc     Dùng ống thông tim luồn thẳng vào động mạch chủ trái vào tâm thất trái (nếu vẩy hết máu tim tốt) Dùng dư khoảng 15cm cột chặt phía chỗ lỗ thủng có ống thơng tim Cẩn thận dỡ bỏ tim, tách rời tim khỏi thể (yêu cầu tim đập cách bình thường) Đưa tim vào bình cồn để ni Để cách bề mặt dung dịch ringer khoảng 1cm Chờ sau phút, dùng đồng hồ bấm để tính tần số co bóp tim Đưa tồn bình ẩm vào nươc đá để hạ nhiệt độ xuống 10 oC tương ứng với thời gian ngâm phút Sau đưa ngồi để tính tần số co bóp tim( lần tính thời gian cần thực lần) Kết : Sau lần đo ta bảng giá trị tần số K sau : T+ 10=296 K Lần 60 Lần 60 Lần 57 Trung bình 59 T = 2860K 42 42 42 42 Áp dụng công thức (1)Q10 K53 T 10 = = K 23T (T+10)T.lgQ10 Áp dụng công thức (2)Ehh = 0,46 = 0,46 53 (273+13).(273+23).lg = 14.118 23 (kcal/mol) Vậy lượng hoạt hố q trình co bóp tim ếch tách rời là: 14.118 (kcal/mol) BÀI 2: XÁC ĐỊNH TÍNH THẤM MỘT CHIỀU CỦA DA ẾCH  Màng tế bào hệ thống mở, mà chúng có khả trao đổi chất từ ngược lại, dồng thời đào thải chat cặn bã ngồi mơi trường  Da ếch đối tượng kiểm tra tính thấm chiều I/ Cơ sở lí thuyết: Da ếch cấu tạo từ lớp:  Lớp : tế bào biêu mô cấu tạo từ – lớp tế bào, lớp ngồi lớp màng cutin, có nguồn gốc tuyến nhầy da ếch kiềm yếu metylblue, da ếch cho thấm từ II/Cách tiến hành:  Tạo túi da ếch, túi lộn ngược túi để xuôi, cho xanhmetylen vào túi, đem ngâm dung dịch sinh lí, thời gian chờ khoảng tiếng Đo xác định hàm lượng metylblue thấm qua màng phương pháp đường chuẩn BÀI 3:XÁC ĐỊNH ĐỘ BỀN TẾ BÀO HỒNG CẦU I.Yêu cầu:  Phân biệt loại môi trường  Phản ứng tế bào hồng cầu với loại môi trường  Xác định thành phần tế bào hồng cầu làm cho thay đổi hình dạng  Xác định nồng độ bền cách II.Lý thuyết Cấu trúc màng tế bào hồng cầu giống loại màng sinh chất khác gồm lớp kép Ngoài bề mặt bên màng tế bào hồng cầu có tồn mạng lưới spectrin có nguồn gốc protein dạng sợi có trọng lượng 200.000 – 220.000 daltol Nhờ có mạng lưới mà tế bào hồng cầu thay đổi hình dạng (co tròn hay duỗi dài) giúp chúng qua mao mạch nhỏ Đối với tế bào hồng cầu già tế bào hồng cầu bị thối hóa chức khả co bị suy giảm chúng lọt qua mao mạch kiểm soát bị tiêu hủy lách Sự thay đổi loại tế bào hồng cầu phụ thuộc vào mơi trường ngồi Có loại mơi trường ngoài:  Ưu trương: Tế bào hồng cầu bị teo lại  Đẳng trương: Tế bào hồng cầu bền vững  Nhược trương: Tế bào hồng cầu trương lên tới nồng độ màng tế bào khơng khả giữ vững bị vỡ giải phóng chất nội bào gọi tượng huyết tiêu Nhiệm vụ thực hành: Xác định nồng độ nhược trương lớn chưa đủ gây tương huyết tiêu nồng độ nồng độ bền III.Hóa chất dụng cụ  Ống nghiệm, pipette, máy ly tâm  Dung dịch NaCl 1%, nước cất, máu chống đông IV Cách tiến hành  Pha 10 dung dịch với 10 nồng độ khác thay đổi từ 0% đến 0,9%, thể tích ống nghiệm 10 ml Ống nghiệm NaCl 1% 10 Nước cất C% 0% 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 % % % % % % % % % V(ml) 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10  Thả vào ống nghiệm giọt hồng cầu  Đảo nhẹ ống lần cố định 30 phút  Đem ly tâm với tốc độ 2500 vòng/phút phút  Lấy đọc kết V Kết quả, giải thích Các ống từ đến có màu từ đỏ đậm tới nhạt dần Nguyên nhân: nồng độ NaCl môi trường nhiều so với tế bào hồng cầu làm cho nước vào làm thề tích tế bào tăng, chúng trương phồng lên bị vỡ ra, giải phóng chất ngồi mơi trường gây tượng huyết tiêu Lượng nước vào ống nghiệm giảm dần từ ống đến ống (vì nồng độ NaCl tăng dần từ ống đến ống thể tích ống nghiệm khơng đổi) nên tế bào ống bị vỡ nhiều làm cho dung dịch có màu đậm Ngược lại ống nước từ môi trường vào tế bào chưa đủ để gây tượng huyết tiêu tức tế bào hồng cầu trương lên tới mức tối đa chưa vỡ  Nồng độ nhược trương lớn chưa đủ gây tượng huyết tiêu 0,6% Các ống 7,8 hồng cầu không bị vỡ lắng xuống đáy dung dịch suốt dần Ống 9: dung dịch thu suốt, lượng nước vào tế bào nhau, có cân nồng độ NaCl màng tế bào Dung dịch thu ống dung dịch đẳng trương BÀI 6:CÁC DẪN XUẤT CỦA HEMOGLOBIN(Hb) I.Yêu cầu : - Nắm cấu trúc chức Hb - Nắm dạng HbO2 - Nắm dẫn xuất Hb II.Cơ sở lí thuyết : Thành phần hồng cầu Hb Trong tế bào hồng cầu có khoảng 200 triệu phân tử Hb Một phân tử Hb chứa 9.000 nguyên tử loại C,H,O,S,N……… trọng lượng phân tử Hb 67000 Dal Hb cấu tạo thành phần : protein globin + nhóm chức Hem Nhóm chức Hem bao gồm nguyên tử Fe ++ nằm vòng pyrol Nhờ nguyên tử Fe++ nên tế bào hồng cầu có khả thu nhận giải phóng Oxi từ Phân tử Hb cho tế bào mô Cấu trúc protein globin : phức tạp, cấu tạo chuỗi polypeptit Trong có chuỗi α-polypeptit chuỗi β-polypeptit, có tính chất khác Hình dạng chuổi polypeptit kết hợp với Oxi khác Chuỗi β-polypeptit kết hợp với oxi bị cuộn tròn lại, nhả oxi ra, lại duỗi thẳng Chuỗi α-polypeptit kết hợp khơng kết hợp, hình dạng khơng thay đổi Oxyhemoglobin có dạng khác nhau: Hb4O2 Hb4O4 Hb4O6 Hb4O8 Chỉ có dạng 4(Hb4O8) dễ dàng kết hợp giải phóng oxi (dạng bão hòa oxi) Dẫn xuất : metHemoglobin (metHb) Khi Fe++ biến đổi thành Fe3+ Hb chuyển thành metHb: có khả kết hợp mà khơng có khả giải phóng oxi máu có lượng lớn MetHb trình cung cấp Oxi cho tế bào mô bị suy giảm gây nên tượng thiếu Oxi III Dụng cụ : máy ly tâm, ống nghiệm Hóa chất : K3[Fe(CN)6]:kaliferixyanua; Na2S2O3:Detionitnatri; dung dịch sinh lý PBS với pH=7,2; máu chống đông IVCách tiến hành kết quả: - Thu nhận HbO2 : lấy máu chống đông cho vào máy ly tâm, ly tâm tốc độ 1500vòng/phút phút để loại bỏ huyết tương để thu nhận hồng cầu (hồng cầu lắng xuống, huyết tương màu vàng nhạt lên) Lấy loại bỏ huyết tương Rửa tế bào hồng cầu dung dịch PBS lần cách đem li tâm 1500 vòng/phút thời gian phút Làm huyết tiêu hồng cầu (cho nước cất vào lắc nhẹ) Sau ly tâm với tốc độ 3000 vòng/phút phút nhằm loại bỏ màng tế bào hồng cầu Thu dịch màu đỏ tươi : HbO2 -Thu nhận metHb : lấy khoảng 3ml HbO 2, sau thêm vào vài giọt K3[Fe(CN)6] lắc nhẹ, thu dung dịch màu nâu sẫm Đó metHb -Thu nhận hemoglobin: lấy dung dịch oxyhemoglobin, thả 1-2 giọt Na 2S2O3 vào, thu dung dịch màu xanh thẫm, Hb Na2S2O3 + HbO2  Hb + Na2S2O5 ... hồng cầu làm cho thay đổi hình dạng  Xác định nồng độ bền cách II .Lý thuyết Cấu trúc màng tế bào hồng cầu giống loại màng sinh chất khác gồm lớp kép Ngoài bề mặt bên màng tế bào hồng cầu có... máy ly tâm, ống nghiệm Hóa chất : K3[Fe(CN)6]:kaliferixyanua; Na2S2O3:Detionitnatri; dung dịch sinh lý PBS với pH=7,2; máu chống đông IVCách tiến hành kết quả: - Thu nhận HbO2 : lấy máu chống đông... hành:  Tạo túi da ếch, túi lộn ngược túi để xuôi, cho xanhmetylen vào túi, đem ngâm dung dịch sinh lí, thời gian chờ khoảng tiếng Đo xác định hàm lượng metylblue thấm qua màng phương pháp đường