WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGÔ MINH THÚY NGHIÊN CỨU ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG PHÂN ĐỐI QUANG CỦA ATENOLOL BẰNG ĐIỆN DI MAO QUẢN LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC HÀ NỘI 2014 WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGÔ MINH THÚY NGHIÊN CỨU ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG PHÂN ĐỐI QUANG CỦA ATENOLOL BẰNG ĐIỆN DI MAO QUẢN LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH: KIỂM NGHIỆM THUỐC VÀ ĐỘC CHẤT MÃ SỐ: 60 72 04 10 Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS Nguyễn Thị Kiều Anh Th.S NCS Tạ Mạnh Hùng HÀ NỘI 2014 WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM LỜI CẢM ƠN Với lòng kính trọng biết ơn sâu sắc, em xin gửi lời cảm ơn tới PGS.TS Nguyễn Thị Kiều Anh - Phòng Quản lý khoa học - Trường Đại học Dược Hà Nội, Th.S NCS Tạ Mạnh Hùng - Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương, tận tình hướng dẫn, giúp đỡ em trình thực hoàn thành luận văn Em xin gửi lời cảm ơn đến Th.S Vũ Ngân Bình thầy cô, anh/ chị kỹ thuật viên Bộ môn Hóa phân tích độc chất- Trường Đại học Dược Hà Nội ban lãnh đạo toàn thể anh/ chị cán bộ, công nhân viên Labo Hóa – Viện Kiểm nghiệm an toàn vệ sinh thực phẩm quốc gia tạo điều kiện tốt sở vật chất để em hoàn thành luận văn Em xin chân thành cảm ơn thầy cô Ban Giám hiệu, Phòng Sau đại học thầy cô giáo Trường Đại học Dược Hà Nội truyền đạt cho em kiến thức, kinh nghiệm quý báu suốt thời gian em học tập trường Cuối cùng, em xin cảm ơn gia đình bạn bè, người động viên, khích lệ tạo động lực cho em suốt trình học tập thực đề tài Hà Nội, ngày tháng 10 năm 2014 Học viên DS Ngô Minh Thúy WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ VÀ ĐỒ THỊ ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 TỔNG QUAN VỀ ATENOLOL 1.1.1 Tính chất 1.1.2 Dược lý chế tác dụng 1.2 TỔNG QUAN VỀ KỸ THUẬT ĐIỆN DI MAO QUẢN 1.2.1 Khái niệm 1.2.2 Nguyên lý trình điện di mao quản 1.2.3 Điện di mao quản vùng 1.3 VÀI NÉT VỀ PHÂN TÍCH ĐỒNG PHÂN QUANG HỌC 1.3.1 Đồng phân quang học 1.3.2 Phương pháp phân tách đồng phân đối quang 1.3.2.1 Phương pháp phân tách đồng phân đối quang gián tiếp 1.3.2.2 Phương pháp phân tách đồng phân đối quang trực tiếp 10 1.3.3 Ứng dụng điện di mao quản (CE) phân tích đồng phân quang học 12 1.4 TÁCH ĐỒNG PHÂN ĐỐI QUANG BẰNG CE SỬ DỤNG CYCLODEXTRIN LÀM TÁC NHÂN CHỌN LỌC ĐỐI QUANG 13 1.4.1 Tổng quan cyclodextrin 13 1.4.2 Tách đồng phân đối quang CE sử dụng cyclodextrin tác nhân chọn lọc đối quang 15 1.5 MỘT SỐ NGHIÊN CỨU PHÂN TÍCH ĐỒNG PHÂN ĐỐI QUANG CỦA ATENOLOL 16 1.5.1 Nghiên cứu nước 16 1.5.2 Nghiên cứu giới 17 WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU, HÓA CHẤT, TRANG THIẾT BỊ 20 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 20 2.1.2 Hóa chất, trang thiết bị 20 2.2 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 21 2.2.1 Hoàn thiện phương pháp định lượng đồng phân đối quang atenolol điện di mao quản 21 2.2.2 Thẩm định phương pháp phân tích 21 2.2.3 Ứng dụng 22 2.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22 2.3.1 Chuẩn bị dung dịch chuẩn, dung dịch mẫu dung dịch làm việc 22 2.3.2 Khảo sát lựa chọn điều kiện điện di 23 2.3.3 Thẩm định phương pháp phân tích 24 2.3.4 Ứng dụng 26 2.3.5 Phương pháp xử lý số liệu 27 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 28 3.1 KHẢO SÁT VÀ LỰA CHỌN ĐIỀU KIỆN ĐIỆN DI 28 3.1.1 Lựa chọn dung dịch điện ly 28 3.1.2 Lựa chọn bước sóng phát 29 3.1.3 Lựa chọn cột mao quản 29 3.1.4 Lựa chọn hiệu điện áp vào hai đầu mao quản 30 3.1.5 Lựa chọn nồng độ tác nhân chọn lọc đối quang 33 3.2 THẨM ĐỊNH PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH 35 3.2.1 Xác định hàm lượng đồng phân R, S-atenolol chuẩn atenolol racemic 35 3.2.2 Độ phù hợp hệ thống 36 3.2.3 Độ đặc hiệu 37 3.2.4 Khoảng nồng độ tuyến tính 38 3.2.5 Độ xác 41 WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM 3.2.6 Độ 42 3.3 ỨNG DỤNG 3.3.1 ĐỊNH LƯỢNG CÁC ĐỒNG PHÂN ĐỐI QUANG CỦA ATENOLOL TRONG MỘT SỐ CHẾ PHẨM 44 3.3.2 ĐÁNH GIÁ ĐỘ HÒA TAN CÁC ĐỒNG PHÂN CỦA ATENOLOL TRONG CHẾ PHẨM VIÊN NÉN 45 CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN 47 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 53 TÀI LIỆU THAM KHẢO WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT AGP Acid α1-glycoprotein BGE ( Background Electrolyte ) Dung dịch điện ly BSA ( Bovine Serum Albumine ) Albumin huyết bò CE ( Capillary Electrophoresis ) Điện di mao quản CGE (Capillary Gel Electrophoresis) Điện di mao quản gel CZE (Capillary Zone Electrophoresis) Điện di mao quản vùng β-CD Beta cyclodextrin Carboxymethyl beta cyclodextrin Dimethyl beta cyclodextrin CM-β-CD DM-β-CD EOF ( Electro-osmotic flow ) Dòng điện thẩm Hydroxypropyl beta HP-β-CD cyclodextrin HPLC ( High Performance Liquid Chromatography) Sắc ký lỏng hiệu cao HSA ( Human Serum Albumine ) Albumin huyết người MEKC (Micellar Electrokinetic Chromatography) Sắc ký điện động mixen Rs (Resolution) Độ phân giải RSD ( Relative Standard Deviation ) Độ lệch chuẩn tương đối SD (Standard Deviation) Độ lệch chuẩn SĐK Số đăng ký tm Thời gian di chuyển Tris (Hydroxymethy) amimomethan TRIS WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Tính chất số CD tự nhiên 14 Bảng 3.1 Xác định hàm lượng đồng phân chuẩn atenolol racemic 35 Bảng 3.2 Độ phù hợp hệ thống 36 Bảng 3.3 Chuẩn bị dãy dung dịch chuẩn atenolol racemic 39 Bảng 3.4 Quan hệ nồng độ diện tích pic atenolol racemic 39 Bảng 3.5 Quan hệ nồng độ diện tích pic S-atenolol 40 Bảng 3.6 Quan hệ nồng độ diện tích pic R-atenolol 40 Bảng 3.7 Kết đánh giá độ lặp lại mẫu Atenolol STADA 50 mg 41 Bảng 3.8 Kết đánh giá độ xác trung gian mẫu Atenolol STADA 50mg 42 Bảng 3.9 Kết đánh giá khả tìm lại với S-atenolol 43 Bảng 3.10 Kết đánh giá khả tìm lại với R-atenolol 43 Bảng 3.11 Kết định lượng mẫu chế phẩm viên nén chứa atenolol 44 Bảng 3.12 Kết định lượng đồng phân đối quang atenolol mẫu thử hòa tan 46 WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ VÀ ĐỒ THỊ Hình 1.1 Công thức cấu tạo Atenolol Hình 1.2 Sơ đồ hệ thống điện di mao quản Hình 1.3 Sự hình thành dòng EOF Hình 3.1 Điện di đồ sử dụng dung dịch điện ly khác 28 Hình 3.2 Điện di đồ dung dịch atenolol racemic 100 ppm sử dụng với mao quản khác 30 Hình 3.3 Điện di đồ dung dịch chuẩn atenolol racemic điện sử dụng 32 Hình 3.4 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc thời gian di chuyển đồng phân quang học atenolol vào giá trị điện sử dụng 32 Hình 3.5 Điện di đồ dung dịch atenolol racemic 100 ppm thay đổi nồng độ tác nhân chọn lọc đối quang 34 Hình 3.6 Điện di đồ mẫu placebo 37 Hình 3.7 Điện di đồ mẫu atenolol racemic chuẩn 37 Hình 3.8 Điện di đồ mẫu atenolol STADA 37 Hình 3.9 Điện di đồ mẫu S-atenolol 38 Hình 4.1 Vị trí tương tác liên kết hydro 49 WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM ĐẶT VẤN ĐỀ Hiện nay, điều trị lâm sàng sử dụng ngày nhiều thuốc có chứa hoạt chất dạng đồng phân quang học tinh khiết, giúp nâng cao hiệu điều trị, giảm liều dùng hạn chế nhiều tác dụng không mong muốn so với dùng thuốc có chứa hoạt chất dạng hỗn hợp racemic Ví dụ: levofloxacin (đồng phân tả tuyền ofloxacin) có tác dụng kháng khuẩn mạnh gấp hàng chục đến hàng trăm lần dextrofloxacin (đồng phân hữu tuyền ofloxacin) [4], dexchlorpheniramin maleat (đồng phân hữu tuyền chlorpheniramin maleat) thuốc kháng Histamin H1 dùng điều trị dị ứng có tác dụng mạnh gấp hai lần chlorpheniramin maleat (dạng racemic) với liều lượng dạng đồng phân tả tuyền tác dụng, cho phép liều dùng nửa [3], lamivudin có hai đồng phân đối quang có tác dụng HIV tương đương nhau, đồng phân (-) lamivudin có độc tính tế bào thấp so với đồng phân (+) lamivudin [18] Trong sống đại ngày nay, xu hướng bệnh tiểu đường, rối loạn lipid máu, bệnh tim mạch ngày tăng nhanh Đặc biệt, với nhóm thuốc tim mạch thời gian điều trị thường kéo dài, việc sử dụng thuốc dạng đồng phân quang học tinh khiết lại có ý nghĩa quan trọng Atenolol dẫn chất aryloxypropanolamin, có tác dụng chẹn chọn lọc thụ thể β1- adrenergic dùng điều trị tăng huyết áp, đau thắt ngực mạn tính ổn định, nhồi máu tim sớm (trong vòng 12 đầu) dự phòng sau nhồi máu tim, loạn nhịp nhanh thất [2] Với carbon bất đối phân tử, atenolol hỗn hợp racemic hai đồng phân đối quang: S-atenolol R-atenolol Một số nghiên cứu chứng minh S-atenolol có vai trò chẹn beta giao cảm dùng atenolol dạng hỗn hợp racemic, đồng thời độc tính thấp so với dạng R-atenolol [20], [25], [26] Do việc sản xuất sử dụng đồng phân S-atenolol ngày quan tâm nhiều Điều đòi hỏi phải xây dựng phương pháp phân tách định lượng dạng đơn đồng phân hỗn hợp racemic atenolol -1WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON Data File C:\CHEM32\1\DATA\ATENOLOL\130518000450.D Sample Name: ate 120 ppm WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM Signal 1: DAD1 D, Sig=194,4 Ref=360,100 Peak MigTime measured Width Area Height Area mobility # [min] [cm²/Vs] [min] [mAU*s] [mAU] % | -| | -| | | | 8.654 0.000 0.2060 318.70081 25.78617 49.6281 9.292 0.000 0.2464 323.47766 21.88113 50.3719 Totals : 642.17847 47.66730 ===================================================================== Summed Peaks Report ===================================================================== Signal 1: DAD1 D, Sig=194,4 Ref=360,100 ===================================================================== Final Summed Peaks Report ===================================================================== Signal 1: DAD1 D, Sig=194,4 Ref=360,100 *** End of Report *** Instrument 7/14/2014 4:41:30 PM THUY WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON Page of Data File C:\CHEM32\1\DATA\ATENOLOL\130518000474.D Sample Name: ate 40 ppm WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM ===================================================================== Acq Operator : THUY Acq Instrument : Instrument Location : Vial Injection Date : 7/10/2014 10:01:18 AM Acq Method : C:\CHEM32\1\METHODS\CE\ATE811M.M Last changed : 7/10/2014 9:49:40 AM by THUY Analysis Method : C:\CHEM32\1\DATA\ATENOLOL\130518000474.D\DA.M (ATE811M.M) Last changed : 7/10/2014 10:11:32 AM by THUY Method Info : ATENOLOL Sample Info : 50mM Tris, pH 3.996, CMCD 8mM 25kV, 50mbar/3s, Ate 40 p pm, 20 C 69 :1 07 Ar ea 8.790 Ar ea 40 :1 06 16 9.403 DAD1 D, Sig=194,4 Ref=360,100 (ATENOLOL\130518000474.D) mAU 30 20 10 HPCE1 V, Voltage (ATENOLOL\130518000474.D) min kV 20 15 10 ===================================================================== Area Percent Report ===================================================================== Sorted By : Signal Area Calculation Mode : Measured Area Multiplier : 1.0000 Dilution : 1.0000 Use Multiplier & Dilution Factor with ISTDs Instrument 7/14/2014 4:50:31 PM THUY WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON Page of Data File C:\CHEM32\1\DATA\ATENOLOL\130518000474.D Sample Name: ate 40 ppm WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM Signal 1: DAD1 D, Sig=194,4 Ref=360,100 Peak MigTime measured Width Area Height Area mobility # [min] [cm²/Vs] [min] [mAU*s] [mAU] % | -| | -| | | | 8.790 0.000 0.1410 106.41573 12.57778 49.7004 9.403 0.000 0.1617 107.69884 11.10371 50.2996 Totals : 214.11457 23.68149 ===================================================================== Summed Peaks Report ===================================================================== Signal 1: DAD1 D, Sig=194,4 Ref=360,100 ===================================================================== Final Summed Peaks Report ===================================================================== Signal 1: DAD1 D, Sig=194,4 Ref=360,100 *** End of Report *** Instrument 7/14/2014 4:50:31 PM THUY WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON Page of Data File C:\CHEM32\1\DATA\ATENOLOL\130518000476.D Sample Name: ate 60 ppm WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM ===================================================================== Acq Operator : THUY Acq Instrument : Instrument Location : Vial Injection Date : 7/10/2014 10:43:41 AM Acq Method : C:\CHEM32\1\METHODS\CE\ATE811M.M Last changed : 7/10/2014 10:32:18 AM by THUY Analysis Method : C:\CHEM32\1\DATA\ATENOLOL\130518000476.D\DA.M (ATE811M.M) Last changed : 7/14/2014 4:53:33 PM by THUY Method Info : ATENOLOL Sample Info : 50mM Tris, pH 3.996, CMCD 8mM 25kV, 50mbar/3s, Ate 60 p pm, 20 C 7.699 Ar ea 50 :1 608.166 Ar 95 ea :1 62 97 DAD1 D, Sig=194,4 Ref=360,100 (ATENOLOL\130518000476.D) mAU 40 30 20 10 HPCE1 V, Voltage (ATENOLOL\130518000476.D) 10 10 kV 20 15 10 ===================================================================== Area Percent Report ===================================================================== Sorted By : Signal Area Calculation Mode : Measured Area Multiplier : 1.0000 Dilution : 1.0000 Use Multiplier & Dilution Factor with ISTDs Instrument 7/14/2014 4:54:56 PM THUY WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON Page of Data File C:\CHEM32\1\DATA\ATENOLOL\130518000476.D Sample Name: ate 60 ppm WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM Signal 1: DAD1 D, Sig=194,4 Ref=360,100 Peak MigTime measured Width Area Height Area mobility # [min] [cm²/Vs] [min] [mAU*s] [mAU] % | -| | -| | | | 7.699 0.000 0.1447 160.39511 18.47349 49.7207 8.166 0.000 0.1766 162.19687 15.30437 50.2793 Totals : 322.59198 33.77787 ===================================================================== Summed Peaks Report ===================================================================== Signal 1: DAD1 D, Sig=194,4 Ref=360,100 ===================================================================== Final Summed Peaks Report ===================================================================== Signal 1: DAD1 D, Sig=194,4 Ref=360,100 *** End of Report *** Instrument 7/14/2014 4:54:56 PM THUY WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON Page of Data File C:\CHEM32\1\DATA\ATENOLOL\130518000477.D Sample Name: ate 80 ppm WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM ===================================================================== Acq Operator : THUY Acq Instrument : Instrument Location : Vial 10 Injection Date : 7/10/2014 11:06:02 AM Acq Method : C:\CHEM32\1\METHODS\CE\ATE811M.M Last changed : 7/10/2014 10:54:28 AM by THUY Analysis Method : C:\CHEM32\1\DATA\ATENOLOL\130518000477.D\DA.M (ATE811M.M) Last changed : 7/15/2014 10:49:59 AM by THUY Method Info : ATENOLOL Sample Info : 50mM Tris, pH 3.996, CMCD 8mM 25kV, 50mbar/3s, Ate 80 p pm, 20 C :2 09 7.794 39 :2 14 38 Ar ea 50 40 Ar ea 7.377 DAD1 D, Sig=194,4 Ref=360,100 (ATENOLOL\130518000477.D) mAU 30 20 10 HPCE1 V, Voltage (ATENOLOL\130518000477.D) min kV 20 15 10 ===================================================================== Area Percent Report ===================================================================== Sorted By : Signal Area Calculation Mode : Measured Area Multiplier : 1.0000 Dilution : 1.0000 Use Multiplier & Dilution Factor with ISTDs Instrument 7/15/2014 10:55:34 AM THUY WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON Page of Data File C:\CHEM32\1\DATA\ATENOLOL\130518000477.D Sample Name: ate 80 ppm WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM Signal 1: DAD1 D, Sig=194,4 Ref=360,100 Peak MigTime measured Width Area Height Area mobility # [min] [cm²/Vs] [min] [mAU*s] [mAU] % | -| | -| | | | 7.377 0.000 0.1493 209.33878 23.36200 49.4333 7.794 0.000 0.1856 214.13847 19.22924 50.5667 Totals : 423.47725 42.59125 ===================================================================== Summed Peaks Report ===================================================================== Signal 1: DAD1 D, Sig=194,4 Ref=360,100 ===================================================================== Final Summed Peaks Report ===================================================================== Signal 1: DAD1 D, Sig=194,4 Ref=360,100 *** End of Report *** Instrument 7/15/2014 10:55:34 AM THUY WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON Page of WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM ĐIỆN DI ĐỒ ỨNG DỤNG ĐỊNH LƯỢNG VÀ ĐÁNH GIÁ ĐỘ HÒA TAN CÁC ĐỒNG PHÂN QUANG HỌC CỦA ATENOLOL TRONG CHẾ PHẨM VIÊN NÉN WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON Data File C:\CHEM32\1\DATA\ATENOLOL\130518000521.D Sample Name: ate 100 ppm WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM ===================================================================== Acq Operator : THUY Acq Instrument : Instrument Location : Vial Injection Date : 7/14/2014 1:10:12 PM Acq Method : C:\CHEM32\1\METHODS\CE\ATE811M.M Last changed : 7/14/2014 12:59:11 PM by THUY Analysis Method : C:\CHEM32\1\DATA\ATENOLOL\130518000521.D\DA.M (ATE811M.M) Last changed : 8/11/2014 11:58:11 AM by THUY (modified after loading) Method Info : ATENOLOL Sample Info : 50mM Tris, pH 3.996, CMCD 8mM 25kV, 50mbar/3s, Atenolol 100ppm, 20 C Ar ea 120 81 :2 77 140 Ar ea mAU :2 64 98 9.623 8.957 DAD1 D, Sig=194,4 Ref=360,100 (ATENOLOL\130518000521.D) 100 80 60 40 20 10 ===================================================================== Area Percent Report ===================================================================== Sorted By : Signal Area Calculation Mode : Measured Area Multiplier : 1.0000 Dilution : 1.0000 Use Multiplier & Dilution Factor with ISTDs Signal 1: DAD1 D, Sig=194,4 Ref=360,100 Peak MigTime measured Width Area Height Area mobility # [min] [cm²/Vs] [min] [mAU*s] [mAU] % | -| | -| | | | 8.957 0.000 0.1593 264.69760 27.69395 48.7912 9.623 0.000 0.1904 277.81281 24.31980 51.2088 Totals : 542.51041 52.01375 ===================================================================== Summed Peaks Report WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON Instrument 8/11/2014 11:58:14 AM THUY Page of Data File C:\CHEM32\1\DATA\ATENOLOL\130518000695.D Sample Name: Atenolol TEN WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM ===================================================================== Acq Operator : THUY Acq Instrument : Instrument Location : Vial Injection Date : 7/28/2014 4:05:25 PM Acq Method : C:\CHEM32\1\METHODS\CE\ATE811M.M Last changed : 7/28/2014 3:52:58 PM by THUY Analysis Method : C:\CHEM32\1\DATA\ATENOLOL\130518000695.D\DA.M (ATE811M.M) Last changed : 8/11/2014 4:48:09 PM by THUY (modified after loading) Method Info : ATENOLOL Sample Info : 50mM Tris, pH 3.996, CMCD 8mM 25kV, 50mbar/3s, Atenolol , 20 C Ar ea 200 :2 70 9.011 68 :2 74 92 mAU Ar ea 8.508 DAD1 D, Sig=194,4 Ref=360,100 (ATENOLOL\130518000695.D) 150 100 50 10 ===================================================================== Area Percent Report ===================================================================== Sorted By : Signal Area Calculation Mode : Measured Area Multiplier : 1.0000 Dilution : 1.0000 Use Multiplier & Dilution Factor with ISTDs Signal 1: DAD1 D, Sig=194,4 Ref=360,100 Peak MigTime measured Width Area Height Area mobility # [min] [cm²/Vs] [min] [mAU*s] [mAU] % | -| | -| | | | 8.508 0.000 0.1785 270.96829 25.29836 49.6679 9.011 0.000 0.2247 274.59229 20.36909 50.3321 Totals : 545.56058 45.66746 ===================================================================== Summed Peaks Report WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON Instrument 8/11/2014 4:48:11 PM THUY Page of Data File C:\CHEM32\1\DATA\ATENOLOL\130518000419.D Sample Name: ate 100 ppm WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM ===================================================================== Acq Operator : THUY Acq Instrument : Instrument Location : Vial 10 Injection Date : 7/7/2014 10:25:42 AM Acq Method : C:\CHEM32\1\METHODS\CE\ATE811M.M Last changed : 7/7/2014 10:11:40 AM by THUY (modified after loading) Analysis Method : C:\CHEM32\1\DATA\ATENOLOL\130518000419.D\DA.M (ATE811M.M) Last changed : 8/12/2014 9:56:01 AM by THUY (modified after loading) Method Info : ATENOLOL Sample Info : 50mM Tris, pH 3.996, CMCD 8mM 25kV, 50mbar/3s,Atenolol 100 ppm, 20 C 9.339 Ar ea 50 :2 69 91 10.079 Ar ea :2 77 DAD1 D, Sig=194,4 Ref=360,100 (ATENOLOL\130518000419.D) mAU 40 30 20 10 10 ===================================================================== Area Percent Report ===================================================================== Sorted By : Signal Area Calculation Mode : Measured Area Multiplier : 1.0000 Dilution : 1.0000 Use Multiplier & Dilution Factor with ISTDs Signal 1: DAD1 D, Sig=194,4 Ref=360,100 Peak MigTime measured Width Area Height Area mobility # [min] [cm²/Vs] [min] [mAU*s] [mAU] % | -| | -| | | | 9.339 0.000 0.1822 269.59055 24.66550 49.2619 10.079 0.000 0.2296 277.66965 20.15739 50.7381 Totals : 547.26019 44.82289 ===================================================================== WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON Instrument 8/12/2014 9:56:18 AM THUY Page of Data File C:\CHEM32\1\DATA\ATENOLOL\130518000602.D Sample Name: Atenolol STD WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM ===================================================================== Acq Operator : THUY Acq Instrument : Instrument Location : Vial Injection Date : 7/21/2014 11:18:39 AM Acq Method : C:\CHEM32\1\METHODS\CE\ATE811M.M Last changed : 7/21/2014 11:07:35 AM by THUY Analysis Method : C:\CHEM32\1\DATA\ATENOLOL\130518000602.D\DA.M (ATE811M.M) Last changed : 8/12/2014 12:29:33 PM by THUY (modified after loading) Method Info : ATENOLOL Sample Info : 50mM Tris, pH 3.996, CMCD 8mM 25kV, 50mbar/3s, Atenolol STD, 20 C 9.303 mAU Ar ea 200 :2 66 Ar 10.048 52 ea :2 72 11 DAD1 D, Sig=194,4 Ref=360,100 (ATENOLOL\130518000602.D) 150 100 50 10 12 ===================================================================== Area Percent Report ===================================================================== Sorted By : Signal Area Calculation Mode : Measured Area Multiplier : 1.0000 Dilution : 1.0000 Use Multiplier & Dilution Factor with ISTDs Signal 1: DAD1 D, Sig=194,4 Ref=360,100 Peak MigTime measured Width Area Height Area mobility # [min] [cm²/Vs] [min] [mAU*s] [mAU] % | -| | -| | | | 9.303 0.000 0.2097 266.95248 21.21535 49.4665 10.048 0.000 0.2919 272.71072 15.57271 50.5335 Totals : 539.66321 36.78807 ===================================================================== Summed Peaks Report WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON Instrument 8/12/2014 12:29:35 PM THUY Page of WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM QUY TRÌNH PHÂN TÍCH ĐỒNG PHÂN ĐỐI QUANG CỦA ATENOLOL BẰNG CE WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM Quy trình phân tích đồng phân đối quang atenolol CE Phạm vi áp dụng Phân tích đồng phân đối quang atenolol chế phẩm thuốc Thiết bị, hóa chất, thuốc thử 2.1 Thiết bị − Máy điện di mao quản trang bị detector PDA − Cân phân tích có độ xác tới 0,1 mg − Thiết bị xử lý nước tinh khiết trao đổi ion siêu lọc 0,2 µm − Máy đo pH − Các thiết bị thí nghiệm cần thiết khác (dụng cụ thủy tinh xác cấp A, máy lắc siêu âm, lọc dung môi…) − Các thiết bị phân tích sử dụng trình nghiên cứu hiệu chuẩn sử dụng theo quy định ISO/IEC 17025 GLP 2.2 Hóa chất, thuốc thử − Hóa chất tinh khiết phân tích: carboxymethyl-β-cyclodextrin, dạng muối natri, acid phosphoric 85%, natri hydroxyd − Chất đối chiếu atenolol racemic − Chất đối chiếu S-atenolol Điều kiện phân tích − Cột mao quản có chiều dài tổng cộng 48,5 cm, chiều dài hiệu dụng 40 cm, đường kính 50µm − Hiệu điện thế: 25kV − Nhiệt độ cột: 20oC − Bước sóng phát hiện: 194 nm − Dung dịch điện di: Tris 50 mM điều chỉnh tới pH 4,0 acid H3PO4 đặc, chứa CM-β-CD 8mM − Tiêm mẫu: 50mbar 3s WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON WWW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM − Xử lý mao quản mới: Trước sử dụng lần đầu tiên, cột mao quản rửa với methanol 15 phút, dung dịch acid hydrocloric 0,1 M 15 phút, dung dịch NaOH 1M 30 phút − Giữa lần chạy, chương trình luyện cột (preconditioning) thực với nước phút, dung dịch NaOH 0,1 M phút, nước phút, BGE phút − Dung dịch chuẩn atenolol racemic: cân xác khoảng 25 mg chuẩn atenolol racemic vào bình định mức 25 ml, thêm khoảng 20 ml dung dịch đệm Tris 50 mM, siêu âm 15 phút, sau bổ sung dung dịch đệm vừa đủ Hút xác 0,5 ml dung dịch thu được, pha loãng dung dịch đệm Tris thành ml, lọc qua màng lọc 0,2 µm − Dung dịch thử: Cân lượng bột viên tương ứng với khoảng 25 mg atenolol cho vào bình định mức 25 ml, thêm khoảng 20 ml đệm Tris, siêu âm 15 phút, sau bổ sung dung dịch đệm vừa đủ, lọc thu lấy dịch lọc Lấy 0,5 ml dịch lọc cho vào bình định mức ml, bổ sung dung dịch đệm Tris 50 mM đến vạch, lắc Tiến hành Tiến hành điện di riêng biệt dung dịch chuẩn dung dịch thử Ghi lại đáp ứng pic điện di đồ Đánh giá kết phân tích cách so sánh đáp ứng (diện tích, thời gian di chuyển) pic điện di đồ dung dịch thử dung dịch chuẩn, lượng cân mẫu thử, hàm lượng lượng cân chuẩn, độ pha loãng dung dịch chuẩn dung dịch thử WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON ... lượng đồng phân đối quang Atenolol điện di mao quản Với hai mục tiêu: Hoàn thiện thẩm định phương pháp định lượng đồng phân đối quang atenolol điện di mao quản Ứng dụng phương pháp định lượng. .. điện di mao quản 1.2.3 Điện di mao quản vùng 1.3 VÀI NÉT VỀ PHÂN TÍCH ĐỒNG PHÂN QUANG HỌC 1.3.1 Đồng phân quang học 1.3.2 Phương pháp phân tách đồng phân đối quang. .. Phương pháp phân tách đồng phân đối quang gián tiếp 1.3.2.2 Phương pháp phân tách đồng phân đối quang trực tiếp 10 1.3.3 Ứng dụng điện di mao quản (CE) phân tích đồng phân quang học