ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN KHOA SINH HỌC *** Đ T V ệt H n NGHIÊN CỨU - 2015 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Hà Nộ – 2016 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN KHOA SINH HỌC *** Đ T V ệt H n - 2015 : Vi sinh v t học : 60420107 Chuyên ngành Mã số LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC N ớn dẫn k oa ọc: PGS.TS N uyễn Vân Tran PGS.TS Bù T Hà Nộ – 2016 V ệt Hà LỜI CẢM ƠN Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới PGS.TS Nguyễn Vân Trang, người thầy tận tình bảo, hướng dẫn suốt thời gian học tập thực luận văn Tôi xin trân trọng cảm ơn PGS TS Bùi Thị Việt Hà thầy giáo, cô giáo khoa Sinh học, đặc biệt thầy giáo, cô giáo môn Vi sinh vật học tận tình hướng dẫn, giúp đỡ, giảng dạy dìu dắt tơi thời gian thực luận văn suốt thời gian học tập trường Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới Th.s Vũ Thị Bích Hậu,CN.Nguyễn Phương Anh, CN.Nguyễn Thanh Tâm làm việc Phòng Miễn dịch Vắc xin – Viện Vệ sinh Dịch tễ Trung ương tận tình giúp đỡ bảo tơi suốt q trình học tập thực luận văn phịng Cuối cùng, tơi vơ biết ơn gia đình bạn bè ln khích lệ động viên tơi suốt thời gian qua Hà Nội, ngày tháng năm 2016 Học viên Đỗ Thị Việt Hương i BẢNG KÍ HIỆU VÀ CÁC CHỮ VIẾT TẮT Ký ệu HBGA T ến An Histoblood group antigen T ến V ệt Kháng nguyên nhóm máu tương dung tổ chức ADN/ ARN (Deoxi)ribonucleic acid Primer forward V t chất di truyền LRC Long Control Region Vùng kiểm soát dài gen FUT Enzyme fucosyltransferase PCR Polymerase Chain Reaction Mồi xuôi Phản ứng chuỗi trùng hợp Probe - Đầu dò gắn huỳnh quang Primer Reverse - Mồi ngược ORF Open Reading Frame Khung đọc mở gen ORI Origin Vị trí khởi đầu tái OD Optical density M t độ quang mẫu ADN URR Upstream Regulatory Region Vùng điều hòa gen DEPC Diethylpyrocarbonate dNTPs H mRNA Deoxyribonucleic triphotphate ARN thông tin NoV RT-PCR Norovirus Reverse transcription polymerase chain reaction Taq-DNA Thermus aquaticus DNA polymerase polymerase WHO World Health Organization RV Rotavirus ii Enzyme phiên mã ngược Tổ chức y tế giới MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1.Giới thiệu chung Viêm dày ruột cấp trẻ em 1.1.1.Định nghĩa bệnh VDDRC 1.1.2.Phân loại 1.1.3.Tình hình bệnh VDDRC giới Việt Nam 1.1.4.Dịch tễ học bệnh VDDRC 1.1.5.Các tác nhân gây VDDRC 1.2.Giới thiệu chung NoV 1.2.1.Bệnh VDDRC nhiễm NoV 1.2.2.Phân loại, hình thái tổ chức gen NoV 1.2.3.Sự lây truyền, đặc điểm lâm sàng sinh lý bệnh 12 1.2.4.Chẩn đoán 13 1.2.5.Phương pháp real time RT-PCR (Real time Reverse transcription polymerase chain reaction) 16 1.3.Tình hình nghiên cứu NoV ngồi nước 16 1.3.1.Tình hình nghiên cứu giới 16 1.3.2.Tình hình nghiên cứu nước 17 1.4.Kiểu gen FUT-2 người tính cảm nhiễm NoV 19 1.5 Kháng nguyên nhóm máu tương dung tổ chức (HBGA) khả cảm nhiễm NoV 21 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 23 2.1 Đối tượng nghiên cứu 23 2.2 Địa điểm thời gian nghiên cứu 23 2.3 V t liệu 24 2.3.1 Máy móc, dụng cụ 24 2.3.2 Sinh phẩm 24 2.4 Phương pháp nghiên cứu 25 2.4.1 Thu th p bệnh phẩm 25 iii 2.4.2 Kỹ thu t real time-RT PCR phát ARN NoV 26 2.4.3 Kỹ thu t RT PCR khuếch đại đoạn gen vùng C NoV 28 2.4.4 Phương pháp xác định kiểu gen FUT-2 31 2.4.5 Xác định kiểu hình HBGA (ABO Lewis) mẫu nước bọt 33 2.5 Xử lý số liệu 34 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 36 3.1 Tỷ lệ lưu hành NoV trẻ không triệu chứng trường mầm non Hà Nam 36 3.2 Biến động genotype NoV lưu hành trẻ không triệu chứng trường mầm non Hà Nam 39 3.3 Mối liên hệ tính cảm nhiễm NoV với kiểu gen FUT-2 47 3.3.1 Tần số SNP vị trí 357, 385, 428, 571, 628, 685, 849 gen FUT-2 47 3.3.2 Mối quan hệ alen đồng hợp lặn A385T kháng nhiễm NoV 52 3.4 Mối tương quan kháng nguyên nhóm máu tương dung tổ chức khả cảm nhiễm NoV trẻ khỏe mạnh trường mầm non Hà Nam 53 3.4.1 Kiểu hình HBGA trẻ khỏe mạnh trường mầm non Hà Nam 53 3.4.2 Mối liên quan kiểu hình kháng nguyên HBGA với khả cảm nhiễm NoV 56 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 59 TÀI LIỆU THAM KHẢO 60 iv DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Thành phần kỹ thu t Realtime RT-PCR đơn cặp primer probe phát NoV genotype G1 27 Bảng 2.2 Thành phần kỹ thu t Realtime RT-PCR đơn cặp primer probe phát NoV genotype G2 28 Bảng 2.3 Thành phần phản ứng RT-PCR đơn cặp primer G1 29 Bảng 2.4 Thành phần phản ứng RT-PCR đơn cặp primer G2 29 Bảng 2.5 Thành phần phản ứng PCR khuếch đại gen FUT-2 32 Bảng 3.1 Đặc điểm chủng NoV trẻ khỏe mạnh nhà trẻ Hà Nam 37 Bảng 3.2 Tỷ lệ nhiễm NoV trẻ khỏe mạnh 40 Bảng 3.3 Các genotypes NoV phát trẻ khỏe mạnh nhà trẻ Hà Nam (T3/2014 - T5/2015) 41 Bảng 3.4 Đặc điểm genotypes NoV trẻ khỏe mạnh số nhà trẻ Hà Nam vào số tháng khác 45 Bảng 3.5 Tần số SNP vị trí 357, 385, 428, 571, 628, 685, 849 gen FUT-2 trẻ 01 trường mẫu giáo Hà Nam 50 Bảng 3.6 Các tần số đột biết FUT-s quần thể Châu Á láng giềngvà Việt Nam 51 Bảng 3.7 Phân bố kiểu gen 385 85 người có mẫu phân xét nghiệm lây nhiễm NoV 52 Bảng 3.8 Phân bố kiểu hình kháng nguyên nhóm máu tương dung tổ chức Lewis a, b trẻ trường mầm non Hà Nam (n=119) 54 Bảng 3.9 Phân bố kiểu hình kháng ngun nhóm máu tương dung tổ chức Lewis x, y trẻ tai trường mầm non Hà Nam (n=119) 54 Bảng 3.10 Tổ hợp kháng nguyên nhóm máu tương dung tổ chức Lewis ab xy trẻ trường mầm non Hà Nam (n=119) 54 Bảng 3.11 Tỷ lệ kháng nguyên nhóm máu tương dung tổ chức ABO (n=119) 56 Bảng 3.12 Tần suất kháng nguyên Lewis theo tình nhiễm NoV (n=119) 57 Bảng 3.13 Mối liên quan kiểu hình ABO tình trạng đơn nhiễm NoV (n=119) 57 v DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 NoV kính hiển vi điện tử Hình 1.2 Biến đổi chủng NoV miền Bắc nước ta từ 2010-2013 10 Hình 1.3 Phân bố genotype khác NoV miền Bắc miền Nam nước ta năm 2010 10 Hình 1.4 Cấu trúc NoV 11 Hình 1.5 Cấu trúc gen NoV 11 Hình 2.1 Sơ đồ tóm tắt loại mẫu thu th p sử dụng cho nghiên cứu 25 Hình 2.2 Sơ đồ tóm tắt nội dung nghiên cứu 35 Hình 3.2 Tỷ lệ lưu hành genotypes NoV trẻ khỏe mạnh nhà trẻ Hà Nam 42 Hình 3.3 Cây phát sinh chủng loài dựa đoạn gen vùng capsid chủng NoV phát nghiên cứu 44 vi ĐẶT VẤN ĐỀ Bệnh viêm dày ruột cấp (VDDRC) hay gọi tiêu chảy trẻ em vấn đề sức khỏe quan tâm toàn giới, đặc biệt thu hút nhiều ý nhà khoa học, y học nguyên nhân hàng đầu gây bệnh t t tử vong cho trẻ em tuổi nước phát triển Theo tổ chức y tế giới (WHO) nhiều công trình nghiên cứu điều tra châu Á, châu Phi châu Mỹ La Tinh cho thấy, nước phát triển hàng năm có 750 triệu trường hợp VDDRC, 500 triệu trẻ em tuổi Tử vong VDDRC hàng năm lên tới 3-6 triệu trẻ em, có 80% số trẻ em tuổi Ở nước phát triển nước ta, bệnh có tần suất mắc nhiều thứ (sau bệnh nhiễm trùng đường hô hấp) Tử vong VDDRC thường không dược đánh giá kịp thời, nhiên ước tính hàng năm có 6000-8000 trường hợp tử vong nước ta VDDRC Tác nhân gây VDDRC đa dạng, báo cáo cho thấy có 26 loại tác nhân khác gây bệnh VDDRC trẻ em, có 60-70% trường hợp nguyên nhân virus nhóm virus thường gây VDDRC rotavirus, NoV, sapovirus, adenovirus, astrovirus, parechovirus aichivirus coi tác nhân thường gặp bệnh viêm dày ruột cấp người NoV tác nhân quan trọng gây vụ dịch VDDRC không vi khuẩn người lớn trẻ em Theo báo cáo hàng năm toàn giới, có đến 267 triệu trường hợp nhiễm NoV NoV cịn có khả gây nhiễm khơng có triệu chứng NoV thuộc họ Caliciviridae virus ARN sợi đơn, dương có khả lây nhiễm cho người động v t NoV đa dạng kiểu gen tính kháng ngun, bao gồm nhóm gen (từ GI đến GV) 35 typ gen phát dựa vào trình tự đoạn gen mã hóa protein VP1 NoV người thuộc GI, GII GIV hầu hết chủng gây bệnh người thuộc nhóm gen GI GII Các virus thuộc họ Caliviridae có khả lây nhiễm người lứa tuổi thường liên quan đến trường hợp tiêu chảy cấp lẻ tẻ vụ dich tiêu chảy cấp toàn giới Các vụ dịch thường xảy điều kiện bán trú (semi-enclosed) trường học, bệnh viện, nhà dưỡng lão, nhà trẻ Ở nước ta, nhiều nghiên cứu giám sát bệnh tiêu chảy trẻ em tuổi bệnh viện cho thấy RV NoV hai tác nhân quan trọng NoV gây tiêu chảy cấp cho trẻ, mà cịn có khả nhiễm khơng triệu chứng, tác nhân tiềm ẩn gây vụ dịch nguồn lây lan mạnh cộng đồng đặc biệt nhà trẻ, lớp học Mức độ cảm ứng thể NoV có liên quan đến trạng thái gen FUT-2, mã hóa cho enzym fucosyltransferase α(1,2) để điều hòa biểu kháng nguyên H Đã có nhiều nghiên cứu mối quan hệ gen FUT- nhiễm virus Nghiên cứu gen tiết (secretor gene) nhóm quần thể người khác xác định vài đột biến gen làm giảm hoạt động enzyme fucosyltransferase Trong đó, kháng nguyên nhóm máu tương dung tổ chức (HBGA) thụ thể trình nhiễm NoV Những kháng nguyên tổng hợp kết hoạt động số enzyme glycosyltransferase mã hóa chủ yếu họ gen ABO (FUT-1), Lewis (FUT-3) secretor (FUT-2) Xuất phát từ lý tiến hành đề tài ―Nghiên cứu tình trạng nhiễm NoV trẻ khỏe mạnh tuổi trường mầm non Hà Nam năm học 2014 - 2015" với mục tiêu sau: Xác định tỷ lệ nhiễm NoV kiểu gen chủng NoV trẻ khỏe mạnh Đánh giá mối liên quan tính cảm nhiễm NoV kiểu gen FUT-2 Đánh giá mối tương quan kháng nguyên nhóm máu tương dung tổ chức khả cảm nhiễm NoV trẻ khỏe mạnh Đề tài thực phòng Miễn dịch Vắc xin, Viện Vệ sinh Dịch tễ Trung ương Bản 3.12 Tần suất k án n uyên Lew s t eo tìn tron n ễm NoV (n=119) Kháng NoV (-) NoV (+) Tổn nguyên (n=77) (n=42) (n=119) Lewis N % 95%CI n % 95%CI n % Lea+b- 2,6 0,17-9,53 0,0 0-9,99 1,7 Lea-b+ 31 40,3 30,01-51,43 24 57,1 42,19-70,89 55 46,2 Lea+b+ 39 50,6 39,72-61,52 14 33,3 20,95-48,51 53 44,5 Lea-b- 6,5 2,46-14,66 9,5 3,21-22,62 7,6 Lex+y- 16 20,8 13,11-31,22 4,8 0,46-16,65 18 15,1 Lex-y+ 41 53,2 42,21-63,97 22 52,4 37,72-66,64 63 52,9 Lex+y+ 19 24,7 16,33-35,43 11 26,2 15,16-41,21 30 25,2 Lex-y- 1,3 16,7 8-30,92 6,7 0,01-7,68 Sự phân bố kiểu hình HBGA khác mối liên hệ với khả lây nhiễm NoV trẻ khỏe mạnh nghiên cứu có ý nghĩa lớn việc kiểm sốt bệnh ngăn ngừa bệnh VDDRC tương lai, đặc biệt việc phát triển thuốc kháng virus đánh giá đáp ứng vắcxin người có kiểu hình HBGA khác Bản 3.13 Mố l ên quan ữa k ểu ìn ABO tìn trạn đ n n ễm NoV (n=119) Kháng nguyên NoV (-) Tỷ lệ (%) NoV (+) Tỷ lệ (%) O 38 49,4 19 45,2 A 16 20,8 19,0 B 17 22,1 11 26,2 AB 7,8 9,5 Tổn 77 100 42 100 ABO 57 Bảng 3.13 so sánh tỷ lệ nhóm tiết kháng nguyên A, B, AB không tiết ABO nhóm trẻ nhiễm NoV với nhóm trẻ khơng nhiễm NoV So với nhóm khơng nhiễm NoV, tỷ lệ tiết kháng nguyên AB B cao nhóm nhiễm NoV, nhiên khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê Khơng có khác biệt phân bố kiểu hình tiết kháng ngun AB nhóm nhiễm NoV (so với nhóm khơng nhiễm NoV) Như v y, kháng ngun ABO khơng đóng vai trị cảm nhiễm NoV Kết phù hợp với nghiên cứu Nguyễn Minh Hiệp cộng (2015) cho rằng, chưa có chứng rõ ràng mối liên quan kháng ngun nhóm ABO tính cảm nhiễm typ phổ biến virus [5] 58 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN Trong số 694 mẫu phân thu th p từ 230 trẻ khỏe mạnh lứa tuổi từ 6-36 tháng từ lớp nhà trẻ cách khoảng 3-5 km tỉnh Hà Nam từ tháng 03/2014 đến hết tháng 05/2015 có 14,8% số mẫu dương tính với NoV Trong đó, có 39,3% trẻ dương tính với lần suốt thời gian nghiên cứu 7,6% trẻ dương tính lần nhiều suốt 15 tháng giám sát Các genotypes NoV lưu hành trẻ khỏe mạnh nhà trẻ có tính đa dạng cao, bao gồm 10 kiểu genotype: GI.2, GI.6, GII.2, GII.3, GII.4, GII.6, GII.7, GII.13, GII.15 GII.17 Đặc biệt, nghiên cứu gen GII.17 GII.15 lần phát Việt Nam C357T A385T SNPs có tỷ lệ cao trẻ khỏe mạnh G428A, C571T, C628T, 685dellTGG G849A SNPs Tình trạng khơng tiết - nonsecretor quần thể người Việt Nam chủ yếu xuất từ đột biến A385T gen FUT-2 Những trẻ mang gen aa vị trí A385T có xu hướng bảo vệ, kháng lại nhiễm NoV thuộc nhóm gen GII Tỷ lệ trẻ có kiểu hình tiết hồn tồn (Lea-b+Lex-y+) chiếm 42,0%, kiểu hình tiết khơng hồn tồn (các kiểu hình chứa Lea+b+ và/hoặc Lex+y+) chiếm 53% không tiết (Lea+b- Lex+y-, Lea+b-Lex-y- , Lea-b-Lex+y-) chiếm 2,5% khơng xác định ( Lea-b-Lex-y-) chiếm 2,5% Kiểu hình Lea+b-/Lex+y-có nguy nhiễm NoV thấp kiểu hình khác Kiểu hình Lea+b- Lex+y- có khả bảo vệ tránh nhiễm NoV kháng nguyên ABO khơng có vai trị cảm nhiễm loại virus KIẾN NGHỊ Giám sát lưu hành NoV quần thể cần tiếp tục, nhằm tạo sở liệu cho phân tích dịch tễ học phân tử cho việc sử dụng phát vắc xin phòng tiêu chảy NoV nước ta 59 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng việt Bộ môn Nhi (2003), Bài giảng nhi khoa tập 1, NXB trường đại học Y khoa Hà Nội, Hà Nội Nguyễn Thị Đào, Hồ Tân Tiến (1991), "Một số nh n xét tiêu chảy lỵ khoa Nhi, bệnh viện tỉnh Đắc Lắc 1994-1995", Tạp chí y học thực hành, kỷ yếu cơng trình nhi khoa- hội nghị nhi khoa khu vực miền trung lần thứ 4, pp 142-145 Phạm Thị Hà Giang, Nguyễn Vân Trang, Lê Thị Hồng Nhung, Phạm Xuân Ninh, Nguyễn Thị Hồng Hạnh, Nguyễn Trần Hiển (2013), "Phát tác nhân vi khuẩn vi rút gây tiêu chảy trẻ em tuổi Thái Bình", Tạp chí học dự phịng, T p XXIII, số 11(147), pp 34-42 Vũ Thị Bích H u, Đặng Đức Anh, Nguyễn Vân Trang (2013), "Biến động genotype NoV lưu hành miền Bắc Việt Nam từ 2007 - 2013: Xuất subgenotype GII.4 trì tương tác kháng ngun nhóm máu", Tạp chí Y học dự phịng t p XXIII, số11 (147), pp 23-30 Nguyễn Minh Hiệp, Nguyễn Phương Anh, Vũ Thị Bích H u, Trần Đắc Tiến, Đặng Đình Thoảng, Phạm Ngọc Hùng, Phan Thị Ngà, Đặng Đức Anh, Nguyễn Vân Trang (2015), "Sự đa dạng kháng nguyên nhóm máu tương dung tổ chức trẻ em Việt Nam mối liên quan tới khả cảm nhiễm norovirus", Tạp chí Y học dự phịng, T p XXV, số 8(168), pp 271-280 Đinh Thanh Huề (2004), Phương pháp dịch tễ học, NXB Y học, Trường đại học Y học Nguyễn Đồng Lịch (2001), "Về vụ dịch tiêu chảy năm 2000 Thái Bình", Tạp chí Y học dự phịng, XI, (48), pp 49-51 Hồng Hữu Nam, Nguyễn Đình Sơn, Nguyễn Thái Hồ (1995), "Nh n xét bệnh lỵ trực trùng Thừa Thiên Huế 05 năm (1990-1994)", Tạp chí vệ sinh phịng dịch, t p V, số (21), pp 31-36 60 Nguyễn Đỗ Phúc, Nguyễn An Huy, Phạm Hùng Vân (2012), "Xây dựng quy trình phát Norovirus kỹ thu t Realtime PCR", Tạp chí Y học thành phố Hồ Chí Minh, 16(3) 10 Nguyễn Vân Trang (2013), "Mối liên hệ nhiễm Norovirus Rotavirus với kháng nguyên nhóm máu trẻ em tuổi, Thái Bình", Tạp chí Y tế dự phòng, T p XXIII số 11(147), pp 70-76 11 Nguyễn Vân Trang (2013), "Tác nhân tiêu chảy vi rút trẻ em: dự phân bố tính đa dạng Việt Nam", Tạp chí Y học dự phòng, t p 23, số (144), pp 10-23 12 Nguyễn Vân Trang, Đặng Đình Thoảng (2014), "Một số tác nhân vi rút gây viêm dày ruột cấp trẻ khơng có triệu chứng bệnh viện Đa khoa tỉnh Hà Nam", Tạp chí Y học dự phịng, XXIV, Số (153), pp 90-96 13 Nguyễn Vân Trang, Vũ Thị Bích H u, Lê Thị Hồng Nhung, Trần Trọng Kiểm, Nguyễn Minh Hiệp, Tetsu Yamashiro, Đặng Đức Anh (2012), "Đặc điểm Norovirus số tác nhân gây bệnh tiêu chảy trẻ em bệnh viện Nhi Thái Bình năm 2010-2011", Tạp chí Y học dự phịng, XXII, Số (132), pp 17-24 14 Trung tâm tuyên truyền bảo vệ sức khỏe (1984), Vì sức khỏe trẻ em, Bộ Y tế Tiếng anh 15 Ando T., Monroe S.S., Gentsch J.R., Jin Q., Lewis D.C., Glass R.I (1995), "Detection and differentiation of antigenically distinct small round-structured viruses (Norwalk-like viruses) by reverse transcription-PCR and southern hybridization", Journal of Clinical Microbiology, 33(1), pp 64-71 16 Anh D.D., Thiem V.D., Fischer T.K., Canh D.G., Minh T.T., Tho L.H., Van M.N., Luan L.T., Kilgore P., Von S.L., Glass R.I (2006), "The burden of rotavirus diarrhea in Khanh Hoa Province, Vietnam: baseline assessment for a rotavirus vaccine trial", The Pediatric infectious disease journal, 25(1), pp 37-40 17 Aragão G.C., Mascarenhas J.D., Kaiano J.H., et al (2013), "Norovirus Diversity in Diarrheic Children from an African-Descendant Settlement in Belém, Northern Brazil", PLoS One, 8(2), p e56608 61 18 Ayukekbong J., Lindh M., Nenonen N., Tah F., Nkuo-Akenji T., Bergström T (2011), "Enteric viruses in healthy children in Cameroon: viral load and genotyping of norovirus strains", Journal of medical virology, 83(12), pp 2135-2142 19 Beuret C (2004), "Simultaneous detection of enteric viruses by multiplex realtime RT-PCR", Journal of virological methods, 115(1), pp 1-8 20 Bucardo F., Kindberg E., Paniagua M., Grahn A., Larson G., Vildevall M., Svensson L (2009), "Genetic susceptibility to symptomatic norovirus infection in Nicaragua", Journal of medical virology, 81(4), pp 728-735 21 Buesa J., Montava R., Abu-Mallouh R., Fos M., Ribes J.M., Bartolomé R., Vanaclocha H., Torner N., Domínguez A (2008), "Sequential evolution of genotype GII norovirus variants causing gastroenteritis outbreaks from 2001 to 2006 in Eastern Spain", Journal of medical virology, 80(7), pp 1288-1295 22 Bull R.A., Eden J.S., Rawlinson W.D., White P.A (2010), "Rapid evolution of pandemic noroviruses of the GII lineage", PLoS Pathog, 6(3), p e1000831 23 Carlsson B., Kindberg E., Buesa J., Rydell G.E., Lido M.F., Montava R., Mallouh R.A.,Grahn A., Rodrı´guez-Dı´az J., Bellido J., Arnedo A., Larson G., Svensson L (2009), "The G428A nonsense mutation in FUT2 provides strong but not absolute protection against symptomatic GII Norovirus infection", PloS one, 4(5), p e5593 24 Castilho J.G., Munford V., Resque H.R.,Fagundes-Neto U.,Vinjé J., Rácz M.L (2006), "Genetic diversity of norovirus among children with gastroenteritis in Sao Paulo State, Brazil", Journal of clinical microbiology, 44(11), pp 3947-3953 25 Chang J.G., Ko Y.C., Lee J.C., Chang S.J., Liu T.C., Shih M.C., Peng C.T (2002), "Molecular analysis of mutations and polymorphisms of the Lewis secretor type α (1, 2)-fucosyltransferase gene reveals that Taiwan aborigines are of Austronesian derivation", Journal of human genetics, 47(2), pp 60-65 26 Chen H., Qian F., Xu J., Chan M., Shen Z., Zai S., Shan M., Cai J., Zhang W., He J (2015), "A novel norovirus GII 17 lineage contributed to adult gastroenteritis in Shanghai, China, during the winter of 2014–2015", Emerging microbes & infections, 4(11), p e67 62 27 Chi-Wai Chan M., Nelson L., Shan Ho W.,Carmen Oi-Kwan L., Terrence ChiKong L., Kwok-Wing TsuiS., Jao-Yiu Sung J (2012), "Covariation of major and minor viral capsid proteins in norovirus genogroup II genotype strains", Journal of virology, 86(2), pp 1227-1232 28 de Bruin E., Duizer E., Vennema H., Koopmans M.P.G (2006), "Diagnosis of Norovirus outbreaks by commercial ELISA or RT-PCR", Journal of virological methods, 137(2), pp 259-264 29 Donaldson E.F, Lindesmith L.C., Lobue A.D., Baric R.S (2008), "Norovirus pathogenesis: mechanisms of persistence and immune evasion in human populations", Immunological reviews, 225(1), pp 190-211 30 Farkas T., Deng X., Ruiz-Palacios G., Morrow A., Jiang X (2006), "Development of an enzyme immunoassay for detection of sapovirus-specific antibodies and its application in a study of seroprevalence in children", Journal of clinical microbiology, 44(10), pp 3674-3679 31 Ferreira M.S., Xavier Mda P., Tinga A.C., Rose T.L., Fumian T.M., Fialho A.M., de Assis R.M., Carvalho Costa F.A., de Oliveira S.A., Leite J.P., Miagostovich M.P (2012), "Assessment of gastroenteric viruses frequency in a children's day care center in Rio De Janeiro, Brazil: a fifteen year study (1994– 2008)", PloS one, 7(3), p e33754 32 Ferrer-Admetlla A., Sikora M., Laayouni H., Esteve A., Roubinet F., Blancher A., Calafell F., Bertranpetit J., Casals F (2009), "A natural history of FUT2 polymorphism in humans", Molecular biology and evolution, 26(9), pp 1993-2003 33 Fischer T.K., Anh D.D., Antil L., Cat N.D., Kilgore P.E., Thiem V.D, Tho L.H, Glass R.I, Bresee J.S (2005), "Health care costs of diarrheal disease and estimates of the cost-effectiveness of rotavirus vaccination in Vietnam", Journal of Infectious Diseases, 192(10), pp 1720-1726 34 Gallimore C.I., Barreiros M.A., Brown D.W., Nascimento J.P., Leite J.P (2004), "Noroviruses associated with acute gastroenteritis in a children's day 63 care facility in Rio de Janeiro, Brazil", Brazilian Journal of Medical and Biological Research, 37(3), pp 321-326 35 Gallimore C.I., Cheesbrough J.S., Lamden K., Bingham C., Gray J.J (2005), "Multiple norovirus genotypes characterised from an oyster-associated outbreak of gastroenteritis", International journal of food microbiology, 103(3), pp 323-330 36 Giammanco G.M., Rotolo V., Medici M.C., Tummolo F., Bonura F., Chezzi C., Martella V., De Grazia S (2012), "Recombinant norovirus GII g/GII 12 gastroenteritis in children", Infection, Genetics and Evolution, 12(1), pp 169-174 37 Green K.Y., Chanock R.M., Kapikian A.Z (2001), "Fields Virology", in D.M, Knipe, et al., Editors, Human Caliciviruses, Lippincott Williams and Wilkins, Philadelphia 38 Green Y.K (2007), "Chapter 28 in Fields Virology", in B.N, Fields, D.M, Knipe, and Howley, Editors, Caliciviridae: The noroviruses Wolters Kluwer Health, Philadelphia 39 Greenberg H.B., Kapikian A.Z (1978), "Detection of Norwalk agent antibody and antigen by solid-phase radioimmunoassay and immune adherence hemagglutination assay", Journal of the American Veterinary Medical Association, 173(5 Pt 2), pp 620-623 40 Hennessy E.P., GreenA.D., ConnorM.P.,Darby R., MacDonald P (2003), "Norwalk virus infection and disease is associated with ABO histo-blood group type", Journal of Infectious Diseases, 188(1), pp 176-177 41 Henry S., Mollicone R., Lowe J.B., Samuelsson B., Larson G (1996), "A Second Nonsecretor Allele of the Blood Group α (1, 2) Fucosyl‐transferase Gene (FUT2)", Vox sanguinis, 70(1), pp 21-25 42 Jiang X., Graham D.Y., Wang K., Estes M.K (1990), "Norwalk virus genome cloning and characterization", Science, 250(4987), pp 1580-1583 43 Junquera, Carolina Gutiérrez, et al (2009), "Prevalence and clinical characteristics of norovirus gastroenteritis among hospitalized children in Spain", The Pediatric infectious disease journal, 28(7), pp 604-607 64 44 Kageyama T., Kojima S., Shinohara M., Uchida K., Fukushi S., Hoshino F.B., Takeda N., Katayama K (2003), "Broadly reactive and highly sensitive assay for Norwalk-like viruses based on real-time quantitative reverse transcriptionPCR", Journal of clinical microbiology, 41(4), pp 1548-1557 45 Kapikian A.Z., Greenberg H.B., Cline W.L., Kalica A.R., Wyatt R.G., James HD Jr., Lloyd N.L., Chanock R.M., Ryder R.W., Kim H.W (1978), "Prevalence of antibody to the Norwalk agent by a newly developed immune adherence hemagglutination assay", Journal of medical virology, 2(4), pp 281-294 46 Kapikian A.Z., Wyatt R.G., Dolin R., Thomhill T.S., Kalica A.R., Chanock R.M (1972), "Visualization by immune electron microscopy of a 27-nm particle associated with acute infectious nonbacterial gastroenteritis", Journal of virology, 10(5), pp 1075-1081 47 Kaplan J.E., Feldman R., Campbell D.S., Lookabaugh C., Gary G.W (1982), "The frequency of a Norwalk-like pattern of illness in outbreaks of acute gastroenteritis", American Journal of Public Health, 72(12), pp 1329-1332 48 Kaufman S.S., et al (2003), "Calicivirus enteritis in an intestinal transplant recipient", American Journal of Transplantation, 3(6), pp 764-768 49 Kelly R.J., Rouquier S., Giorgi D., Lennon G.G., Lowe J.B (1995), "Sequence and Expression of a Candidate for the Human Secretor Blood Group α (1, 2) Fucosyltransferase Gene (FUT2) Homozygosity for an enzyme-inactivating nonsense mutation commonly correlates with the non-secretor phenotype", Journal of Biological Chemistry, 270(9), pp 4640-4649 50 Khamrin P., Maneekarn N., Peerakome S., Tonusin S., Malasao R., Mizuguchi M., Okitsu S., Ushijima H (2007), "Genetic diversity of noroviruses and sapoviruses in children hospitalized with acute gastroenteritis in Chiang Mai, Thailand", Journal of medical virology, 79(12), pp 1921-1926 51 Khamrin P., Nguyen T.A., Phan T.G., Satou K., Masuoka Y., Okitsu S., Maneekarn N., Nishio O., Ushijima H (2008), "Evaluation of immunochromatography and commercial enzyme-linked immunosorbent assay for rapid detection of norovirus antigen in stool samples", Journal of virological methods, 147(2), pp 360-363 65 52 Kindberg E., Hejdeman B., Bratt G., Wahren B., Lindblom B., Hinkula J., Svensson L (2006), "A nonsense mutation (428G→ A) in the fucosyltransferase FUT2 gene affects the progression of HIV-1 infection", Aids, 20(5), pp 685-689 53 Koda Y., Soejima M., Kimura H (2001), "The polymorphisms offucosyltransferases", Leg Med (Tokyo), (1), pp 2-14 54 Kojima S., Kageyama T., Fukushi S., Hoshino F.B., Shinohara M., Uchida K., Natori K., Takeda N., Katayama K (2002), "Genogroup-specific PCR primers for detection of Norwalk-like viruses", Journal of virological methods, 100(1), pp 107-114 55 Kotloff K.L., Nataro J.P., Blackwelder W.C., Nasrin D., Farag T.H., et al (2013), "Burden and aetiology of diarrhoeal disease in infants and young children in developing countries (the Global Enteric Multicenter Study, GEMS): a prospective, case-control study", The Lancet, 382(9888), pp 209-222 56 Lanata C.F, Christa L Fischer-Walker, Olascoaga AC, Torres CX, Aryee MJ, Black RE (2013), "Global causes of diarrheal disease mortality in children