BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI Đinh Thị Hải Bình NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ VIÊN GIẢI PHÓNG CÓ KIỂM SOÁT PSEUDOEPHEDRIN - LORATADIN Chuyên ngành: Công nghệ dược phẩm bào chế thuốc Mã số: 62720402 TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC Hà Nội, năm 2017 Công trình hoàn thành tại: TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI Người hướng dẫn khoa học : - PGS TS Nguyễn Thanh Hải - PGS TS Trịnh Văn Lẩu Phản biện 1: ………………………………………… Phản biện 2: ………………………………………… Phản biện 3: ……………………………………… Luận án bảo vệ trước Hội đồng đánh giá luận án cấp Trường họp Trường Đại học Dược Hà Nội vào hồi … giờ… ngày… tháng … năm Có thể tìm hiểu luận án tại: - Thư viện Quốc gia Việt Nam - Thư viện Trường ĐH Dược HN ĐẶT VẤN ĐỀ Hiện nay, viêc̣ bào chế dược chất da ̣ng thuố c giải phóng có kiểm soát ngày càng trở nên phổ biế n vì các ưu điể m của nó như: tăng hiệu điều trị, cải thiê ̣n khả tuân thủ của người bê ̣nh, giảm tổ ng liề u điề u tri,̣ giảm thiể u tác du ̣ng không mong muốn của thuố c… Pseudoephedrin thường dùng dạng muối sulfat hydroclorid, dễ tan nước, có thời gian bán thải ngắn (khoảng 58 giờ) Ở Việt Nam, có số nghiên cứu bào chế pseudoephedrin dạng thuốc tác dụng kéo dài Tuy nhiên, việc bào chế kết hợp pseudoephedin với loratadin (một dược chất tan nước, có thời gian bán thải dài) chế phẩm giải phóng có kiểm soát chưa nghiên cứu Vì vậy, để góp phần tạo chế phẩm thuốc kết hợp hai dược chất pseudoephedrin loratadin, có tác dụng chữa viêm mũi dị ứng hiệu đồng thời có khả ứng dụng vào thực tiễn sản xuất, luận án thực đề tài “Nghiên cứu bào chế viên giải phóng có kiểm soát Pseudoephedrin - Loratadin” với mục tiêu sau: Bào chế viên giải phóng có kiểm soát chứa pseudoephedrin 120 mg loratadin mg có mô hình giải phóng dược chất tương đương với viên đối chiếu Clarinase Repetabs (Schering Plough) Bước đầu đánh giá sinh khả dụng viên bào chế chó thí nghiệm * Những đóng góp luận án: Cho đến thời điểm tại, chưa có công bố nghiên cứu bào chế đánh giá SKD viên giải phóng có kiểm soát hai thành phần PSE LOR Việt Nam, kết nghiên cứu luận án xem đóng góp ngành công nghệ bào chế dược phẩm nước, cụ thể sau: - Xây dựng công thức qui trình bào chế viên giải phóng có kiểm soát PSE LOR gồm hai phần giải phóng giải phóng kéo dài Phần giải phóng lớp bao phim chứa hai dược chất PSE 60 mg LOR mg Phần giải phóng kéo dài dược chất PSE 60 mg bào chế phương pháp bao màng khuếch tán với tá dược kiểm soát giải phóng zein, polyme có nguồn gốc tự nhiên dùng phổ biến nước phát triển chưa sử dụng Việt Nam Phương pháp bào chế đơn giản, sử dụng tá dược thông dụng nên qui trình áp dụng qui mô lớn Tiêu chuẩn sở viên Clatadin B Viện kiểm nghiệm thuốc TW thẩm định - Xây dựng thẩm định phương pháp định lượng đồng thời PSE LOR huyết tương chó có giới hạn định lượng nhỏ, khoảng tuyến tính rộng, có độ nhạy độ xác cao kỹ thuật LC – MS/MS hệ thống UPLC với chất chuẩn nội domperidol Dữ liệu đánh giá SKD chứng minh viên nghiên cứu có SKD in vivo giống viên đối chiếu Clarinase chó thí nghiệm * Giới thiệu chung luận án: Bố cục cấu trúc: Luận án có 150 trang, 63 bảng 21 hình Trong gồm phần: Đặt vấn đề (2 trang); Chương Tổng quan (32 trang); Chương Nguyên liệu, trang thiết bị phương pháp nghiên cứu (20 trang); Chương Kết nghiên cứu (72 trang); Chương Bàn luận (22 trang); Kết luận đề xuất (2 trang) Phụ lục (gồm bảng, hình tài liệu liên quan) Tài liệu tham khảo: Luận án tham khảo 134 tài liệu, có 15 tài liệu tiếng Việt 119 tài liệu tiếng Anh CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan pseudoephedrin loratadin 1.1.1 Pseudoephedrin Công thức hóa học; tính chất lý, hóa, dược động học; tác dụng dược lý, định, tương tác thuốc; phương pháp định lượng 1.1.2 Loratadin Công thức hóa học; tính chất lý, hóa, dược động học; tác dụng dược lý, định, tương tác thuốc; phương pháp định lượng 1.2 Một số nét bào chế pseudoephedrin dạng giải phóng kéo dài 1.2.1 Hệ màng bao khuếch tán dược chất có kiểm soát Các muối PSE dễ tan nước nên mô hình GPKD thích hợp hệ màng bao khuếch tán hay gọi “bình chứa” (reservoir) Polyme tạo màng có nhiều loại, polyme tự nhiên zein tốt cho sức khỏe môi trường, có đặc tính hóa lý thuận lợi cho bao phim kiểm soát giải phóng dược chất tốt 1.2.2 Một số kết nghiên cứu bào chế pseudoephedrin giải phóng kéo dài Các nghiên cứu bào chế PSE GPKD chế màng bao sử dụng polyme tổng hợp hỗn hợp polyme EC, Eudragit RL, RS, NE Zein có khả khắc phục hạn chế polyme khác, sử dụng phù hợp cho bào chế PSE dạng thuốc TDKD 1.3 Tổng quan bào chế kết hợp pseudoephedrin loratadin giải phóng có kiểm soát 1.3.1 Một số chế phẩm kết hợp hai dược chất psedoephedrin loratadin lưu hành thị trường Thị trường thuốc Việt Nam lưu hành chưa có chế phẩm phối hợp PSE, LOR dạng giải phóng có kiểm soát 1.3.2 Một số kết nghiên cứu bào chế kết hợp pseudoephedrin loratadin giải phóng có kiểm soát Các nghiên cứu bào chế kết hợp PSE với LOR giải phóng dược chất có kiểm soát dạng cốt màng bao (pellet, viên bao, viên nén, viên nang…) gồm hai phần: LOR giải phóng PSE GPKD 1.3.3 Định lượng đồng thời pseudoephedrin loratadin chế phẩm bào chế Có nhiều phương pháp quang phổ đạo hàm tỉ đối quang phổ đạo hàm, LC kết hợp đo mật độ quang, HPLC Trong đó, HPLC có nhiều ưu điểm để đánh giá độ hòa tan giải phóng in vitro viên hai thành phần PSE LOR, nhiên quy trình phân tích phức tạp, với viên giải phóng có kiểm soát 1.4 Nghiên cứu sinh khả dụng viên phối hợp hai dược chất pseudoephedrin loratadin 1.4.1 Định lượng pseudoephedrin loratadin dịch sinh học Nồng độ đỉnh PSE LOR huyết tương thấp chênh lệch lớn (khoảng ng/ml với LOR 300 ng/ml với PSE) Phương pháp LC-MS/MS có độ đặc hiệu tốt, thời gian phân tích mẫu ngắn phù hợp để phân tích đống thời PSE LOR mẫu huyết tương Chất chuẩn nội diazepam (LOR), phenylproparolamin (PSE); xử lý mẫu huyết tương áp dụng ba kỹ thuật bản: tủa protein, chiết lỏng - lỏng, chiết pha rắn chủ yếu chiết lỏng lỏng với dung môi ethyl ether 1.4.2 Một số kết nghiên cứu sinh khả dụng đường uống pseudoephedrin loratadin Các nghiên cứu giới tương đối đa dạng nhiên Việt Nam chưa có nghiên cứu định lượng đồng thời LOR PSE dịch sinh học SKD dạng bào chế giải phóng có kiểm soát kết hợp hai thành phầ n CHƯƠNG NGUYÊN LIỆU, TRANG THIẾT BỊ VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Nguyên liệu, trang thiết bị đối tượng nghiên cứu - Nguyên liệu: pseudoephedrin hydroclorid, loratadin, zein nguyên liệu bào chế, hóa chất dùng kiểm nghiệm đạt tiêu chuẩn Dược điển tinh khiết phân tích, tiêu chuẩn nhà sản xuất đáp ứng yêu cầu nghiên cứu - Thiết bị: trang thiết bị dùng bào chế kiểm nghiệm thuốc chủ yếu ĐHDHN số Trung tâm Tương đương Sinh học - Viện Kiểm nghiệm thuốc TW - Thuốc đối chiếu: Viên Clarinase Repetabs hãng Schering Plough (Bỉ) số lô khác - Động vật thí nghiệm: Chó ta, giống đực, khỏe mạnh, cân nặng 10 ± 1,0 kg, đạt tiêu chuẩn thí nghiệm 2.2 Phương pháp nghiên cứu 2.2.1 Phương pháp bào chế Cấu trúc viên GPCKS PSE 120 mg - LOR mg gồm phần: Viên PSE 60 mg GPKD theo chế màng bao khuếch tán; Lớp bao giải phóng có chứa hai dược chất PSE 60 mg LOR mg Bào chế viên nghiên cứu theo giai đoạn chính: - Bào chế viên nhân PSE 60 mg: phương pháp tạo hạt ướt với tá dược độn, rã, trơn thường qui ảnh hưởng đến độ rã, độ hòa tan viên - Bào chế viên PSE 60 mg GPKD: bao màng khuếch tán GPKD cho viên nhân PSE 60 mg với polyme zein Thành phần dịch bao: Zein: Thay đổi; Chất hóa dẻo (DBP/PEG): Thay đổi; Talc: 10% zein (kl/kl); Titan dioxyd: 20% zein (kl/kl); Isopropanol : nước (8:2): vừa đủ để dịch bao 6% zein Tiến hành bao phim với thiết bị máy bao phim Vanguard - Bào chế viên GPCKS PSE 120 mg - LOR mg: cách bao lớp màng giải phóng chứa dược chất lên viên PSE 60 mg GPKD bào chế Thành phần dịch bao: PSE hydroclorid 60 mg; LOR mg; HPMC E6; PEG 4000; Aerosil; talc; ethanol 90% Quá trình bao thực khảo sát trên hai loại thiết bị bao nồi bao truyền thống có cải tiến máy bao phim Vanguard 2.2.2 Phương pháp đánh giá đặc tính hóa lý viên - Đánh giá tiêu chất lượng viên: hình thức, định tính, độ cứng, độ mài mòn, đồng khối lượng, đồng hàm lượng dược chất (LOR) theo qui định DĐVN IV - Định lượng dược chất bán thành phẩm thành phẩm: định lượng PSE viên nhân viên PSE 60 mg GPKD quang phổ UV-VIS; định lượng đồng thời PSE LOR chế phẩm bào chế phương pháp quang phổ đạo hàm bậc HPLC - Đánh giá giải phóng dược chất từ viên: theo hướng dẫn Dược điển số tài liệu thử hòa tan khảo sát trình giải phóng dược chất viên đối chiếu viên bào chế môi trường pH 1,2; pH 4,5; pH 6,8 Đánh giá tiêu chuẩn chất lượng độ hòa tan viên GPCKS bào chế môi trường pH 1,0 pH 8,2 Đánh giá tương đương hòa tan viên bào chế viên đối chiếu môi trường pH 1,2; pH 4,5; pH 6,8 2.2.3 Phương pháp đánh giá độ ổn định Đánh giá độ ổn định viên bào chế theo qui định WHO hướng dẫn Asean điều kiện bảo quản thực lão hóa cấp tốc với tiêu khảo sát gồm: hình thức, độ đồng hàm lượng, độ hòa tan, hàm lượng dược chất 2.2.4 Phương pháp đánh giá sinh khả dụng in vivo - Đánh giá SKD in vivo viên bào chế so sánh với viên đối chiếu: tiến hành động vật thí nghiệm chó; phương pháp bố trí thí nghiệm mù đôi, chéo giai đoạn, đơn liều; lấy mẫu 14 thời điểm trước sau cho chó uống thuốc - Định lượng dược chất huyết tương chó: xây dựng thẩm định tiêu phương pháp định lượng HPLC kết nối hệ thống khối phổ theo hướng dẫn FDA 2.2.5 Công cụ tính toán số liệu, thiết kế thí nghiệm tối ưu hóa - Thiết kế thí nghiệm, phân tích kết thiết kế thí nghiệm tối ưu hóa công thức bào chế dựa mạng neuron nhân tạo với trợ giúp phần mềm Inform 3.1 - Xử lý biểu thị kết nghiên cứu công cụ thống kê thích hợp; biểu thị dạng giá trị trung bình ± độ lệch chuẩn (TB ± SD) n số lần lặp lại thí nghiệm CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 3.1 Kết khảo sát xây dựng phương pháp định lượng dược chất chế phẩm bào chế 3.1.1 Kết khảo sát phương pháp định lượng đồng thời pseudoephedrin loratadin quang phổ đạo hàm bậc Kết khảo sát LOR có giá trị quang phổ đạo hàm bậc tuyến tính với nồng độ khoảng 5-50 µg/ml bước sóng 308,6 nm (R2 = 0,9996) PSE hydroclorid có giá trị quang phổ đạo hàm bậc tuyến tính với nồng độ khoảng 180-1000 µg/ml bước sóng 263 nm (R2 = 0,9994) Phương pháp có độ lặp lại cao với RSD = 1,32% (PSE hydroclorid) RSD = 1,66% (với LOR); có độ cao (phần trăm tìm lại PSE hydroclorid từ 95,76% đến 103,54% LOR từ 97,27% đến 102,73%) Phương pháp sử dụng để định lượng đồng thời PSE LOR chế phẩm bào chế tiến hành nghiên cứu khảo sát xây dựng công thức bào chế viên GPCKS PSE 120 mg - LOR mg 3.1.2 Kết khảo sát xây dựng phương pháp định lượng đồng thời pseudoephedrin loratadin sắc ký lỏng hiệu cao - Điều kiện sắc ký: Cột: Hypersil C18 BDS (250 x 4,6 mm, 5µm), nhiệt độ cột 250C; Pha động: ACN: MeOH: dung dịch Amoni dihydrophosphat 0,03M, pH 3,5 = 50:25:25; Thể tích tiêm mẫu: 20 µl ; Bước sóng phát hiện: λ= 210 nm - Thẩm định phương pháp: tính thích hợp với hệ thống phân tích, có tính chọn lọc cao, khoảng tuyến tính rộng (6,28 µg/ml-167,42 µg/ml với PSE 0,25 µg/ml-6,64 µg/ml với LOR), có độ cao (tỷ lệ tìm lại từ 98 %-102 %) độ xác cao (độ lặp lại cao với RSD ≤ 2,0% ngày khác ngày) Phương pháp sử dụng để đánh giá tiêu chuẩn chất lượng của viên GPCKS PSE 120 mg - LOR mg bào chế 3.2 Kết khảo sát giải phóng dược chất viên đối chiếu 3.2.1 Khảo sát trình giải phóng dược chất viên đối chiếu xây dựng mô hình bào chế cho viên nghiên cứu Khảo sát trình giải phóng dược chất viên đối chiếu Clarinase môi trường pH 1,2; pH 4,5 pH 6,8; xây dựng mô hình bào chế cho viên nghiên cứu: bào chế viên PSE 60 mg GPKD 12 theo chế màng bao khuếch tán với tá dược kiểm soát giải phóng zein; từ tiếp tục bào chế viên GPCKS PSE 120 mg - LOR mg cách bao lớp màng giải phóng chứa LOR mg PSE 60 mg lên viên PSE 60 mg GPKD d Khảo sát trình giải phóng dược chất từ viên pseudoephedrin 60 mg giải phóng kéo dài bào chế theo công thức tối ưu Bào chế viên PSE 60 mg GPKD cách bao màng theo công thức màng bao tối ưu phần mềm dự đoán (viên F3), kết thử hòa tan viên F3 so sánh với dự đoán phần mềm viên đối chiếu trình bày bảng hình sau: Bảng 3.25 Quá trình giải phóng PSE từ viên F3 (TB ± SD, n= 3) Công thức Dự đoán Tỷ lệ PSE giải phóng theo thời gian (%) giờ 8,33 Viên (F3) giờ 19,48 giờ 57,63 72,37 TB 9,89 13,13 17,91 33,21 59,59 76,29 SD 1,16 2,49 1,94 1,27 1,81 2,59 TB 10,86 17,52 21,84 31,59 50,71 72,51 SD 2,85 2,50 4,04 7,66 7,63 7,94 f2 70,64 59,30 % PSE giải phóng Lõi viên đối chiếu 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 Viên đối chiếu Viên F3 Thời gian (giờ) Hình 3.10 Đồ thị giải phóng dược chất theo thời gian viên F3 viên đối chiếu (± SD, n = 3) 11 Đồ thị giải phóng dược chất từ viên PSE 60 mg GPKD bào chế theo công thức tối ưu gần giống với phần lõi viên đối chiếu Clarinase (f2 = 59,30; trình giải phóng dược chất thu từ thực nghiệm phù hợp với kết phần mềm dự đoán (f2 = 70,64); công thức màng bao tối ưu dự đoán chọn để bao viên PSE 60 mg GPKD e Đánh giá số đặc tính viên pseudoephedrin 60 mg giải phóng kéo dài bào chế Độ cứng: 9,3 Kp ± 2,05); Độ mài mòn trung bình 0,67 ± 0,02 (< 1%); tỷ lệ chênh lệch khối lượng so với khối lượng trung bình (332,6 mg) nằm giới hạn cho phép (5%); đạt tiêu độ đồng khối lượng; Hàm lượng trung bình viên F3 102,37±2,33 (so với yêu cầu 60 mg), nằm giới hạn cho phép (90 – 110%) Từ kết đề xuất tiêu chuẩn viên PSE 60 mg GPKD 3.3.2 Nghiên cứu bào chế viên giải phóng có kiểm soát Pseudoephedrin 120 mg - Loratadin mg Viên GPCKS PSE 120 mg - LOR mg bào chế từ viên nhân PSE 60 mg GPKD bao lớp màng giải phóng chứa hai dược chất PSE 60 mg LOR mg - Lựa chọn thành phần lớp màng bao: Dược chất: PSE 60 mg; LOR mg; Polyme: HPMC E6; Chất hóa dẻo: PEG 4000; Chất chống dính: Aerosil; talc; Dung môi: Ethanol 90% - Khảo sát ảnh hưởng tỷ lệ HPMC E6 đến trình bao khả rã lớp màng bao: độ bền màng thời gian rã tăng tỷ lệ thuận theo tỷ lệ HPMC E6; tỷ lệ 22,8% HPMC E6/khối lượng màng cho kết màng bao mềm dẻo, có độ bền học tốt, thời gian rã tương đối nhanh 5,5 phút sử dụng cho nghiên cứu sau - Khảo sát ảnh hưởng tỷ lệ chất hóa dẻo PEG 4000: màng bao sử dụng 20% PEG 4000 có hình thức tốt, bề mặt mịn, độ bền tốt 12 thời gian rã tương đối thấp (4,5 phút), tỷ lệ 20% PEG 4000 /khối lượng HPMC E6 chọn sử dụng cho nghiên cứu - Đánh giá số đặc tính viên GPCKS PSE 120 mg - LOR mg bào chế được: Khối lượng viên trung bình: TB ± SD = 465,5 ± 20,2 (mg); Hàm lượng viên trung bình: PSE hydroclorid (TB ± SD) = 121,25 ± 5,70 (mg), LOR (TB ± SD) = 5,50 ± 0,43 (mg); Kết so sánh độ hòa tan dược chất hai chế phẩm sau: % LOR giải phóng 110 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 Viên bào chế Viên đối chiếu Thời 30 gian (phút) 45 15 60 120 % PSE giải phóng Hình 3.13 Đồ thị giải phóng LOR theo thời gian viên bào chế viên Clarinase 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 Viên bào chế Viên đối chiếu Thời gian (giờ) 10 12 Hình 3.14 Đồ thị giải phóng PSE theo thời gian viên bào chế viên Clarinase Kết cho thấy đồ thị giải phóng LOR PSE viên bào chế tương tự viên đối chiếu với giá trị hệ số f2 = 53,9 (LOR) f2 = 84,72 (PSE) 13 3.3.3 Công thức qui trình bào chế viên giải phóng có kiểm soát Pseudoephedrin 120 mg – Loratadin mg Công thức qui trình bào chế viên gồm giai đoạn mô tả Sơ đồ giai đoạn qui trình bào chế viên GPCKS PSE 120 mg – LOR mg (hình 3.15 luận án): Bào chế viên nhân PSE 60 mg; Bao màng giải phóng kéo dài zein; Bao màng giải phóng chứa dược chất 3.3.4 Xây dựng qui trình bào chế qui mô 4000 viên đề xuất tiêu chuẩn chất lượng viên giải phóng có kiểm soát Pseudoephedrin 120 mg - Loratadin mg 3.3.4.1 Kết nâng qui mô bào chế 4000 viên/lô Xây dựng công thức qui trình bào chế qui mô 4000 viên/lô, khảo sát thông số kỹ thuật đánh giá tiêu chất lượng viên theo giai đoạn: - Bào chế viên nhân PSE 60 mg: + Công thức 4000 viên: PSE hydroclorid: 240 g; Lactose: 760 g; Tinh bột mì: 120 g; PVP K30: 40 g; Ethanol 70%: 200 g; Magnesi stearat: g; Tacl: 12 g; Aerosil: g + Thông số kỹ thuật: Giai đoạn trộn bột khô: thời gian trộn phút với tốc độ đầu máy 350 vòng/phút; Giai đoạn tạo hạt: tốc độ xát hạt 100 vòng/phút; thời gian sấy hạt 15 phút; tốc độ dập viên vòng/phút - Đặc tính viên: hàm lượng PSE trung bình (%): 101,95 ± 4,13 (so với yêu cầu 60 mg); Độ cứng (Kp) 8,76 ± 0,65; Độ mài mòn (%) 0,16 ± 0,02; Đồng khối lượng (mg) 304,20 ± 3,52; Độ hòa tan sau 30 phút (% PSE) 89,26 ± 3,12 - Bao màng giải phóng kéo dài zein: + Công thức màng bao zein (cho 4000 viên): Zein: 98 g; DBP: g; Talc: 10 g; Titan dioxyd: g; Isopropanol : nước (8:2): 1600 ml 14 + Thông số bao phim: nhiệt độ khí vào: 65 oC; tốc độ phun dịch: ml/phút; nhiệt độ khí ra: 60 oC; tốc độ quay nồi bao: vòng/phút; lưu lượng khí thổi vào: 10 m3/h; lưu lượng khí hút ra: 12 m3/h; áp suất vòi phun: 1,8 atm; đường kính vòi phun: 1,2 mm + Đặc tính viên: Độ cứng (Kp) 8,76 ± 0,65; Độ mài mòn (%) 0,16 ± 0,02 ; Đồng khối lượng (mg) 362,80 ± 2,21; Hàm lượng PSE (%) 101,95 ± 4,13; Độ hòa tan (%) đạt tiêu chuẩn (sau giờ: 10,22 ± 1,04; giờ: 18,86 ± 2,94; giờ: 50,17 ± 2,55; giờ: 73,75 ± 0,93; 10 giờ: 82,41 ± 3,66) - Bao màng giải phóng chứa dược chất: + Công thức lớp màng bao giải phóng (cho 4000 viên): PSE hydroclorid: 252,00 mg; LOR: 21,00 mg; HPMC E6: 90,00 mg; PEG 4000: 18,00 mg; Aerosil: 9,00 mg; Talc: 18,00 mg; Ethanol 90%: 1800,00 g + Thông số bao phim: nhiệt độ khí vào: 60 oC; tốc độ phun dịch: 4,0 ml/phút; nhiệt độ khí ra: 50 oC; tốc độ quay nồi bao: vòng/phút; lưu lượng khí thổi vào: 10 m3/h; lưu lượng khí hút ra: 12 m3/h; áp suất vòi phun: 1,8 atm; đường kính vòi phun: 1,2 mm - Đánh giá tiêu chất lượng viên: Hình thức, định tính, đồng khối lượng: đạt yêu cầu; Định lượng: đạt yêu cầu tiêu hàm lượng dược chất (LOR: 90% - 110%; PSE: 95% - 105%), chênh lệch không 5% so với hàm lượng ghi nhãn; Độ đồng hàm lượng (LOR): đạt yêu cầu (85% - 115%; chênh lệch với hàm lượng trung bình < 5%); Kết thử độ hòa tan cho thấy viên bào chế có độ hòa tan đạt yêu cầu thời điểm so với tiêu chuẩn sở viên đối chiếu Clarinase Kết trình bày bảng sau: 15 Bảng 3.45 Kết thử độ hòa tan chế phẩm Clatadin B (n= 6) Thời điểm % LOR % PSE giải phóng giải phóng Thời điểm % PSE giải phóng Thời điểm % PSE giải phóng Thời điểm % PSE giải phóng Lô 97,68±2,72 53,24±1,12 56,82±2,04 81,97±1,97 85,48±1,56 Lô 97,3 ± 2,16 53,31±1,22 57,79±1,15 81,72±2,25 86,36±2,13 Lô 96,18±1,69 53,44±0,81 57,03±0,94 81,99±2,18 85,96±1,19  65 %  80 % Lô Yêu cầu  80%  40%;  60%  65% 3.3.4.2 Đề xuất tiêu chuẩn chất lượng cho viên giải phóng có kiểm soát Pseudoephedrin 120 mg – Loratadin mg Dựa tham khảo tài liệu Tiêu chuẩn sở viên Clarinase [63], kết kiểm nghiệm chế phẩm Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương (Phụ lục 3) đề xuất tiêu chuẩn chất lượng chế phẩm, xây dựng Dự thảo tiêu chuẩn sở viên Clatadin B thẩm định Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương 3.3.5 Đánh giá độ ổn định viên giải phóng có kiểm soát Pseudoephedrin 120 mg – Loratadin mg - Theo dõi thay đổi tính chất: Hình thức, định tính đồng hàm lượng (LOR) viên Clatadin B bảo quản 12 tháng điều kiện thực tháng điều kiện lão hóa cấp tốc không thay đổi so với ban đầu đạt yêu cầu chất lượng đề - Theo dõi thay đổi hàm lượng dược chất: điều kiện bảo quản thực hàm lượng dược chất PSE LOR giảm theo thời gian bảo quản đạt yêu cầu theo tiêu chuẩn đề xuất Ở điều kiện lão hóa cấp tốc, hàm lượng dược chất giảm tương đối mạnh (khoảng xấp xỉ 10%), nhiên hàm lượng LOR đạt yêu cầu chất lượng Ngoại suy phần mềm Minitab 17, kết dự đoán tuổi thọ thuốc với tiêu 26 tháng 16 - Theo dõi thay đổi độ hòa tan: Ở hai điều kiện bảo quản, viên đạt tiêu chuẩn độ hòa tan So sánh với yêu cầu tiêu chuẩn chất lượng đề xuất, sơ kết luận viên Clatadin B đạt tiêu độ hòa tan thời gian theo dõi Xử lý số liệu phần mềm Minitab 17, dự đoán tuổi thọ chế phẩm theo tiêu chuẩn 26 tháng - Dự đoán tuổi thọ thuốc: Tuổi thọ dự đoán thuốc theo tiêu chuẩn hàm lượng độ hòa tan dược chất 26 tháng Tuy nhiên có thay đổi hàm lượng dược chất đáng kể sau tháng bảo quản điều kiện lão hóa cấp tốc, theo hướng dẫn ASEAN dự đoán tuổi thọ chế phẩm 18 tháng 3.4 Nghiên cứu đánh giá sinh khả dụng 3.4.1 Đánh giá sinh khả dụng in vitro Căn vào kết độ hòa tan in vitro của chế phẩm thử (viên Clatadin B) chế phẩm đối chiếu (viên Clarinase), để so sánh đồ thị giải phóng dược chất hai chế phẩm tính hệ số f2, kết trình bày bảng sau: Bảng 3.49 Kết đánh giá hệ số tương đồng f2 Môi trường pH 1,2 f2 Môi trường pH 4,5 Môi trường pH 6,8 PSE LOR PSE LOR PSE LOR 61,40 70,46 56,38 55,20 52,68 - Trong môi trường có tương đồng giải phóng dược chất chế phẩm thử chế phẩm đối chiếu (f2 > 50) 3.4.2 Nghiên cứu đánh giá sinh khả dụng in vivo 3.4.2.1 Xây dựng thẩm định phương pháp định lượng dược chất huyết tương chó - Xây dựng phương pháp: Chất chuẩn nội: domperidol; Cột sắc ký Shimpark UPLC C18 (50mm x 3,0mm; 2,1µm); nhiệt độ cột 17 30ºC; pha động ACN:dung dịch acid formic 0,05% (70:30); lưu lượng dòng 200 µl/phút; thể tích tiêm mẫu 10 µl; kiểu khối phổ MS/MS, m/z ion mẹ/ion LOR, PSE DOM: 383,17/259,17; 166,04/117,06 426,17/175,08; Xử lý mẫu: chiết lỏng-lỏng hỗn hợp diethyl ether:cloroform (8:2) - Thẩm định: Tính chọn lọc cao (m/z LOR, PSE DOM: 383,17/259,17; 166,04/117,06 426,17/175,08); Khoảng nồng độ tuyến tính rộng (LOR 0,2-50 ng/ml, r = 0,9983), PSE 10-2550 ng/ml, r = 0,9995); Giới hạn định lượng nhỏ (LOR PSE 0,2 ng/ml 10 ng/ml); độ cao (LOR: 102,06%-107,60%, PSE: 92,62%02,30%); độ xác tốt (RSD LOR 10% PSE 6%); Tỷ lệ thu hồi hoạt chất ba khoảng nồng độ đạt yêu cầu (DOM: 97%, LOR: 93% PSE: 53%) Dược chất ổn định điều kiện bảo quản nhiệt độ phòng sau 15 ngày -400C 3.4.2.2 Đánh giá sinh khả dụng viên Clatadin B chó thí nghiệm Kết kiểm nghiệm trước tiến hành đánh giá SKD hai chế phẩm Thử Chứng cho thấy mẫu đạt theo tiêu chuẩn chất lượng theo qui định, hàm lượng hai chế phẩm chênh lệch không 5,0% tính toán kết không cần hiệu chỉnh - Định lượng dược chất huyết tương chó: Thực nghiệm tiến hành 12 chó, theo mô hình chéo giai đoạn, mù đôi Từ kết định lượng vẽ đường cong biến thiên theo thời gian nồng độ PSE LOR trung bình máu 12 chó sau: 18 3500 Nồng độ (ng/ml) 3000 2500 2000 Chứng Chuẩn Thử 1500 1000 500 0 10 15 20 Thời gian (giờ) 25 30 35 Hình 3.20 Đường cong nồng độ pseudoephedrin 12 chó theo thời gian (trung bình  SD) Nồng độ (ng/ml) Chuẩn Chứng Thử 30 40 0 10 20 Thời gian (giờ) Hình 3.21 Đường cong nồng độ loratadin 12 chó theo thời gian (trung bình  SD) Đồ thị nồng độ PSE LOR huyết tương chó hai chế phẩm thời điểm đầu cuối tương đối giống Cmax T max hai chế phẩm không khác nhiều chứng tỏ viên bào chế có mô hình giải phóng dược chất tương tự viên đối chiếu đạt mục tiêu đặt - Đánh giá so sánh sinh khả dụng viên Clatadin B với viên Clarinase: Tổng hợp thông số DĐH hai thuốc 12 chó 19 khoảng tin cậy 90% tỉ lệ giá trị trung bình thuốc Thử so với thuốc Chứng (tính số liệu chuyển logarit) bảng sau: Bảng 3.61 Các thông số DĐH pseudoephedrin loratadin chó uống viên Clatadin B viên Clarinase Thông số Cmax±SD Tmax±SD AUC0-32±SD AUC0-∞±SD (ng/ml) (giờ) (ng/ml*giờ) (ng/ml*giờ) Chế phẩm Thuốc Thử LOR 4,9±0,5 2,2±0,3 40,6±11,9 43,1±13,1 (Clatadin B) PSE 2410,9±303,1 2,0±0,4 20391,6±1395,4 20480,8±1398,9 Thuốc LOR 5,3±0,7 2,3±0,4 42,8±11,9 45,5±13,2 PSE 2661,7±345,0 1,9±0,4 21367,7±2461,5 21467,0±2457,1 Chứng (Clarinase) Bảng 3.62 Khoảng tin cậy 90% tỉ lệ giá trị trung bình thuốc Thử so với thuốc Chứng Dược chất LOR Thông số Giới hạn chấp nhận (%) Kết (%) Cmax 80,00 - 125,00 85,92 - 97,65 AUC0-32 80,00 - 125,00 84,14 -105,90 AUC0-∞ 80,00 - 125,00 83,48 - 106,33 Tmax PSE Khác ý nghĩa thống kê mức tin cậy 95% Cmax 80,00 - 125,00 87,22 - 94,21 AUC0-32 80,00 - 125,00 91,38 - 100,43 AUC0-∞ 80,00 - 125,00 91,38 - 100,36 Tmax Khác ý nghĩa thống kê mức tin cậy 95% - Nhận xét chung đánh giá sinh khả dụng: Theo hướng dẫn ASEAN nghiên cứu sinh khả dụng tương đương sinh học, viên giải phóng có kiểm soát Pseudoephedrin 120 mg - Loratadin mg bào chế có sinh khả dụng invivo tương tự viên đối chiếu Clarinase Repetabs (Schering-Plough) chó thí nghiệm 20 CHƯƠNG BÀN LUẬN 4.1 Về lựa chọn mô hình bào chế viên giải phóng có kiểm soát chứa pseudoephedrin loratadin Bào chế riêng hai phần giải phóng GPKD cho hai dược chất LOR PSE hạn chế ảnh hưởng việc sử dụng biện pháp kéo dài giải phóng dược chất PSE đến độ tan LOR, đồng thời khắc phục khác biệt thời gian bán thải hai dược chất ½ liều PSE (60 mg) giải phóng với LOR để phát huy tác dụng ngay, nâng cao hiệu điều trị cho chế phẩm thuốc 4.2 Về nghiên cứu bào chế viên pseudoephedrin 60 mg giải phóng kéo dài Kết đánh giá số tiêu chất lượng hình thức, độ cứng, hàm lượng trung bình, độ đồng khối lượng, hàm lượng trung bình viên đồ thị giải phóng dược chất từ viên PSE 60 mg GPKD bào chế theo công thức tối ưu gần giống với phần lõi viên đối chiếu Clarinase (f2 = 59,30) cho thấy màng bao zein có khả kiểm soát trình giải phóng dược chất tốt, viên PSE 60 mg GPKD bào chế đạt yêu cầu chất lượng đề 4.3 Về nghiên cứu bào chế lớp màng giải phóng chứa hai dược chất loratadin pseudoephedrin Phương pháp bào chế lớp màng giải phóng chứa hai dược chất bao phim khả thi thông số kiểm soát dễ dàng Các kỹ thuật bào chế sử dụng phù hợp để bào chế kết hợp thành công hai dược chất có khác biệt lớn đặc tính lý hóa dược động học chế phẩm giải phóng dược chất có kiểm soát đạt chất lượng theo yêu cầu Kết thử độ hòa tan viên cho thấy viên bào chế viên đối có đồ thị giải phóng LOR PSE môi trường tương tự 21 4.4 Về xây dựng phương pháp kiểm nghiệm, tiêu chuẩn chất lượng đánh giá độ ổn định - Định lượng đồng thời PSE LOR chế phẩm bào chế: áp dụng phương pháp quang phổ đạo hàm bậc phù hợp tiện lợi cho nghiên cứu bào chế mang tính khảo sát góp phần giảm thiểu phụ thuộc vào phương pháp HPLC công tác kiểm nghiệm; Định lượng đồng thời PSE LOR HPLC khắc phục nhược điểm số nghiên cứu khác, đồng thời phù hợp với điều kiện thực tế Việt Nam - Xây dựng TCCL phương pháp kiểm nghiệm: Bộ tiêu chuẩn chất lượng viên GPCKS PSE 120 mg - LOR mg qui mô 4000 viên/lô thẩm định Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương, có độ tin cậy tính khả thi đánh giá chất lượng chế phẩm - Về đánh giá độ ổn định: Đánh giá thay đổi hàm lượng dược chất, độ hòa tan tiêu khác hai điều kiện thực lão hóa cấp tốc theo qui định WHO hướng dẫn Asean Từ kết xử lý số liệu phần mềm Minitab 17, tuổi thọ thuốc dự đoán chung cho tiêu chuẩn chất lượng 26 tháng Tuy nhiên, theo hướng dẫn ASEAN dự đoán tuổi thọ chế phẩm 18 tháng Tuổi thọ dự đoán thuốc tương đối thấp trình bào chế thuốc phải qua nhiều công đoạn khác nhau, viên có chứa số thành phần có tính hút ẩm, bao bì đóng gói có khả chống ẩm chưa đảm bảo điều kiện bảo quản cho thuốc Để kết luận hạn dùng thực thuốc, cần có nghiên cứu dài hạn điều kiện thường (nhiệt độ: 30 ± 2°C, độ ẩm: 75 ± 5%) 22 4.5 Về nghiên cứu đánh giá sinh khả dụng - So sánh giải phóng dược chất in vitro chế phẩm môi trường thu giá trị f2 > 50, cho thấy có tương đồng SKD in vitro chế phẩm bào chế chế phẩm đối chiếu - Phương pháp định lượng đồng thời LOR PES huyết tương chó thẩm định tính thích hợp hệ thống, độ đặc hiệu - chọn lọc, tương quan nồng độ diện tích pic, khoảng tuyến tính, độ đúng, xác ngày khác ngày, giới hạn định lượng độ ổn định mẫu thử theo hướng dẫn FDA; phù hợp để dùng nghiên cứu SKD - Kết bước đầu đánh giá SKD chứng minh viên GPCKS PSE LOR có SKD in vivo giống viên đối chiếu Clarinase chó thí nghiệm kết nghiên cứu độ hòa tan in vitro sở quan trọng cho phép triển khai đánh giá TĐSH thuốc người KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT Kết luận Bào chế viên giải phóng có kiểm soát Pseudoephedrin 120 mg - Loratadin mg - Đã xây dựng công thức qui trình bào chế viên PSE 60 mg GPKD 12 theo chế màng bao khuếch tán với tá dược kiểm soát giải phóng dược chất zein, polyme có nguồn gốc tự nhiên - Đã xây dựng công thức qui trình bào chế viên giải phóng có kiểm soát Pseudoephedrin 120 mg - Loratadin mg gồm hai phần: phần giải phóng chứa hai dược chất PSE 60 mg LOR mg phần giải phóng kéo dài PSE 60 mg Viên bào chế có chất lượng đồ thị giải phóng dược chất tương tự viên đối chiếu Clarinase 23 - Đã triển khai qui trình bào chế viên giải phóng có kiểm soát Pseudoephedrin 120 mg - Loratadin mg qui mô 4000 viên/lô - Đã xây dựng tiêu chuẩn sở cho viên giải phóng kiểm soát Pseudoephedrin 120 mg - Loratadin mg Tiêu chuẩn thẩm định viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương với tiêu chí hình thức, định tính, định lượng, đồng hàm lượng, thử hoà tan áp dụng để đánh giá chất lượng viên nghiên cứu - Đã bước đầu theo dõi đánh giá độ ổn định viên bào chế điều kiện thực lão hoá cấp tốc Sơ dự đoán viên có tuổi thọ 18 tháng điều kiện thực Đánh giá sinh khả dụng - Đã xây dựng phương pháp định lượng đồng thời PSE LOR huyết tương chó phương pháp ghép nối HPLC – khối phổ thiết bị UPLC Phương pháp thẩm định theo qui định FDA với tiêu: tính chọn lọc, giới hạn định lượng dưới, khoảng nồng độ tuyến tính, độ đúng, độ lặp lại, tỷ lệ thu hồi, độ ổn định Phương pháp có giới hạn định lượng nhỏ, độ nhạy độ xác cao, đạt điều kiện để áp dụng đánh giá sinh khả dụng in vivo viên nghiên cứu - Đã đánh giá SKD in vivo viên nghiên cứu chó thí nghiệm, so sánh với viên đối chiếu Clarinase Kết cho thấy viên nghiên cứu có SKD tương tự viên đối chiếu chó thí nghiệm Đề xuất Bào chế qui mô lớn tiếp tục theo dõi độ ổn định viên giải phóng có kiểm soát Psedoephedrin 120 mg - Loratadin mg bào chế Đánh giá tương đương sinh học viên giải phóng có kiểm soát Psedoephedrin 120 mg - Loratadin mg bào chế 24 DANH MỤC CÁC CÔNG TRÌNH ĐÃ CÔNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC Đinh Thị Hải Bình, Lê Thị Ngọc Điệp, Nguyễn Thanh Hải, Trịnh Văn Lẩu (2010), “Định lượng đồng thời loratadin pseudoephedrin sulfat phương pháp quang phổ đạo hàm bậc nhất”, Tạp chí kiểm nghiệm thuốc, số 2.2010, tập 8- số 28, tr 13 -16 Đinh Thị Hải Bình, Hoàng Thúy Hồng, Nguyễn Thạch Tùng, Nguyễn Thanh Hải, Phạm Thị Minh Huệ (2013), “Nghiên cứu bào chế đánh giá viên pseudoephedrin giải phóng kéo dài phương pháp bao màng zein”, Tạp chí Dược học, số 450, tr 11 - 14 Đinh Thị Hải Bình, Nguyễn Hữu Tiến, Nguyễn Thanh Hải, Lê Thị Ngọc, Ngô Quang Trung, Nguyễn Thị Kiều Anh (2013), “Nghiên cứu định lượng đồng thời pseudoephedrin loratadin viên phóng thích có kiểm soát HPLC”, Tạp chí Nghiên cứu dược & thông tin thuốc, số 4/2013, tr 131 - 136 Đinh Thị Hải Bình, Nguyễn Thị Kim Oanh, Nguyễn Thanh Hải, Trịnh Văn Lẩu, Lê Thị Quế, Nguyễn Thị Kiều Anh (2013), “Xây dựng phương pháp định lượng Loratadin Pseudoephedrin huyết tương chó UPLC-MS/MS”, Tạp chí Nghiên cứu dược & thông tin thuốc, số 5/2013, tr 168 - 173 ... GPKD 3.3 Kết nghiên cứu bào chế viên giải phóng có kiểm soát Pseudoephedrin – Loratadin 3.3.1 Nghiên cứu bào chế viên pseudoephedrin 60 mg giải phóng kéo dài 3.3.1.1 Bào chế viên nhân pseudoephedrin. .. phần giải phóng kéo dài PSE 60 mg Viên bào chế có chất lượng đồ thị giải phóng dược chất tương tự viên đối chiếu Clarinase 23 - Đã triển khai qui trình bào chế viên giải phóng có kiểm soát Pseudoephedrin. .. hình bào chế viên giải phóng có kiểm soát chứa pseudoephedrin loratadin Bào chế riêng hai phần giải phóng GPKD cho hai dược chất LOR PSE hạn chế ảnh hưởng việc sử dụng biện pháp kéo dài giải phóng