LỜI CẢM ƠN Xin trân trọng cảm ơn trường Đại học Mở Thành phố Hồ Chí Minh, ban Chủ nhiệm khoa Công nghệ Sinh học tạo điều kiện cho tiếp thu cách tốt nhất, giúp có môi trường học tập rèn luyện Xin gửi lời cảm ơn đến tất thầy cô giảng dạy suốt thời gian qua, trang bị cho kiến thức cần thiết giúp vững bước chân chặn đường sau Trân trọng cảm ơn cô Nguyễn Trần Đông Phương người trực tiếp hướng dẫn truyền đạt cho kiến thức quý báu để thực tốt đề tài Trân trọng cảm ơn thầy Nguyễn Minh Hoàng bạn phòng Thí nghiệm Hóa – Môi trường giúp đỡ, tạo điều kiện giúp hoàn thành đề tài Xin cảm ơn tất bạn bè, anh chị em học việc phòng thí nghiệm Công nghệ Tế bào thực vật bên cạnh động viên giúp đỡ suốt thời gian học tập Cuối cùng, xin chân thành cảm ơn ba mẹ yêu thương nuôi nấng trưởng thành, bên con, an ủi cho lời khuyên gặp khó khăn Xin cảm ơn lòng tình cảm chân thành Chúc tất điều hạnh phúc thành công Tp Hồ Chí Minh, ngày 05 tháng năm 2015 Lê Văn Vinh i DANH MỤC HÌNH Hình I.1 Cây Húng chanh Hình I.2 Hoa Húng chanh Hình I.3 Đoạn cành Húng chanh già, có rễ đốt Hình I.4 Hai thành phần tinh dầu Húng chanh 12 Hình I.5 Một số dược phẩm điều chế từ Húng chanh 14 Hình I.6 Các đường sinh tổng hợp monoterpinenes sesquiterpenes thực vật (Dinesh A Nagegowda, 2010) 18 Hình II.1 Quy trình ly trích tinh dầu 38 Hình II.2 Bộ chưng cất tinh dầu phương pháp lôi nước 39 Hình III.1 Ảnh hưởng nồng độ BA kết hợp IAA trình tạo chồi từ đoạn chồi ngủ Húng chanh môi trường MS sau tuần nuôi cấy 43 Hình III.2 Ảnh hưởng nồng độ Kin kết hợp IAA trình tạo chồi từ đoạn chồi ngủ Húng chanh môi trường MS sau tuần nuôi cấy 45 Hình III.3 Ảnh hưởng nồng độ than hoạt tính lên sinh trưởng chồi in vitro từ đoạn chồi ngủ Húng chanh môi trường MS sau tuần nuôi cấy .47 Hình III.4 Ảnh hưởng nồng độ khoáng đa lượng lên sinh trưởng chồi in vitro từ đoạn chồi ngủ Húng chanh sau tuần nuôi cấy 49 Hình III.5 Ảnh hưởng nồng độ khoáng đa lượng bổ sung than hoạt tính g/l đến sinh trưởng chồi Húng chanh sau tuần nuôi cấy .51 Hình III.6 Ảnh hưởng nồng độ đường lên sinh trưởng chồi in vitro Húng chanh sau tuần nuôi cấy .52 Hình III.7 Ảnh hưởng nồng độ đường bổ sung than hoạt tính g/l đến sinh trưởng chồi Húng chanh sau tuần nuôi cấy .54 Hình III.8 Ảnh hưởng kết hợp yếu tố môi trường tối ưu đến sinh trưởng chồi in vitro từ đoạn chồi ngủ Húng chanh sau tuần nuôi cấy 56 Hình III.9 Tinh dầu Húng chanh thu .57 ii DANH MỤC BẢNG Bảng I.1 Thành phần phần trăm hợp chất bay Húng chanh trồng số nơi giới 11 Bảng II.1 Ảnh hưởng nồng độ BA kết hợp IAA trình tạo chồi từ đoạn chồi ngủ Húng chanh 32 Bảng II.2 Ảnh hưởng nồng độ Kin kết hợp IAA trình tạo chồi từ đoạn chồi ngủ Húng chanh 32 Bảng II.3 Ảnh hưởng than hoạt tính trình sinh trưởng chồi in vitro từ đoạn chồi ngủ Húng chanh 33 Bảng II.4 Ảnh hưởng nồng độ khoáng đa lượng đến sinh trưởng chồi in vitro từ đoạn chồi ngủ Húng chanh 34 Bảng II.5 Ảnh hưởng nồng độ khoáng đa lượng bổ sung than hoạt tính đến sinh trưởng chồi in vitro từ đoạn chồi ngủ Húng chanh 35 Bảng II.6 Ảnh hưởng nồng độ đường đến sinh trưởng chồi in vitro từ đoạn chồi ngủ Húng chanh 36 Bảng II.7 Ảnh hưởng nồng độ đường nồng độ than hoạt tính đến sinh trưởng chồi in vitro từ đoạn chồi ngủ Húng chanh 36 Bảng II.8 Ảnh hưởng kết hợp yếu tố môi trường đến sinh trưởng chồi in vitro từ đoạn chồi ngủ Húng chanh 37 Bảng II.9 Ảnh hưởng thời gian để héo nguyên liệu đến hàm lượng tinh dầu Húng chanh 39 Bảng III.1 Ảnh hưởng nồng độ BA kết hợp IAA trình tạo chồi in vitro từ đoạn chồi ngủ Húng chanh 42 Bảng III.2 Ảnh hưởng nồng độ Kin kết hợp IAA trình tạo chồi in vitro từ đoạn chồi ngủ Húng chanh 44 Bảng III.3 Ảnh hưởng nồng độ than hoạt tính lên sinh trưởng chồi in vitro từ đoạn chồi ngủ Húng chanh 46 Bảng III.4 Ảnh hưởng nồng độ khoáng đa lượng lên sinh trưởng chồi in vitro từ đoạn chồi ngủ Húng chanh 48 Bảng III.5 Ảnh hưởng nồng độ khoáng đa lượng có bổ sung than hoạt tính đến sinh trưởng chồi in vitro từ đoạn chồi ngủ Húng chanh 50 Bảng III.6 Ảnh hưởng nồng độ đường lên sinh trưởng chồi in vitro từ đoạn chồi ngủ Húng chanh 52 iii Bảng III.7 Ảnh hưởng nồng độ đường bổ sung than hoạt tính lên sinh trưởng chồi in vitro từ đoạn chồi chủ Húng chanh 53 Bảng III.8 Ảnh hưởng kết hợp yếu tố môi trường tối ưu đến sinh trưởng chồi in vitro từ đoạn chồi ngủ Húng chanh 55 Bảng III.9 Ảnh hưởng thời gian để héo nguyên liệu lên hàm lượng tinh dầu Húng chanh .57 iv DANH MỤC VIẾT TẮT AC Than hoạt tính BA 6-Benzinaminopurine IAA Indol-3-acetic acid Kin Kinetin MS Môi trường Murashige Skoog v MỤC LỤC Danh mục hình ii Danh mục bảng iii Danh mục viết tắt v MỤC LỤC vi ĐẶT VẤN ĐỀ Phần I TỔNG QUAN TÀI LIỆU Sơ lược họ Lamiaceae .4 Sơ lược Húng chanh Plectranthus amboinicus (Lour.) Spreng 5 2.1 Vị trí phân loại 2.2 Nguồn gốc, phân bố 2.3 Đặc tính sinh học Húng chanh 2.4 Đặc điểm sinh thái Húng chanh 2.5 Kĩ thuật nhân giống .8 2.6 Thành phần công dụng Húng chanh 10 Hợp chất thứ cấp 14 3.1 Những yếu tố ảnh hưởng đến trình tổng hợp hợp chất thứ cấp .15 3.2 Tinh dầu 16 3.3 Một số phương pháp chiết tinh dầu 19 Nghiên cứu nước: 21 4.1 Nghiên cứu nước 21 4.2 Nghiên cứu nước 22 Nuôi cấy mô tế bào thực vật 22 5.1 Khái niệm ứng dụng 22 5.2 Các yếu tố ảnh hưởng đến nuôi cấy mô 23 5.3 Các điều kiện ảnh hưởng đến trình nuôi cấy 23 5.4 Vai trò chất điều hòa sinh trưởng 25 5.5 Than hoạt tính .26 vi Sự phát sinh hình thái chồi bất định 26 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 30 Phần II Điạ điể m và thời gian thực hiê ̣n nghiên cứu khoa học 30 1.1 Điạ điể m: .30 1.2 Thời gian: 30 Đố i tươ ̣ng nghiên cứu 30 Điều kiện nuôi cấy in vitro Húng chanh .30 3.1 Môi trường nuôi cấy .30 3.2 Điều kiện nuôi cấy 31 3.3 Hoá chất dùng nuôi cấy mô 31 Phương pháp 31 4.1 Khảo sát số yếu tố môi trường ảnh hưởng tới sinh trưởng chồi in vitro Húng chanh 31 4.2 Khảo sát ảnh hưởng thời gian để héo nguyên liệu lên hàm lượng tinh dầu Húng chanh 37 Bố trí thí nghiê ̣m 40 Phần III KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 42 Kết 42 1.1 Ảnh hưởng yếu tố môi trường lên sinh trưởng chồi in vitro từ chồi ngủ Húng chanh 42 1.2 Khảo sát ảnh hưởng thời gian để héo nguyên liệu lên hàm lượng tinh dầu Húng chanh 57 Thảo luận .58 Phần IV KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 63 Kết luận 63 Kiến nghị .63 Tài liệu tham khảo 65 Phụ lục viii vii ĐẶT VẤN ĐỀ Từ xa xưa, người biết sử dụng tinh dầu từ loại thảo mộc có mùi thơm nghi lễ tôn giáo đời sống ngày Ngày nay, tinh dầu nguyên liệu ngành công nghiệp dược phẩm hóa mỹ phẩm Ngoài ưu điểm mùi hương, tinh dầu có ưu điểm khác không gây hại môi trường dễ phân hủy so với hợp chất khác Do có công dụng thực tiễn, ngày có nhiều công trình nghiên cứu khai thác tinh dầu toàn giới Ở Việt Nam, với điều kiện tự nhiên ưu đãi, thuận lợi cho việc hình thành phát triển loại thực vật, đặc biệt chứa tinh dầu có giá trị cao, có Húng chanh Húng chanh loại rau thơm quen thuộc nhân dân ta, trồng làm thuốc hay làm rau ăn nhiều nơi Theo Đông y, Húng chanh có vị cay, mùi thơm, tính ấm, có tác dụng phát tán phong hàn, tiêu đờm, trừ phong, sát khuẩn, dùng chủ yếu để chữa cảm cúm, chữa ho, viêm họng Trong Húng chanh có chứa tinh dầu, thành phần chủ yếu hợp chất phenolic có carvacrol, thymol, eugenol, salicylat chavicol (Nguyễn Thị Bích Thuyền cộng sự, 2012) Tinh dầu Húng chanh vị thuốc nam thông dụng trồng với quy mô lớn vùng Đông Nam Á, Trung Á, Ấn Độ, Trung Quốc để chữa bệnh, đặc biệt chữa ho cảm cúm cung cấp tinh dầu cho ngành công nghiệp nước hoa giới Ngoài ra, nghiên cứu gần chứng minh tinh dầu Húng chanh có khả kháng số vi sinh vật E coli ATCC 25922, Candida albican ATCC 10231, Enterococcus feacalis ATCC 29212, Aspergillus niger, Bacillus subtilis ATCC 6633, Staphylococus aureus ATCC 25923 Samonella typhi2 (Nguyễn Thị Bích Thuyền cộng sự, 2012) Tinh dầu Húng chanh ứng dụng nhiều loại dược phẩm, thực phẩm chức năng, bánh kẹo, … Các đề tài nghiên cứu Húng chanh chủ yếu nhằm thu nhận tinh dầu từ nguồn nguyên liệu sẵn có tự nhiên, hay nhân giống phương pháp thủy canh (Phạm Triều Nghi, 2013), nuôi cấy mô hệ thống quang tự dưỡng (Nguyễn Như Hiến cộng sự, 2011) Tuy nhiên, nghiên cứu yếu tố môi trường ảnh hưởng đến sinh trưởng Húng chanh chưa quan tâm Do đó, nghiên cứu đề tài “KHẢO SÁT MỘT SỐ YẾU TỐ MÔI TRƯỜNG ẢNH HƯỞNG LÊN SỰ SINH TRƯỞNG CHỒI CÂY HÚNG CHANH PLECTRANTHUS AMBOINICUS (LOUR.) SPRENG IN VITRO” nhằm tìm hiểu ảnh hưởng vài yếu tố môi trường (nồng độ thành phần chất điều hòa tăng trưởng thực vật, nồng độ than hoạt tính, nồng độ khoáng đa lượng nồng độ đường) lên sinh trưởng chồi Húng chanh in vitro TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt [1] Bộ Y tế (2009), Dược điển Việt Nam IV, Nhà xuất Y học [2] Đỗ Huy Bích, Đặng Quang Chung, Bùi Xuân Chương, Nguyễn Thượng Dong, Đỗ Trung Đàm, Phạm Văn Hiển, Vũ Ngọc Lộ, Phạm Duy Mai, Phạm Kim Mãn, Đoàn Thị Nhu, Nguyễn Tập, Trần Toàn (2006), Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam, Tập 1, Nhà xuất Khoa học kĩ thuật [3] Vương Ngọc Chính (2005), Hương liệu mỹ phẩm, Nhà xuất đại học Quốc gia Thành phố Hồ Chí Minh [4] Huỳnh Thị Ánh Hồng, Nguyễn Trần Đông Phương (2013), Nhân giống khảo sát số yếu tố ảnh hưởng đến trình chưng cất tinh dầu Hoắc hương Pogostemon cablin (Blanco) Benth, Khóa luận tốt nghiệp, trường Đại học Mở Thành phố Hồ Chí Minh [5] Dương Công Kiên (2002), Nuôi cấy mô thực vật tập 1, Nhà xuất Đại học Quốc gia Thành phố Hồ Chí Minh [6] Vũ Ngọc Lộ, Đỗ Trung Võ, Nguyễn Mạnh Pha, Lê Thúy Hạnh (1996), Những tinh dầu Việt Nam, Nhà xuất Khoa học Kĩ thuật Hà Nội [7] Đỗ Tất Lợi (2004), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, Công ty in Công đoàn Việt Nam, Hà Nội [8] Nguyễn Đức Lượng, Lê Thị Thủy Tiên (2006), Công nghệ tế bào, Nhà xuất Đại học Quốc gia Thành phố Hồ Chí Minh [9] Võ Thị Bạch Mai (2004), Sự phát triển chồi rễ, Nhà xuất Đại học Quốc gia Thành phố Hồ Chí Minh 65 [10] Phạm Triều Nghi (2013), Xây dựng phương pháp thủy canh rau tần dày (Plectranthus amboinicus) đốt thân số môi trường dinh dưỡng, Thư viện đề tài nghiên cứu Khoa học Euréka [11] Hoàng Thị Sản (2009), Phân loại thực vật học, Nhà xuất Giáo dục [12] Lê Ngọc Thạch (2003), Tinh dầu, Nhà xuất Đại học Quốc gia TP Hồ Chí Minh [13] Nguyễn Thị Bích Thuyền, Nguyễn Thị Diệu Thúy, Châu Thị Thúy Hằng (2012), Khảo sát thành phần hóa học hoạt tính kháng vi sinh vật tinh dầu Húng chanh ( Plectranthus amboinicus Lour.), Tạp chí Khoa học, 21(a), tr 144-147 [14] Bùi Trang Việt (2000), Sinh lý thực vật đại cương, Nhà xuất Đại học Quốc gia Thành phố Hồ Chí Minh Tài liệu nước [15] Annadurai Senthilkumar, Venugopalan Venkatesalu (2010), “Chemical composition and larvicidal activity of the essential oil of Plectranthus amboinicus (Lour.) Spreng against Anopheles stephensi: a malarial vector mosquito”, Parasitol Res, 107, 1275-1278 [16] Akalezi C.O., Liu S., Li Q.S., Yu J.T., Zhong J.J (1998), “Combined effects of initial sucrose concentration and inoculum size on cell growth and ginseng saponin production by suspension cultures of P ginseng”, Process Biochem, 34, 639 [17] Candrappa S., Hugar S., Itgappa M., Nagarajappa K (2009), “Antidiabetic and antioxidant potential of Coleus aromaticus leaf extracts in alloxan induced diabetic rats”, Pharmacologyonline, 3, 1054-1061 [18] Chang J., Cheng C (2007), “Potential use of Plectranthus amboinicus in the Treatment of Rheumatoid Arthritis”, eCAM, 7(1), 115-120 66 [19] Dinesh A Nagegowda (2010), “Plant volatile terpenoid metabolism: Biosynthtic genes, transcriptional regulation and subcellular comparmentation”, FEBS Letters, 584, 2965-2973 [20] Gupta S.D., Ibaraki Y (2006), Plant tissue culture engineering, Springer [21] Koba K., Garde D., Sanda K., Raynaud C., Chaumont, JP (2007), “Chemical composition and antimicrobial properties of the leaf esential oil of Coleus aromaticus Benth from Cambodia”, Inter J of Essential Oil Therapeutics, 1(1), 16-20 [22] Kee-Yoeup P and Eun-Joo H (2000), “Cytokinins, auxin and activated charcoal affect organogenesis and anatomical characteristics of shoot-tip cultures of Lisianthus [Eustoma grandiflorum (Raf) Shinn] In Vitro”, Cell Dev Bio Plant, 36(2), 128-132 [23] Krajňáková J., Gömöry D and Häggman H.,(2009), “Effect of sucrose concentration, polyethylene glycon and activated charcoal on maturation and regeneration of Abies cephalonica somatic embryos”, Plant Cell Tiss.Org.Cult., 96, 251-262 [24] Myrthy PS, Ramalakshmi K., Srinivas P (2009), “Fungitoxyc activity of India borage (Plectrathus amboinicus) volatiles”, Food chemistry, 114, 1014-1018 [25] Pan M J and Staden V J (1998), “The use of charcoal in in vitro culture: review”, J Plant Grow Geg., 26, 155-163 [26] Rashmi Sahay Khare, Shanta Banejee, Kanika Kundu (2011), “Coleus aromaticus Benth.- a nutritive medicinal plant of potential therapeutic value”, ISSN, 2(3), 488-500 [27] Sánchez M C., San-josé M C., Ballester A and Vieitez A M (1996), “Requirement for in vitro rooting of Quercus robur and Q rubra shoots derived from mature trees”, Tree physiol., 16, 673- 680 67 [28] Singh G, Singh OP, Prasad YR, de Lampasona MP, Catalan C (2002), “Studies on essential oil, part 33: Chemical and insecticidal investigations on leaf oil of Coleus amboinicus Lour.”, Flavour and Fragrance J., 17, 440-442 [29] Small E (1997), Culinary Herbs, NRC Research Press [30] Staples G.W., K M.S (1999), Ethnic culinary herbs, University of Hawaii Press [31] Valera D, Rivas R, Avila JL, Aubert L, Alonso-Amelot M, Usubillage A (2003), “The essential oil of Coleus amboinicus Loureiro chemical composition and evaluation of insect anti-feedant effects”, Ciencia, 11(2), 113-118 [32] Zhong J J (1998), “Production of genseng saponin and polysaccharide by cell cultures of P ginseng and P notoginseng, Effects of plant growth regulators”, Appl Biochem and Biotechnol., 75, 261 68 PHỤ LỤC I Thành phần môi trường MS (Murashige Skoog) Bảng 1: Thành phần muối khoáng (mg/l) Skoog I Skoog II Skoog III NH4NO3 1650,00 KNO3 1900,00 KH2PO4 170,00 MgSO4.7H2O 370,00 CaCl2.2H2O 440,00 Na2EDTA 37,30 FeSO4.7H2O 27,80 Mn2SO4.4H2O 22,30 H3BO3 6,20 ZnSO4.7H2O 8,60 KI 0,83 Na2MoO4.2H2O 0,25 CuSO4.5H2O 0,025 CoCl2.6H2O 0,025 Bảng Thành phần Vitamin Morel (mg/l) Pirydoxyne (B6) 1,00 Biotin (II) 0,01 Morel’s Meso-inositol 100,00 Vitamin Nicotinic Acid (P.P) 1,00 Thiamin-HCl (B1) 1,00 Pantotheate-Ca 1,00 viii II Phân tích thống kê ANOVA Kết xử lý thống kê thí nghiệm tạo chồi môi trường MS bổ sung kết hợp BA IAA ANOVA Table for chieucao by nghiem thuc Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Val Between groups 647.869 129.574 206.77 0.00 Within groups 7.52 12 0.626667 Total (Corr.) 655.389 17 Table of Means for chieucao by nghiem thuc with 95.0 percent LSD intervals -Stnd error nghiem thuc Count Mean (pooled s) Lower limit Upper limit -0 1.43333 0.457044 0.729186 2.13748 12 19.4667 0.457044 18.7625 20.1708 15 14.8667 0.457044 14.1625 15.5708 3 6.06667 0.457044 5.36252 6.77081 7.06667 0.457044 6.36252 7.77081 12.3333 0.457044 11.6292 13.0375 -Total 18 10.2056 ix Multiple Range Tests for chieucao by nghiem thuc -Method: 95.0 percent Duncan nghiem thuc Count Mean Homogeneous Groups -0 1.43333 X 3 6.06667 X 7.06667 X 12.3333 X 15 14.8667 X 12 19.4667 X -Contrast Difference -0 - 12 *-18.0333 - 15 *-13.4333 - *-4.63333 - *-5.63333 - *-10.9 12 - 15 *4.6 12 - *13.4 12 - *12.4 12 - *7.13333 15 - *8.8 15 - *7.8 15 - *2.53333 - -1.0 - *-6.26667 - *-5.26667 -* denotes a statistically significant difference Kết xử lý thống kê thí nghiệm tạo chồi môi trường MS bổ sung kết hợp Ki IAA ANOVA Table for chieu cao by nghiem thuc Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 762.746 152.549 104.68 0.0000 Within groups 17.487 12 1.45725 Total (Corr.) 780.233 17 x Table of Means for chieu cao by nghiem thuc with 95.0 percent LSD intervals -Stnd error nghiem thuc Count Mean (pooled s) Lower limit Upper limit -0 1.63333 0.696958 0.559561 2.70711 12 5.53 0.696958 4.45623 6.60377 15 9.34333 0.696958 8.26956 10.4171 3 22.1333 0.696958 21.0596 23.2071 5.04 0.696958 3.96623 6.11377 8.81 0.696958 7.73623 9.88377 -Total 18 8.74833 Multiple Range Tests for chieu cao by nghiem thuc -Method: 95.0 percent Duncan nghiem thuc Count Mean Homogeneous Groups -0 1.63333 X 5.04 X 12 5.53 X 8.81 X 15 9.34333 X 3 22.1333 X -Contrast Difference -0 - 12 *-3.89667 - 15 *-7.71 - *-20.5 - *-3.40667 - *-7.17667 12 - 15 *-3.81333 12 - *-16.6033 12 - 0.49 12 - *-3.28 15 - *-12.79 15 - *4.30333 15 - 0.533333 - *17.0933 - *13.3233 - *-3.77 -* denotes a statistically significant difference Kết xử lý thống kê thí nghiệm tạo chồi môi trường MS bổ sung than hoạt tính Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 90.0115 18.0023 3.36 0.0397 Within groups 64.2989 12 5.35824 Total (Corr.) 154.31 17 xi Table of Means for Col_3 by nghiem thuc with 95.0 percent LSD intervals -Stnd error nghiem thuc Count Mean (pooled s) Lower limit Upper limit -0 5.23 1.33644 3.171 7.289 8.06667 1.33644 6.00767 10.1257 12.1133 1.33644 10.0543 14.1723 3 6.92 1.33644 4.861 8.979 9.83333 1.33644 7.77433 11.8923 6.95667 1.33644 4.89767 9.01567 -Total 18 8.18667 Multiple Range Tests for Col_3 by nghiem thuc -Method: 95.0 percent Duncan nghiem thuc Count Mean Homogeneous Groups -0 5.23 X 3 6.92 XX 6.95667 XX 8.06667 XXX 9.83333 XX 12.1133 X -Contrast Difference -0 - -2.83667 - *-6.88333 - -1.69 - *-4.60333 - -1.72667 - -4.04667 - 1.14667 - -1.76667 - 1.11 - *5.19333 - 2.28 - *5.15667 - -2.91333 - -0.0366667 - 2.87667 -* denotes a statistically significant difference Kết xử lý thống kê thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng thay đổi nồng độ đa lượng lên sinh trưởng chồi in vitro từ chồi ngủ Húng chanh xii ANOVA Table for chieucao by NT Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 368.933 92.2333 34.59 0.0000 Within groups 26.6667 10 2.66667 Total (Corr.) 395.6 14 Table of Means for chieucao by NT with 95.0 percent LSD intervals Stnd error NT Count Mean (pooled s) Lower limit Upper limi 0.25MS 13.0 0.942809 11.5146 14.485 0.5MS 15.6667 0.942809 14.1812 17.152 1.5MS 5.33333 0.942809 3.8479 6.8187 2MS 2.33333 0.942809 0.847904 3.8187 MS 6.66667 0.942809 5.18124 8.152 Total 15 8.6 Multiple Range Tests for chieucao by NT -Method: 95.0 percent Duncan NT Count Mean Homogeneous Groups -2MS 2.33333 X 1.5MS 5.33333 X MS 6.66667 X 0.25MS 13.0 X 0.5MS 15.6667 X -Contrast Difference -0.25MS - 0.5MS -2.66667 0.25MS - 1.5MS *7.66667 0.25MS - 2MS *10.6667 0.25MS - MS *6.33333 0.5MS - 1.5MS *10.3333 0.5MS - 2MS *13.3333 0.5MS - MS *9.0 1.5MS - 2MS *3.0 1.5MS - MS -1.33333 2MS - MS *-4.33333 -* denotes a statistically significant difference Kết xử lý thống kê thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng thay đổi nồng độ đa lượng bổ sung than hoạt tính lên sinh trưởng chồi in vitro từ chồi ngủ Húng chanh xiii ANOVA Table for chieucaochoi by nghiem thuc Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 428.278 85.6556 35.86 0.0000 Within groups 28.6667 12 2.38889 Total (Corr.) 456.944 17 Table of Means for chieucaochoi by nghiem thuc with 95.0 percent LSD intervals -Stnd error nghiem thuc Count Mean (pooled s) Lower limit Upper limit -0.25MS* 12.6667 0.892354 11.2919 14.0415 0.5MS* 14.6667 0.892354 13.2919 16.0415 1.5MS* 3.33333 0.892354 1.95852 4.70815 2MS* 1.0 0.892354 -0.374812 2.37481 MS 6.66667 0.892354 5.29185 8.04148 MS* 10.0 0.892354 8.62519 11.3748 -Total 18 8.05556 Multiple Range Tests for chieucaochoi by nghiem thuc -Method: 95.0 percent Duncan nghiem thuc Count Mean Homogeneous Groups -2MS* 1.0 X 1.5MS* 3.33333 X MS 6.66667 X MS* 10.0 X 0.25MS* 12.6667 XX 0.5MS* 14.6667 X -Contrast Difference -0.25MS* - 0.5MS* -2.0 0.25MS* - 1.5MS* *9.33333 0.25MS* - 2MS* *11.6667 0.25MS* - MS *6.0 0.25MS* - MS* 2.66667 0.5MS* - 1.5MS* *11.3333 0.5MS* - 2MS* *13.6667 0.5MS* - MS *8.0 0.5MS* - MS* *4.66667 1.5MS* - 2MS* 2.33333 1.5MS* - MS *-3.33333 1.5MS* - MS* *-6.66667 2MS* - MS *-5.66667 2MS* - MS* *-9.0 MS - MS* *-3.33333 -* denotes a statistically significant difference xiv Kết xử lý thống kê thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng thay đổi nồng độ đường lên sinh trưởng chồi in vitro từ chồi ngủ Húng chanh ANOVA Table for chieu cao by nghiem thuc Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 368.25 122.75 34.26 0.0001 Within groups 28.6667 3.58333 Total (Corr.) 396.917 11 Table of Means for chieu cao by nghiem thuc with 95.0 percent LSD intervals -Stnd error nghiem thuc Count Mean (pooled s) Lower limit Upper limit -20 21.0 1.09291 19.2179 22.7821 30 7.0 1.09291 5.21791 8.78209 40 10.0 1.09291 8.21791 11.7821 50 8.33333 1.09291 6.55125 10.1154 -Total 12 11.5833 Multiple Range Tests for chieu cao by nghiem thuc -Method: 95.0 percent Duncan nghiem thuc Count Mean Homogeneous Groups -30 7.0 X 50 8.33333 X 40 10.0 X 20 21.0 X -Contrast Difference -20 - 30 *14.0 20 - 40 *11.0 20 - 50 *12.6667 30 - 40 -3.0 30 - 50 -1.33333 40 - 50 1.66667 -* denotes a statistically significant difference Kết xử lý thống kê thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng thay đổi nồng độ đường bổ sung than hoạt tính lên sinh trưởng chồi in vitro từ chồi ngủ Húng chanh xv ANOVA Table for chieu cao by nghiem thuc Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 288.4 72.1 32.77 0.0000 Within groups 22.0 10 2.2 Total (Corr.) 310.4 14 Table of Means for chieu cao by nghiem thuc with 95.0 percent LSD intervals -Stnd error nghiem thuc Count Mean (pooled s) Lower limit Upper limit -20* 16.3333 0.856349 14.9841 17.6825 30 7.0 0.856349 5.65079 8.34921 30* 13.3333 0.856349 11.9841 14.6825 40* 10.3333 0.856349 8.98413 11.6825 50* 4.0 0.856349 2.65079 5.34921 -Total 15 10.2 Multiple Range Tests for chieu cao by nghiem thuc -Method: 95.0 percent Duncan nghiem thuc Count Mean Homogeneous Groups -50* 4.0 X 30 7.0 X 40* 10.3333 X 30* 13.3333 X 20* 16.3333 X -Contrast Difference -20* - 30 *9.33333 20* - 30* *3.0 20* - 40* *6.0 20* - 50* *12.3333 30 - 30* *-6.33333 30 - 40* *-3.33333 30 - 50* *3.0 30* - 40* *3.0 30* - 50* *9.33333 40* - 50* *6.33333 -* denotes a statistically significant difference xvi Kết xử lý thống kê thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng kết hợp nồng độ khoáng đa lượng, đường, than hoạt tính lên sinh trưởng chồi in vitro từ chồi ngủ Húng chanh ANOVA Table for chieu cao by nghiem thuc Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 559.067 139.767 23.04 0.0000 Within groups 60.6667 10 6.06667 Total (Corr.) 619.733 14 Table of Means for chieu cao by nghiem thuc with 95.0 percent LSD intervals -Stnd error nghiem thuc Count Mean (pooled s) Lower limit Upper limit -1/2 13.6667 1.42205 11.4262 15.9072 1/2 * 10.3333 1.42205 8.09284 12.5738 1/4 22.0 1.42205 19.7595 24.2405 1/4 * 21.6667 1.42205 19.4262 23.9072 DC 6.66667 1.42205 4.42618 8.90716 -Total 15 14.8667 Multiple Range Tests for chieu cao by nghiem thuc -Method: 95.0 percent Duncan nghiem thuc Count Mean Homogeneous Groups -DC 6.66667 X 1/2 * 10.3333 XX 1/2 13.6667 X 1/4 * 21.6667 X 1/4 22.0 X -Contrast Difference -1/2 - 1/2 * 3.33333 1/2 - 1/4 *-8.33333 1/2 - 1/4 * *-8.0 1/2 - DC *7.0 1/2 * - 1/4 *-11.6667 1/2 * - 1/4 * *-11.3333 1/2 * - DC 3.66667 1/4 - 1/4 * 0.333333 1/4 - DC *15.3333 1/4 * - DC *15.0 -* denotes a statistically significant difference xvii Kết xử lý thống kê thí nghiệm khảo sát thời gian để héo ảnh hưởng đến hàm lượng tinh dầu Húng chanh ANOVA Table for khoi luong by nghiem thuc Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 14825.0 4941.67 10.78 0.0035 Within groups 3666.67 458.333 Total (Corr.) 18491.7 11 Table of Means for khoi luong by nghiem thuc with 95.0 percent LSD intervals -Stnd error nghiem thuc Count Mean (pooled s) Lower limit Upper limit -0 156.667 12.3603 136.512 176.821 10 143.333 12.3603 123.179 163.488 20 166.667 12.3603 146.512 186.821 30 76.6667 12.3603 56.512 96.8214 -Total 12 135.833 Multiple Range Tests for khoi luong by nghiem thuc -Method: 95.0 percent Duncan nghiem thuc Count Mean Homogeneous Groups -30 76.6667 X 10 143.333 X 156.667 X 20 166.667 X -Contrast Difference -0 - 10 13.3333 - 20 -10.0 - 30 *80.0 10 - 20 -23.3333 10 - 30 *66.6667 20 - 30 *90.0 -* denotes a statistically significant difference xviii ... sự, 2011) Tuy nhiên, nghiên cứu yếu tố môi trường ảnh hưởng đến sinh trưởng Húng chanh chưa quan tâm Do đó, nghiên cứu đề tài “KHẢO SÁT MỘT SỐ YẾU TỐ MÔI TRƯỜNG ẢNH HƯỞNG LÊN SỰ SINH TRƯỞNG CHỒI... đến sinh trưởng chồi in vitro từ đoạn chồi ngủ Húng chanh 36 Bảng II.8 Ảnh hưởng kết hợp yếu tố môi trường đến sinh trưởng chồi in vitro từ đoạn chồi ngủ Húng chanh 37 Bảng II.9 Ảnh hưởng. .. 42 1.1 Ảnh hưởng yếu tố môi trường lên sinh trưởng chồi in vitro từ chồi ngủ Húng chanh 42 1.2 Khảo sát ảnh hưởng thời gian để héo nguyên liệu lên hàm lượng tinh dầu Húng chanh