BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI ĐỖ THỊ ĐỊNH NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ KHẢO SÁT TÁC DỤNG CHỐNG VIÊM CẤP CỦA PHÂN ĐOẠN ETHYL ACETAT CHIẾT XUẤT TỪ CÂY DÂY ĐÒN GÁNH (GOUANIA LEPTOSTACHYA DC.) HỌ TÁO TA (RHAMNACEAE) LUẬN VĂN THẠC SỸ DƢỢC HỌC HÀ NỘI 2017 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI ĐỖ THỊ ĐỊNH NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ KHẢO SÁT TÁC DỤNG CHỐNG VIÊM CẤP CỦA PHÂN ĐOẠN ETHYL ACETAT CHIẾT XUẤT TỪ CÂY DÂY ĐÒN GÁNH (GOUANIA LEPTOSTACHYA DC.) HỌ TÁO TA (RHAMNACEAE) LUẬN VĂN THẠC SỸ DƢỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH: DƯỢC HỌC CỔ TRUYỀN MÃ SỐ: 60720406 Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS Nguyễn Thị Bích Thu HÀ NỘI 2017 LỜI CÁM ƠN Luận văn hoàn thành, nhận nhiều giúp đỡ nhiều tập thể cá nhân Tôi xin gửi lời cám ơn chân thành đến: PGS TS Nguyễn Thị Bích Thu người thầy tận tình hướng dẫn, định hướng, động viên, giúp đỡ suốt trình thực đề tài Tập thể thầy cô Trường ĐH Dược Hà Nội tận tình dạy dỗ, truyền đạt kiến thức tảng quý báu cho Các thầy cô, anh chị em bạn Khoa Hóa phân tích - Tiêu chuẩn, Viện Dược liệu Trung ương giúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợi môi trường làm việc vui vẻ thời gian thực đề tài TS Nguyễn Thị Hường – Hiệu trưởng anh chị, bạn bè đồng nghiệp môn Dược liệu – trường cao đẳng Dược TW Hải Dương động viên, hỗ trợ vật chất lẫn tinh thần, giúp đỡ suốt thời gian học Cao học Cám ơn gia đình động lực cho phấn đấu bước đường Hà Nội,ngày tháng 04 năm 2017 Xin chân thành cảm ơn! Đỗ Thị Định MỤC LỤC MỤC LỤC DANH MỤC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC BẢNG DANH MỤC HÌNH 10 ĐẶT VẤN ĐỀ CHƢƠNG TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan thực vật chi Gouania Jacq Dây đòn gánh 1.1.1 Vị trí phân loại chi Gouania Jacq .3 1.1.2.Đặc điểm thực vật tính đa dạng sinh học chi Gouania Jacq 1.1.2.1 Đặc điểm thực vật 1.1.2.2 Tính đa dạng sinh học 1.1.3 Đặc điểm thực vật phân bố số loài thuộc chi Gouania 1.1.3.1 Đặc điểm thực vật phân bố loài Gouania javanica Miq 1.1.3.2 Đặc điểm thực vật phân bố loài Gouania leptostachya DC 1.2 Thành phần hoá học 1.2.1 Thành phần hoá học loài Gouania lupuloides 1.2.2 Thành phần hóa học loài Gouania ulmifolia 1.2.3 Thành phần hoá học Dây đòn gánh (Gouania leptostachya DC.) 1.3 Tác dụng sinh học 11 1.3.1 Tác dụng sinh học số loài thuộc chi Gouania Jacq 11 1.3.2 Tác dụng sinh học Dây đòn gánh 11 1.4 Công dụng theo y học cổ truyền 13 1.4.1 Tính vị công 13 1.4.2 Chủ trị 13 1.4.3 Một số thuốc có Dây đòn gánh 13 1.4.3.1 Chữa sưng tấy, tụ máu, đau nhức chấn thương 13 4.3.2 Chữa bỏng bỏng vôi 14 4.3.3 Chữa sốt cao gây co giật trẻ em 14 1.4.3.4 Chữa rắn cắn 14 1.4.3.5 Diệt chấy 14 CHƢƠNG 2: ĐỐI TƢỢNG, VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15 2.1 Đối tƣợng nghiên cứu 15 2.2 Hóa chất thiết bị dùng nghiên cứu 15 2.2.1 Thuốc thử, dung môi, hoá chất 15 2.2.2 Các thiết bị sử dụng nghiên cứu 15 2.3 Phƣơng pháp nghiên cứu 16 2.3.1 Nghiên cứu hóa học 16 2.3.1.1 Định tính sơ nhóm chất Dây đòn gánh 16 2.3.1.2 Chiết xuất cao toàn phần EtOH cao phân đoạn EtOAc 17 2.3.1.3 Phân lập xác định cấu trúc hóa học hợp chất 19 2.3.2 Nghiên cứu độc tính cấp tác dụng chống viêm cấp 19 2.3.2.1 Nghiên cứu độc tính cấp 19 2.3.2.2 Nghiên cứu tác dụng chống viêm cấp 21 2.3.3 Phân tích thống kê 23 CHƢƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 24 3.1 Kết nguyên cứu hóa học Dây đòn gánh 24 3.1.1 Xác định độ ẩm dược liệu 24 3.1.2 Kết định tính sơ nhóm chất Dây đòn gánh 24 3.1.3 Chiết xuất 26 3.1.4 Phân lập 26 3.1.5 Kiểm tra độ tinh khiết chất phân lập 28 3.1.5.1 Kiểm tra độ tinh khiết SKLM 29 3.1.5.2 Kiểm tra độ tinh khiết HPLC 31 3.1.6 Xác định cấu trúc chất phân lập 33 3.1.6.1 Chất DG3 33 3.1.6.2 Chất DG5 36 3.2 Kết nghiên cứu độc tính cấp tác dụng chống viêm cấp 39 3.2.1 Kết nghiên cứu độc tính cấp cao toàn phần EtOH 39 3.2.1.1 Kết nghiên cứu 39 3.2.1.2 Kết luận 39 3.2.2 Kết nghiên cứu tác dụng chống viêm cấp 40 3.2.2.1 Kết nghiên cứu 40 3.2.2.2 Kết luận 42 CHƢƠNG 4: BÀN LUẬN 43 4.1 Về hóa học 43 4.2 Về độc tính cấp tác dụng chống viêm cấp 46 4.2.1 Về độc tính cấp 46 4.2.2 Về tác dụng chống viêm cấp 47 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 50 KẾT LUẬN 50 Về hóa học 50 Về độc tính cấp tác dụng chống viêm cấp 50 KIẾN NGHỊ 51 TÀI LIỆU THAM KHẢO 52 PHỤ LỤC 57 DANH MỤC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT Phần viết tắt Phần viết đầy đủ ADN Acid Deoxyribo Nucleic n-BuOH Butanol DPPH 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl dl Dược liệu EtOH Ethanol EtOAc Ethyl acetat ESI-MS Electron Spray Ionization Mass Spectrometry HPLC High perfomance liquid chromatography GC/MS Gas Chromatography - Mass Spectometry LC/MS Liquid chromatography- Mass spectrometry FTIR Fourier Transform InfraRed IC50 Inhibition concentration 50% IR Infrared MeOH Methanol MS Mass spectrometry NMR Nuclear magnetic resonance LD50 Lethal dose, 50% LD100 Lethal dose, 100% UV – VIS Ultraviolet-Visible SKLM Sắc ký lớp mỏng TLC Thin layer chromatography Phần viết tắt Phần viết đầy đủ VSV Vi sinh vật VHLKH & CNVN Viện hàn lâm khoa học công nghệ Việt Nam DANH MỤC BẢNG Bảng Tên bảng Trang 3.1 Xác định độ ẩm mẫu Dây đòn gánh 24 3.2 Tóm tắt kết định tính nhóm chất 25 3.3 Số liệu phổ 1H 13C-NMR hợp chất DG3 quercitrin 35 3.4 Số liệu phổ 1H 13C-NMR hợp chất DG5 catechin 38 3.5 So sánh tác dụng chống viêm cấp mẫu thử phân đoạn 41 EtOAc so với lô chứng bệnh lý DANH MỤC HÌNH Tên hình Hình Trang 1.1 Hình ảnh Dây đòn gánh 1.2 Hình ảnh Dây Đòn gánh lúc hoa 1.3 Cấu trúc hóa học acid gouanic A 1.4 Cấu trúc hóa học acid ceanothenic 1.5 Cấu trúc hóa học acid gouanic C 1.6 Cấu trúc hóa học hợp chất C5 1.7 Cấu trúc hóa học hợp chất C9 1.8 Cấu trúc hóa học hợp chất DG1 10 1.9 Cấu trúc hóa học hợp chất DG2 10 2.1 Sơ đồ quy trình chiết xuất cao Dây đòn gánh 18 2.2 Quy trình thí nghiệm thử tác dụng chống viêm 22 3.1 Quy trình phân lập chất từ phân đoạn EtOAc 28 3.2 Sắc ký lớp mỏng DG3 so với cao EtOH cao EtOAc 29 3.3 Sắc ký lớp mỏng DG5 so với cao EtOH cao EtOAc 30 3.4 Sắc ký đồ HPLC kiểm tra độ tinh khiết hợp chất DG3 32 3.5 Sắc ký đồ HPLC kiểm tra độ tinh khiết hợp chất DG5 33 3.6 Sơ đồ cấu tạo hóa học DG3 36 3.7 Sơ đồ cấu tạo hóa học DG5 39 3.8 Mức độ phù bàn chân chuột (%) theo thời gian (giờ) lô 42 chuột thí nghiệm Phụ lục Phiếu giám định tên KH mẫu NC Dây đòn gánh mẫu lưu 57 Phụ lục Phổ chất DG3 59 Phụ lục Phổ chất DG5 63 Phụ lục 2: Phổ chất DG3 59 60 61 62 Phụ lục 3: Phổ DG5 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 ... "Nghiên cứu thành phần hóa học khảo sát tác dụng chống viêm cấp phân đoạn ethyl acetat chiết xuất từ Dây đòn gánh (Gouania leptostachya DC.), họ Táo ta (Rhamnaceae) với hai mục tiêu: Chiết xuất, phân. .. DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI ĐỖ THỊ ĐỊNH NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ KHẢO SÁT TÁC DỤNG CHỐNG VIÊM CẤP CỦA PHÂN ĐOẠN ETHYL ACETAT CHIẾT XUẤT TỪ CÂY DÂY ĐÒN GÁNH (GOUANIA. .. từ phân đoạn ethyl acetat chiết xuất từ Dây đòn gánh (Gouania leptostachya DC.) Đánh giá độc tính cấp cao toàn phần EtOH tác dụng chống viêm cấp cao phân đoạn ethyl acetat chiết xuất từ Dây đòn