Đang tải... (xem toàn văn)
Tuyển chọn chủng vi khuẩn Acetobacter Xylinum cho màng dày, nghiên cứu ảnh hưởng của etanol, axit axetic, ( NH4)2SO4, pH, ứng dụng làm thạch dừa (Khóa luận tốt nghiệp)Tuyển chọn chủng vi khuẩn Acetobacter Xylinum cho màng dày, nghiên cứu ảnh hưởng của etanol, axit axetic, ( NH4)2SO4, pH, ứng dụng làm thạch dừa (Khóa luận tốt nghiệp)Tuyển chọn chủng vi khuẩn Acetobacter Xylinum cho màng dày, nghiên cứu ảnh hưởng của etanol, axit axetic, ( NH4)2SO4, pH, ứng dụng làm thạch dừa (Khóa luận tốt nghiệp)Tuyển chọn chủng vi khuẩn Acetobacter Xylinum cho màng dày, nghiên cứu ảnh hưởng của etanol, axit axetic, ( NH4)2SO4, pH, ứng dụng làm thạch dừa (Khóa luận tốt nghiệp)Tuyển chọn chủng vi khuẩn Acetobacter Xylinum cho màng dày, nghiên cứu ảnh hưởng của etanol, axit axetic, ( NH4)2SO4, pH, ứng dụng làm thạch dừa (Khóa luận tốt nghiệp)Tuyển chọn chủng vi khuẩn Acetobacter Xylinum cho màng dày, nghiên cứu ảnh hưởng của etanol, axit axetic, ( NH4)2SO4, pH, ứng dụng làm thạch dừa (Khóa luận tốt nghiệp)Tuyển chọn chủng vi khuẩn Acetobacter Xylinum cho màng dày, nghiên cứu ảnh hưởng của etanol, axit axetic, ( NH4)2SO4, pH, ứng dụng làm thạch dừa (Khóa luận tốt nghiệp)Tuyển chọn chủng vi khuẩn Acetobacter Xylinum cho màng dày, nghiên cứu ảnh hưởng của etanol, axit axetic, ( NH4)2SO4, pH, ứng dụng làm thạch dừa (Khóa luận tốt nghiệp)Tuyển chọn chủng vi khuẩn Acetobacter Xylinum cho màng dày, nghiên cứu ảnh hưởng của etanol, axit axetic, ( NH4)2SO4, pH, ứng dụng làm thạch dừa (Khóa luận tốt nghiệp)Tuyển chọn chủng vi khuẩn Acetobacter Xylinum cho màng dày, nghiên cứu ảnh hưởng của etanol, axit axetic, ( NH4)2SO4, pH, ứng dụng làm thạch dừa (Khóa luận tốt nghiệp)Tuyển chọn chủng vi khuẩn Acetobacter Xylinum cho màng dày, nghiên cứu ảnh hưởng của etanol, axit axetic, ( NH4)2SO4, pH, ứng dụng làm thạch dừa (Khóa luận tốt nghiệp)Tuyển chọn chủng vi khuẩn Acetobacter Xylinum cho màng dày, nghiên cứu ảnh hưởng của etanol, axit axetic, ( NH4)2SO4, pH, ứng dụng làm thạch dừa (Khóa luận tốt nghiệp)Tuyển chọn chủng vi khuẩn Acetobacter Xylinum cho màng dày, nghiên cứu ảnh hưởng của etanol, axit axetic, ( NH4)2SO4, pH, ứng dụng làm thạch dừa (Khóa luận tốt nghiệp)
Khoá luận tốt nghiệp TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM HÀ NỘI KHOA : SINH HỌC NGUYEN THI QUANG - K29A “TUYEN CHON CHUNG VI KHUAN ACETOBACTER XYLINUM CHO MANG DAY, NGHIEN CUU ANH HUONG CUA ETANOL, AXIT AXETIC, (NH¿);SO¿, pH,ỨNG DỤNG LÀM THẠCH DỪA ” KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Chuyên ngành : Vị sinh vật Người hướng dẫn : Thạc sĩ: Nguyễn Khắc Thanh Hà Nội: 2007 Nguyên Thị Quang K29A-Sinh Khoá luận tốt nghiệp LỜI CẢM ƠN Để có thành cơng đề tài khoá luận, em nhận giúp đỡ tâm huyết tận tình thầy mơn Vì Sinh tơ thực vật, đặc biệt giúp đỡ thầy Nguyễn Khắc Thanh cô Đinh thị Kim Nhung bạn sinh viên, ý kiến đóng góp bạn nhóm vi sinh Em xin bày tỏ lòng cảm ơn chân thành sâu sắc giúp đỡ quý báu thầy cơ, bạn nhóm vi sinh người trực tiếp hướng dẫn em thầy Nguyễn Khắc Thanh Hà Nội, tháng 05 năm 2007 Sinh viên: Nguyễn thị Quang Nguyên Thị Quang K29A-Sinh Khoá luận tốt nghiệp LỜI CAM ĐOAN Khoá luận tốt nghiệp hoàn thành hướng dẫn tận tình thạc sĩ Nguyễn Khắc Thanh Em xin cam đoan rằng: Đây kết nghiên cứu riêng em Kết không trùng với kết tác giả cơng bố Nếu sai em xin chịu hoàn toàn trách nhiệm Sinh viên: Nguyễn Thị Quang Nguyên Thị Quang K29A-Sinh Khoá luận tốt nghiệp TĨM TẮT CƠNG TRÌNH Thạch dừa sản phẩm tạo thành q trình ni vi sinh Acetobacter xylinum mơi trường nước dừa chuyển hố thành Hemixenluoza, qua chế biến xử lý với sỐ nguyên liệu thành thạch dừa Đây ăn cô truyền số nước Đông Nam Á: Philipin, Malaixia Việt Nam xử sở dừa Bên cạnh ăn chế biến từ dita cơm dừa, kẹo dừa, bánh đa Thì thạch đừa nhiều người ưa thích Thạch dừa với thành phân Hemixenluloza, có tác dụng giúp cho q trình tiêu hố tốt hơn, dưỡng da, chống lão hố, giảm cholesterol máu phịng ngừa số bệnh ung thư Ở nước ta, việc nghiên cứu ứng dụng vi khuânAcetobacter xylinum sản xuất thach diva rat it, xuất hiên vải sở sản xuất thạch đừa (Thành phố Hồ Chí Minh) sản lượng nhu cầu sử dụng thạch dừa ngày tăng, nguồn nguyên liệu lại dồi Đứng trước nhu cầu tiềm việc nghiên cứu vi khuẩn Acetobacter xylinum đến việc ứng dụng tạo nguôn thức ăn từ nguyên liệu sẵn có việc làm có ý nghĩa thực tiễn lý luận sâu sắc, chọn nghiên cứu đề tài:”Tuyền chon ching vi khuẩn Acetobacter xylinum cho mang dày, nghiên cứu ảnh hưởng etanol, axit axefic, (NHa);SO¿, pH, ứng dụng làm thạch dừa” Trong đề tài này, từ nguồn nguyên liệu sẵn có nước tơi phân lập 60 mẫu, tuyên chọn 02 chủng vi khuan Acetobacter xylinum cho màng dày làm đối tượng nghiên cứu Nghiên cứu khả tạo màng chọn hai chủng vi khuân Acetobacter xylinum 1a A; va Ag cho mang đày Nghiên cứu quan sát hình dạng tế bào kính hiên vi quang học Nghiên cứu động thái phát triển hai chủng Nghiên cứu ảnh hưởng etanol, axIt axetic, (NH¿);5O¿x, pH tới trình tạo màng hai chủng Ứng dụng hai chủng vào làm thạch dừa phạm vi phịng thí nghiệm, Ngun Thị Quang K29A-Sinh Khoá luận tốt nghiệp 1.1 Ly chon dé tai PHAN DAT VAN DE Cũng linh vực khoa học khác, công nghệ vi sinh mà tiền thân cơng nghệ lên men trải qua chặng đường phát triển đầy khó khăn, phức tạp Đã từ lâu người biết ứng dụng trình lên men sản xuất vào đời sống như: Làm tương, muối dưa, làm bánh mì, sản xuất bia rượu mà chưa hiểu hết chất trình lên men Cho đến gần thị trường xuất loại thực phẩm thạch dừa Đây loại thực phâm nhiều người ưu thích bơ dưỡng: Giúp cho q trình tiêu hố tốt hơn, dưỡng da, giảm cJolesferol máu, chống lão hoá, ngăn ngừa số bệnh ung thư Tuy nhiên nước vài sở sản xuất, nhu cầu sử dụng thạch dừa ngày cao, nguồn nguyên liệu thô để sản xuất lại đồi đào khô để bảo quản nước dừa Đứng trước tiềm nhu cầu chọn tiến hành nghiên cứu đề tài: "Tuyền chon chủng vỉ khuẩn Acetobacter xylinum cho màng dày, nghiên cứu ảnh hưởng efanol, axit axefic, (NH¿);SO¿a, pH, ứng dụng làm thạch dừa” 1.2.Mục tiêu đề tài Từ nguồn nguyên liệu: Bia, rượu vang, hoa quả, giấm tiễn hành phân lập tuyên chọn chủng cho màng dày, nghiên cứu ảnh hưởng số yếu tô tới trình lên men 1.3.Nhiệm vụ Phân lập tuyên chọn chủng vi khuẩn Acetobacter xylinum cho màng dày, từ chọn hai chủng cho màng dày làm đối tượng nghiên cứu Tìm hàm lượng efanol, axit axefic, (NH¿);SO¿, pH thích hợp cho phát triển hai ching Acetobacter xylinum tuyén chọn 1.4 Ý nghĩa lý luận thực tiễn đề tài Nghiên cứu nhằm sâu tìm hiểu hình thái, đặc tính sinh lý, sinh hoá chung Acetobacter xylinum co kha nang cho mang day Góp phân tìm hiểu q trình sản xuất thạch dừa nâng cao hiệu sản xuất Nguyên Thị Quang K29A-Sinh Khoá luận tốt nghiệp Phần Tổng quan tài liệu 2.1 Lược sử nghién ciru va phan loai vi khuan Acetobacter xylinum (A.xylinum) 2.1.1.Lược sử nghiên cứu vi khuẩn A.xylinum Người ta thường gọi q trình chuyển hố rượu thành axit axetic q trình lên men axetic, thực chất q trình oxi hố, vi khuẩn gầy q trình vi khuẩn axetic thuộc giống Acefobacter Trước người ứng dụng trình đề làm giẫm từ rượu vang hỏng cách thụ động mà chưa hè biết đến chế chất cuả Tuy tới năm đầu kỉ 19 người điều chế axit axetic đậm đặc, biết giấm sản phẩm lên men nhóm vi sinh vật mà ngày gọi Acetobacter hay vi khuân axetic Từ đến có nhiều khoa học nghiên cứu loại vi khuẩn Người nhìn thấy vi sinh vật Antoni Lơvenhuc (1632-1723) Person (1822) người nghiên cứu axit axetic từ lớp màng mỏng phát triển giẫm Ông chứng minh loại vi sinh vật có tên Mycoderma axetic Năm 1973 Kittzing nhận xét trình lên men giẫm thiết phải có vi sinh vật, ơng khẳng định rõ vai trị vi sinh vật trinh lên men giảm Cùng năm đó, Hansen cung tách hai loại vi khuẩn thuân khiết từ mangf giẫm ơng gọi Ä4ycoderma aceti Mycoderma pasteurianum Năm (1862-1868) L.pasteur người khám phá chế trình lên men axetic, q trình oxi hố rượu etylic Ông chứng minh đắn nhận xét Kittzing & Hansen, khăng định chất trình lên men axetic Với việc sử dụng kính hiến vi Lơvenhuc nhận thức tồn g1ới v1 sinh vật thực bắt đầu, nhờ Pasteur xem xét xuất màng bia rượu vang cách kỹ lưỡng Cuối ơng kết luận màng tạo thành loại trực khuẩn (màng tập hợp tế bào trực khuẩn) ông gọi Ä4ycoderma aceti Những nghiên cứu nhằm mục đích cải tiễn q trình lên men axetic Trên sở có nhiều quan điểm phân loại khác đời Nguyên Thị Quang K29A-Sinh Khoá luận tốt nghiệp 2.1.2.Phân loại vỉ khuẩn Acetobacter Từ trước tới có nhiều tác giả đề cập đến đề đáng ý khố phân loại Beijerinck Ông phân loại vi khuẩn dựa vào hai dấu hiệu Một là: Khả sử dụng đạm amoni để thực sinh trưởng phát triển Hai là: Có hay khơng có giai đoạn động trình phát triển Năm 1962 Heneberg chia tất vi khuẩn axetic thành nhóm theo nơi sống đặc trưng chúng Nhóm I: Vi khuẩn khơng phát triển bia hoa Hublon độc với chúng Nhóm 2: Vi khuân phát triển bia Nhóm 3: Vi khuẩn phát triển dung dịch rượu vang Nhóm 4: Vi khuẩn để sản xuất giẫm theo phương pháp nhanh Năm 1934, theo nghiên cứu hội nhà vi khuẩn học Hoa Kỳ, vi khuân axetic có khả sử dụng hợp chất tương đối đơn giản cacbon nitơ nên kết hợp vào họ Wiobacteriaceae Từ vi khuân giâm giữ tên Acetobacter Nim 1848 Vanght công bô kết ơng quan sát thấy di động nhiéu loai Acetobacter aceti, Acetobacter pasteurianum, Acetobacter oxydans, Acetobacter malanogenum Vanght giải thích lồi loại có đơn mao cực xác nhận vị trí vi khuẩn axetic họ Pseudomonadaceae Ngày theo khoá phân loại Bergeys nhiều tác giả khác xếp vi khuan Acetobacter va Gluconobacter vao ho Acetobacter iaceae Năm 1914 Bergeys phân loại loài giống 4cefobacter thành hai loại - Loại 1: OxI hoá axIt axetic thành CO› HạO + Loại sử dụng muối amoni làm nguồn nito nhất, đại diện vi khuẩn Acetobacter aceti + Không sử dụng muối amoni lam ngu6n nito nhat Trên bề mặt mơi trường dịch thể tạo màng nhây có chứa xenluloza, điển hình acetobacter xylinum Trên bề mặt mơi trường dịch thể không tạo màng nhây chứa xenluloza, dàng dién hinh la Acetobacter rancens, Acetobacter pasteurianum Nguyên Thi Quang K29A-Sinh Khoá luận tốt nghiệp _ Loại 2: Vi khn khơng oxi hố axit axetic +Tạo thành sắc tố môi trường glucoza Sắc tô nâu tới đen nhạt : Acefobacter malanogenus Sắc tố hồng: Acetobacter zancens + Không tạo thành sắc tố Nhiệt độ thích hợp 14 30-35°C: Acetobacter suboxydans Nhiệt độ thích hợp giưa 18-21°C :4cetobacter oxydans Năm 1960 Shiwel Car nghiên cứu đặc trưng ni cấy sinh hố vi khuẩn Acetobacter va dua két luận khơng thể có đồng vi khuân Acetobacter Tư nghiên cứu 4cefobacfer người ta khơng ngừng phát huy vai trị đời sống người Nhu cầu người vè sử dụng Acetobacter cang da dang va ching dugc sử dụng nhiều công trinh khoa hoc phuc vu nhu cau hàng ngày như: lên men giám, chế biến thức ăn, sản xuất vitaminC, B¿, B;, B;;, sản xuất tơ nhân tạo 2.2 Đặc điểm chung vi khuẩn 4cefobacfer|2] Ngày người ta biết vi khuan Acetobacter tác nhân trình lên men axetic Chúng thuộc vào giống vi khuân 4cefobacfer chu mao không bà Giwconobacfer đơn mao Đây giỗng vi khuẩn axeticquan trọng họ 4cefobaccfer iaceae Chúng phơ biến trongtự nhiên, có bề mặt lá, hoa chúng tạo axix axetic tir rugu etylic Trong tế bào Giuconobacter khơng có chu trình tricacboxylic hoạt động nên khơng thê oxi hố axetat có chu trình khác thay thế( chu trình glyoxylat) Khơng oxI hố axit axetic Khi so sánh vi khuẩn với vi khuẩn thuộc giồng pseudomonas thay có đặc điểm tương tự Chúng khác pseudomonas chỗ chịu độ axit cao hơn, khắ chuyển hố pepton yếu di động khơng sinh sắc tô.Nhiều loại vi khuẩn Acetobacter phat triển môi trường thiếu thức ăn môi trường nuôi lâu dé làm biến đổi hình thái thành dạng có hình thái đặc biệt Vi khuẩn Acefobacfer dạng hình que, có tiêm mao, di động, khơng sinh bào tử,gram âm, hiếu khí bắt buộc Nguyên Thị Quang K29A-Sinh Khoá luận tốt nghiệp Trên sở dựa vảo tính chất đặc trưng cua vi khuẩn Acetobacter ma người ta xếp chúng vào nhóm độc lập khả oxi hoá rượu etylic thành axit axetic, pH-=4,5 Ngồi chúng cịn thực q trình oxI hố khơng hồn tồn hợp chất hữu khác dé tạo thành hợp chất xeton, Vi khuẩn Acefobacter phát triển tốt điều kiện hiểu khí, nhiệt độ thích hợp từ25-30°C, pH thích hợp 5,4-6,8 hố đị đưỡng hữu [10,15] Đặc điểm phân biệt 4cefobacter Giuconobacter So sánh với Pseudomonas Dac diém so sanh Gluconobacter Acetobacter Pseudomonas oe VỊ trí tiêm mao Don mao cực ` Chu mao ˆ Chu mao + + + + Phát triển pH=4.5 Oxy hoá etanol pH=4.5 không Oxy hoa axit không Cực — — + + _ + + + + + lactose — Su dung Gelatin _ _ + — — + axetic Oxy hoa lactat Glucoza -> Gluconate Sử dung tinh bột Sac tơ huỳnh quang + Về hình dạng tế bào, vi khuân Acefobacter trực khuẩn hình que, kích thước trung bình từ 0,6-0,8uim Các tế bào đứng tách riêng xếp thành chuỗi, loại đặc biệt có tế bào hình câu tuỳ thuộc vào điều kiện pH môi trường „nhiệt độ nuôi [2].Vi khuan Acetobacter khả sinh bào tử, tạo Nguyên Thị Quang K29A-Sinh Khoá luận tốt nghiệp màng nhây, số có khả di động nhờ tiêm mao,một số khơng có khả Khi nghiên cứu khuẩn lạc màng vi khuẩn 4cefobacfer môi trường cho thấy vi khuẩn 4cefobacfer phát triển tốt môi trường nước bia, mơi trường có chứa cao nẫm men:glucoza, rượu etylic, manitol Trên môi trường đặc chúng phát triển khuẩn lạc trịn đặn đường kính trung bình 3mm, bề mặt trơn bóng, phần khgn lạc nỗi lên day va sam phân xung quanh Một số loại có khuân lạc lớn(đ=4-5mm) bề mặt trơn bóng khơng có màu, mỏng hạt sương nhỏ đễ đàng dùng que cấy gạt khỏi môi truường Trên môi trường lỏng vi khuẩn axetic phát triển tạo thành lớp màng Dung dich duéi màng suốt Khi nghiên cứu lớp màng người ta thấy có sợi xenluloza giỗng sọi Nhu câu đinh dưỡng vi khuẩn axetic đôi với nguồn cacbon, nitơ chat sinh trưởng đa dạng Chúng sử đụng đường, rượu efylic, axit hữu làm nguôn cacbon, muỗi amoni làm nguồn nitơ Trong q trình phát triển chúng có nhu cầu số axit amin, chất kích thích sinh trưởng Một số lồi vi khuẩn có khả tổng hợp chất cao phân tử:xenluloza, tinh bột Con người ứng dụng điều sản xuất công nghiệp Vi khuẩn axetic có khả oxi hố gluxit theo mây hướng sau: -Hướng 1: Khơng có photphoril hố chất với tham gia enzym đặc hiệu -Hướng 2: Oxxi hoá chất photphoril hoá đường pentozo photphat -Hướng 3: Theo sơ đồ Entenr-Doudoroff -Hướng 4: Theo chu trình Krebs Glyoxylat 2.3.Một số loại vi khuẩn Acetobacter[10,15] 2.3.1.Acetobacter xylinum Là trực khuân hình que (2um), đứng riêng rẽ xếp thành chuỗi, không di động tế bào bao bọc chất dây, tạo váng nhanh dày, bắt màu xanh với thuốc nhuộm lốt H;SO¿ 2.3.2 Acetobacter aceti Nguyên Thi Quang 10 K29A-Sinh ... tiễn lý luận sâu sắc, tơi chọn nghiên cứu đề tài:”Tuyền chon ching vi khuẩn Acetobacter xylinum cho mang dày, nghiên cứu ảnh hưởng etanol, axit axefic, (NHa);SO¿, pH, ứng dụng làm thạch dừa? ?? Trong... dừa ? ?ứng trước tiềm nhu cầu chọn tiến hành nghiên cứu đề tài: "Tuyền chon chủng vỉ khuẩn Acetobacter xylinum cho màng dày, nghiên cứu ảnh hưởng efanol, axit axefic, (NH¿);SO¿a, pH, ứng dụng làm. .. hiên vi quang học Nghiên cứu động thái phát triển hai chủng Nghiên cứu ảnh hưởng etanol, axIt axetic, (NH¿);5O¿x, pH tới trình tạo màng hai chủng Ứng dụng hai chủng vào làm thạch dừa phạm vi phịng