i LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành chương trình đào tạo cao học trường Đại học Lâm nghiệp, nhằm vận dụng kiến thức học vào thực tiễn, làm quen với công tác nghiên cứu khoa học khả tổng hợp phân tích vấn đề, tác giả tiến hành thực Luận văn tốt nghiệp cao học Trong trình thực hoàn thiện luận văn, tác giả nhận nhiều quan tâm, giúp đỡ đóng góp cán Phòng nghiên cứu Bảo vệ Thực vật rừng – Viện Khoa học Lâm nghiệp Việt Nam, Khoa đào tạo sau Đại học - Trường Đại học Lâm nghiệp, từ gia đình bạn bè đồng nghiệp Tác giả xin chân thành cảm ơn ủng hộ, giúp đỡ Đặc biệt tác giả muốn gửi lời cảm ơn sâu sắc tới PGS TS Phạm Quang Thu, người thầy trực tiếp hướng dẫn khoa học tận tình quan tâm, tạo điều kiện thuận lợi truyền đạt kiến thức quý báu suốt trình thực Luận văn hoàn thiện sở tham khảo nhiều tài liệu có liên quan ý kiến đóng góp nhiều nhà chuyên môn nỗ lực tác giả Tuy nhiên khả năng, điều kiện thời gian hạn chế, chủ đề nghiên cứu hoàn toàn nên luận văn không tránh khỏi thiếu sót Tác giả mong nhận ý kiến đóng góp, xây dựng nhà khoa học bạn bè đồng nghiệp để Luận văn hoàn thiện Xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, tháng năm 2013 Tác giả ii MỤC LỤC Trang Trang phụ bìa Lời cảm ơn i Mục lục .ii Danh mục bảng iv Danh mục hình v ĐẶT VẤN ĐỀ Chương TỔNG QUAN VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 1.1 Nghiên cứu nước 1.1.1 Nghiên cứu phân loại nhóm nấm Đông trùng hạ thảo nấm Đông trùng hạ thảo tuyết (Isaria tenuipes) 1.1.2 Nghiên cứu thành phần hóa học I tenuipes 1.1.3 Nghiên cứu giá trị dược liệu nấm Đông trùng hạ thảo 1.1.4 Nghiên cứu nuôi trồng thể giá thể nuôi cấy sinh khối hệ sợi 1.2 Nghiên cứu nước 1.2.1 Nghiên cứu thành phần loài loài nấm ký sinh côn trùng nấm đông trùng hạ thảo 1.2.2 Nghiên cứu giá trị dược liệu 1.2.3 Nghiên cứu nuôi trồng thể giá thể nuôi cấy sinh khối hệ sợi Chương MỤC TIÊU - ĐỐI TƯỢNG - NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 11 2.1 Mục tiêu nghiên cứu 11 2.2 Đối tượng nghiên cứu 11 2.3 Nội dung nghiên cứu 11 2.3.1 Phân lập chủng nấm Isaria tenuipes Việt Nam 11 2.3.2 Đặc điểm sinh học hệ sợi nuôi cấy khiết 11 2.3.3 Nghiên cứu hoạt tính chủng nấm 11 iii 2.3.4 Nghiên cứu khả hình thành thể giá thể nhân tạo 11 2.4 Phương pháp nghiên cứu 12 2.4.1 Phương pháp phân lập 12 2.4.2 Đặc điểm sinh học hệ sợi nuôi cấy khiết 12 2.4.3 Phương pháp nghiên cứu hoạt tính kháng khuẩn, kháng nấm bê ̣nh chủng nấm Isaria tenuipes 14 2.4.4 Phương pháp nghiên cứu khả hình thành thể quả giá thể nhân tạo 15 Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 16 3.1 Nghiên cứu đặc điểm hình thái, giải phẫu và đặc điểm sinh trưởng chủng nấ m Isaria tenuipes 16 3.1.1 Kế t quả điề u tra, phân lập và nghiên cứu đặc điể m sinh trưởng các chủng nấ m Isaria tenuipes tại vườn Quố c gia Ba Vì 16 3.1.2 Nghiên cứu đặc điểm hình thái, giải phẫu nấ m Isaria tenuipes 19 3.2 Nghiên cứu đặc điểm sinh học hệ sợi nấm điều kiện nuôi cấy khiết 20 3.2.1 Nghiên cứu xác định môi trường dinh dưỡng tối ưu cho nhân sinh khối hệ sợi 20 3.2.2 Nghiên cứu xác định nhiêt độ không khí tối ưu cho trình nhân sinh khối hệ sợi 25 3.2.3 Nghiên cứu ảnh hưởng pH môi trường đến sinh trưởng hệ sợi 29 3.3 Phương pháp nghiên cứu hoạt tính kháng khuẩn, kháng nấm bê ̣nh chủng nấm Isaria tenuipes 33 3.3.1 Bước đầu đánh giá hoạt tính kháng khuẩn nấm Isaria tenuipes 33 3.3.2 Bước đầu đánh giá hoạt tính kháng nấm nấm Isaria tenuipes 36 3.4 Nghiên cứu đánh giá khả hình thành thể giá thể nhân ta ̣o 40 3.4.1 Nghiên cứu đánh giá khả hình thành thể giá thể lỏng 40 3.4.2 Nghiên cứu nuôi trồng thể nấm Isaria tenuipes nhộng tằm 50 KẾT LUẬN - TỒN TẠI - KIẾN NGHỊ 54 TÀI LIỆU THAM KHẢO iv DANH MỤC CÁC BẢNG Tên bảng TT 1.1 1.2 1.3 3.1 3.2 Trang Thành phần sinh hoá nguyên tố khoáng nấm I tenuipes Thành phần acid amin nấm đông trùng hạ thảo I tenuipes Thành phần vitamin nấm Đông trùng hạ thảo I tenuipes Đặc điểm kết phân lập chủng nấm Ba Vì 16 Kết xác định môi trường dinh dưỡng nhân sinh khối hệ sợi nấm Isaria tenuipes 21 3.3 Xác định nhiệt độ không khí tố i ưu cho sinh trưởng nấm 26 3.4 Sinh trưởng của nấ m I tenuipes ở các pH môi trường khác 29 3.5 3.6 3.7 Đường kính vòng ức chế khuẩn B subtilis nấm I tenuipes 33 Đường kính vòng ức chế nấm F oxysporum nấm I tenuipes 37 Xác định môi trường dinh dưỡng tối ưu nuôi trồng thể nấm Isaria tenuipes 40 3.8 Kết xác định nhiệt độ không khí tố i ưu cho nuôi trồng thể 43 3.9 Kết xác định nhiệt độ không khí tố i ưu cho nuôi trồng thể 46 3.10 Kết nghiên cứu khả hình thành thể nấm Isaria tenuipes giá thể nhộng tằm 51 v DANH MỤC CÁC HÌNH Tên hình TT Trang 3.1 Hệ sợi nấm BV2 18 3.2 Hệ sợi nấm BV4 18 3.3 Hệ sợi nấm BV5 18 3.4 Hệ sợi nấm BV6 18 3.5 Hệ sợi nấm BV11 19 3.6 Hệ sợi nấm BV16 19 3.7 Hệ sợi nấm BV17 19 3.8 Thể nấm 20 3.9 Bào tử vô tính 20 3.10 Sinh trưởng ̣ sơ ̣i nấ m ở các môi trường dinh dưỡng khác 22 3.11 Sự khác về đô ̣ dầ y ̣ sơ ̣i nấ m 3.12 3.13 22 Trọng lươ ̣ng tươi ̣ sơ ̣i ở các môi trường dinh dưỡng khác 23 Tro ̣ng lươ ̣ng khô ̣ sơ ̣i ở các môi trường dinh dưỡng khác 24 3.14 Sinh trưởng của nấ m ở thang nhiê ̣t đô ̣ không khí khác 27 3.15 Tro ̣ng lươ ̣ng tươi hệ sơi ở các nhiệt độ không khí khác 28 3.16 Tro ̣ng lươ ̣ng khô hệ sợi ở các nhiệt độ không khí khác 28 3.17 3.18 Hê ̣ sơ ̣i nấm nuôi cấy môi trường CT5 pH khác 30 Hê ̣ sơ ̣i nấm nuôi cấy môi trường CT7 pH khác 30 3.19 Trọng lượng tươi hệ sợi ở pH môi trường khác 32 3.20 Trọng lượng khô hệ sợi ở pH môi trường khác 32 3.21 Đường kính vòng ức chế khuẩn B subtilis nấm I tenuipes 34 vi 3.22 3.23 3.24 Khả kháng khuẩn Bacillus subtilis nấm Isaria tenuipes 35 Khả kháng khuẩn nấm Isaria tenuipes đối chứng 36 Đường kính vòng ức chế nấm F oxysporum nấm I tenuipes 38 3.25 Khả kháng nấm nấm Isaria tenuipes đối chứng 39 3.26 Thể quả nấ m ở CT2,CT4 3.27 Thể quả nấ m ở CT5 41 3.28 3.29 Tro ̣ng lươ ̣ng tươi thể ở các môi trường dinh dưỡng khác 41 42 Tro ̣ng lươ ̣ng khô thể ở các môi trường dinh dưỡng khác 3.30 Thể nấm thang nhiệt độ khác 42 44 3.31 Tro ̣ng lươ ̣ng tươi thể ở các nhiệt độ không khí khác 45 3.32 Tro ̣ng lươ ̣ng khô thể ở các nhiệt độ không khí khác 45 3.33 Thể nấ m I tenuipes pH môi trường khác 47 3.34 Trọng lượng khô thể ở pH môi trường khác 48 3.35 Trọng lượng khô thể ở pH môi trường khác 49 3.36 Hê ̣ sơ ̣i nấ m I tenuipes 49 3.37 Thể quả nấ m I tenuipes 3.38 Thể nấm sau 20 ngày 53 3.39 Thể nấm sau 30 ngày 53 3.40 Thể nấm sau 35 ngày 53 3.41 Thu hoạch thể nấm 53 53 ĐẶT VẤN ĐỀ Nấm đông trùng hạ thảo tuyết (Isaria tenuipes (Peck.) Samson), tên trước (Paecilomyces tenuipes Peck.) loài nấm dược liệu nuôi trồng sử dụng lâu đời Hàn Quốc Trong tự nhiên, loại nấm tồn hai giai đoạn: giai đoạn hữu tính có tên Cordyceps takaomontana Yakushiji, giai đoạn vô tính có tên Isaria tenuipes Peck Đây loài nấm có giá trị dược liệu quý, tác dụng chủ yếu điều trị hỗ trợ điều trị bệnh ung thư nhờ tác dụng dược lý sinh học chúng Một hợp chất hóa học có hoạt tính sinh học có giá trị dược liệu chứa thể giai đoạn hữu tính giai đoạn vô tính loài nấm 4-acetyl12,13-epoxyl-9-trichothecene-3,15-diol (Oh, G.S et.al 2001) Đây hợp chất dùng để điều trị bệnh ung thư, đặc biệt bệnh máu trắng nước giới, đặc biệt sử dụng rộng rãi Hàn Quốc (Eiji Yokoyama et al., 2003) Đây loài nấm dược liệu quý lần mô tả ghi nhận có phân bố Việt Nam Qua đợt điều tra, Trung tâm nghiên cứu bảo vệ rừng - Viện Khoa học Lâm nghiệp Việt Nam thu số mẫu Đông trùng hạ thảo nhiều nơi như: Vườn Quốc gia Ba Vì, Vườn quốc gia Tam Đảo, Khu bảo tồn thiên nhiên Tây Yên Tử, và nguồn gen loài đươ ̣c lưu giữ bảo quản ta ̣i phòng Việc nhân nuôi gây trồng nhân tạo thành công loài nấm có ý nghĩa vô to lớn việc bảo tồn phát triển loài Việt Nam Để nhân nuôi nhân ta ̣o thành công loài nấ m này thì đặc điểm sinh học chúng Nghiên cứu đặc điểm sinh học loài nấm Isaria tenuipes sở khoa học quan trọng xem yếu tố định đến thành bại việc nuôi trồng thể nấm nhân tạo Với lý trên, tiến hành thực đề tài “Nghiên cứu đặc điểm sinh học nấm Đông trùng hạ thảo tuyết (Isaria tenuipes) có phân bố Việt Nam” nhằm góp phần bảo tồn, nghiên cứu ứng dụng phát triển bền vững loài Đông trùng hạ thảo quý Thành công đề tài có ý nghĩa lớn nghiên cứu khoa học y học nước nhà, đặc biệt sở để tiếp tục nghiên cứu quy trình nuôi trồng nhân tạo loại nấm thần dược Chương TỔNG QUAN VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 1.1 Nghiên cứu nước 1.1.1 Nghiên cứu phân loại nhóm nấm Đông trùng hạ thảo nấm Đông trùng hạ thảo tuyết (Isaria tenuipes) Dựa đặc điểm hình thái đặc điểm cấu trúc phân tử, loài nấm đông trùng hạ thảo xếp 162 đơn vị phân loại thuộc họ Cordycipitaceae Ophiocordycipitaceae [14] Isaria tenuipes loài nấm phổ biến tìm thấy nhiều khu vực miền núi Hàn Quốc [21] Hình dạng nấm mọc riêng lẻ hay thành cụm nhóm Có thể mọc thẳng đột xuất nhánh, dài lên 45 mm, thân nấm chủ yếu màu vàng chanh bên có bột màu trắng [13] Theo hệ thống phân loại truyền thống loài nấm Isaria tenuipes xếp vào họ Clavicipitaceae [11] Đây loài nấm dược liệu nuôi trồng sử dụng lâu đời Hàn Quốc Trong tự nhiên, ký chủ, dễ dàng thấy dạng thể quả: dạng thể chứa bào tử hữu tính (stromata) có tên go ̣i là Cordyceps takaomontana Yakushiji & Kumazawa dạng thể chứa bào tử vô tính (synnemata) chính là Isaria tenuipes 1.1.2 Nghiên cứu thành phần hóa học I tenuipes Nấm I tenuipes xâm nhiễm nhộng hay sâu non sau hình thành dạng thể màu vàng mọc thẳng hay phân nhánh bên vật chủ Theo y học truyền thống Trung Hoa, dạng thể nấm I tenuipes có giá trị cao mặt dược liệu tác dụng dược lý sinh học chúng Các hoạt chất Ergosterol peroxide Acetoxyscirpenediol tách chiết từ nấm I tenuipes nuôi cấy nhân tạo có khả ức chế dòng tế bào ung thư người tế bào khối u dày, tế bào ung thư gan, tế bào ung thư ruột kết - ruột thẳng Hoạt tính Acetoxyscirpenediol mạnh Cisplatin hoạt chất dùng điều trị cho bệnh nhân ung thư đến 6,6 lần [16] Một hợp chất hóa học có hoạt tính sinh học có giá trị dược liệu chứa thể giai đoạn hữu tính giai đoạn vô tính loài nấm Isaria tenuipes 4-acetyl-12,13-epoxyl-9-trichothecene3,15-diol [17] Đây hợp chất dùng để điều trị bệnh ung thư, đặc biệt bệnh máu trắng nước giới, đặc biệt sử dụng rộng rãi Hàn Quốc [10] Trong dạng thể nấm Isaria tenuipes chứa hợp chất sinh học giá trị dược phẩm cao, chẳng hạn adenosine N6-(2hydroxyethyl) adenosine [13] Có tác dụng tăng cường hệ thống miễn dịch lấy lại lượng, tương tự chức bổ nhân sâm Một số thành phần sinh hoá, nguyên tố khoáng, acid amin vitamin nấm đông trùng hạ thảo I tenuipes xác định sau [30]: Bảng 1.1: Thành phần sinh hoá nguyên tố khoáng nấm I tenuipes STT Chỉ tiêu Đơn vị tính Hàm lượng Protein % chất khô 7,75 Mannitol % chất khô 1,21 Lipid % chất khô 7,77 Cu mg/kg 21,1 Fe mg/kg 43,9 Mn mg/kg 22,2 Se mg/kg 0,32 Zn mg/kg 2,55 Ca mg/10g 12,0 10 Cr mcg/10g 0,80 11 K mg/10g 186,0 12 Na mg/10g 3,0 Bảng 1.2: Thành phần acid amin nấm đông trùng hạ thảo I tenuipes TT Acid amin ĐV Alanin % Glycin Hàm Hàm TT Acid amin ĐV 1,40 10 Methionine % 0,25 % 1,32 11 Glutamic acid % 2,46 Valin % 1,00 12 Phenylalanine % 1,30 Leucin % 1,44 13 Lysine % 2,66 Isoleucin % 0,69 14 Histidine % 0,80 Threonine % 0,83 15 Tyrosine % 2,89 Serin % 0,73 16 Cystine % 0,12 Proline % 2,83 17 Arginine % 5,30 Asparatic acid % 1,44 18 Tryptophan % 0,29 lượng lượng Bảng 1.3: Thành phần vitamin nấm Đông trùng hạ thảo I tenuipes STT Acid amin Đơn vị tính Hàm lượng Vitamin B1 mcg/10g 89,4 Vitamin B3 mg/10g 0,37 Vitamin B6 mcg/10g 19,1 Vitamin C mg/10g 1,25 Vitamin E mg/10g 0,23 Vitamin A mg/10g 0,12 Vitamin D mg/10g 242,0 1.1.3 Nghiên cứu giá trị dược liệu nấm Đông trùng hạ thảo Nấm Đông trùng hạ thảo loại nấm loại dược liệu quý, tốt cho sức khoẻ, phù hợp với lứa tuổi Đông trùng hạ thảo vị thuốc bồi bổ quý giá, có tác dụng tích cực với rấ t nhiề u bệnh rối loạn Phụ biểu 18: Tests of Between-Subjects Effects Dependent Variable: Trọng lượng tươi Type III Sum of Mean Source Squares df Square F Corrected 11.269a 15 751 581.566 Model Intercept 1072.924 1072.924 8.306E5 k 001 000 315 CT 2.222 2.222 1.720E3 pH 5.701 950 735.526 CT * pH 3.345 558 431.621 Error 034 26 001 Total 1084.226 42 Corrected 11.302 41 Total Sig .000 000 732 000 000 000 Phụ biểu 19: pH Duncana Sig N 6 6 6 Phân cấp trọng lượng tươi Subset 4.4600 4.7500 4.8850 5.0000 5.2600 5.4400 5.5850 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 Phụ biểu 20: Tests of Between-Subjects Effects Dependent Variable: Trọng lượng khô Mean Source Type III Sum of Squares df Square Corrected 1.321a 15 088 Model Intercept 21.272 21.272 k 000 000 CT 960 960 pH 328 055 CT * pH 032 005 Error 008 26 000 Total 22.600 42 Corrected 1.328 41 Total F Sig 299.863 000 7.245E4 738 3.270E3 186.485 17.915 000 488 000 000 000 Phụ biểu 21: pH Duncan a Sig N 6 6 6 Phân cấp trọng lượng khô Subset 5850 6250 6717 7150 7200 8200 1.000 1.000 1.000 618 1.000 8450 1.000 IV Ảnh hưởng môi trường dinh dưỡng lên hình thành thể nấm I.tenuipes Phụ biểu 22: ANOVA Trọng lượng tươi Between Groups Within Groups Total Sum of Squares df 3808.266 027 12 3808.293 17 Mean Square 761.653 002 F Sig 3.377E5 000 Phụ biểu 23: CT Duncan a Sig Phân cấp trọng lượng tươi Subset for alpha = 0.05 N 2167 3333 4600 3.4667 15.3367 40.3000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 Phụ biểu 24: ANOVA Trọng lượng khô Sum of Squares 26.397 000 26.397 Between Groups Within Groups Total df Mean Square F 5.279 1.584E5 12 000 17 Sig .000 Phụ biểu 25: CT Duncan a Sig N 3 3 3 Phân cấp trọng lượng khô Subset for alpha = 0.05 0300 0933 1700 4167 2.1767 1.000 1.000 1.000 1.000 3.1500 1.000 1.000 Phụ biểu 26: ANOVA Chiều dài Sum of Squares Between Groups Within Groups Total Mean Square df 3433.111 4.000 12 3437.111 17 F 2.060E 686.622 333 Sig .000 Phụ biểu 27: CT Duncan Sig a N 3 3 3 Phân cấp chiều dài Subset for alpha = 0.05 11.6667 15.6667 21.3333 21.6667 39.6667 1.000 1.000 493 50.6667 1.000 1.000 Phụ biểu 28: ANOVA Thời gian Between Groups Within Groups Total Sum of Squares 201.833 34.667 236.500 df Mean Square 40.367 12 2.889 17 F 13.973 Sig .000 Phụ biểu 29: Duncan a CT Sig Phân cấp thời gian Subset for alpha = 0.05 N 3 32.3333 33.0000 33.0000 35.6667 39.3333 40.0000 40.6667 640 079 379 V Ảnh hưởng nhiệt độ đến sinh trưởng thể nấm Isaria tenuipes Phụ biểu 30: Tests of Between-Subjects Effects Dependent Variable: thời gian Type III Sum of Source Squares df Mean Square F Sig Corrected 136.389a 19.484 22.774 000 Model Intercept 17236.056 17236.056 2.015E4 000 k 7.444 3.722 4.351 044 CT 6.722 6.722 7.857 019 t 115.111 57.556 67.273 000 CT * t 7.111 3.556 4.156 049 Error 8.556 10 856 Total 17381.000 18 Corrected 144.944 17 Total Phụ biểu 31: Phân cấp thời gian Duncan a t 15 20 25 Sig N 6 27.5000 Subset 31.8333 1.000 1.000 33.5000 1.000 Phụ biểu 32: Tests of Between-Subjects Effects Dependent Variable: Số lượng Type III Sum of Source Squares df Mean Square Corrected 3286.722a 469.532 Model Intercept 16989.389 16989.389 k 444 222 CT 1740.500 1740.500 t 1545.444 772.722 CT * t 333 167 Error 889 10 089 Total 20277.000 18 Corrected Total 3287.611 17 F Sig 5.282E3 000 1.911E5 2.500 1.958E4 8.693E3 1.875 000 132 000 000 203 Phụ biểu 33: Phân cấp số lượng Duncan a t 25 20 15 Sig N 6 20.3333 Subset 29.0000 1.000 1.000 42.8333 1.000 Phụ biểu 34: Tests of Between-Subjects Effects Dependent Variable: Chiều dài Type III Sum of Mean Source Squares df Square Corrected 1144.422a 163.489 Model Intercept 34304.536 34304.536 k 551 276 CT 57.602 57.602 t 136.734 68.367 CT * t 949.534 474.767 Error 1.862 10 186 Total 35450.820 18 Corrected 1146.284 17 Total F Sig 877.924 000 1.842E5 1.480 309.320 367.127 2.549E3 000 274 000 000 000 Phụ biểu 35: Phân cấp chiều dài Duncana t 20 25 15 Sig N 6 40.6667 Subset 42.9833 1.000 1.000 47.3167 1.000 Phụ biểu 36: Tests of Between-Subjects Effects Dependent Variable: Trọng lượng tươi Mean Source Type III Sum of Squares df Square Corrected 1416.811a 202.402 Model Intercept 9421.069 9421.069 k 004 002 CT 742.666 742.666 t 673.254 336.627 CT * t 887 443 Error 019 10 002 Total 10837.899 18 Corrected 1416.830 17 Total F Sig 1.044E5 000 4.859E6 983 3.830E5 1.736E5 228.713 000 408 000 000 000 Phụ biểu 37: Phân cấp trọng lượng tươi Duncana t 25 20 15 Sig N 6 16.7883 Subset 20.6033 1.000 1.000 31.2417 1.000 Phụ biểu 38: Tests of Between-Subjects Effects Dependent Variable: Trọng lượng khô Mean Source Type III Sum of Squares df Square Corrected 14.046a 2.007 Model Intercept 98.842 98.842 k 001 000 CT 6.219 6.219 t 7.073 3.537 CT * t 753 376 Error 002 10 000 Total 112.890 18 Corrected 14.048 17 Total F Sig 8.599E3 000 4.236E5 2.000 2.665E4 1.516E4 1.613E3 000 186 000 000 000 Phụ biểu 39: Phân cấp trọng lượng khô Duncana t 25 20 15 Sig N 6 1.8367 Subset 1.9667 1.000 1.000 3.2267 1.000 V Ảnh hưởng pH tới sinh trưởng thể nấm Isaria tenuipes Phụ biểu 40: Tests of Between-Subjects Effects Dependent Variable: Thời gian Type III Sum of Source Squares df Mean Square F Sig Corrected 250.571a 15 16.705 28.151 000 Model Intercept 37800.000 37800.000 6.370E4 000 k 571 286 481 623 CT 24.381 24.381 41.086 000 pH 192.667 32.111 54.113 000 CT * pH 32.952 5.492 9.255 000 Error 15.429 26 593 Total 38066.000 42 Corrected 266.000 41 Total Phụ biểu 41: tg Subset Duncan a pH Sig N 6 6 6 27.8333 27.8333 28.3333 28.3333 28.8333 31.6667 32.1667 299 271 271 33.3333 1.000 Phụ biểu 42: Tests of Between-Subjects Effects Dependent Variable:Số lượng Type III Sum of Mean Source Squares df Square Corrected 5369.595a 15 357.973 Model Intercept 39070.500 39070.500 k 429 214 CT 3790.500 3790.500 pH 1244.000 207.333 CT * pH 334.667 55.778 Error 8.905 26 342 Total 44449.000 42 Corrected Total 5378.500 41 F Sig 1.045E3 000 1.141E5 626 1.107E4 605.369 162.859 000 543 000 000 000 Phụ biểu 43: Phân cấp số lượng Subset pH N Duncan 20.5000 27.3333 28.6667 6 30.3333 33.1667 34.6667 38.8333 Sig 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 a Phụ biểu 44: Tests of Between-Subjects Effects Dependent Variable: Chiều dài Mean Source Type III Sum of Squares df Square Corrected 894.860a 15 59.657 Model Intercept 96106.734 96106.734 k 010 005 CT 298.134 298.134 pH 179.198 29.866 CT * pH 417.518 69.586 Error 097 26 004 Total 97001.690 42 Corrected 894.956 41 Total F Sig 1.605E4 000 2.585E7 1.345 8.019E4 8.033E3 1.872E4 000 278 000 000 000 Phụ biểu 45: pH Duncan a Sig N 6 6 6 Phân cấp chiều dài Subset 45.1000 45.2000 46.3667 48.7000 49.1833 1.000 1.000 1.000 1.000 50.1167 50.1833 1.000 069 Phụ biểu 46: Tests of Between-Subjects Effects Dependent Variable: Trọng lượng tươi Type III Sum of Mean Source Squares df Square Corrected 5626.689a 15 375.113 Model Intercept 27159.749 27159.749 k 001 000 CT 3231.394 3231.394 pH 1963.618 327.270 CT * pH 431.676 71.946 Error 007 26 000 Total 32786.445 42 Corrected 5626.696 41 Total F Sig 1.378E6 000 9.979E7 1.085 1.187E7 1.202E6 2.644E5 000 353 000 000 000 Phụ biểu 47: Phân cấp trọng lượng tươi Subset pH N Duncana 16.0850 18.2433 21.8550 27.4167 6 27.9500 28.5600 37.8967 Sig 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 Phụ biểu 48: Tests of Between-Subjects Effects Dependent Variable: Trọng lượng khô Mean Source Type III Sum of Squares df Square Corrected 87.824a 15 5.855 Model Intercept 480.095 480.095 k 9.048E-5 4.524E-5 CT 31.929 31.929 pH 46.977 7.829 CT * pH 8.918 1.486 Error 001 26 2.473E-5 Total 567.920 42 Corrected 87.824 41 Total F Sig 2.368E5 000 1.942E7 1.830 1.291E6 3.167E5 6.011E4 000 181 000 000 000 Phụ biểu 49: pH Duncan Sig a N 6 6 6 Phân cấp trọng lượng khô Subset 1.3067 2.6467 3.0967 3.7017 4.0367 4.1800 4.6983 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 ... ĐỀ NGHIÊN CỨU 1.1 Nghiên cứu nước 1.1.1 Nghiên cứu phân loại nhóm nấm Đông trùng hạ thảo nấm Đông trùng hạ thảo tuyết (Isaria tenuipes) 1.1.2 Nghiên cứu thành phần hóa học. .. tục nghiên cứu quy trình nuôi trồng nhân tạo loại nấm thần dược 2 Chương TỔNG QUAN VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 1.1 Nghiên cứu nước 1.1.1 Nghiên cứu phân loại nhóm nấm Đông trùng hạ thảo nấm Đông trùng hạ. .. Ba Vì 2.3 Nội dung nghiên cứu 2.3.1 Phân lập chủng nấm Isaria tenuipes Việt Nam - Phân lâ ̣p và nghiên cứu đặc điểm sinh trưởng hệ sợi nấm nuôi cấy khiết - Nghiên cứu đặc điểm hình thái nấ