PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG STAPHYLOCOCCUS AUREUS 17-06-2015 PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG STAPHYLOCOCCUS AUREUS 1.1 ĐỊNH LƯỢNG STAPHYLOCOCCUS AUREUS 1.1.1 Phạm vi áp dụng Phương pháp (tham chiếu theo NMKL 66 4th ed 2003) dùng để định lượng Staphylococcus aureuscho tất loại thực phẩm 1.1.2 Định nghĩa Staphylococcus aureus vi sinh vật gram dương, hình cầu, cho phản ứng catalase coagulase dương tính 1.1.3 Nguyên tắc Định lượng Staphylococcus aureus thực cách cấy trang lượng mẫu biết lên môi trường thạch Baird Parker, vi khuẩn cho khuẩn lạc đặc trưng xác định phản ứng coagulase Một vài chủng cho coagulase âm tính tạo độc tố đường ruột 1.1.4 Môi trường Dung dịch Saline Peptone Water (SPW) Thạch Trypton Soya Agar (TSA) Thạch Baird Parker (BP) Canh Brain Hart Infusion (BHI) Huyết tương thỏ 1.1.5 Thiết bị Tủ ấm 37,0 oC ± 1,0 oC 1.1.6 Qui trình 1.1.6.1 Chuẩn bị mẫu: Tham chiếu theo mục 5.10-Phần 5- Sổ tay hướng dẫn chung kiểm nghiệm ST5.4/PKN3 1.1.6.2 Cấy mẫu: Cấy trang 0,1 ml dịch mẫu nồng độ thích hợp que cấy hình tam giác trùng môi trường Baird Parker Đối với mẫu lỏng: Nếu số lượng Staphylococcus aureus thấp giới hạn phát nâng hệ số 10 lần nghĩa cấy ml dịch mẫu ban đầu (chưa pha loãng) cấy vào đĩa Đối với mẫu khác dùng ml dịch mẫu ban đầu (chưa pha loãng) cấy vào đĩa Kết đĩa xử lý đĩa trình đọc, khẳng định báo cáo kết 1.1.6.3 Nuôi ủ: Lật ngược đĩa ủ 37 oC ± 1,0 oC (24 ± 3) h (48 ± 4) h 1.1.6.4 Đọc kết quả: Sau (24 ± 3) h, môi trường Baird Paker Agar khuẩn lạc Staphylococcus aureus có đường kính (1,0 đến 1,5) mm, màu đen hay xám, sáng lồi Có vòng sáng đục hẹp bao quanh khuẩn lạc Những khuẩn lạc điển hình đánh dấu tiếp tục ủ 24 h Sau (48 ± 4) h, khuẩn lạc Staphylococcus aureus có đường kính (1,5 đến 2,0) mm Hầu hết khuẩn lạc thường bao quanh vùng sáng Một vài chủng vòng sáng hay vòng đục bao quanh (không điển hình) Cả hai loại khuẩn lạc đánh dấu đĩa petri 1.1.6.5 Khẳng định: Cấy chuyển khuẩn lạc điển hình khuẩn lạc không điển hình từ BP sang môi trường TSA ủ 37,0 oC ± 1,0 oC (24 ± 3) h Từ môi trường TSA cấy chuyển vi khuẩn sang ống nghiệm có chứa 0,3 ml huyết tương thỏ, ủ 37,0 oC ± 1,0 oC Kiểm tra hình thành khối đông sau (1, 3, 24) h Đọc kết test coagulase: * Dương tính: Nếu khối đông hình thành (hoàn toàn hay 1/2) * Âm tính: Không hình thành khối đông, dịch huyền phù giữ nguyên (giống dịch mẫu chưa ủ) 1.1.6.6 Tính kết quả: Số lượng Staphylococcus aureus tính theo công thức sau: Cs = (F1 x Nt x Ht ) + (F2 x Na x Ha ) Trong đó: * F1, F2: Nồng độ pha loãng mẫu * Nt: Tổng số khuẩn lạc điển hình đĩa * Na: Tổng số khuẩn lạc không điển hình đĩa Số khuẩn lạc điển hình thử nghiệm cho kết dương tính Ht = -Số khuẩn lạc điển hình thử nghiệm Ha = • Số khuẩn lạc không điển hình thử nghiệm cho kết dương tính -Số khuẩn lạc không điển hình thử nghiệm Kết ghi vào biểu mẫu ST5.4/PKN1/B4 Chú ý: Trong trường hợp số khuẩn lạc nằm khoảng 20 đến 200, đếm số khuẩn lạc điển hình không điển hình, sau thử nghiệm coagulase kết theo công thức ghi rõ biểu mẫu Staphylococcus aureus Bách khoa toàn thư mở Wikipedia Staphylococcus aureus Staphylococcus aureus kính vi điện tử 20,000x Phân loại khoa học Vực (domain) Bacteria Giới (regnum) Eubacteria Ngành (phylum) Firmicutes Lớp (class) Bacilli Bộ (ordo) Bacillales Họ (familia) Staphylococcaceae Chi (genus) Staphylococcus Loài (species) S aureus Danh pháp hai phần Staphylococcus aureus ROSENBACH, 1884 Staphylococcus Aureus Phân loại tư liệu bên [[Tập tin:{{{Image}}}|frameless|upright=1|alt=]] ICD-9 041.11 Những khúm vàng S aureus dĩa thạch agar Chú ý vùng trống xung quanh khúm, phân giải hồng cầu thạch (tan huyết beta) Staphylococcus aureus (phát âm /ˌstæfɨlɵˈkɒkəs ˈɔri.əs/, hay Tụ cầu vàng loài tụ cầu khuẩn Gram-dương kỵ khí tùy nghi, nguyên nhân thông thường gây nhiễm khuẩn loài tụ cầu Nó phần hệ vi sinh vật sống thường trú da tìm thấy mũi da Khoảng 20% dân số loài người vật mang lâu dài S aureus.[1] Sắc tốcarotenoid staphyloxanthin làm nên tính chất màu vàng 'S aureus', vốn thấy từ khúm cấy thạch vi khuẩn Sắc tố đóng vai trò tác nhân độc hại có tính chất chống ôxy hóa giúp cho vi sinh vật không bị chết chủng oxy gây phản ứng sử dụng hệ thống miễn dịch Các tụ cầu thiếu sắc tố dễ dàng bị tiêu diệt hệ thống miễn dịch thể ký chủ Đặc tính sinh học:'''Hình thái: - hình cầu - Đường kính 0,7 - µm - Không sinh nha bào, lông - Một số chủng có giáp mô - Trong bệnh phẩm vi khuẩn thường xếp thành đôi, đám nhỏ, hay gặp vi khuẩn xếp thành đám giống chùm nho - Vi khuẩn Gram + Cấu trúc kháng nguyên: Tụ cấu có cấu trúc kháng nguyên phức tạp mành tế bào vi khuẩn có loại kháng nguyên: - Protein A - Techoic acid - Peptidoglycan (glucopeptid) Sức đề kháng: - Vi khuẩn đề kháng với nhiệt độ: + 70⁰C / 1h + 80⁰C / 10 - 30 phút + 100⁰C / sau vài phút - Chất sát trùng thông thường diệt vi khuẩn nhanh - Nơi khô vi khuẩn sống 200 ngày - Vi khuẩn đề kháng cao nhiệt độ lạnh Hình ảnh[sửa | sửa mã nguồn] • • • • Chú thích[sửa | sửa mã nguồn] Ngộ độc độc tố tụ cầu khuẩn staphhylococcus aureus 14-07-2016 Tụ cầu vi khuẩn phổ biến rộng rãi thiên nhiên: không khí, đất, nước, niêm dịch mũi, khoang miệng họng người động vật, da mụn ghẻ lở,mưng mủ, …và đặc biệt vú bò sữa bị viêm Staphylococcus aureus (S.aureus) có hình cầu kết thành chùm thành đám, không chuyển động, không tạo thành bào tử, chịu đựng khô hạn, sinh sắc tố môi trường nuôi cấy Nhiệt độ tối thích cho sinh trưởng chúng 370C, độc tố tạo thành 40C.Tụ cầu chịu nhiệt độ tới 700C, 800C850C chết sau 20-25 phút Chúng thể hiếu khí tùy tiện, môi trường thích hợp cho chúng phát triển pH trung tính,axit kiềm nhẹ, pH ngừng phát triển Tụ cầu khuẩn chịu dung dịch muối có nồng độ tới 12% đường tới 50%; chúng tồn số bánh kem có nồng độ đường cao, mát mặn, kem sữa, ăn chế biến từ thịt, cá S.aureus sinh độc tố có tính chất gây ngộ độc khác nhau: gây viêm họng, gây viêm da mưng mủ, gây dung giải hồng cầu Tụ cầu phát triển thực phẩm sinh ngoại độc tố ruột (Enterotoxin),gây ngộ độc thức ăn Đặc điểm độc tố ruột bền với nhiệt (ở nước sôi 30 phút không bị phá hủy), chịu môi trường pH = cồn Ở nhiệt độ thấp độc tố giữ hoạt tính tháng Để phá hủy hoàn toàn Enterotoxindo tụ cầu S.aureus sinh phải đun sôi thực phẩm liền hấp áp lực nước 1200C 30 phút Độc tố ruột Enterotoxin sinh chất khác không giống thời gian số lượng tạo thành: cháo gạo, khoai tây, S.aureus sinh Enterotoxin nhanh nhiều sữa; đặc biệt môi trường giàu Protein chất béo, vi khuẩn phát triển nhanh sau 24 số vi khuẩn tăng lên 200.000 đến 500.000 lần tạo thành nhiều độc tố Trong sữa cháo gạo bị nhiễm khuẩn, độc tố thường tích tụ sau 6-12 điều kiện 15 0C-220C, 5-60C vi khuẩn phát triển chậm 0C ngừng lại Vi khuẩn phát triển tốt sinh độc tố nhanh 37 0C (khoảng từ 30-370C); cháo gạo, khoai tây nghiền, bánh mỳ kẹp thịt… sau 3-4 tích tụ đủ lượng độc tố gây ngộ độc Như vậy, điều kiện bình thường sản phẩm thực phẩm S.aureus phát triển tạo thành độc tố nhanh, ngộ độc thực phẩm nước ta thường tụ cầu Trong thời gian gần đây, nước ta xảy vụ ngộ độc thực phẩm mà nguyên nhân thức ăncó nhiễm vi khuẩn tụ cầu vàng Ngày 26/3/2015 Công ty TNHH CY Vina -KCN Long Đức- Tp Trà Vinh làm 229 người mắc ăn thịt gà chiên nhiễm độc tố vi khuẩn tụ cầu vàng; thành phố Quảng Ngãi (24/4/2015) xảy vụ ngộ độc thực phẩm làm 28 người mắc ăn bánh mỳ nhiễm khuẩn tụ cầu vàng Tại tỉnh ta, từ tháng 5-7/2015 xảy 02 vụ ngộ độc thực phẩm sau ăn cỗ cưới: vụ ngộ độc làm 137 người mắc xã Bản Cảm- Cổ Linh – Bắc Kạn vụ ngộ độc làm 43 người mắc thôn Nà Đán- xã Đôn Phong- huyện Bạch Thông Mặc dù vụ ngộ độc không gây tử vong, hồi chuông đáng lo ngại an toàn thực phẩm Một điều quan trọng thực phẩm nhiễm tụ cầu nhận biết cảm quan Vì nguy hiểm người tiêu dùng Con người nhạy cảm với độc tố tụ cầu vàng, có tới 90% số người ăn thức ăn nhiễm khuẩn bị ngộ độc Bệnh phát sau ăn khoảng từ 1-6 giờ, tùy thuộc vào lượng độc tố có thức ăn.Triệu chứng lâm sàng bệnh thường lợm giọng, bụng quặn đau, nôn mửa dội, ỉa chảy, mệt mỏi rã rời, có người bị nhức đầu, mồ hôi, co giật cơ,huyết áp hạ, mạch yếu, Do thời gian diễn biến bệnh nhanh khoảng 1-2 ngày hết triệu chứng khỏi, nên tử vong chủ yếu bệnh nhân trẻ em bị dinh dưỡng, người già mắc bệnh mãn tính kèm theo Ngộ độc độc tố tụ cầu vàng hay gặp, ăn phải thức ăn nhiễm khuẩn có tích tụ độc tố bị ngộ độc Các sữa, thịt dễ nguồn gây bệnh Các loại bánh kẹo chế biến từ kem sữa, trứng, hộp chao dầu, thức ăn từ cá, thịt… nhiễm khuẩn hay có độc tố ruột Vì để chủ động phòng chống ngộ độc thực phẩm tụ cầu không dùng loại thịt gia súc, gia cầm bị nhiễm bệnh sữa bò bị viêm vú viêm tuyến vú để chế biến làm thực phẩm Người sản xuất, chế biến thực phẩm bị ghẻ lở, viêm họng, viêm da có mủ, viêm phế quản , không chế biến trực tiếp tiếp xúc với thực phẩm Tác giả viết: CN Vi -Trưởng khoa Tin khác ... (familia) Staphylococcaceae Chi (genus) Staphylococcus Loài (species) S aureus Danh pháp hai phần Staphylococcus aureus ROSENBACH, 1884 Staphylococcus Aureus Phân loại tư liệu bên [[Tập tin:{{{Image}}}|frameless|upright=1|alt=]]... nghiệm coagulase kết theo công thức ghi rõ biểu mẫu Staphylococcus aureus Bách khoa toàn thư mở Wikipedia Staphylococcus aureus Staphylococcus aureus kính vi điện tử 20,000x Phân loại khoa học... khối đông, dịch huyền phù giữ nguyên (giống dịch mẫu chưa ủ) 1.1.6.6 Tính kết quả: Số lượng Staphylococcus aureus tính theo công thức sau: Cs = (F1 x Nt x Ht ) + (F2 x Na x Ha ) Trong đó: * F1,