I HC THI NGUYấN TRNG I HC KHOA HC NGễ TH HU NH GI HOT TNH SINH HC CA MT S HP CHT PHN LP T LOI TRUNG QUN Ancistrocladus cochinchinensis VIT NAM LUN VN THC S SINH HC NG DNG THI NGUYấN - 2016 S húa bi Trung tõm Hc liu HTN http://www.lrc.tnu.edu.vn I HC THI NGUYấN TRNG I HC KHOA HC NGễ TH HU NH GI HOT TNH SINH HC CA MT S HP CHT PHN LP T LOI TRUNG QUN Ancistrocladus cochinchinensis VIT NAM Chuyờn ngnh: Cụng ngh sinh hc Mó s: 60.42.02.01 LUN VN THC S SINH HC NG DNG Ngi hng dn khoa hc: TS Lờ Qunh Liờn THI NGUYấN - 2016 S húa bi Trung tõm Hc liu HTN http://www.lrc.tnu.edu.vn i LI CAM OAN Tụi xin cam oan: Lun tt nghip vi ti ỏnh giỏ hot tớnh sinh hc ca mt s hp cht phõn lp t loi Trung quõn Ancistrocladus cochinchinensis Vit Nam l cụng trỡnh nghiờn cu ca cỏ nhõn tụi di s hng dn ca TS Lờ Qunh Liờn v s h tr ca ti nghiờn cu c bn Nghiờn cu a dng cỏc loi thuc chi Trung quõn (Ancistrocladus) Vit Nam da vo phõn tớch húa sinh v di truyn, mó s: 104.01-2013.53, tin s Lờ Qunh Liờn l ch nhim ti, khụng chộp ca bt c Tụi xin chu trỏch nhim v cụng trỡnh nghiờn cu ca mỡnh Thỏi Nguyờn, ngy thỏng nm 2016 Ngi cam oan Ngụ Th Hu S húa bi Trung tõm Hc liu HTN http://www.lrc.tnu.edu.vn ii LI CM N Vi lũng bit n sõu sc ca mỡnh, tụi xin cm n TS Lờ Qunh Liờn Vin Húa sinh bin, Vin Hn lõm Khoa hc v Cụng ngh Vit Nam v cỏc anh/ch lm vic ti Phũng Ti Nguyờn sinh vt ó tn tỡnh hng dn, giỳp tụi quỏ trỡnh hc tp, nghiờn cu v hon thnh lun Tụi xin cm n ti Nghiờn cu c bn: Nghiờn cu a dng cỏc loi thuc chi Trung quõn (Ancistrocladus) Vit Nam da vo phõn tớch húa sinh v di truyn, mó s: 104.01-2013.53, TS Lờ Qunh Liờn ch nhim ti ó h tr tụi quỏ trỡnh thc hin lun Tụi xin cm n cỏc thy cụ khoa Khoa hc s sng, cỏc thy cụ ging dy ti trng i hc Khoa hc - i hc Thỏi Nguyờn v cỏc thy cụ cụng tỏc ti Vin Hn lõm Khoa hc v Cụng ngh Vit Nam ó truyn t kin thc cho tụi nm hc ti trng Trong sut quỏ trỡnh hc v thc hin lun tụi luụn nhn c s ng viờn ca bn bố, ng nghip v ngi thõn gia ỡnh Thỏi Nguyờn, ngy thỏng nm 2016 Ngi cam oan Ngụ Th Hu S húa bi Trung tõm Hc liu HTN http://www.lrc.tnu.edu.vn iii MC LC LI CAM OAN i LI CM N ii MC LC iii DANH MC T VIT TT v DANH MC BNG vi DANH MC HèNH, BIU vii M U 1 Lý chn ti Mc tiờu ca ti Ni dung nghiờn cu Chng TNG QUAN TI LIU 1.1 Hp cht th cp cú hot tớnh sinh hc t thc vt 1.1.1 Khỏi nim 1.1.2 Phõn loi 1.1.3 Nhng nghiờn cu v hp cht thiờn nhiờn t thc vt trờn th gii 1.1.4 Tỡnh hỡnh nghiờn cu cỏc hp cht thiờn nhiờn t thc vt ti Vit Nam 1.2 Mt s hot tớnh sinh hc c bn ca thc vt 1.2.1 Hot tớnh khỏng vi sinh vt 1.2.2 Hot tớnh chng oxy húa 10 1.2.3 Hot tớnh gõy c t bo 11 1.3 Tng quan tỡnh hỡnh nghiờn cu v Chi Trung quõn (Ancistrocladus) 13 1.3.1 c im, phõn b 13 1.3.2 Tỡnh hỡnh nghiờn cu trờn th gii 14 1.3.2 Tỡnh hỡnh nghiờn cu nc 16 Chng VT LIU V PHNG PHP NGHIấN CU 19 2.1 Vt liu nghiờn cu 19 2.2 Phm vi nghiờn cu 21 S húa bi Trung tõm Hc liu HTN http://www.lrc.tnu.edu.vn iv 2.2.1 Phm vi 21 2.2.2 a im nghiờn cu 21 2.2.3 Thi gian: Nghiờn cu c tin hnh t thỏng 09/2015-09/2016 22 2.3 i tng, thit b nghiờn cu 22 2.3.1 Cỏc húa cht, thit b chuyờn dựng 22 2.4 Phng phỏp nghiờn cu 24 2.4.1 Phng phỏp th hot tớnh khỏng sinh: 24 2.4.2 Phng phỏp th hot tớnh chng oxy húa thu dn gc t DPPH 25 2.4.3 Phng phỏp th c tớnh t bo 26 2.5 Phng phỏp x lý s liu 28 Chng KT QU V THO LUN 29 3.1 Kt qu ỏnh giỏ hot tớnh sinh hc ca cõy Trung quõn (Ancistrocladus cochinchinensis) 29 3.1.1 ỏnh giỏ hot tớnh khỏng sinh ca cỏc hp cht phõn lp t loi Trung quõn Ancistrocladus cochinchinensis 29 3.1.2 ỏnh giỏ hot tớnh chng oxy húa ca cỏc hp cht phõn lp t loi Trung quõn Ancistrocladus cochinchinensis 37 3.1.3 ỏnh giỏ hot tớnh gõy c t bo ca cỏc hp cht phõn lp t loi Trung quõn Ancistrocladus cochinchinensis 38 KT LUN, KIN NGH 45 Kt lun 45 Kin ngh 46 TI LIU THAM KHO 47 S húa bi Trung tõm Hc liu HTN http://www.lrc.tnu.edu.vn v DANH MC T VIT TT Ký hiu Thut ng ADN Axit Deoxyribo Nucleotit DMSO Dimethylsulfoxide DPPH 1,1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl LU Human lung carcinoma Ung th phi IC50 Inhibitory concentration 50% Nng c ch 50% cỏ th SRB Sulforhodamine B OD Optical Density SA Scavenging Activities SC Scavenging Concentration at 50% HL-60 Human promyelocytic leukima SK-MEL-2 Human skin caner TCA Mt quang hc Kh nng trung hũa gc oxy húa t Nng trung hũa c 50% gc t T bo ung th bch cu T bo ung th da Trichloroacetic acid S húa bi Trung tõm Hc liu HTN http://www.lrc.tnu.edu.vn vi DANH MC BNG Bng 1.1 Mt s loi thc vt cú hot tớnh khỏng vi sinh vt Bng 1.2 Mt s hp cht chng oxy húa t thc vt 11 Bng 1.3 Mt s hp cht cú kh gõy c t bo t thc vt 13 Bng 2.1 Tờn gi, ký hiu cỏc hp cht nghiờn cu 20 Bng 2.2 Danh sỏch v c im chớnh ca cỏc loi vi sinh vt th nghim 23 Bng 3.1 Kh nng c ch vi khun E.coli ca hp cht phõn lp 30 Bng 3.2 Kh nng c ch vi khun Staphylococcus aureus 31 Bng 3.3 Kh nng c ch vi khun Salmonella tiphymurium 32 Bng 3.4 Kh nng c ch nm Candida albicans 35 Bng 3.5 Kh nng c ch nm A fumigatus 36 Bng 3.6 Kh nng chng oxy húa ca hp cht th nghim 37 Bng 3.7 Hot tớnh c ch dũng t bo ung th LU-1 39 Bng 3.8 Hot tớnh c ch dũng t bo ung th HL-60 40 Bng 3.9 Hot tớnh c ch dũng t bo ung th SK-MEL-2 41 S húa bi Trung tõm Hc liu HTN http://www.lrc.tnu.edu.vn vii DANH MC HèNH, BIU HèNH Hỡnh 1.1 Cõy trung quõn (Ancistrocladus cochinchinensis) 14 Hỡnh 1.2 Cu trỳc húa hc ca mt s naphthylisoquinonline alkaloids tỏch t Ancistrocladus 15 Hỡnh 1.3 Cỏc Napthylisoquinoline alkaloid tỏch chit t Cõy Trung quõn Ancistrocladus cochinchinensis 18 Hỡnh 2.1 Mu lỏ dựng phõn lp hp cht nghiờn cu 19 Hỡnh 2.2 Mụ hỡnh cu trỳc húa hc ca cỏc hp cht nghiờn cu 21 Hỡnh 3.1 Hot tớnh c ch ca hp cht AC1 (M1), AC4 (M4) i vi loi vi khun 33 BIU Biu 3.1 Giỏ tr SC50 ca hp cht th nghim v i chng 38 Biu 3.2: Phn trm t bo u b c ch nng : 20àg/ml i vi cht th v 10àg/ml i vi i chng dng Ellipticine 41 S húa bi Trung tõm Hc liu HTN http://www.lrc.tnu.edu.vn M U Lý chn ti T xa xa ngi ó bit s dng mt s loi thc vt lm thc phm v lm thuc cha tr bnh tt, vt thng Ngy nay, cựng vi s phỏt trin ca cỏc k thut tỏch chit cỏc hp cht thiờn nhiờn, ngi cng cú xu hng s dng nhng sn phm t thiờn nhiờn lnh vc chm súc sc khe Vit Nam l nc cú h thc vt rt phong phỳ v a dng Tng s loi thc vt ó ghi nhn Vit Nam khong 10.500 loi tng s 12.000 loi theo c tớnh Trong s ú, ngun ti nguyờn cõy lm thuc chim khong 30% Kt qu iu tra ngun ti nguyờn cõy thuc ca Vin Dc liu (2006) cho bit Vit Nam cú 3.948 loi thc vt bc cao, bc thp v nm ln c dựng lm thuc Trong thi gian qua, nc ta ó cú hn 3.000 loi thuc cú ngun gc t tho dc c cp s ng ký, chim gn 1/3 tng s thuc mi c cp s ng ký lu hnh hng nm Nh vy, nhu cu s dng cõy dc liu ch xut thuc nc l rt ln Khụng nhng vy, vic s dng dc phm cú ngun gc thiờn nhiờn cng ang c cỏc nc trờn th gii ht sc quan tõm Trong ú cú cỏc loi thuc chi Trung quõn (Ancistrocladus) hin c nhiu nh nghiờn cu trờn th gii quan tõm bi thnh phn húa hc c trng v cỏc tỏc dng sinh hc ca chỳng Chi Trung quõn phõn b ph bin vựng nhit i chõu v Tõy Phi, ngi ta ó tỡm thy loi thc vt ny mt s hp cht cú alkaloid giỏ tr v naphthoquinon cú c tớnh t bo, tỏc dng trờn mt s t bo ung th, khỏng vi khun v khỏng nm Theo y hc c truyn, cõy Trung quõn cú v ng, chỏt, tớnh bỡnh, khụng c, cú cụng nng hnh huyt, húa , tr phong thp, mnh gõn xng, gii nhit, trc huyt, tr m, gii c Thng c dựng tr au lng, au xng khp, phong thp, chõn tay tờ mi; nht l trng hp ph n sau , ngi mt mi, au nhc ton thõn, yu sc [1] Ngoi ra, lỏ Trung quõn S húa bi Trung tõm Hc liu HTN http://www.lrc.tnu.edu.vn 39 Tin hnh sng lc hot tớnh gõy c t bo ca cỏc hp cht tỏch chit t cõy Ancistrocladus cochinchinensis theo phng phỏp ó mụ t chỳng tụi ó thu c nhng kt qu nh sau: 3.1.3.1 Hot tớnh gõy c t bo LU-1 Kh nng c ch dũng t bo LU-1 ca hp cht c th hin bng 3.7 Bng 3.7 Hot tớnh c ch dũng t bo ung th LU-1 Dũng t bo LU-1 (% c ch) Nng (àg/ml) Ellipticine AC1 AC2 AC3 AC4 AC5 AC6 Nng % c àg/ml ch 100 12,62 18,60 15,80 21,82 101,32 19,08 10 98,22 20 -8,62 8,12 4,52 11,48 95,68 -0,04 75,77 -8,20 0,48 -2,32 0,02 24,76 -5,40 0.4 49,36 0.8 -10,52 -2,56 -2,98 -3,94 8,80 -8,14 0.08 23,88 IC50 >100 >100 >100 >100 6.52 1.60 >100 0.43 0.08 Trong s hp cht, hp cht AC1 biu hin hot tớnh c ch rt yu, nng th nghim cao nht 100àg/ml mi c ch c 12% t bo ung th LU-1 Cỏc hp cht AC2, AC3, AC4, AC6 cng biu hin kh nng tng t ỏng chỳ ý nht s ny cú hp cht AC5, bt u cú hot tớnh c ch t bo LU-1 nng rt thp 0,8àg/ml v hot ng c ch t l thun vi nng dch th Tc l nng cng cao thỡ kh nng c ch tt hn Biu 3.1 minh kh nng c ch t bo ung th nng dch th 100àg/ml nng ny c hp cht u biu hin hot tớnh, ú hp cht AC1, AC6 khụng c ch t bo LU-1 cỏc nng thp hn, thm cỏc t bo cũn tip tc phỏt trin s dng nng th nghim n 20àg/ml S húa bi Trung tõm Hc liu HTN http://www.lrc.tnu.edu.vn 40 3.1.3.2 Hot tớnh gõy c t bo HL-60 Kh nng gõy c t bo ung th mỏu HL-60 ca hp cht c th hin bng 3.8 Bng 3.8 Hot tớnh c ch dũng t bo ung th HL-60 Dũng t bo HL-60 (% c ch) Nng Ellipticine (àg/ml) AC1 AC2 AC3 AC4 AC5 AC6 Nng % c àg/ml ch 100 31,25 28,62 44,76 21,71 100,36 41,47 10 98,22 20 27,30 10,92 19,11 11,65 99,04 14,57 75,77 5,90 3,27 -6,54 -0,68 33,09 8,53 0.4 49,36 0.8 4,11 -2,71 -8,51 -9,29 15,28 7,21 0.08 23,88 IC50 >100 >100 >100 >100 5.02 1.22 >100 0.33 0.03 Theo Vin nghiờn cu ung th quc gia Hoa K, mt cht cú IC50 < 20 àg/ml c xem l cú c tớnh i vi t bo Kt qu IC50 cũn giỳp so sỏnh mt cỏch y hot tớnh gõy c t bo gia cỏc mu vi Nu mu th no cú giỏ tr IC50 thp hn, tc nng c ch 50% s t bo ớch thp hn thỡ cht ú cú hot tớnh gõy c t bo mnh hn õy, cú trờn tng s mu cú IC50 >100 àg/mL cho thy cỏc mu hp cht ny cú hot tớnh gõy c i vi dũng t bo HL-60 tng i yu ỏng chỳ ý nht cú hp cht AC5 biu hin hot tớnh gõy c t bo tt, giỏ tr IC50 l 5,021,22 3.1.3.3 Hot tớnh gõy c dũng t bo SK-MEL-2 i vi dũng t bo SK-MEL-2 c hp cht u cú biu hin gõy c t bo S húa bi Trung tõm Hc liu HTN http://www.lrc.tnu.edu.vn 41 Bng 3.9 Hot tớnh c ch dũng t bo ung th SK-MEL-2 Dũng t bo SK-MEL-2 (% c ch) Nng (àg/ml) Ellipticine AC1 AC2 AC3 AC4 AC5 AC6 Nng % c àg/ml ch 100 30,74 19,41 28,08 37,75 97,29 31,47 10 98,22 20 12,86 2,66 10,69 22,19 96,39 3,06 75,77 8,66 0,04 6,98 12,72 21,32 1,98 0.4 49,36 0.8 1,82 -0,32 3,18 2,23 10,44 -2,77 0.08 23,88 IC50 >100 >100 >100 >100 6.79 2.01 >100 0.47 0.09 T l t bo sng sút ph thuc vo nng dch th AC2 v AC6 khụng gõy c t bo nng 0,8àg/ml, cỏc t bo ung th phỏt trin bỡnh thng n nng 4àg/ml bt u cú t bo b tiờu dit nhng vi t l thp tng ng l 4,04% v 1,98% Cỏc hp cht AC1, AC3, AC4 cng biu hin hot tớnh c ch t bo ung th t nng th nghim u tiờn 0,8àg/ml nhng t l c ch cng thp, giỏ tr IC50 u > 100 ỏng chỳ ý nht s hp cht ny l hp cht AC5 biu hin hot tớnh c ch t bo ung th tt nht, nng 8àg/ml t l c ch l 10,44% Nng dch th cng tng thỡ phn trm t bo c ch cng cao Giỏ tr IC50 ca AC5 tng i thp 6,79 2,01 tng ng vi kh nng tiờu dit t bo ung th SK-MEL-2 tt hn c Biu 3.2: Phn trm t bo u b c ch nng : 20àg/ml i vi cht th v 10àg/ml i vi i chng dng Ellipticine S húa bi Trung tõm Hc liu HTN http://www.lrc.tnu.edu.vn 42 Nhỡn vo biu 3.2 cú th nhn thy rng hp cht AC5 cú hot tớnh c ch rt tt i vi c dũng t bo ung th th nghim Hot tớnh dch th nng 20àg/ml tng ng vi hot ng ca cht i chng dng 10àg/ml Nh vy, kt qu ỏnh giỏ hot tớnh gõy c ca hp cht th nghim trờn dũng t bo ung th nghiờn cu cho thy hp cht AC5 cú hot tớnh tt nht Hot tớnh ny th hin trờn tt c cỏc dũng t bo ung th c s dng thớ nghim, cho thy hot cht ny cú kh nng c ch s phỏt trin ca t bo ung th núi chung, khụng thy tớnh hng ớch c bit Nhúm nghiờn cu ti Vin Húa hc (Vin Hn Lõm Khoa hc v cụng ngh Vit Nam) cng phõn lp c t loi A cochinchinensis sinh trng ti Bỡnh nh nhiu hp cht alkaloid cú giỏ tr nh 6-O-methylhamateine, hamatinine, 6-O-methylhamatinine, 6-O-demethyl-7-epi-ancistrobrevine D, 7epi- ancistrobrevine D and 6-O-demethyl-8-O-methyl-7-epi-ancistrobrevine D vi hot tớnh gõy c t bo v chng ụxy húa [12], [13] Trong quỏ trỡnh tỡm kim cỏc hp cht t loi A cochinchinensis sinh trng ti Vnh Phỳc, ba hp cht thuc nhúm alkaloid l isoquinoline alkaloid (AC3), anciscohine 60--D-glucopyranoside (AC4) v 4-methoxy-5-epi-ancistecrorine (AC5) cng c phõn lp; ú hai hp cht AC4 v AC5 l nhng hp cht mi Bờn cnh ú, mt s hp cht khỏc thuc nhúm phenolic nh Ancistronaphtoside A/B (AC1/2) v Tortoside A (AC6) Khi b sung vo cỏc dũng t bo ung th phi, ung th mỏu v ung th biu mụ, hp cht AC5 ó th hin kh nng c ch sinh trng ca cỏc dũng t bo ny mt cỏch rừ rt Giỏ tr c ch IC50 ca hp cht AC5 lờn cỏc dũng t bo ung th phi, ung th mỏu v ung th biu mụ ln lt l 6.52 1.60, 5.02 1.22, 6.79 2.01 g/mL (Bng 3.7, 3.8, 3.9) Tng t vi loi A cochinchinensis ti Vit Nam, alkaloids cng l nhúm hp cht th cp ch yu phõn lp c t nhiu loi chi Trung quõn nh A tectorius, A heyneanus, A cochinchinensis [17], [18] S húa bi Trung tõm Hc liu HTN http://www.lrc.tnu.edu.vn 43 c bit, hai hp cht nhúm naphthylisoquinoline alkaloid l Dioncoquinones A v B phõn lp t loi A heyneanus cú kh nng c ch mnh m cỏc t bo u ty in vitro vi giỏ tr c ch IC50 nng 11 M [18], [19] m khụng gõy c nhng t bo bỡnh thng Theo Bringmann v cng s, kh nng dit t bo u ty ny ca hai hp cht Dioncoquinones A v B tng t nh melphalan, mt hp cht ang c nghiờn cu phỏt trin cho húa tr liu Vi giỏ tr IC50 khong 5-6 g/mL tng ng vi 12-14 M, hp cht AC5 ó th hin kh nng c ch t bo ung th phi, ung th mỏu v ung th biu mụ tng t nh hot tớnh ca hp cht Dioncoquinones A v B trờn t bo u ty Tuy nhiờn, ỏnh giỏ hot tớnh trờn cỏc dũng t bo ung th khỏc nhau, nờn cha cú nhng so sỏnh c th v hot tớnh nhúm hp cht alkaloid t loi A cochinchinensis ca Vit Nam v cỏc loi khỏc trờn th gii Bờn cnh kh nng tiờu dit t bo gõy bnh, kh nng khụng gõy c vi cỏc t bo bỡnh thng ca hp cht AC5 cng cn phi c nghiờn cu sõu hn Thnh phn húa hc ca cõy Trung quõn khỏ a dng, ú alkaloid l nhúm hp cht cú hot tớnh sinh hc rừ rt nht vi hn 140 dng khỏc [17] c bit hp cht dimeric naphthylisoquinon alkaloids hay cũn gi l michellamines B cú kh nng c ch s sinh trng ca virus gõy suy gim dch ngi HIV mc in vivo [45] Hin nay, khai thỏc v s dng bn vng ngun ti nguyờn thiờn nhiờn, c bit l cỏc cõy dc liu ti Vit Nam ang l mi quan tõm ng thi ca cỏc nh nghiờn cu v qun lý Thc t ó cho thy rt nhiu cỏc thuc cng nh thc phm chc nng c phỏt trin t nhng hp cht thiờn nhiờn cú cõy dc liu chng hn nh taxol cha ung th, curcumin khỏng khun, chng oxy húa v c hiu vi cỏc bnh viờm loột d dy Cha nhiu hp cht tim nng, thnh phn húa hc ca cõy Trung quõn Vit Nam cng ó c mt s nhúm nghiờn cu v khng nh vai trũ ca nhúm hp cht alkaloid t loi cõy ny.Vi nguyờn liu thớ nghim l sỏu hp cht phõn lp S húa bi Trung tõm Hc liu HTN http://www.lrc.tnu.edu.vn 44 t loi A cochichinenis (Vnh Phỳc), ti ó xỏc nh c kh nng gõy c lờn ba nhúm t bo ung th phi, ung th vỳ v ung th biu mụ ca hp cht 4-methoxy-5-epi-ancistecrorine A1 thuc nhúm alkaloid Bờn cnh ú, hai hp cht anciscohine 6-0--D-glucopyranoside (nhúm alkaloid) v tortoside A (nhúm phenolic) cng th hin kh nng c ch s sinh trng ca nhúm vi khun gõy bnh ng rut l E coli, S aureus v S typhimurium Nhng kt qu nghiờn cu trờn õy ó bc u khng nh giỏ tr ca loi Trung quõn A cochichinenis ti Vit Nam, cng nh cung cp c s khoa hc cho vic s dng lỏ Trung quõn cỏc bi thuc dõn gian tr bnh ti a phng S húa bi Trung tõm Hc liu HTN http://www.lrc.tnu.edu.vn 45 KT LUN, KIN NGH Kt lun 1.1 Hot tớnh khỏng sinh Sỏu hp cht phõn lp t loi Trung quõn Ancistrocladus cochinchinensis c s dng nghiờn cu u th hin kh nng c ch sinh trng ca ớt nht mt ba loi vi khun kim nh l E coli, Staphylococcus aureus v Salmonella typhymurium Hai hp cht AC2 v AC4 u cú kh nng c ch c ba vi khun, ú hp cht AC4 th hin hot tớnh tt hn Hp cht AC1, AC3 v AC5 cú kh nng c ch hai vi khun l Staphylococcus aureus v Salmonella typhymurium cũn hp cht AC6 ch cú kh nng c ch vi khun Staphylococcus aureus Sỏu hp cht t loi loi Trung quõn Ancistrocladus cochinchinensis khụng cú hot tớnh ỏng k vic c ch s sinh trng phỏt trin ca loi nm th nghim l A fugamitus v C albicans 1.2 Hot tớnh chng oxy húa i vi th nghim hot tớnh chng oxy húa trờn h DPPH, cho thy ch cú hp cht AC4 bt u th hin hot tớnh trung hũa gc t vi giỏ tr SC50 l 76,16, nhiờn nng trung hũa 50% gc t cao hn nhu so vi cht i chng dng (Acid Ascorbic 4,40) 1.3 Hot tớnh gõy c t bo Mi hp cht tỏch chit c cú kh nng gõy c t bo cỏc mc khỏc nhau, ú cú hp cht AC5 cú hot tớnh tt trờn c dũng t bo th nghim LU-1, HL-60, SK-MEL-2 vi IC 50 ln lt l 6,52 1,60, 5,02 1,22, 6,79 2,01 S húa bi Trung tõm Hc liu HTN http://www.lrc.tnu.edu.vn 46 Kin ngh Loi Trung quõn Ancistrocladus cochinchinensis l loi c trng ca Vit Nam v s hp cht tinh ch l cht mi nờn hu nh cha cú nghiờn cu ỏnh giỏ so sỏnh vi kt qu thc nghim ca chỳng tụi Do vy nhng kt qu ca nghiờn cu bc u m hng nghiờn cu sõu hn, rng hn cỏc lnh vc khỏng vi khun, chng oxy húa v gõy c t bo c bit nhng hp cht cú biu hin hot tớnh tt cn c tip tc nghiờn cu, sng lc Nht l th nghim gõy c t bo ca hp cht cn c ỏnh giỏ nh hng trờn t bo bỡnh thng S húa bi Trung tõm Hc liu HTN http://www.lrc.tnu.edu.vn 47 TI LIU THAM KHO I Ting Vit Tt Li (2005), Nhng cõy thuc v v thuc Vit Nam, Nh xut bn Y hc, H Ni Nguyn ng Khoa, Trn Cụng Lun (2014), Nghiờn cu hot tớnh khỏng vi sinh vt cỏc cao chit v hp cht flavonoid phõn lp c t lỏ chựm ngõy, Tp Dc liu, 19(1) Phm ụng Phng, Trn Hựng (2009), Kho sỏt tỏc ng, c tớnh t bo ca thnh phn alkaloid v Naphthoquinon ba loi Ancistrocladus Vit Nam, Tp Dc hc, s 401, 23-27 Phm ụng Phng, Trn Hựng (2009), Nghiờn cu thnh phn Naphthoquinon mt loi Trung quõn (Ancistrocladus.sp Ancistrocladaceae) mi phỏt hin Vit Nam, Tp Dc hc, s 396, 33-37 Phm ụng Phng, Trn Hựng (2009), Nghiờn cu tỏc dng khỏng nm ca cỏc napthoquinon mt loi trung quõn (Ancistrocladus.sp) mi phỏt hin Vit Nam, Tp Dc hc, s 399, 36-40 Phan Quc Kinh (2011), Giỏo trỡnh cỏc hp cht thiờn nhiờn cú hot tớnh sinh hc, Nh xut bn giỏo dc Vit Nam Phan Tng Sn, Phan Minh Giang (2016), Húa hc cỏc hp cht thiờn nhiờn, Nh xut bn khoa hc k thut, H Ni Trn M Linh, Lờ Qunh Liờn, Ninh Khc Bn (2013), Hot tớnh c ch nm v vi khun gõy bnh ca loi thc vt ngp mn Aegiceras corniculatum, Avicennia marina v Lumnitzera racemosa ti Vn Quc gia Xuõn Thy, Hi ngh khoa hc ton quc v sinh thỏi v ti nguyờn sinh vt ln th 5, 1127-1131 S húa bi Trung tõm Hc liu HTN http://www.lrc.tnu.edu.vn 48 II Ting Anh Allen D.E., Hatfield G (2004), Medicinal Plants in FolkTradition: An Ethnobotany of Britain and Ireland, Timber Press: Cambridge, U K, 431 10 Amstrong D (2002), Oxidants and Antioxidants, Ultra structure and Molecular Biology Protocols, Humana Press, 196, 3-12 11 Anh N.H, Helmut R., Andrea P., Sung T.V., Adam G (1997), Tetralones from ancistrocladus cochinchinensis, Phytochemistry, 44 (63), 549-551 12 Anh N.H, Porzel A., Ripperge H., Bringmann G., Schaffer M., God R., Sung T.V., Adam G (1997), Naphthylisoquinoline from Ancistrocladus cochinchinensis, Phytochemistry, 45(6),1287-1291 13 Anh N.H, Ripperger H., Sung T.V, Adam G (1996), Some results from a chemical study on Vietnamese Ancistrocladus cochinchinensis, Phytochemistry, 34,89-93 14 Bernhoft (2010), Bioactive compounds in plants - benefits and risks for man and animals, The Norwegian Academy of Science and Letters, Norway 15 Bohlmann J., Keeling C.I (2008), Terpenoid biomaterials, Plant Journal, 54(4), 656-69 16 Boyd M.R., Hallock J.W., McMahon Y.F., Cardellina J.B., Buckheit J.H., Manfredi R.W.Jr., Bringmann K.P., Blunt G., Schọffer M., Cragg G.M (1994), Anti-HIV michellamines from Ancistrocladus korupensis, Journal Medicine Chemistry, 37(12),1740-1745 17 Bringmann G., Zhang G., Olschlọger T., Stich A., Wu J., Chatterjee M., Brun R (2013), Highly selective antiplasmodial naphthylisoquinoline alkaloids from Ancistrocladus tectorius, Phytochemistry, 91, 220-228 S húa bi Trung tõm Hc liu HTN http://www.lrc.tnu.edu.vn 49 18 Bringmann G., Hertlein-Amslinger B., Kajahn I., Dreyer M., Brun R., Moll H., Stich A., Ioset K.N., Schmitz W., Ngoc L.H (2011), Phenolic analogs of the N,C-coupled naphthylisoquinoline alkaloid ancistrocladinium A, from with (Ancistrocladaceae), Ancistrocladus improved cochinchinensis antiprotozoal activities, Phytochemistry, 72(1), 89-93 19 Bringmann G., Wohlfarth M., Rischer H., Rỹckert M., Schlauer J (1998) The polyketide folding mode in the biogenesis of isoshinanolone and plumbagin from Ancistrocladus heyneanus (Ancistrocladaceae) Tetrahedron Letter, 39, 8445-8448 20 Bringmann G., Rỹdenauer S., Irmer A., Bruhn T., Brun R., Heimberger T., Stỹhmer T., Bargou R., Chatterjee M (2008), Antitumoral and antileishmanial dioncoquinones and ancistroquinones from cell cultures of Triphyophyllum peltatum (Dioncophyllaceae) and Ancistrocladus abbreviatus (Ancistrocladaceae), Phytochemistry, 69, 2501-2509 21 Bringmann G., Dreyer M., Faber J.H., Dalsgaard P.W., Staerk D., Jaroszewski W.N., Dangalasi H., Mbago F., Brun R., Christensen S.B (2004), Ancistrotanzanine C and related 5,1'- and 7,3'-coupled Naphthylisoquinoline alkaloids from Ancistrocladustanzaniensis, Journal Nature Production,67(5), 743-748 22 Bringmann G.,Kinzinger L (1992), Ancistrocline, A Napthylisoquinoline alkaloids from Ancistrocladus tectorius, Phytochemistry, 31(9), 32973299 23 Bringmann G., Saeb W., Assi L A., Sankara Narayanan A S., Peters (1997), Betulinic acid: isolation from Triphyophyllum peltatum and Ancistrocldus heyneanus, antimalarial activity, and crystal structure of benzyl ester, Planta medica, 63(3), 255-257 S húa bi Trung tõm Hc liu HTN http://www.lrc.tnu.edu.vn 50 24 Chowdhury A.R., Mandal S., Mittra B., Sharma S., Mukhopadhyay S., Majumder H.K (2002), Betulinic acid, a potent inhibitor of eukaryotic topoisomerase I: identification of the inhibitory step, the major functinal group responsible and development of more potent derivatives, Medical Science Monitor, 8(7), 254-265 25 Chua L.S (2013), A review on plant-based rutin extraction methods and its pharmacological activities, Journal Ethnopharmacol, 150(3), 805-17 26 Cowan M.M (1999), Plant Products as Antimicrobial Agents, Chiniacal microbiology reviews,12(4), 564 - 582 27 Cragg G.M., Schepartz S.A., Suffuess M., Grever M.R (1993), The taxol supply crisis New NCI policies for handing the large- scale production of novel natural product anticancer and antiHIV agent, Journal of natural products, 56, 1657-1668 28 Franỗois G., Bringmann G., Dochez C., Schneider C., Timperman G., Akộassi L (1995), Activities of extracts and naphthylisoquinoline alkaloids from Triphyophyllum peltatum, Ancistrocladus abbreviatus and Ancistrocladus barteri against Plasmodium berghei (Anka strain) invitro, Journal Ethnopharmacol, 46(2), 115-120 29 Francois G.,Timperman G., Eling W., Akeassi L., Holenz R.G, Bringmann G (1997), Naphthylisoquinoline Alkaloids against Malaria: Evaluation of the Curative Potentials of Dioncophylline C and Dioncopeltine Aagainst Plasmodium berghei invivo, Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 41(11), 2533-2539 30 Gupta V.K., Sharma S.K (2006), Plants as natural antioxidants, Natural Product Radiance, 5(4), 326-334 31 Hadacek F., Harald G (2000), Testing of Antifungal Natural products: Methodologies, Comparability of Results and Assay Phytochemical analysis, 11, 137-147 S húa bi Trung tõm Hc liu HTN http://www.lrc.tnu.edu.vn Choice, 51 32 Halliwell B (1991), Reactive oxygen species in living systems: soure, biochemistry, and role in human disease, The American Journal of Medicine,91,14-22 33 Houghton P., Fang R., Techatanawat I., Steventon G., Hylands P.J., Lee C.C (2007), The sulforhodamine (SRB) assay and other approaches to testing plant extracts and derived compounds for activities related to reputed anticancer activity, Methods, 42, 377-387 34 James B.M., Michael J.C., Robert J.G., Robert W.B., Carol L.S., Yali F.H., Michael R.B (1995), Michellamine B, a Novel Plant Alkaloid, Inhibits HumanImmunodeficiency Virus-Induced Cell Killing byat Least Two Distinct Mechanisms, Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 39(2) 484-488 35 Joon-Kwan M., Takayuki S (2009), Antioxidant assays for plant and food components: Reviews, Journal of Agricultural and Food Chemistry, 57, 1655-1666 36 Karn A.K., Sharon Mah., Kumar R., Sharon Mad (2014), Naphthyl Isoquinoline alkaloids Extracted from Stem of Ancistrocladus heyneanus Exhibits Bactericidal Activity, Research Journal of Pharmaceutical, Biological and Chemical Sciences, 5(3), 1699-1707 37 Kaur R., Singh J., Singh G., Kaur H (2011), Anticancer plants: A review, Journal natural product plant resource, 1(4), 131-136 38 Kathiresan K, Boopathy N.S, Kavitha S (2006), Coastal vegetationoAn underexplored source of anticancer drugs, Natural Product Radian 5(2), 115-119 39 Lester P (1999), Methods in enzymology, Academic Press, 310, 489-503 40 Lin Z.X., Hoult J.R.S, Raman A (1999), Sulforhodamine B assay for measuring proliferation of a pigmented melanocyte cell line and its application to the evaluation of crude drugs used in the treatment of vitiligo, Journal of Ethnopharmacology, 66, 141-150 S húa bi Trung tõm Hc liu HTN http://www.lrc.tnu.edu.vn 52 41 Marderosian A.Der., Beutler J A (2002), The Review of Natural Products 2nd edn, Facts and comparision, 13-43 42 Maclagan T (1876), Drug Discovery: A History, Lancet, 107, 342 43 Marjorie M.C (1999), Plant products as antimicrobial agents, Clinnical microbiolygy reviews, 12 (4), 564-582 44 Merck G.F (1848), Natural Product Chemistry for Drug Discovery, Annual of Physics Chemistry, 66, 125 45 McMahon J.B., Currens M.J., Gulakowski R.J., Buckheit R.W Jr., Lackman-Smith C., Hallock Y.F., Boyd M.R (1995), Michellamine B, a novel plant alkaloid, inhibits human immunodeficiency virusinduced cell killing by at least two distinct mechanisms, Antimicrobial Agents Chemother, 39(2),484-488 46 More S., Maldar N.N., Bhamra P., Sharon Mah., Sharon Mad (2012), Antimicrobial activity of Naphthyl Iso-quinoline alkaloids of Ancistrocladus heyneanus: I Extracted from Leaves, Advances in Applied Science Research, (5), 2760-2765 47 Pazisis K.T., Geromichalos G.D., Dimitriadis K.A., Kortsaris A.H (1997), Optimization of the sulforhodamine B colorimetric assay, Journal of Immunological Methods, 208(2), 151-158 48 Pascal Amoa Onguộnộ P.A., Ntie-Kang F., Lifongo L.L., Ndom J.C., Sippl W., Mbaze L.M (2013), The potential of anti-malarial compounds derived from African medicinal plants, part I: a pharmacological evaluation of alkaloids and Terpenoids, Malaria Journal, 12,449 49 Ponte-Sucre, Faber J.H., Gulder T., Kajahn I., Sarah E H Pedersen, Schultheis M., Bringmann G., Moll H (2007), Activities of Naphthylisoquinoline Alkaloids and Synthetic Analogs against Leishmania major, Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 51(1), 188-194 S húa bi Trung tõm Hc liu HTN http://www.lrc.tnu.edu.vn 53 50 Reif-Acherman S (2011), The contributions of Henri Victor Regnault in the context of organic chemistry of the first half of the nineteenthcentury, Quớmica Nova, 35(2), 438-443 51 Segiun M.A (1814), Natural Product Chemistry for Drug Discovery, Annual Chemistry, 92, 225 52 Wieland Voigt (2005), Methods in Molecular Medicine, Humana Press Inc, 110, 39-48 53 Wani M.C., Taylor H.L., Wall M.E., Coggon P., McPhail A.T (1971), Plant antitumor agent VI The isolation and structure of taxol, a novel antileukemic and antitumor agent from Taxus brevifolia, Journal of American Chemical Society, 93, 2325-2327 III Ti liu trang Web 54 Botanyvn.com 55 http://wikipedia.org/wiki/khang_sinh 56 http://en.wikipedia.org/wiki/Free-radical_theory 57 http://en.wikipedia.org/wiki/Reactive_oxygen_species 58 http://digipat.noip.gov.vn (Th vin s v bng sỏng ch ca Vit Nam) S húa bi Trung tõm Hc liu HTN http://www.lrc.tnu.edu.vn ... 3.1.1 Đánh giá hoạt tính kháng sinh hợp chất phân lập từ loài Trung quân Ancistrocladus cochinchinensis 29 3.1.2 Đánh giá hoạt tính chống oxy hóa hợp chất phân lập từ loài Trung quân Ancistrocladus. .. nấm) hợp phân lập từ loài A .cochinchinensis; - Đánh giá hoạt tính chống oxy hóa hợp chất phân lập từ loài A .cochinchinensis; - Đánh giá hoạt tính gây độc tế bào hợp chất phân lập từ loài A .cochinchinensis. .. kiếm hợp chất có giá trị y dược học chi Trung quân Việt Nam, tiến hành nghiên cứu đề tài Đánh giá hoạt tính sinh học số hợp chất phân lập từ loài Trung quân Ancistrocladus cochinchinensis Việt Nam