B GIO DC V O TO TRNG I HC S PHM H NI BI TH THU HIN Nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học số loài nấm Việt Nam LUN N TIN S HểA HC H NI - 2017 B GIO DC V O TO TRNG I HC S PHM H NI BI TH THU HIN Nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học số loài nấm Việt Nam Chuyờn ngnh: Húa hu c Mó s: 62.44.01.14 LUN N TIN S HểA HC Ngi hng dn khoa hc: PGS.TS NG NGC QUANG TS LU VN HUYN H NI - 2017 LI CAM OAN Tụi xin cam oan õy l cụng trỡnh nghiờn cu ca riờng tụi Cỏc s liu, kt qu nờu lun ỏn l trung thc v cha tng c cụng b bt k cụng trỡnh no khỏc Ngi cam oan Bựi Th Thu Hin LI CM N Lun ỏn c hon thnh ti phũng thớ nghim Húa hc cỏc hp cht thiờn nhiờn, b mụn Húa hu c, Khoa Húa hc, Trng i hc S Phm H Ni Tụi xin by t lũng bit n chõn thnh v sõu sc nht n PGS.TS ng Ngc Quang (Khoa Húa hc, Trng i hc s phm H Ni) v TS Lu Vn Huyn (Trng i hc Ti Nguyờn v Mụi Trng) ó giao ti, tn tỡnh hng dn, to iu kin tt nht, giỳp tụi tng bc quỏ trỡnh thc hin lun ỏn Tụi cng xin cm n PGS.TS Lờ xuõn Thỏm (S khoa hc cụng ngh Lõm ng), PGS.TS Dng Minh Lam (Khoa Sinh hc, Trng i hc S Phm H Ni) ó xỏc nh tờn khoa hc ca cỏc mu nm Li cm n cng xin c gi ti cỏc giỏo s, tin s ca Vin Húa hc, Vin Hn lõm Khoa hc v Cụng ngh Vit Nam ó thc hin o NMR, MS, GC MS v th hot tớnh khỏng sinh cỏc cht ó phõn lp c Cui cựng, tụi xin cm n n Ban giỏm hiu, cỏn b phũng o to Sau i hc, cỏc thy/cụ Khoa Húa hc, c bit l cỏc thy cụ b mụn Hu c, cỏc bn ng nghip, hc viờn cao hc, sinh viờn, gia ỡnh v ngi thõn nhng ngi to iu kin, ng viờn v giỳp tụi hon thnh lun ỏn ny Tỏc gi Bựi Th Thu Hin MC LC Trang Trang ph bỡa Li cam oan Li cm n Mc lc Danh mc cỏc kớ hiu, cỏc ch cỏi vit tt Danh mc cỏc bng Danh mc cỏc hỡnh Danh mc cỏc s M U CHNG 1: TNG QUAN 1.1 Gii thiu chung v gii nm 1.1.1 Phõn loi nm 1.1.2 Vai trũ ca nm vi ngi 1.2 H nm Xylariaceae 11 1.2.1 Gii thiu chung v h nm Xylariaceae .11 1.2.2 Thnh phn húa hc h nm Xylariaceae 12 1.3 Nm linh chi 17 1.3.1 Gii thiu chung v nm linh chi 17 1.3.2 Tỏc dng ca nm linh chi .20 1.3.3 Thnh phn húa hc ca nm linh chi 22 1.3.4 Nghiờn cu v nm ca Vit Nam 32 CHNG 2: PHNG PHP NGHIấN CU V THC NGHIM 36 2.1 Phng phỏp nghiờn cu 36 2.1.1 Phng phỏp ly mu 36 2.1.2 Phng phỏp chit xut, phõn lp, xỏc nh cu trỳc cỏc cht phõn lp c 36 2.1.3 Phng phỏp kho sỏt cu trỳc cỏc hp cht 36 2.1.4 Phng phỏp th hot tớnh sinh hc 37 2.2 Húa cht v thit b 37 2.2.1 Húa cht 37 2.2.2 Thit b 38 2.2.3 Dng c 38 2.3 Thc nghim .39 2.3.1 Nghiờn cu cỏc hp cht t nm vng (Tomophagus cattienensis) 39 2.3.2 Nghiờn cu cỏc hp cht nm linh chi (Ganoderma mirabile) 44 2.3.3 Nghiờn cu cỏc hp cht nm linh chi tớm (Ganoderma neo-japonicum) .49 2.3.4 Nghiờn cu cỏc hp cht nm Kretzschmaria sandvicensis 55 2.3.5 Nghiờn cu cỏc hp cht nm Daldinia eschscholzii 58 CHNG 3: KT QU V THO LUN 66 3.1 Nm linh chi vng (Tomophagus cattienensis) .66 3.1.1 Mu nm 66 3.1.2 Phõn lp cỏc cht 66 3.1.3 Xỏc nh cu trỳc cỏc hp cht 66 3.1.4 Hot tớnh sinh hc ca cỏc cht H1- H4 86 3.2 Nm linh chi Ganoderma mirabile 86 3.2.1 Mu nm 86 3.2.2 Phõn lp cỏc hp cht 86 3.2.3 Xỏc nh cu trỳc cỏc hp cht 87 3.2.4 Hot tớnh sinh hc 94 3.3 Nm linh chi Ganoderma neo-japonicum .95 3.3.1 Mu nm 95 3.3.2 Phõn lp cỏc hp cht 95 3.3.3 Xỏc nh cu trỳc hp cht 95 3.3.4 Hot tớnh sinh hc 104 3.4 Nm Kretzschmaria sandvicensis 105 3.4.1 Mu nm .105 3.4.2 Phõn lp cỏc hp cht 105 3.4.3 Xỏc nh cu trỳc cỏc hp cht 105 3.5 Nm Daldinia eschscholzii .111 3.5.1 Mu nm .111 3.5.2 Phõn lp cỏc hp cht 111 3.5.3 Xỏc nh cu trỳc cỏc hp cht 112 3.5.4 Hot tớnh sinh hc 122 KT LUN 127 DANH MC CễNG TRèNH LIấN QUAN N LUN N 129 TI LIU THAM KHO 130 PH LC 1PL DANH MC CC K HIU, CC CH CI VIT TT Kớ hiu cỏc phng phỏp sc kớ TLC: Thin Layer Chromatography (Sc kớ lp mng) CC: Column Chromatography (Sc kớ ct) Prep HPLC: Preparative High Performance Liquid Chromatography (Sc kớ lng iu ch hiu nng cao) Kớ hiu cỏc phng phỏp ph 1H-NMR: Proton Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy (Ph cng hng t proton) 13 C-NMR: Carbon Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy (Ph cng hng t ht nhõn 13C) HSQC: Heteronuclear Single Quantum Correlation (Ph hai chiu, d ht nhõn tng tỏc trc tip C H) HMBC: Heteronuclear Multiple Bond Correlation (Ph hai chiu, d ht nhõn tng tỏc giỏn tip C H) ROESY: Rotating frame Overhause Effect Spectroscopy (Ph hai chiu tng tỏc khụng gian H-H) DEPT: Distortionless Enhancement by Polarisation Tranfer (Ph 13C- DEPT) IR: Infrared Spectroscopy (Ph hng ngoi) ESI-MS: Electron Spray Ionization Mass Spectrocopy (Ph phun mự in t) FT-ICR MS: Fourier Transform Ion Cyclotron Resonance Mass Spectrometry Cỏc kớ hiu v ph s: singlet d: doublet t: triplet dd: doublet ca doublet dt: doublet ca triplet brs: singlet tự m: multiplet Cỏc kớ hiu khỏc KB: MCF7: SK-LU-1: HepG2: IC50: E: H: A: ung th biu mụ ung th vỳ ung th phi ung th gan nng c ch 50% etyl axetat n- hexan axeton DANH MC CC BNG Trang Bng 1.1: Bng 1.2: Bng 1.3: Mt s loi nm linh chi v cụng dng ca nú 19 Thnh phn (%) khoỏng a lng cỏc chng linh chi G lucidum .30 Thnh phn khoỏng ph bin cỏc chng nm linh chi G Bng 3.1: lucidum (ppm) .31 Cỏc hp cht phõn lp t nm linh chi vng .66 Bng 3.2: Bng 3.3: Bng 3.4: Bng s liu ph NMR ca cht H1 68 Bng s liu ph NMR ca cht H2 76 Bng s liu ph NMR ca cht H3 81 Bng 3.5: Bng 3.6: Bng 3.7: Bng 3.8: Bng 3.9: Bng s liu ph NMR ca cht H4 85 Hot tớnh khỏng t bo ung th biu mụ ca H1-H4 (ph lc 68) 86 Cỏc hp cht phõn lp t nm linh chi (Ganoderma mirabile): 87 Bng so sỏnh giỏ tr ph NMR ca cht H5 vi ergosterol 88 Bng so sỏnh giỏ tr ph NMR ca cht H6 vi ergosterol peroxide .90 Bng 3.10: Bng s liu ph NMR ca cht s H7 .92 Bng 3.11: Bng 3.12: Cỏc hp cht phõn lp t nm linh chi (Ganoderma neo-japonicum): 95 Bng so sỏnh giỏ tr ph NMR ca cht H9 vi Ergosta-4,6,8(14), 22-tetraen-3-on 98 Bng so sỏnh giỏ tr ph NMR ca H10 vi ganodermadiol 101 Bng so sỏnh giỏ tr ph NMR ca cht H12 vi ergosta-7,22ien -3-ol (o CDCl3) 103 Cỏc hp cht phõn lp t nm linh chi (Kretzschmaria sandvicensis) 105 Bng s liu ph NMR ca cht H13 107 Bng 3.13: Bng 3.14: Bng 3.15: Bng 3.16: Bng 3.17: Bng 3.18: Bng 3.19: Bng 3.20: Bng 3.21: Bng 3.22: Bng 3.23: Bng so sỏnh giỏ tr ph NMR ca cht s H14 vi orthosporin 109 Bng s liu ph NMR ca cht H15 111 Cỏc hp cht phõn lp t nm Daldinia eschscholzii .112 Bng so sỏnh giỏ tr ph NMR ca cht H16 vi cytochalasin .114 Bng so sỏnh giỏ tr ph NMR ca cht H17 vi cytochalasin 116 Bng so sỏnh giỏ tr ph NMR ca cht H18 vi cytochalasin 118 Bng so sỏnh giỏ tr ph NMR ca cht H20 vi ergosta7,24(241)-dien-3-ol 120 Bng 3.24: Bng thng kờ cỏc cht v hot tớnh sinh hc, IC50 (g/ml) .125 DANH MC CC HèNH Trang Hỡnh 0-1: Hỡnh 0-2: Hỡnh 0-3: Nm linh chi vng (Tomophagus cattienensis) Cỏt Tiờn Nm linh chi (Ganoderma mirabile) Lo Cai Nm linh chi tớm (Ganoderma neo-japonicum) Cỏt Tiờn .2 Hỡnh 0-4: Nm Kretzschmaria sandvicensis in Biờn .2 Hỡnh 0-5: Nm Daldinia eschscholzii Phỳ Th Hỡnh 1.1: Mt s hỡnh nh v cỏc lp nm Hỡnh 1.2: Cu trỳc n v ca -D-glucan in hỡnh G lucidum 23 Hỡnh 1.3: Cu trỳc n v c bn ca glycosaminoglycan G lucidum 24 Hỡnh 3.1: Hỡnh 3.2: Ph FT-ICR-MS ca cht H2 69 Ph 1H-NMR ca cht H2 70 Hỡnh 3.3: Hỡnh 3.4: Hỡnh 3.5: Ph 13C-NMR ca cht H2 71 Ph HMBC ca cht H2 72 Ph HSQC ca cht s H2 74 Hỡnh 3.6: Hỡnh 3.7: Ph ROESY ca cht H2 (BTH1B7A11) 75 Cỏc tng tỏc quan trng ph ROESY ca cht H2 75 Hỡnh 3.8: Hỡnh 3.9: Hỡnh 3.10: Hỡnh 3.11: Hỡnh 3.12: Hỡnh 3.13: Hỡnh 3.14: Ph FT-ICR-MS ca cht H3 77 Ph 1H-NMR ca cht H3 78 Ph 13C-NMR ca cht H3 79 Ph HMBC ca cht H3 80 Ph FT-ICR-MS ca cht H4 82 Ph 1H-NMR ca cht H4 83 Ph `13C-NMR ca cht H4 83 Hỡnh 3.15: Hỡnh 3.16: Hỡnh 3.17: Hỡnh 3.18: Ph HMBC ca cht H4 84 Ph HMBC ca cht H7 93 Ph 1H-NMR ca cht H9 97 Ph 13C-NMR ca cht H9 97 50PL Ph lc 52: Ph 13C-NMR ca hp cht cytochalasin 12 Ph lc ph ca hp cht cytochalasin (H17) Ph lc 53: Ph ESI-MS ca hp cht cytochalasin 51PL Ph lc 54: Ph 1H-NMR ca hp cht cytochalasin 52PL Ph lc 55: ph 13C-NMR ca hp cht cytochalasin 53PL Ph lc 56: ph HSQC ca hp cht cytochalasin 54PL Ph lc 57: Ph HMBC ca hp cht cytochalasin 55PL Ph lc 58: Ph ROESY ca hp cht cytochalasin 56PL 13 Ph lc ph hp cht cytochalasin (H18) Ph lc 59: Ph ESI-MS ca hp cht cytochalasin Ph lc 60: Ph 1H-NMR ca hp cht cytochalasin 57PL Ph lc 61: Ph 13C-NMR ca hp cht cytochalasin 14 Ph lc ph hp cht bis(2-ethylhexyl) terephthalate (H19) Ph lc 62: Ph 1H-NMR ca hp cht bis(2-ethylhexyl) terephthalate 58PL Ph lc 63: Ph 13C-NMR ca hp cht bis(2-ethylhexyl) terephthalate 59PL Ph lc 64: ph HSQC ca hp cht bis(2-ethylhexyl) terephthalate 60PL Ph lc 65: Ph HMBC ca hp cht bis(2-ethylhexyl) terephthalate 61PL 15 Ph lc ph hp cht ergosta-7,24(241)-dien-3-ol (H20) Ph lc 66: Ph 1H-NMR ca hp cht ergosta-7,24(241)-dien-3-ol Ph lc 67: Ph 13C-NMR ca hp cht ergosta-7,24(241)-dien-3-ol 62PL Ph lc 68: Kt qu th hot tớnh c t bo ca cht H1, H2, H3, H4 H Ni, ngy 03 thỏng nm 2013 64PL Ph lc 69: Kt qu th hot tớnh khỏng sinh H1, H2, H3, H4 01/9/2013 H Ni, ngy 15 thỏng nm 2013 65PL Ph lc 70: Kt qu th hot tớnh c t bo ca cht H7, H10, H13, H14, H15 11/2013 Ngy 31 thỏng 11 nm 2013 ...B GIO DC V O TO TRNG I HC S PHM H NI BI TH THU HIN Nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học số loài nấm Việt Nam Chuyờn ngnh: Húa hu c Mó s: 62.44.01.14 LUN N TIN S HểA HC... tỳi Cỏc loi thuc h Xylariaceae ch yu hoi sinh tờn g mc, gc ct, cnh v lỏ cõy, mt s hoi sinh trờn phõn ng vt, mt s ký sinh gõy bnh nguy him thc vt Vit Nam cú 82 loi vi 13 chi thuc h Xylariaceae... chỳng tụi chn ti Nghiờn cu thnh phn húa hc v hot tớnh sinh hc ca mt s loi nm Vit Nam i tng nghiờn cu i tng nghiờn cu ca lun ỏn l nm loi nm Vit Nam H Ganodermataceae: Tomophagus cattienensis, Ganoderma