BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - NGUYỄN THỊ CÚC NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ HOẠT TÍNH DIỆT TẾ BÀO UNG THƯ CỦA HAI LOÀI HẢI MIÊN DYSIDEA FRAGILIS VÀ HALICLONA OCULATA Chuyên ngành: Hóa Hữu Mã số : 62.44.01.14 TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ HÓA HỌC Hà Nội - 2017 Công trình hoàn thành tại: Học Viện Khoa học Công nghệ Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Người hướng dẫn khoa học 1: PGS TS Phan Văn Kiệm Người hướng dẫn khoa học 2: TS Hoàng Lê Tuấn Anh Phản biện 1: Phản biện 2: Phản biện 3: Luận án bảo vệ trước Hội đồng chấm luận án tiến sĩ cấp Học viện, họp Học Viện Khoa học Công nghệ - Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam vào hồi năm 2017 Có thể tìm hiểu luận án tại: - Thư viện Học Viện Khoa học Công nghệ - Thư viện Quốc gia Hà Nội , ngày tháng MỞ ĐẦU Tính cấp thiết luận án Biển đại dương giới chiếm 71% diện tích bề mặt trái đất, đồng thời nơi chiếm đến 90% thể tích khu vực sinh sống trái đất Với khoảng 300.000 loài động thực vật rong biển, ruột khoang, hải miên, thân mềm, loài vi khuẩn biển…sinh sống Việt Nam quốc gia có bờ biển dài 3.260 km chạy dọc từ Bắc vào Nam, hàng nghìn đảo ven biển, đặc biệt có hai quần đảo Trường Sa Hoàng Sa nằm biển Đông Việc nghiên cứu, khảo sát thành phần hóa học hoạt tính sinh học loài sinh vật biển nói chung, loài hải miên nói riêng vấn đề quan tâm Các nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học giới loài hải miên có cấu trúc hóa học đa dạng phong phú, nhiều hợp chất phát có hoạt tính sinh học lí thú Xuất phát từ điểm đó, lựa chọn đề tài “Nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính diệt tế bào ung thư hai loài hải miên Dysidea fragilis Haliclona oculata” Mục tiêu nghiên cứu luận án Nghiên cứu để làm rõ thành phần hóa học chủ yếu loài hải miên Dysidea fragilis Haliclona oculata Đánh giá hoạt tính gây độc tế bào hợp chất phân lập để tìm kiếm một số chất có hoạt tính, làm sở khoa học cho nghiên cứu Các nội dung nghiên cứu luận án: Nghiên cứu phân lập hợp chất từ loài hải miên Dysidea fragilis Haliclona oculata Việt Nam Xác định cấu trúc hợp chất phân lập Đánh giá hoạt tính gây độc tế bào hợp chất phân lập nhằm định hướng cho nghiên cứu ứng dụng CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN Phần tổng quan trình bày nghiên cứu nước quốc tế vấn đề: 1.1 Giới thiệu chung hải miên 1.2 Tình nghiên cứu loài hải miên thuộc giống Dysidea 1.3 Tình nghiên cứu loài hải miên thuộc giống Haliclona 1.4 Tình nghiên cứu loài hải miên Việt Nam CHƯƠNG 2: THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 2.1 Đối tượng nghiên cứu 2.1.1 Loài hải miên Dysidea fragilis Mẫu Hải miên Dysidea fragilis (Montagu, 1814) thu thập từ vùng biển Vân Đồn, Quảng Ninh, Việt Nam vào tháng 8/2014 2.1.2 Loài hải miên Haliclona oculata Mẫu Hải miên Haliclona oculata (Linnaeus, 1759) thu thập từ vùng biển Hạ Long, Quảng Ninh, Việt Nam vào tháng 4/2014 2.2 Phương pháp nghiên cứu 2.2.1 Phương pháp phân lập hợp chất Phối hợp phương pháp sắc ký bao gồm: sắc ký lớp mỏng (TLC), sắc ký lớp mỏng điều chế sắc ký cột (CC) 2.2.2 Phương pháp xác định cấu trúc hoá học hợp chất Phương pháp chung để xác định cấu trúc hóa học hợp chất kết hợp thông số vật lý với phương pháp phổ đại bao gồm: phổ khối (ESI-MS), phổ khối phân giải cao (HRESI-MS), độ quay cực ([]D), phổ cộng hưởng từ nhân (NMR) 2.2.3 Đánh giá hoạt tính gây độc tế bào in vitro Hoạt tính gây độc tế bào hoạt chất xác định theo phương pháp SRB 2.3 Phân lập hợp chất 2.3.1 Phương pháp chung chiết xuất Phần nêu phương pháp chung để chiết xuất mẫu hải miên 2.3.2 Phân lập hợp chất từ loài hải miên Dysidea fragilis Phần trình bày cách thức phân lập hợp chất từ loài hải miên Dysidea fragilis Hình 2.3 Sơ đồ phân lập hợp chất từ loài Dysidea fragilis 2.3.3 Phân lập hợp chất từ loài hải miên Haliclona oculata Phần cách thức phân lập hợp chất từ loài hải miên Haliclona oculata Hình 2.4 Sơ đồ phân lập hợp chất từ loài Haliclona oculata 2.4 Hằng số vật lý kiện phổ hợp chất 2.4.1 Hằng số vật lý kiện phổ hợp chất phân lập từ loài hải miên Dysidea fragilis 2.4.1.1 Hợp chất 1: Dysinidine I (chất mới) Chất bột màu trắng, vô định hình; [ ]25 : -76,5 (c=0,1, CHCl3) D 13 Số liệu phổ H- C-NMR: xem Bảng 3.1 2.4.1.2 Hợp chất 2: Dysinidine II (chất mới) Chất bột màu trắng, vô định hình; [ ]25 : -25,0 (c=0,1, CHCl3) D H- NMR (500 MHz, CD3OD) H (ppm): 4,78 (d, J = 4,0 Hz, H2), 4,08 (d, J = 4,0 Hz, H-3), 1,53 (m, H-4a), 1,53 (m, Hα-5)/1,82 (m, Hβ-5), 1,97 (br s, H-6), 5,32 (d, J = 3,5 Hz, H-8), 2,41 (m, H-8a), 1,49 (dd, J = 13,5, 15,0 Hz, Hα-9)/2,16 (dd, J = 2,5, 15,0 Hz, Hβ-9), 1,11 (s, H-10), 1,05 (s, H-11), 1,66 (s, H-12), 3,39 (s, 2-OCH3), 3,43 (s, 9a-OCH3) C-NMR (125 MHz, CD3OD) C (ppm): 110,67 (C-2), 81,00 13 (C-3), 81,52 (C-3a), 40,95 (C-4), 47,31 (C-4a), 22,31 (C-5), 33,28 (C-6), 135,33 (C-7), 126,03 (C-8), 31,32 (C-8a), 35,02 (C-9), 108,62 (C-9a), 26,59 (C-10), 23,52 (C-11), 23,52 (C-12), 56,51 (2-OCH3), 49,88 (9a-OCH3) 2.4.1.3 Hợp chất 3: Dysinidine III (chất mới) Chất bột màu trắng, vô định hình; [ ]25 : +82,1 (c=0,1, CHCl3) D H- NMR (500 MHz, CDCl3) H (ppm): 5,06 (s, H-2), 4,07 (s, H3), 2,62 (dt, J = 6,5, 11,0 Hz, H-4a), 1,58 (m, Hα-5)/1,70 (m, Hβ-5), 1,84 (m, Hα-6)/1,91 (m, Hβ-6), 5,30 (dd, J = 1,0, 3,0 Hz, H-8), 2,76 (m, H-8a), 1,61 (m, Hα-9)/2,33 (dd, J = 8,5, 13,5 Hz, Hβ-9), 1,24 (s, H-10), 1,09 (s, H-11), 1,66 (s, H-12), 3,50 (s, 2-OCH3) C-NMR (125 MHz, CDCl3) C (ppm): 108,03 (C-2), 79,81 (C- 13 3), 59,63 (C-3a), 46,44 (C-4), 43,31 (C-4a), 20,55 (C-5), 28,51 (C-6), 133,37 (C-7), 124,55 (C-8), 34,79 (C-8a), 41,68 (C-9), 177,85 (C9a), 24,79 (C-10), 20,64 (C-11), 23,92 (C-12), 56,67 (2-OCH3) 2.4.1.4 Hợp chất 4: Dysinidin A (chất mới) Chất bột màu trắng, vô định hình; [ ]25 : -30,1 (c=0,1, CHCl3) D H- NMR (500 MHz, CDCl3) H (ppm): 5,58 (s, H-3), 1,67 (m, H-4a), 1,48 (m, Hα-5)/1,78 (m, Hβ-5), 2,04 (br s, H-6), 5,36 (d, J = 3,5 Hz, H-8), 2,80 (m, H-8a), 2,58 (dd, J = 6,0, 12,5 Hz, H-9), 1,18 (s, H-10), 1,13 (s, H-11), 1,65 (s, H-12), 3,68 (s, 2-OCH3) C-NMR (125 MHz, CDCl3) C (ppm): 166,25 (C-2), 115,07 13 (C-3), 163,14 (C-3a), 43,86 (C-4), 47,02 (C-4a), 19,11 (C-5), 30,92 (C-6), 134,38 (C-7), 123,69 (C-8), 34,18 (C-8a), 46,30 (C-9), 205,52 (C-9a), 26,88 (C-10), 24,03 (C-11), 23,18 (C-12), 51,80 (2-OCH3) 2.4.1.5 Hợp chất 5: Dysinidin B (chất mới) Chất bột màu trắng, vô định hình; [ ]25 : +42,0 (c=0,1, CHCl3) D H- NMR (500 MHz, CDCl3) H (ppm): 2,16 (s, H-3), 2,00 (m, H-4a), 1,44 (m, Hα-5)/1,56 (m, Hβ-5), 2,00 (m, H-6), 5,38 (d, J = 5,0 Hz, H-8), 2,60 (m, H-8a), 2,11 (dd, J = 12,0, 14,0 Hz, Hα-9)/2,52 (dd, J = 4,0, 14,0 Hz, Hβ-9), 1,17 (s, H-10), 1,09 (s, H-11), 1,62 (s, H-12), 3,66 (s, 9a-OCH3) C-NMR (125 MHz, CDCl3) C (ppm): 25,57 (C-3), 213,41 (C- 13 3a), 50,35 (C-4), 43,68 (C-4a), 19,91 (C-5), 31,82 (C-6), 135,01 (C7), 124,43 (C-8), 33,51 (C-8a), 36,28 (C-9), 173,11 (C-9a), 24,19 (C10), 21,11 (C-11), 23,37 (C-12), 51,44 (9a-OCH3) 2.4.1.6 Hợp chất 6: Dysinidine C (chất mới) Chất bột màu trắng, vô định hình; [ ]25 : +81,4 (c=0,1, CHCl3) D H- NMR (500 MHz, CD3OD) H (ppm): 5,97 (s, H-3), 2,03 (dt, J = 3,5, 14,5 Hz, H-4a), 1,41 (dt, J = 4,0, 14,5 Hz, Hα-5)/1,79 (m, Hβ5), 3,91 (br d, J = 4,0 Hz, H-6), 5,56 (dd, J = 1,5, 5,5 Hz, H-8), 2,79 (m, H-8a), 1,46 (t, J = 14,0 Hz, Hα-9)/2,32 (dd, J = 4,0, 14,0 Hz, Hβ9), 1,42 (s, H-10), 1,29 (s, H-11), 1,78 (s, H-12), 3,19 (s, 9a-OCH3) C-NMR (125 MHz, CD3OD) C (ppm): 172,62 (C-2), 118,49 13 (C-3), 174,85 (C-3a), 39,31 (C-4), 43,16 (C-4a), 29,10 (C-5), 68,75 (C-6), 136,27 (C-7), 128,64 (C-8), 31,80 (C-8a), 39,60 (C-9), 109,14 (C-9a), 26,18 (C-10), 25,48 (C-11), 21,02 (C-12), 50,95 (9a-OCH3) 2.4.1.7 Hợp chất 7: Dysinidine D (chất mới) Chất bột màu trắng, vô định hình; [ ]25 : +61,0 (c=0,1, CHCl3) D H- NMR (500 MHz, CDCl3) H (ppm): 5,80 (s, H-3), 2,15 (m, H-4a), 1,01 (m, Hα-5)/1,65 (m, Hβ-5), 2,15 (m, Hα-6)/2,43 (dt, J = 5,5, 13,5 Hz, Hβ-6), 4,01 (d, J = 2,5, H-8), 2,66 (m, H-8a), 1,58 (t, J = 13,5 Hz, Hα-9)/2,08 (dd, J = 3,5, 13,5 Hz, Hβ-9), 1,38 (s, H-10), 1,20 (s, H-11), 4,83 (br s, Hα-12)/ 4,85 (br s, Hβ-12), 3,16 (s, 9a-OCH3) C-NMR (125 MHz, CDCl3) C (ppm): 169,46 (C-2), 117,75 13 (C-3), 172,89 (C-3a), 39,04 (C-4), 43,54 (C-4a), 22,74 (C-5), 28,84 (C-6), 145,90 (C-7), 76,38 (C-8), 36,59 (C-8a), 36,15 (C-9), 107,64 (C-9a), 25,29 (C-10), 25,04 (C-11), 112,57 (C-12), 50,36 (9a-OCH3) 2.4.1.8 Hợp chất 8: Dysinidine E (chất mới) Chất bột màu trắng, vô định hình; [ ]25 : +11,0 (c=0,1, CHCl3) D H- NMR (500 MHz, CDCl3) H (ppm): 1,61 (m, H-4a, H-4a′), 1,53 (m, Hα-5, Hα-5′)/1,68 (m, Hβ-5, Hβ-5′), 1,99 (m, H-6, H-6′), 5,35 (d, J = 4,5, H-8, H-8′), 2,63 (m, H-8a, H-8a′), 1,45 (dd, J = 12,0, 12,5 Hz, Hα-9, Hα-9′)/2,43 (m, Hβ-9, Hβ-9′), 4,96 (dd, J = 6,5, 12,0 Hz, H9a, H-9a′), 1,32 (s, H-10, H-10′), 1,17 (s, H-11, H-11′), 1,62 (s, H-12, H-12′) C-NMR (125 MHz, CDCl3) C (ppm): 172,03 (C-2, C-2′), 13 117,54 (C-3, C-3′), 172,50 (C-3a, C-3a′), 40,01 (C-4, C-4′), 48,17 (C4a, C-4a′), 19,00 (C-5, C-5′), 31,07 (C-6, C-6′), 134,83 (C-7, C-7′), 122,86 (C-8, C-8′), 30,89 (C-8a, C-8a′), 37,31 (C-9, C-9′), 37,31 (C9a, C-9a′), 29,19 (C-10, C-10′), 25,45 (C-11, C-11′), 23,19 (C-12, C12′) 2.4.1.9 Hợp chất 9: Furodysinin lactone Chất bột màu trắng, vô định hình; [ ]25 : -20,0 (c=0,1, MeOH) D H- NMR (500 MHz, CD3OD) H (ppm): 5,75 (s, H-3), 1,72 (m, H-4a), 1,20 (m, Hα-5)/1,72 (m, Hβ-5), 2,03 (m, H-6), 5,41 (d, J = 4,0 Hz, H-8), 2,81 (m, H-8a), 1,52 (dd, J = 13,5, 13,5 Hz, Hα-9)/2,27 (dd, J = 3,5, 13,5 Hz, Hβ-9), 1,42 (s, H-10), 1,26 (s, H-11), 1,65 (s, H-12) C-NMR (125 MHz, CD3OD) C (ppm): 172,71 (C-2), 115,71 13 (C-3), 177,00 (C-3a), 39,61 (C-4), 48,75 (C-4a), 19,75 (C-5), 32,01 (C-6), 135,34 (C-7), 124,92 (C-8), 31,92 (C-8a), 42,15 (C-9), 107,50 (C-9a), 27,32 (C-10), 25,70 (C-11), 23,34 (C-12) 2.4.1.10 Hợp chất 10: O-methyl-furodysinin lactone Chất bột màu trắng, vô định hình; [ ]25 : -80,5 (c=0,1, MeOH) D H- NMR (500 MHz, CD3OD) H (ppm): 5,81 (s, H-3), 1,68 (m, H-4a), 1,16 (m, Hα-5)/1,68 (m, Hβ-5), 1,97 (m, H-6), 5,36 (d, J = 4,0 Hz, H-8), 2,77 (m, H-8a), 1,52 (dd, J = 13,5, 13,5 Hz, Hα-9)/2,34 (dd, J = 3,5, 13,5 Hz, Hβ-9), 1,37 (s, H-10), 1,24 (s, H-11), 1,62 (s, H-12), 3,17 (s, 9a-OCH3) C-NMR (125 MHz, CD3OD) C (ppm): 169,57 (C-2), 117,27 13 (C-3), 173,03 (C-3a), 38,70 (C-4), 47,74 (C-4a), 18,48 (C-5), 30,91 (C-6), 134,26 (C-7), 123,54 (C-8), 30,18 (C-8a), 40,25 (C-9), 107,51 (C-9a), 25,70 (C-10), 25,24 (C-11), 23,10 (C-12), 50,35 (9a-OCH3) 2.4.1.11 Hợp chất 11: O-methyl-6-oxofurodysinin lactone Chất bột màu trắng, vô định hình; [ ]25 : -64,1 (c=0,1, MeOH) D H- NMR (500 MHz, CD3OD) H (ppm): 5,92 (s, H-3), 2,26 (dt, J = 4,5, 14,5 Hz, H-4a), 2,05 (dd, J = 14,5, 17,5 Hz, Hα-5)/ 2,46 (dd, J = 14,5, 17,5 Hz, Hβ-5), 6,74 (d, J = 6,5 Hz, H-8), 3,08 (m, H-8a), 1,64 (dd, J = 13,5, 13,5 Hz, Hα-9)/2,48 (m, Hβ-9), 1,40 (s, H-10), 1,22 (s, H-11), 1,77 (s, H-12), 3,20 (s, 9a-OCH3) C-NMR (125 MHz, CD3OD) C (ppm): 168,86 (C-2), 118,73 13 (C-3), 171,01 (C-3a), 38,58 (C-4), 47,08 (C-4a), 35,03 (C-5), 198,07 (C-6), 135,84 (C-7), 146,53 (C-8), 31,03 (C-8a), 37,65 (C-9), 106,85 (C-9a), 24,97 (C-10), 24,71 (C-11), 15,61 (C-12), 50,58 (9a-OCH3) 2.4.1.12 Hợp chất 12: Dysideasterol F Chất bột màu trắng, vô định hình; [ ]25 : +86,2 (c=0,1, CHCl3) D H-NMR (500 MHz, CDCl3) H (ppm): 1,72 (m, Hα-1)/2,29 (m, Hβ-1), 1,50 (m, Hα-2)/2,09 (m, Hβ-2), 4,03 (m, H-3), 0,98 (m, Hα4)/2,03 (m, Hβ-4), 5,37 (s, H-6), 5,19 ( s, H-7), 4,10 (br s, H-11), 1,65 (m, Hα-12)/2,22 (m, Hβ-12), 2,62 (dd, J = 7,5, 12,0 Hz, H-14), 1,50 (m, H-15), 1,33 (m, Hα-16)/1,95 (m, Hβ-16), 1,33 (m, H-17), 0,64 (s, H-18), 3,65 (d, J = 9,0 Hz, H-19)/ 3,89 (d, J = 9,0 Hz, H-19), 1,35 (m, H-20), 0,93 (d, J = 6,0 Hz, H-21), 1,01 (m, Hα-22)/1,33 (m, Hβ22), 1,13 (m, Hα-23)/1,33 (m, Hβ-23), 1,13 (m, H-24), 1,52 (m, H- 11 1,20 (m, H-17), 0,80 (s, H-18), 0,88 (s, H-19), 1,60 (m, H-20), 0,90 (d, J = 7,0Hz, H-21), 1,70 (m, H-22), 1,32 (m, H-23), 1,24 (m, H-24), 1,42 (m, H-25), 0,86 (d, J = 7,0 Hz, H-26), 0,87 (d, J = 7,0 Hz, H27) C-NMR (CDCl3, 125 MHz) C (ppm): 34,72 (C-1), 30,15 (C- 13 2), 66,48 (C-3), 39,96 (C-4), 82,16 (C-5), 135,42 (C-6), 130,79 (C-7), 79,46 (C-8), 51,10 (C-9), 36,96 (C-10), 23,43 (C-11), 39,46 (C-12), 44,75 (C-13), 51,73 (C-14), 20,69 (C-15), 28,24 (C-16), 56,45 (C17), 12,62 (C-18), 18,58 (C-19), 35,23 (C-20), 18,16 (C-21), 35,96 (C-22), 23,81 (C-23), 39,46 (C-24), 27,99 (C-25), 22,54 (C-26), 22,80 (C-27) 2.4.2 Hằng số vật lý kiện phổ hợp chất phân lập từ loài hải miên Haliclona oculata 2.4.2.1 Hợp chất 16: 3β-Hydroxy-5-cholenic acid methyl ester Chất bột vô định hình, màu trắng; [ ]25 : -38,0 (c=0,1, CHCl3) D H-NMR (500 MHz, CDCl3) H (ppm): 1,11 (m, Hα-1)/1,87 (m, Hβ-1), 1,45 (m, Hα-2)/1,58 (m, Hβ-2), 3,54 (m, H-3), 2,25 (m, Hα4)/2,34 (m, Hβ-4), 5,37 (d, J = 5,0 Hz, H-6), 1,81 (m, Hα-7)/2,04 (m, Hβ-7), 1,50 (m, H-8), 0,94 (m, H-9), 1,48 (m, Hα-11)/1,52 (m, Hβ-11), 1,19 (m, Hα-12)/2,01 (m, Hβ-12), 1,12 (m, H-14), 1,12 (m, Hα15)/1,62 (m, Hβ-15), 1,53 (m, Hα-16)/1,89 (m, Hβ-16), 1,11 (m, H17), 0,70 (s, H-18), 1,03 (s, H-19), 1,44 (m, H-20), 0,95 (d, J = 6,5 Hz, H-21), 1,54 (m, Hα-22)/2,00 (m, Hβ-22), 2,26 (m, Hα-23)/2,38 (m, Hβ-23), 3,68 (s, OMe) C-NMR (CDCl3, 125 MHz) C (ppm): 37,27 (C-1), 31,67 (C- 13 2), 71,81 (C-3), 42,32 (C-4), 140,77 (C-5), 121,67 (C-6), 31,08 (C-7), 31,91 (C-8), 50,11 (C-9), 36,51 (C-10), 21,09 (C-11), 39,76 (C-12), 42,39 (C-13), 56,75 (C-14), 24,27 (C-15), 28,11 (C-16), 55,80 (C- 12 17), 11,88 (C-18), 19,40 (C-19), 35,39 (C-20), 18,32 (C-21), 31,89 (C-22), 31,04 (C-23), 174,78 (C-24), 51,48 (OMe) 2.4.2.2 Hợp chất 17: Stigmasta-5,24(28)-dien-3β,29-diol Chất bột vô định hình, màu trắng; [ ]25 : -33,0 (c=0,1, CHCl3) D H-NMR (500 MHz, CDCl3) H (ppm): 3,53 (m, H-3), 5,35 (s, H6), 0,68 (s, H-18), 1,26 (s, H-19), 0,98 (d, J = 6,5 Hz, H-21), 1,03 (d, J = 6,5 Hz, H-26), 1,03 (d, J = 6,5 Hz, H-27), 5,35 (m, H-28), 4,17 (d, J = 7,0 Hz, H-29) C-NMR (CDCl3, 125 MHz) C (ppm): 37,26 (C-1), 31,90 (C- 13 2), 71,79 (C-3), 42,29 (C-4), 140,78 (C-5), 121,67 (C-6), 31,66 (C-7), 36,36 (C-8), 50,12 (C-9), 36,51 (C-10), 21,08 (C-11), 39,75 (C-12), 42,37 (C-13), 56,75 (C-14), 24,30 (C-15), 28,27 (C-16), 55,63 (C17), 11,84 (C-18), 19,39 (C-19), 36,40 (C-20), 18,71 (C-21), 34,56 (C-22), 26,39 (C-23), 150,64 (C-24), 31,90 (C-25), 21,95 (C-26), 22,06 (C-27), 120,88 (C-28), 59,48 (C-29) 2.4.2.3 Hợp chất 18: 24-Methylenecholest-4-en-3β,6β-diol Chất bột vô định hình, màu trắng; [ ]25 : -21,0 (c=0,1, CHCl3) D H-NMR (500 MHz, CDCl3) H (ppm): 1,16 (m, Hα-1)/2,02 (m, Hβ-1), 1,97 (m, Hα-2)/2,18 (m, Hβ-2), 4,55* (H-3), 5,99 (s, H-4), 4,55* (H-6), 1,38 (m, Hα-7)/1,73 (m, Hβ-7), 1,52 (m, H-8), 0,87 (m, H-9), 1,49 (m, H-11), 1,28 (m, Hα-12)/2,22 (m, Hβ-12), 1,05* (H-14), 1,13 (m, Hα-15)/1,62 (m, Hβ-15), 1,23 (m, Hα-16)/1,82 (m, Hβ-16), 1,05* (H-17), 0,72 (s, H-18), 1,54 (s, H-19), 1,41 (m, H-20), 0,99 (d, J = 6,5 Hz, H-21), 1,22 (m, Hα-22)/1,62 (m, Hβ-22), 1,97 (m, Hα23)/2,18 (m, Hβ-23), 2,28 (m, H-25), 0,88 (d, J = 6,5 Hz, H-26), 0,89 (d, J = 6,5 Hz, H-27), 4,84 (d, J = 8,0 Hz, H-28) C-NMR (CDCl3, 125 MHz) C (ppm): 39,73 (C-1), 30,19 (C- 13 2), 73,74 (C-3), 129,97 (C-4), 147,15 (C-5), 67,54 (C-6), 37,71 (C-7), 13 28,48 (C-8), 55,03 (C-9), 37,33 (C-10), 21,37 (C-11), 40,53 (C-12), 42,87 (C-13), 56,49 (C-14), 24,58 (C-15), 28,52 (C-16), 56,34 (C17), 12,20 (C-18), 21,68 (C-19), 36,07 (C-20), 18,93 (C-21), 35,06 (C-22), 30,19 (C-23), 156,72 (C-24), 34,08 (C-25), 22,68 (C-26), 22,12 (C-27), 106,64 (C-28) 2.4.2.4 Hợp chất 19: Cholest-5-en-3β,7β-diol Chất bột vô định hình, màu trắng; [ ]25 : -52,0 (c=0,1, CHCl3) D H-NMR (500 MHz, CDCl3) H (ppm): 3,52 (m, H-3), 5,29 (br s, H-6), 3,85 (br d, J = 7,0 Hz, H-7), 0,69 (s, H-18), 1,05 (s, H-19), 0,92 (d, J = 6,5 Hz, H-21), 0,87 (d, J = 6,5 Hz, H-26), 0,83 (d, J = 6,5 Hz, H-27) C-NMR (CDCl3, 125 MHz) C (ppm): 36,96 (C-1), 31,59 (C- 13 2), 71,44 (C-3), 41,75 (C-4), 43,49 (C-5), 125,47 (C-6), 73,37 (C-7), 40,93 (C-8), 48,29 (C-9), 36,46 (C-10), 21,09 (C-11), 39,58 (C-12), 42,95 (C-13), 55,98 (C-14), 26,39 (C-15), 28,55 (C-16), 55,49 (C17), 11,83 (C-18), 18,79 (C-19), 35,74 (C-20), 19,16 (C-21), 36,22 (C-22), 23,85 (C-23), 39,51 (C-24), 28,02 (C-25), 22,81 (C-26), 22,55 (C-27) 2.4.2.5 Hợp chất 20: Xestospongiene J Chất dầu, không màu; [ ]25D : +15,0 (c=0,1, CHCl3) H-NMR (500 MHz, CDCl3) H (ppm): 1,62* (H-2), 2,17 (m, Hα3)/2,22 (m, Hβ-3), 4,52 (dt, J = 3,0, 7,0 Hz, H-4), 4,41 (br s, H-5), 5,43 (dd, J = 6,0, 15,5 Hz, H-6), 5,86 (dd, J = 6,5, 15,5 Hz, H-7), 2,17* (H-8), 2,56* (H-9), 1,62* (H-11), 2,17* (H-12), 6,38 (t, J = 7,0 Hz, H-13) C-NMR (CDCl3, 125 MHz) C (ppm): 177,51 (C-1), 28,62 (C- 13 2), 21,24 (C-3), 82,33 (C-4), 72,68 (C-5), 126,34 (C-6), 135,11 (C-7), 14 32,19 (C-8), 28,52 (C-9), 28,42 (C-10), 27,55 (C-11), 32,87 (C-12), 138,67 (C-13), 88,68 (C-14) 2.4.2.6 Hợp chất 21: Xestospongiene A Chất dầu, không màu; [ ]25 : -10,0 (c=0,1, CHCl3) D H-NMR (500 MHz, CDCl3) H (ppm): 2,55 (m, H-2), 2,00 (m, Hα-3)/2,40 (m, Hβ-3), 4,98 (q, J = 7,0, 13,5 Hz, H-4), 5,77 (dd, J = 6,5, 15,5 Hz, H-5), 5,87 (dd, J = 6,0, 15,5 Hz, H-6), 4,18 (dt, J = 6,0, 12,5 Hz, H-7), 1,55 (m, H-8), 1,35 (m, Hα-9)/1,41 (m, Hβ-9), 1,35 (m, H-10), 1,45 (m, H-11), 2,10 (dq, J = 7,0, 14,5 Hz, H-12), 6,38 (t, J = 7,0 Hz, H-13) C-NMR (CDCl3, 125 MHz) C (ppm): 176,80 (C-1), 28,45 (C- 13 2), 28,68 (C-3), 79,90 (C-4), 127,62 (C-5), 136,55 (C-6), 71,61 (C-7), 36,98 (C-8), 25,00 (C-9), 28,85 (C-10), 27,68 (C-11), 32,88 (C-12), 138,65 (C-13), 88,72 (C-14) 2.5 Đánh giá hoạt tính gây độc tế bào Phần nêu bước thực để xác định hoạt tính gây độc tế bào hợp chất phân lập từ hai loài hải miên 2.6 Kết thử hoạt tính gây độc tế bào hợp chất 2.6.1 Kết thử hoạt tính gây độc tế bào hợp chất phân lập từ loài hải miên Dysidea fragilis Các hợp chất 1-6, 8-11, 13 14 đánh giá sàng lọc sơ bộ nồng độ 100 µg/mL hoạt tính độc tế bào dòng tế bào ung thư KB, LU-1, HL-60, LnCaP, SK-MeI2, HepG2, MCF-7, PC-3 Kết cho thấy, bốn hợp chất 3, 11, 13 14 có khả ức chế >50% phát triển tế bào ung thư Nên chúng tiếp tục thí nghiệm nồng độ để xác định giá trị IC50 15 Bảng 2.3 Kết đánh giá hoạt tính gây độc tế bào hợp chất HC IC50 (µg/mL) KB LU-1 HL-60 LNCaP SK-Mel-2 HepG2 MCF-7 PC-3 >100 43,51 >100 40,77 38,84 45,43 42,96 48,53 11 >100 >100 >100 >100 91,18 >100 >100 78,51 13 12,66 11,91 3,50 14 8,02 8,12 4,22 11,29 12,65 10,38 9,40 7,90 9,00 6,66 8,51 9,76 8,36 0,35 0,36 0,43 0,31 0,35 ĐC* 0,41 0,38 0,31 *ĐC: Ellipticine sử dụng chất đối chứng dương 2.6.2 Kết thử hoạt tính gây độc tế bào hợp chất phân lập từ loài hải miên Haliclona oculata Sáu hợp chất (16-21) đánh giá sàng lọc sơ bộ nồng độ 100 µg/mL hoạt tính độc tế bào dòng tế bào ung thư KB, LU1, HL-60, LnCaP, SK-MeI2, HepG2, MCF-7, PC-3 Kết sàng lọc hợp chất cho thấy, nồng độ 100 µg/mL năm hợp chất 16, 17, 19-21 có khả ức chế >50% phát triển tế bào ung thư Nên chúng tiếp tục thí nghiệm nồng độ để xác định giá trị IC50 Bảng 2.6 Kết đánh giá hoạt tính gây độc tế bào hợp chất IC50 (µg/mL) HC KB LU-1 HL-60 LNCaP SK-Mel-2 HepG2 MCF-7 PC-3 16 11,62 16,27 19,50 31,93 32,11 26,34 42,96 22,38 16,56 18,00 18,61 19,50 19 14,66 18,40 13,86 14,98 21,82 22,81 17,47 11,18 20 72,29 83,88 39,01 60,36 40,58 47,46 74,08 35,30 21 29,84 39,26 23,65 39,21 31,07 32,62 36,89 37,24 0,42 0,54 0,41 17 3,74 ĐC* 0,40 3,99 0,28 9,69 0,30 0,35 *ĐC: Ellipticine sử dụng chất đối chứng dương 7,53 0,42 16 CHƯƠNG THẢO LUẬN KẾT QUẢ 3.1 Xác định cấu trúc hợp chất phân lập từ loài hải miên Dysidea fragilis Phần trình bày kết phân tích phổ xác định cấu trúc 15 hợp chất phân lập từ loài loài hải miên Dysidea fragilis 1: Dysinidine I (chất mới) 2: Dysinidine II (chất mới) 3: Dysinidine III (chất mới) 4: Dysinidin A (chất mới) 5: Dysinidin B (chất mới) 6: Dysinidine C (chất mới) 7: Dysinidine D (chất mới) 9: Furodysinin lactone 10: O-methyl furodysinin lactone 8: Dysinidine E (chất mới) 11: O-methyl-6-oxofurodysinin lactone 17 12: Dysideasterol F 13: 9α, 11α-epoxycholest-7-en-3β,5α,6α-triol 14: 9α,11α-epoxycholest-7-en3β,5α,6α,19-tetrol 6-acetate 15: 5,8-epidioxycholest-6-en-3-ol Dưới trình bày chi tiết phương pháp xác định cấu trúc hợp chất 3.1.1 Hợp chất : Dysinidine I (chất mới) Công thức phân tử xác định C16H24O4 dựa phổ HR-ESI-MS với xuất pic ion giả phân tử m/z 281,1753 [M+H]+ (tính toán lí thuyết cho công thức C16H25O4, 281,1753) Hình 3.1 Phổ HR-ESI-MS Hình 3.2 Phổ 1H-NMR Trên phổ 1H-NMR cho thấy xuất tín hiệu proton olefin δH 5,37 (br d, J = 1,0 Hz), proton oxymethine δH 4,07 (d, J = 4,5 Hz) 5,05 (d, J = 4,5 Hz), proton methine δH 2,53 (dt, J = 4,5, 10,0 Hz) 2,94 (m), proton methylene δH 1,51 (m, α)/1,75 (m, β), 1,88 (m) 1,92 (dd, J = 3,0, 10,0 Hz), nhóm methyl δH 0,91 (s), 1,05 (s) 1,66 (s), nhóm methoxy δH 3,57 (s) 18 Phổ 13C-NMR DEPT cho thấy có mặt 16 carbon, bao gồm có carbon carbonyl δC 176,41, carbon không liên kết trực tiếp với hydro δC 46,08, 61,32 133,33, nhóm methine δC 34,27, 43,15, 74,42, 107,01 124,60, nhóm methylene δC 21,31, 28,63 34,60, carbon methyl δC 21,58, 23,87, 23,95 57,75 Hình 3.3 Phổ 13C-NMR Hình 3.4 Phổ HSQC Phân tích số liệu phổ 1H- 13C-NMR hợp chất gợi ý hợp chất thuộc nhóm chất sesquiterpene, tương tự hợp chất công bố dysetherin (1a) [Tetrahedron, 56, 5247 (2000)], một hợp chất phân lập từ loài hải miên Dysidea sp., có mở vòng epoxy C-2/C-3 Phân tích tương tác phổ HSQC cho phép gán tín hiệu proton liên kết trực tiếp với carbon Hình 3.5 Phổ HMBC Hình 3.6 Phổ COSY Hình 3.7 NOESY Phổ Dựa vào tương tác HMBC H-10 (δH 1,05)/H-11 (δH 0,91) C-3a (δC 61,32)/C-4 (δC 46,08)/C-4a (δC 43,15); H-3 (δH 4,07) C-3a (δC 61,32)/C-4 (δC 46,08)/C-9 (δC 34,60)/C-9a (δC 176,41) xác định vòng spiro C-3a 19 Bảng 3.1 Số liệu phổ NMR hợp chất tham khảo C 3a 4a 8a 9a 10 11 12 2-OMe a) δC# δCa) 76,1 57,8 59,7 47,5 44,9 21,2 28,7 134,1 123,7 31,1 39,1 177,6 22,3 26,1 23,7 107,01 74,42 61,32 46,08 43,15 21,31 28,63 133,33 124,60 34,27 34,60 176,41 23,95 21,58 23,87 57,75 δHa) (độ bội, J, Hz) 5,05 (d, 4,5) 4,07 (d, 4,5) 2,53 (dt, 7,0, 10,0) 1,51 (m, α)/1,75 (m, β) 1,88 (m) 5,37 (br d, 1,0) 2,94 (m) 1,92 (dd, 3,0, 10,0) 1,05 (s) 0,91 (s) 1,66 (s) 3,57 (s) Đo CDCl3, #δC dysetherin (1a) đo CDCl3 [Tetrahedron, 56, 5247 (2000)] Bên cạnh đó, cấu tạo xác định thêm phân tích phổ COSY Trên phổ COSY, khung sesquiterpene, thấy tương tác tín hiệu proton H-4a (δH 2,53) H-6 (δH 1,88) với proton H-5 (δH 1,51), tín hiệu proton H-4a (δH 2,53), H-8 (δH 5,37) H-9 (δH 1,92) với proton H-8a (δH 2,94) Hình 3.8 Các tương tác HMBC, COSY NOESY 20 Hóa lập thể hợp chất C-3a, C-4a C-8a gợi ý có cấu hình (β) tương tự hợp chất dysetherin (1a) dựa trình sinh tổng hợp hợp chất sesquiterpene dạng spirodysin từ giống Dysidea [Nat Prod Rep., 27, 165 (2010)] Điều khẳng định thêm tương tác NOESY H-4a (δH 2,53) H-8a (δH 2,94) Cấu hình α nhóm hydroxyl C-3 xác định dựa vào tương tác NOESY H-3 (δH 4,07) H-10 (δH 1,05)/H-11 (δH 0,91) Hằng số tương tác H-2 H-3, J = 4,5 Hz gợi ý cấu hình nhóm methoxy C-2 β (JH-2/H-3 = 2,2 Hz H-2 H-3 dạng cis) Điều khẳng định thêm tương tác NOESY H-2 (δH 5,05) H-9 (δH 1,92) Hình 3.9 Cấu trúc hóa học hợp chất tham khảo 1a Dựa chứng phổ trên, cấu trúc xác định Đây hợp chất đặt tên dysinidine I 3.2 Xác định cấu trúc hợp chất phân lập từ loài hải miên Haliclona oculata Phần trình bày chi tiết kết phân tích phổ xác định cấu trúc hợp chất biết phân lập từ loài loài hải miên Haliclona oculata 16: 3β-Hydroxy-5-cholenic acid methyl ester 17: Stigmasta-5,24(28)-dien3β,29-diol 21 18: 24-Methylenecholest-4-en-3β,6β-diol 19: Cholest-5-en-3β,7β-diol 20: Xestospongiene J 21: Xestospongiene A 3.3 Hoạt tính gây độc tế bào hợp chất phân lập từ loài hải miên Dysidea fragilis Trong số hợp chất thuộc lớp chất sesquiterpene phân lập từ loài hải miên Dysidea fragilis, hợp chất thể hoạt tính gây độc tế bào trung bình với dòng tế bào ung thư: LU-1, LnCaP, SK-MeI2, HepG2, MCF-7, PC-3 với giá trị IC50 khoảng 38,84 ÷ 48,53 µg/mL; hợp chất 11 thể hoạt tính gây độc tế bào yếu với dòng tế bào ung thư: SK-MeI2 PC-3 với giá trị IC50 91,18 78,51 µg/mL Đây lần hoạt tính gây độc tế bào hai hợp chất 11 nghiên cứu Các hợp chất 13 14 thuộc lớp chất sterol thể hoạt tính gây độc tế bào mạnh tất dòng tế bào ung thư thử nghiệm với giá trị IC50 khoảng 3,50 ÷ 12,66 µg/mL Hợp chất 14 nghiên cứu hoạt tính gây độc tế bào dòng tế bào A431 với giá trị IC50 0,3 µM Đây lần hoạt tính gây độc tế bào hợp chất 13 nghiên cứu 3.4 Hoạt tính gây độc tế bào hợp chất phân lập từ loài hải miên Haliclona oculata Kết đánh giá hoạt tính gây độc tế bào hợp chất phân lập từ loài hải miên Haliclona oculata cho thấy, hợp chất 17 thể 22 hoạt tính gây độc tế bào tốt Tác dụng gây độc tế bào ung thư chất mạnh hai dòng tế bào ung thư KB LU-1 với giá trị IC50 tương ứng 3,74 3,99 µg/mL Các hợp chất 16, 19-21 thể tác dụng gây độc tế bào ung thư thử nghiệm mức độ trung bình với giá trị IC50 khoảng từ 11,18 tới 83,88 µg/mL Kết thử hoạt tính hai hợp chất có chứa brom 20 21 cho thấy chúng thể hoạt tính trung bình, giống hợp chất có cấu trúc tương tự phân lập từ Haliclona sp KẾT LUẬN Đây công trình nghiên cứu hóa học hoạt tính sinh học hai loài hải miên Dysidea fragilis Haliclona oculata thu thập vùng biển đông bắc Việt Nam Nghiên cứu hóa học a Bằng phương pháp sắc ký kết hợp, từ loài hải miên Dysidea fragilis phân lập 15 hợp chất Sử dụng phương pháp phổ đại, cấu trúc hóa học 15 hợp chất xác định Trong đó, có hợp chất hợp chất biết, là: - hợp chất sesquiterpene mới: Dysinidine I (1), Dysinidine II (2), Dysinidine III (3), Dysinidin A (4), Dysinidin B (5), Dysinidin C (6), Dysinidin D (7) Dysinidin E (8); - hợp chất sesquiterpene biết: Furodysinin lactone (9), O-methyl furodysinin lactone (10) O-methyl-6-oxofurodysinin lactone (11); - hợp chất sterol biết: Dysideasterol F (12), 9α,11αepoxycholest-7-en-3β,5α,6α-triol (13), 9α,11α-epoxycholest-7-en3β,5α,6α,19-tetrol 6-acetate (14) 5α,8α-epidioxycholest-6-en-3βol (15) 23 b Bằng phương pháp sắc ký kết hợp, từ loài hải miên Haliclona oculata phân lập hợp chất Sử dụng phương pháp phổ đại, cấu trúc hóa học hợp chất biết xác định, là: - hợp chất sterol: 3β-hydroxy-5-cholenic acid methyl ester (16), stigmasta-5,24(28)-dien-3β,29-diol (17), 24-methylenecholest4-en-3β,6β-diol (18) cholest-5-en-3β,7β-diol (19); - hợp chất có chứa brom: xestospongiene J (20) xestospongiene A (21) Nghiên cứu hoạt tính sinh học - Đã tiến hành đánh giá sàng lọc sơ bộ hoạt tính gây độc tế bào 18 hợp chất phân lập (1-6, 8-11, 13, 14 16-21) nồng độ 100 µg/mL dòng tế bào ung thư Kết cho thấy, hợp chất 3, 11, 13, 14, 16, 17 19-21 thể hoạt tính gây độc tế bào một dòng tế bào ung thư thử nghiệm với giá trị phần trăm ức chế 50% - Đã tiến hành thử nghiệm hoạt tính gây độc tế bào hợp chất 3, 11, 13, 14, 16, 17 19-21 nồng độ 0,8 µg/mL, µg/mL, 20 µg/mL, 100 µg/mL dòng tế bào ung thư lựa chọn để tính toán giá trị IC50 Kết cho thấy: + Ba hợp chất 13, 14 17 có hoạt tính gây độc tế bào dòng tế bào ung thư thử nghiệm Đặc biệt, hai hợp chất 13 14 thể hoạt tính mạnh dòng tế bào HL-60 với giá trị IC50 tương ứng 3,50 µg/mL 4,22 µg/mL Hợp chất 17 thể hoạt tính mạnh hai dòng tế bào KB LU-1 với giá trị IC50 tương ứng 3,74 µg/mL 3,99 µg/mL + Các hợp chất 16, 19-21 có hoạt tính gây độc tế bào mức độ yếu dòng tế bào ung thư với giá trị IC50 khoảng từ 11,18 tới 83,88 µg/mL 24 + Hợp chất thể hoạt tính gây độc tế bào với dòng tế bào ung thư LU-1, LnCaP, SK-MeI2, HepG2, MCF-7, PC-3 với giá trị IC50 43,51 µg/mL, 40,77 µg/mL, 38,84 µg/mL, 45,43 µg/mL, 42,96 µg/mL, 48,53 µg/mL KIẾN NGHỊ Từ công trình nghiên cứu tác giả có kiến nghị sau: Cần có nghiên cứu sâu hoạt tính sinh học phân đoạn chứa hợp chất steroid để từ phát triển thành sản phẩm phục vụ cho việc bồi bổ, nâng cao sức khỏe phòng ngừa, hỗ trợ điều trị bệnh ung thư, viêm nhiễm… Hợp chất sesquiterpene thể hoạt tính gây độc tế bào với một số dòng tế bào ung thư Vì vậy, cần có nghiên cứu sâu chế hoạt động hai hợp chất NHỮNG ĐÓNG GÓP MỚI CỦA LUẬN ÁN Lần nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học hai loài hải miên Dysidea fragilis Haliclona oculata vùng biển Đông Bắc Việt Nam Lần phân lập hợp chất từ loài hải miên Dysidea fragilis Các hợp chất là: Dysinidine I (1), Dysinidine II (2), Dysinidine III (3), Dysinidin A (4), Dysinidin B (5), Dysinidin C (6), Dysinidin D (7), Dysinidin E (8) Lần hợp chất phân lập từ hai loài hải miên Dysidea fragilis Haliclona oculata đánh giá hoạt tính gây độc tế bào dòng tế bào ung thư người bao gồm ung thư biểu mô (KB), ung thư phổi (LU-1), ung thư bạch cầu (HL-60), ung thư tuyến tiền liệt (LNCaP PC-3), ung thư da (SK-Mel2), ung thư gan (HepG2), ung thư vú (MCF-7) DANH MỤC CÁC CÔNG TRÌNH ĐÃ CÔNG BỐ Nguyen Thi Cuc, Hoang Le Tuan Anh, Dan Thi Thuy Hang, Nguyen Xuan Nhiem, Nguyen Hai Dang, Nguyen Hoai Nam, Pham Hai Yen, Do Cong Thung, Vu Kim Thu, Chau Van Minh and Phan Van Kiem Sesquiterpenes from the Vietnamese Marine Sponge Dysidea fragilis Natural Product Communications, 2015, 10 (8), 1341-1342 Nguyen Xuan Nhiem, Nguyen Thi Cuc, Dan Thi Thuy Hang, Do Thi Trang, Nguyen Hoai Nam, Pham Hai Yen, Do Cong Thung, Vu Kim Thu, Hoang Le Tuan Anh, Bui Huu Tai, Chau Van Minh and Phan Van Kiem 1H and 13C NMR assignments of sesquiterpenes from Dysidea fragilis Magnetic Resonance in Chemistry, 2015, 53, 1057–1060 Phan Van Kiem, Nguyen Xuan Nhiem, Bui Huu Tai, Hoang Le Tuan Anh, Dan Thi Thuy Hang, Nguyen Thi Cuc, Le Thi Huyen, Nguyen Hoai Nam, Pham Hai Yen, Do Cong Thung and Chau Van Minh Bis-sesquiterpene from the Marine Sponge Dysidea fragilis Natural Product Communications, 2016, 11 (4), 439-441 Phan Van Kiem, Nguyen Thi Viet Thanh, Dan Thi Thuy Hang, Nguyen Thi Cuc, Nguyen Xuan Nhiem, Pham Hai Yen, Hoang Le Tuan Anh, Bui Huu Tai, Do Thi Thao, Chau Van Minh Cytotoxic constituents from Vietnamese marine sponge Haliclona oculata (Linnaeus, 1759) Letters in Organic Chemistry, 2015, 12, 708-712 Nguyen Thi Cuc, Dan Thi Thuy Hang, Duong Thi Dung, Nguyen Xuan Nhiem, Hoang Le Tuan Anh, Pham Hai Yen, Do Cong Thung, Chau Van Minh, Phan Van Kiem Sesquiterpenes from Marine sponge Dysidea fragilis Vietnam Journal of Chemistry, 2015, 53 (2), 240-242 Nguyễn Thị Cúc, Đỗ Công Thung, Hoàng Lê Tuấn Anh, Dương Thị Dung, Phạm Hải Yến, Nguyễn Xuân Nhiệm, Đỗ Thị Trang, Bùi Hữu Tài, Châu Văn Minh, Phan Văn Kiệm Các hợp chất steroit từ loài hải miên Dysidea fragilis Tạp chí Hóa học, 2016, 54 (2e), 1-5 ... Việc nghiên cứu, khảo sát thành phần hóa học hoạt tính sinh học loài sinh vật biển nói chung, loài hải miên nói riêng vấn đề quan tâm Các nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học giới loài. .. bào ung thư hai loài hải miên Dysidea fragilis Haliclona oculata Mục tiêu nghiên cứu luận án Nghiên cứu để làm rõ thành phần hóa học chủ yếu loài hải miên Dysidea fragilis Haliclona oculata. .. ÁN Lần nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học hai loài hải miên Dysidea fragilis Haliclona oculata vùng biển Đông Bắc Việt Nam Lần phân lập hợp chất từ loài hải miên Dysidea fragilis